TEMA 17

Infecciones del tracto gastrointestinal.Análisis microbiológico de

muestras fecales.

Tema 17. Infecciones del tracto gastrointestinal. Análisis microbiológico demuestras fecales.

1. Características generales del tracto gastrointestinal (TGI)2. Microbiota normal del tracto gastrointestinal3. Afecciones del tracto gastrointestinal4. Mecanismos inespecíficos de defensa del hospedador5. Participación de la microbiota normal en la defensa del hospedador

5.1. Síndrome de colitis seudomembranosa (colitis asociada a loslos antibióticos)

6. Mecanismos patogénicos de agentes que causan infecciones del tractogastrointestinal

7. Toma de muestras8. Transporte de muestras al laboratorio9. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis10. Cultivo de materia fecal

1. Características generales del tracto gastrointestinal (TGI)

2. Microbiota normal del tracto gastrointestinal

3. Afecciones del tracto gastrointestinal

• Gastroenteritis

• Diarrea

• Disentería

• Enterocolitis

4. Mecanismos inespecíficos de defensa del hospedador

• Acidez del estómago

• Peristaltismo

• Mucosa

• IgA secretora

• Presencia de eosinófilos

5. Participación de la microbiota normal en la defensa del hospedador

Microbiota normal es un factor importante

Si disminuye se reduce resistencia a infecciones intestinales (favorece crecimiento de Candida, estafilococos, Pseudomonas y enterobacterias)

5.1. Síndrome de colitis seudomembranosa (colitis asociada a los antibióticos)

Casi exclusivamente tras tratamiento con antimicrobianos

Toxinas de Clostridium difficile (otros clostridios y Staphylococcus aureus)

C. difficile

• número escaso y controlado por microbiota normal

• resistente natural a muchos antibióticos

• microbiota reducida, Clostridium prolifera y sintetiza toxinas

• enterotoxina y citotoxina provocan diarrea moderada (remite tras suspender tratamiento)

4. La destrucción tisular y la respuestainflamatoria producen diarrea por lasalida incontrolada del contenido intestinal.

Salida del contenido intestinal

PMN

Citotoxina

Enterotoxina

PMN

2. Degradación de la mucosidad intestinalpor acción de la enterotoxina.

1. Liberación de las dos toxinas por C. difficile.

3. Destrucción celular por acción de la citotoxina.Se produce respuesta inflamatoria.

5.1. Síndrome de colitis seudomembranosa (colitis asociada a los antibióticos)

6. Mecanismos patogénicos de agentes que causan infecciones del tractogastrointestinal

a) Producción de toxinas (afectan a secreción de líquidos, funciones celulares o funciones neurológicas)

b) Invasión del epitelio de la mucosa (destrucción celular, sangre, enfermedad sistémica)

Además de bacterias, pueden provocar infecciones:

• Virus (rotavirus, hepatitis A, B, C, Norwalk)

• Protozoos (Entamoeba histolytica, Giardia lamblia)

• Parásitos (Anisakis, Taenia)

7. Toma de muestras

5 mL (2-15 mL) (líquidas), volumen equivalente a nuez (sólidas)

Envase de cartón encerado o plástico (con cuchara)

Muestras sospechosas de contener sigelas (muydelicadas), si es posible, sembrar al lado de la camadel paciente

Si no hay heces hisopado rectal

• no válido detectar parásitos o antígenos virales

• válido para virus

Diagnóstico de parásitos: aspirado duodenal o proctoscopia

Si no se aísla patógeno en el primer cultivo, enviar dos muestras adicionales en días siguientes

7. Toma de muestras

8. Transporte de muestras al laboratorio

Muestra no procesada en dos horas: colocar en medio de transporte (Cary-Blair); mantener a temperatura ambiente, no refrigerar

Muestras para cultivo de virus no procesada en dos horas: refrigerar

Hisopo rectal para cultivo de virus: colocar en medio Stuart modificado

Si se sospecha presencia de Campylobacter: colocar inmediatamente hisopo en medio de transporte (evitar desecación)

Muestras para detectar citotoxina de C. difficile: deben congelarse (–70ºC ó –20ºC) hasta procesamiento (pueden ser descongeladas, centrifugadas y filtradas y el filtrado nuevamente congelado)

9. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis

Preparaciones en fresco: detectar parásitos

Microscopio de contraste de fases o campo oscuro: morfología y movilidad deCampylobacter y Vibrio

Presencia de leucocitos indica existencia de proceso inflamatorio (relacionado con microorganismos de carácter invasivo)

Tinción de Gram

• Neutrófilos PMN y acúmulos de cocos Gram positivos: posible infección por estafilococos

• Muchos bacilos Gram negativos delgados y curvos: posible infección por Campylobacter

• Gran número de bacilos Gram positivos grandes y delgados con paredes paralelas: presencia de Clostridium difficile

9. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis

ELISA útil para detectar:

• Bacterias: Helicobacter pylori, Campylobacter, E. coli verotoxigénica.

• Toxinas: Clostridium difficile.

• Virus: rotavirus, adenovirus y astrovirus.

• Parásitos: Giardia, Cryptosporidium, Entamoeba histolytica.

Sondas genéticas disponibles para:

• Campylobacter, Salmonella, Shigella, Yersinia, E. coli.

PCR:

• Virus de la hepatitis B y C.

10. Cultivo de materia fecal

Rutinariamente: investigar presencia de Campylobacter, Salmonella y Shigella

Buscar Yersinia enterocolitica en áreas con incidencia elevada

Cuando se solicite: búsqueda de vibrios, C. difficile y micobacterias

Detección Salmonella y Shigella:

• agar sangre (permite crecimiento de levaduras,estafilococos, enterococos y bacilos Gram negativos)

• medio moderadamente selectivo (MacConkey o EMB)

Agar sangreAgar de MacConkey

Agar EMB

10. Cultivo de materia fecal

Detección Salmonella y Shigella:

• medio selectivo y diferencial(agar entérico de Hektoen, agar XLD)

• medio muy selectivo (depende del coste)(agar SS, agar verde-brillante, agar sulfito de bismuto)

Detección bacterias Gram positivas: agar CNA

Agar entéricode Hektoen

Agar XLD

Agar CNA

Agar SS Agar verdebrillante

Agar sulfitode bismuto

10. Cultivo de materia fecal

Detección Campylobacter:

• Agar Campy (con sangre) (CO2 y 42ºC)

• Agar Skirrow

Detección Vibrio cholerae:

• Oxidasa sobre agar sangre (positiva)

• Agar TCBS

Agar Campy

Agar Campy con sangre

Agar TCBS

Agar Skirrow

Prueba de la oxidasa sobre agar

10. Cultivo de materia fecal

Agar CIN: Yersinia enterocolitica

Agar CCYE: Clostridium difficile

Caldos de enriquecimiento para aumentar probabilidadde detección de Salmonella, Shigella (caldo Gramnegativos, caldo selenito) y Campylobacter (caldotioglicolato Campy)

Agar CIN

Agar CCYE

Caldo tioglicolato Campy

Caldo selenito