TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

PARA PREPARAR MUESTRAS PARA SU

OBSERVACION

VITALES Se realizan directamente en el individuo vivo.

SUPRAVITALES Se estudian tejidos vivos separados del individuo.

Emplea: Técnicas de Cultivos Celulares y

Tisulares.

POSTVITALES Se efectúa sobre

muestras de tejido muerto fijados o no

fijados

TÉCNICAS EN MICROSCOPÍA

ÓPTICA

TEJIDOS BLANDOS

TÉCNICA HISTOLÓGICA

BÁSICA

ETAPAS:

FIJACIÓN

INCLUSIÓN

CORTE

COLORACIÓN

MONTAJE

TÉCNICA HISTOQUÍMICA

TEJIDOS DUROS

TÉCNICAS EN MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA ANALÍTICA

Fijación

Interrumpe los procesos del metabolismo

celular

Conserva de manera fidedigna

•Estructuras Celulares y Tisulares

Procedimientos Físicos

(Congelación) o Químicos (el más usado)

Se debe iniciar lo más pronto posible para

evitar la autolisis

Dura desde unas horas hasta varios días

dependiendo del tamaño de la

muestra

INCLUSIÓN

Obtiene una lámina

delgada de la Muestra, 5

Micras

Las Muestras adquieren

dureza para poder ser cortados.

La más utilizada es la Inclusión en Parafina.

Para realizar la inclusión:

•Deshidratar las muestras (alcohol etílico)

•Aclarar la Muestra (Benceno, xileno, tolueno, entre otros).

Corte

Micrótomo

Manual

Motorizado

Micrótomo Minot o de

rotación

Cuchilla de acero asegurada

fuertemente y permanece fija con un ángulo de inclinación

adecuado

Sistema de fijación del Bloque de

Parafina

Desplazamiento Vertical para el corte

Una Vez realizado el corte se extiende por

flotación en agua a 37°C

Se recoge el corte en un porta objetos y se

deja secar en una estufa a 37°C

CO

LOR

AC

IÓN

Utiliza colorantes

Mayormente Soluciones Acuosas

Hematoxilina Resalta estructuras basófilas

Eosina Resalta Eosinofilas o

ácidofilas

Eliminación de la Parafina Solventes orgánicos tipo

xileno

Hidratación del Corte en soluciones decrecientes de

etanol

Se termina de Hidratar el corte

Agua destilada

Se sumerge la muestra en una cubeta con colorante

Se elimina el exceso de colorante

Se sumerge en agua destilada

Montaje

Lavado del Corte Agua Destilada

Deshidratación Soluciones

crecientes de etanol

Aclaración de la Muestra

Xileno

Cubrir el objeto

Se colocan gotas de medio de

montaje

Se coloca un cubreobjetos

Técnica Histoquímica

Reacciones químicas y/o bioquímicas

Localiza substancias o actividad de enzimas en muestras

histológicas.

Cromógenos

La enzima adquiere una coloración observable con el

microscopio óptico.

Técnicas InmunoHistoquímicas

Utilizan antisueros o anticuerpos

específicos contra componentes

tisulares o celulares a identificar.

Reacciones Anti Cuerpo (Ac) / Antígeno (Ag)

Resaltar inmunoglobinas

uniéndolas a moléculas

fluorescentes o enzimas

mediante el uso de cromógenos

Tejidos Duros Técnica de

Descalcificación

Se descalcifican y ablandan los tejidos

después de la fijación.

Soluciones de ácidos fuertes

Ácidos débiles

Quelantes químicos

Se realiza la inclusión en parafina.

Para piezas dentarias se recomienda una

inclusión en celoidina

Se cortan y tiñen

Tejidos Duros

Técnica de Inclusión del

tejido duro fijado sin descalcificar

Se utiliza Metil-metacrilato

Cualquier Metacrilato que

alcance gran dureza

Micrótomo motorizado con una cuchilla de

carburo de tungsteno

Las Secciones pueden

observarse con luz común, luz polarizada o

fluorescencia sin colorear.

Tejidos Duros Técnica de Desgaste

Se toman láminas gruesas de la

muestra.

Frotación contra piedra de Arkansas de Grano Grueso.

Frotación contra piedra de Arkansas

de Grano Fino.

Se obtiene una muestra de 30

Micras.

Microscopía Electrónica

de Transmisión

Ultra micrótomo para muestras de 30

a120 nm de grosor

Deshidratación con Etanol o

acetona

Postfijación con Tetróxido de

Osmio

Contraste con citrato de

uranilo y/o citrato de

plomo

Para el estudio de tejidos duros

se utilizan técnicas de microscopía

analítica

Microscopía Electrónica

Analítica

Técnica no destructiva

•Permite conocer <In Situ> y en segundos la morfología y composición química de la muestra

Microanálisis por energía dispersiva de Rayos X

•Inducción de electrones con rayos X para identificar los elementos químicos de la muestra

•Se registran los espectros en picos Gaussianos

Es necesario realizar una criofijación de las

muestras a bajas temperaturas.

Microscopía Electrónica de Barrido

Interacción de un haz de

electrones sobre la superficie del

espécimen

Origina electrones

secundarios captados por un

detector.

El detector amplifica la

señal eléctrica y la transmite a un

monitor

Preparación de

Muestras:

Fijación en Glutaraldehído

PostFijación con tetróxido

de osmio

Deshidratación de las muestras postfijadas en soluciones de

acetona o etanol

Desecación mediante técnica de punto crítico (Sustitución del

líquido en la muestra por CO2 Líquido el cual se

vuelve gas y se elimina

lentamente)

Montaje de las muestras en

porta muestras de aluminio

usando como adherente y

Conductor Plata coloidal.

Metalización con oro para asegurar la

conductividad eléctrica

Para Tejidos duros solo es

necesario montar y

recubrir las muestras