1PREPARACIN DE LOS TEJIDOS PARA EXAMEN MICROSCPICO.

El examen de la estructura de la clula, tejidos y rganos puede hacerse de 2 formas:

EXAMEN AL ESTADO FRESCO, INMEDIATO O IN VIVO: Se realiza sobre el organismo vivo o sobre partes aisladas que sobreviven cierto tiempo.sobreviven cierto tiempo. Pueden ser teidas con un colorante vital o no.

EXAMEN MEDIATO O POST-MORTEM: Se realiza sobre elementos que han sido muertos por la fijacin y luego teidos.

MICROSCOPA OPTICA

FIJACIONParaformaldehdos/Alcohol

LAVADO

CORTEMicrtomo

5-10 um

MONTAJEBao termorregulado/Adhesivo/Portaobjetos

COLORACION

DESPARAFINAJEXilol/OH descentes/Agua destilada

TAMAO1 a 3 cm3

Agua corriente

DESHIDRATACIONOH ascendentes/Xilol

INCLUSIONParaplast (60)

COLORACIONHematoxilina-Eosina

(H-E)

DESHIDRATACIONOH ascendentes/Xilol

PROTECCION (montaje final)/ cubreobjetos/pegamento

COLORANTES M.O.

HEMATOXILINA EOSINA

Esta tcnica utiliza dos colorantes: en primer lugar los cortes se someten ala accin de la hematoxilina, colorante bsico, que se une a cualquiersustancia que tenga grupos cidos, tales como los grupos fosfato del ADN y alas protenas nucleares que poseen carga negativa. A continuacin, los cortesse someten a la accin de la eosina, colorante dbilmente cido, que coloreaa las estructuras bsicas.

AZUL DE TOLUIDINA

Colorante que tie estructura basfilas, tales como la cromatina. Se puedecomportar como colorante ortocromtico (tie de color azul) ometacromtico (tie de color violeta-rojo), dependiendo del pH y de lanaturaleza qumica de la sustancia teida.

2MICROSCOPA ELECTRONICA

FIJACIONGlutaraldehdo/OsO4

LAVADO

CORTEUltramicrotomo

50-60 nm

MONTAJERejilla de cobre

( ll )

TAMAO1 a 5 mm3

LAVADOSolucin Lavadora

DESHIDRATACIONAlcoholes

ascendentes/Acetona

INCLUSIONEPON (T Amb.)

(grilla)

CONTRASTEMetales pesados

Acetato de uranilo/citrato de plomo

EL MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO (MEB)

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