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Travaux dirigésOrganisation fonctionnelle de la cellule
Des molécules du vivant à la cellule
Séance 1
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1. Obtention des cellules etdes organites à étudier
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Fibroblastes liés au substrat
Culture de fibroblastes
Flacon de culture des fibroblastesMultiplication en tapis
METMP
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Comptages réguliers sousmicroscope et dilutions
périodiquesEtuve
Mise en étuve à atmosphère contrôlée
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Neurones de caille en développement
Culture de neuroblastes de caille
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Etude de documents
Figure 1 - Représentation schématique d’un profil de croissance normal (A) et de cellules transformées (B), cultivée sur un support solide. (D’après Ringertz & Savage, Cell Hybrids, Academic Press, Inc., New York, 1976).
Figure 2 - Micrographies électroniques à balayage de cellules cultivées. A gauche, cellules embryonnaires normales de hamster (mv, microvillosités, R, rides). x 1620. A droite, le même type de cellules mais après transformation par un adénovirus humain. x 6145. (D’après de Robertis, Biologie moléculaire de la cellule).
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Avec gradient continu de densité
Centrifugation
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Vitesse de 50 000 tours/minSoit 100 000 g
Ultracentrifugation
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2. Observation et identification de cellules à l’aide du microscope
photonique
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Le microscope photonique
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Principe de la microscopie
http://www.biologie.ens.fr/dbmicelc/spip.php?article5
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Quelques cellules à observer
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Cellules d’élodée
x 100photo C. Escuyer
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Cellules d’épiderme d’oignondans de l’eau distillée
dans une solution de [NaCl] 2M
x100
x100
photo C. Escuyer
photo C. Escuyer
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Cellules de parenchyme de tubercule
x 1000 (immersion)
x 40 avec lugol dilué
amyloplastes
photo C. Escuyer
photo C. Escuyer
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Cellules buccales
http://lycees.ac-rouen.fr/modeste-leroy/spip/spip.php?article135
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Cellules bactériennes
Des lactobacilles et autres streptocoques d'un yaourt "maison"
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Cellules de Penicillium
http://forum.mikroscopia.com/topic/12600-le-pain-et-les-moisissures/
Penicillium (1) et Aspergillus (3)
Aspergillus (2) et Cladosporium (4)
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La coloration
Colorant Couleur Constituant rendu visible
Bleu de méthylène bleu toute la cellule
Rouge neutre rouge toute la cellule, surtout la vacuole
Carmin acétique rose ADN
Vert de méthyle acétique + pyronine ADN en vert et ARN en rose
Carmin / rouge congo rose cellulose
Vert d’iode vert lignine
Lugol = eau iodée violet à brun amidon, glycogène
Rouge soudan III lipides
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Kératine marquée au Cy2 (vert), ADN marqué au DAPI (bleu) et mitochondries marquées au redCMX-Ros (rouge)
Microscopie photonique et marquage fluorescent
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Marquage aux anticorps
http://www.abcam.com/secondary-antibodies/limmunofluorescence-directe-vs-limmunofluorescence-indirecte
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Quelques tissus à observer
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Coupe de tige de LamierColoration au carmin vert d’iode
Collenchyme
Parenchyme cortical
phloème
xylèmeépiderme
x 40
photo C. Escuyer
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Les tissus végétauxForme des
cellulesEpaisseur de
la paroiCouleur de
la paroiLocalisation
du tissu Nom de tissu Catégorie du tissu
ronde fine rose cœur des organes parenchyme remplissage
+/- réserve
rectangulaire finerose (+/-
translucide lipidique)
surface des organes aériens
épiderme revêtement
petites cellules fine rose dans des
faisceaux phloème tissu conducteur
de sèvetaille variable un peu épaisse vert dans des
faisceaux xylème
tissu conducteur
de sève
petites cellules très épaisse rose variée collenchyme
tissu de soutienpetites
cellules très épaisse vert variée sclérenchyme
tissu de soutien
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Epithélium cilié
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Acini de pancréas exocrine
photo C. Escuyer
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Pancréas endocrine : îlot de Langerhans
x 400
photo C. Escuyer
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Coupe de peau de salamandre
photo C. Escuyer
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photo C. Escuyer
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Acinusmuqueux
Acinus séreux
Muscle strié squelettique
Conjonctif du derme
Épiderme pluristratifiémucuscanal
X 100
photo C. Escuyer
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Acinus muqueuxX 400
photo C. Escuyer
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Capillaires avec érythrocytes nucléés (x 400)
photo C. Escuyer
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Coupe transversale de trachée
X 1
photo C. Escuyer
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Paroi de la trachée
photo C. Escuyer
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AIR
Epithélium
musclelisse cartilage
Paroi de la trachée
conjonctif
photo C. Escuyer
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photo C. Escuyer
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cartilage
Épithélium ciliéconjonctif
photo C. Escuyer
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Détail de l’épithélium cilié
capillaire
ciliature
photo C. Escuyer
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photo C. Escuyer
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Muscle lisse
Acinimuqueux
Épithélium cilié
AIR
photo C. Escuyer
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acinus
épithélium
photo C. Escuyer
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X 10
Hépatocytes et capillaires+ fibres de conjonctif
X 100
Foie
photo C. Escuyer
photo C. Escuyer
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Bilan des types cellulaires
Noyau visible
Organites et caractères spécifiques
Taille des cellules
non Procaryote - quelques µm Eubactéries
oui Eucaryote
cellules arrondies, et matrice extra-cellulaire variée 20-50 µm Règne animal
oui Eucaryote paroi pecto-cellulosique, vacuole, plastes 100 µm Règne végétaloui Eucaryote
paroi de chitine, vacuole, absence de plastes
50-100 µm
Règne champignon
Après observation au microscope photonique