156

TALLER DE DIAGNÓSTICO Y VACUNAS VETERINARIAS / DIAGNOSIS AND VETERINARY VACCINES WORKSHOP

PRESENTACIONES ORALES / ORAL PRESENTATIONS

VACD-O-1. CSF IN THE EUROPEAN UNION. DIAGNOSTIC AND VACCINES POLICIES / PESTE PORCINA CLÁSICA EN LA UNIÓN EUROPEA. DIAGNOSTICO Y POLÍTICAS DE VACUNACIÓN. Volker Moennig, Institute of Virology, Hannover, Germany VACD-O-2. RTq-PCR IN VETERINARY DIAGNOSTIC/ PCR-RTq EN EL DIAGNÓSTICO VETERINARIO. Stefanie Schmeiser, Institute of Virology, Hannover, Germany VACD-O-3. INFLUENZA PORCINA: EMERGENCIA E IMPACTO / SWINE INFLUENZA: EMERGENCY AND IMPACT. Heidy Díaz de Arce, CENSA, Cuba. VACD-O-4. AVANCES EN EL DIAGNÓSTICO DE LOS MICIOPLASMAS. EXPERIENCIA

DE CUBA EN LA TEMATICA Evelyn Lobo Jefe de MYCOLAB (Laboratorio de diagnóstico de micoplasmas), CENSA. elobo@censa.edu.cu

Los micoplasmas fueron aislados por primera vez, en 1899, de bovinos que padecían la

Pleuroneumonia contagiosa biovina, desde entonces y hasta la actualidad han sido

aislados de especies de animales, plantas, cultivos celulares y productos biofarmacéuticos

de aplicación biomédica, hoy se conocen más de 200 especies de estos micoorganismos.

La última década se ha caracterizado por numerosos avances en el esclarecimiento de los

factores de virulencia de las bacterias, con excepción de los micoplasmas, una vez que los

estudios sobre su patogenicidad se han quedado muy atrás de otros modelos

experimentales. La única excepción ha sido con respecto al estudio de la variabilidad

antigénica. El descubrimiento de la impresionante capacidad que los micoplasmas poseen

para mantener una arquitectura de superficie que es antigénicamente y funcionalmente

versátil situó a estos microorganismos en el grupo de ―elite‖ de bacterias patógenas y

parásitos, distinguiéndose por su sorprendente variabilidad antigénica. Esta versatilidad

constituye una estrategia de supervivencia de los micoplasmas en los organismos que

parasitan. Para su diagnóstico y caratcerización se han desarrollado técnicas que van

desde el cultivo microbiológico hasta el empleo de técnicas moleculares. En Cuba fueron

aislados por primera vez a inicio de los 80s y desde entonces se han reportado afectando a

bovinos, aves, cerdos y otras especies de interés veterinario. MYCOLAB es el único

laboratorio, a nivel nacional, que realiza investigaciones en el tema de la micoplasmología,

cuenta con un sistema de calidad bajo la norma ISO/IEC: 17025 para laboratorios

157 acreditados y ha desarrollado un sistema de diagnóstico que incluye técnicas de

diagnóstico desde el cultivo microbiológico, pruebas bioquímicas, serológicas y varios

ensayos moleculares como la Hibridación de acidos nucleicos (HAN) y diversos ensayos

de PCR (simple, anidado, RFLP, RAPD, DGGE). La aplicación de estas técnicas ha

permitido la detección, aislamiento y caracterización filogenética de estos microorganismos

que afectan a especies de interes económico. El presente trabajo tiene como objetivo

mostrar las experiencias de Cuba en el aislamiento y caracterizacion de micoplasmas que

afectan especies de interés económico.

VACD-O-5. DIAGNÓSTICO Y CARACTERIZACIÓN MOLECULARES EN

BACTERIOLOGÍA VETERINARIA EN CUBA Ivette Espinosa Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Cuba Los métodos convencionales que se utilizan en el diagnóstico bacteriológico se basan en la

detección de características fenotípicas como las propiedades culturales, tintoriales y

bioquímicas. Estos ensayos pueden resultar subjetivos e ineficientes, fundamentalmente

cuando se trata de entidades microbianas que provienen de poblaciones heterogéneas

donde existe una microflora comensal abundante, incluso cuando podrían estar presentes

cepas avirulentas de la especie de interés. Los procedimientos basados en la detección de

marcadores específicos en el genoma, orientan la detección de los aislados con

potencialidades genéticas de expresar factores que contribuyen a su virulencia. En

nuestras condiciones la utilización de ensayos moleculares como la reacción en cadena de

la polimerasa ha permitido la detección de diferentes genotipos de Streptococcus suis y

Pasteurella multocida, entidades asociadas a diferentes manifestaciones clínicos en

cerdos. Los aislados de S.suis del genotipo cps2j-serotipo2 que provenían de animales con

procesos invasivos resultaron negativos para los tres marcadores suilisina (syl), factor

extracelular (ef) y muramidasa (mrp), mientras los aislados de pulmón de este serotipo

evidencian los tres marcadores génicos. Estos datos contribuyen al conocimiento de la

enfermedad, al diagnóstico diferencial de los procesos respiratorios en el cerdo y al

desarrollo de medidas encaminadas a su control.

VACD-O-6. Conferencia Dr. Andrew Potter, Director Vaccine and infectious Disease Organization (VIDO) Canada VACD-O-7. MicroRNAs CODIFICADOS POR VIRUS QUE AFECTAN AL CERDO / MicroRNAs ENCODED BY VIRUSES AFFECTING SWINE. Jose Ignacio Nuñez, CReSA, España

158 VACD-O-8. UNMASKING THE PROTECTIVE MECHANISMS AGAINST CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS: IMPLICATIONS FOR VACCINE DEVELOPMENT / DESENMASCARANDO LOS MECANISMOS DE PROTECCIÓN CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE PORCINA CLÁSICA: IMPLICACIONES PARA EL DESARROLLO DE VACUNAS. Llilianne Ganges, CReSA, España

VACD-O-9. COMPUTER AIDED IDENTIFICATION OF POTENTIAL ANTIBACTERIAL VACCINE TARGETS

J.A. Agüero*, L. Aguilar-Bultet*, Y. Estévez-Diepa**, Y. Abreu-Jorge** and A. Lage-Castellanos*** *Microbial Genomics and Bioinformatics Laboratory. Molecular Biology Department. Microbiology Direction. National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. jaaguero@censa.edu.cu **Computer Science Department, Direction of Technological Innovation Management, National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. *** Statistics and Mathematics Department, Cuban Neuroscience Center. Havana. Cuba. Vaccinology has proved to be very effective in preventing infectious bacterial diseases.

However, there are several human and animal pathogens for which vaccines have not yet

been discovered. The advent of the genomic era has recently led to a new generation of

rationally designed vaccines developed using reverse vaccinology. This approach reduces

the time required for the identification of candidate vaccines and provides new solutions for

those vaccines which have been difficult or impossible to develop. A candidate vaccine

should be highly expressed, available for immune surveillance, and possess epitopes that

the host recognises. For this reasons the pathogenic genome should be scanned for open

reading frames, sub-cellular location of predicted proteins, their functions and antigenic

characteristics of them. Predicting such diverse properties remains challenging. No one

method is universally applicable and successful; rather we need to integrate several

approaches in our research. An appraisal of a possible methodology to access these issues

is presented and discussed.

VACD-O-10. AVANCES EN LA GENERACIÓN DE LAS VACUNAS VETERINARIAS Y

SU PERSPECTIVA DE DESARROLLO INDUSTRIAL.

Siomara Martínez, B. Corona Grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). siomara@censa.edu.cu La vacunación continúa siendo la vía más sostenible y de mayor impacto en el control de

enfermedades infecciosas, dado por la mayor factibilidad económica, a lo que se agrega el

problema que representa la resistencia de los patógenos a antibióticos. En este sentido, las

vacunas resultantes de la biotecnología desempeñan un papel importante en el control y la

vigilancia de algunas de las enfermedades animales más importantes, zoonosis y

159 seguridad alimentaria. La obtención de las nuevas generaciones de vacunas a ciclo

cerrado, deben pasar por diferentes requerimientos que transitan desde la investigación

básica, pasando por pruebas de concepto que demuestren su robustez pero considerando

imperativos comerciales, requerimientos locales con respecto a la enfermedad así como

las perspectivas globales del control de la misma. A esto debe agregarse las regulaciones

cada vez mayores de bioseguridad y Calidad. Otros criterios a tener en cuenta están

relacionados con que las producciones de las vacunas dirigidas a los animales de

producción se caracterizan por ser grandes pero obtenidas a bajo costo.

Sobre las vacunas de nuevas generaciones existen presiones regulatorias y legales cada

vez mayores sobre todo las que contienen organismos vivos genéticamente modificados

así como fuertes medidas de Bioseguridad relacionadas con las enfermedades zoonóticas,

liberación al ambiente y los patógenos transmitidos por alimentos. Uno de los aspectos

que más inciden en la factibilidad de producción de las vacunas dirigidas a los animales

son los relacionados con los sistemas productivos donde las regulaciones cada vez

mayores, las Buenas Prácticas de Producción, así como los retos de las producciones de

antígenos a gran escala unido a cambios en los Sistemas productivos y las nuevas

formulaciones de los medios de cultivo, encarecen los mismos. En el trabajo se realiza un

análisis de las tendencias de las nuevas generaciones de Vacunas Veterinarias desde una

Perspectiva Industrial.

VACD-O-11. 3RS ALTERNATIVE METHODS FOR POTENCY AND SAFETY TESTING OF VETERINARY VACCINES: A CURRENT OVERVIEW AND NEW TRENDS / 3R MÉTODOS ALTERNATIVOS PARA LAS PRUEBAS DE POTENCIA Y LA SEGURIDAD DE LAS VACUNAS VETERINARIAS: UNA VISIÓN ACTUAL Y NUEVAS TENDENCIAS. Mario Landys, Instituto Finlay, Cuba

PRESENTACIONES EN CARTELES / POSTER PRESENTATIONS

VACD-1. FACTIBILIDAD DEL USO DE LA PROTEÍNA RECOMBINANTE VP3 DE

GUMBORO EN UN ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO TIPO ELISA

A. Alfonso y J. Noda

Dirección de Microbiología, Grupo de Virología Animal. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. Correo electrónico: abdulahi@censa.edu.cu

Nuestro objetivo fue demostrar la factibilidad del empleo de la proteína recombinante VP3

del virus de la enfermedad de Gumboro para el desarrollo de un ELISA indirecto que

permita detectar anticuerpos específicos a esta proteína. Los sueros positivos se

obtuvieron por inoculación experimental. Se empleo el formato de ELISA indirecto y se

titularon los reactantes por el método de tablero de ajedrez. Para la realización del ELISA

160 indirecto una placa de 96 pozos fue recubierta con la proteína recombinante VP3 a razón

de 5 ug/ml y se emplearon diluciones de suero y conjugado de 1:100 a 1:600 y de 1:12500

a 1:100000 respectivamente. Los resultados arrojaron una excelente diferenciación entre

los sueros positivos y negativos en las diferentes diluciones, sobre todo en las diluciones

inferiores. Se apreció una disminución progresiva de la densidad óptica del suero positivo

con el aumento de las diluciones del mismo y del conjugado, a excepción del negativo,

demostrando una reacción específica del analito (IgY) por la proteína VP3. Pudimos

determinar que tanto los reactivos, metodología y protocolos seleccionados nos permiten

distinguir muy bien entre los sueros positivos reactivos a VP3 y los negativos,

demostrándose además que dicho ensayo poseía una tendencia a dar muy poco fondo.

Con estos resultados podemos concluir que el uso de la proteína recombinante VP3 de

Gumboro es factible para su empleo en el desarrollo de un ensayo inmunoenzimático tipo

ELISA.

VACD-2. DETECCIÓN DE BRONQUITIS INFECCIOSA Y METAPNEUMOVIRUS AVIAR MEDIANTE RT-PCR EN MUESTRAS CLÍNICAS DE AVES CON PROCESOS

RESPIRATORIOS Ana M. Acevedo*, M. Colás**, Y. Burgher*, D. Relova*, A. Merino**, J. Noda*. *Grupo de Virología Animal, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. acevedo@censa.edu.cu ** Laboratorio de Investigación y Diagnóstico Aviar (LIDA. La Habana. Cuba. El virus de la bronquitis infecciosa y el metapneumovirus aviar son dos agentes infecciosos

virales con manifestaciones clínicas muy semejantes que provocan un impacto económico

severo en la industria avícola. Para identificar la posible presencia de estos agentes en

aves con clínica respiratoria, se obtuvieron muestras de tráquea pulmón y exudados

traqueales procedentes de cinco granjas de ponedoras. El diagnóstico virológico se realizó

por aislamiento viral en embrión de pollo y la identificación por RT-PCR específico para

bronquitis y metapneumovirus aviar. Se obtuvo aislamiento viral de bronquitis en tres de las

granjas evaluadas y la detección directa del virus por RT-PCR tanto a partir de la muestra

clínica como de los aislados obtenidos. En las poblaciones evaluadas no se detectó

metapneumovirus aviar, no obstante se cuenta con la metodología de diagnóstico para la

detección e identificación por métodos moleculares y convencionales de este agente, no

disponible anteriormente en el país.

161

VACD-3. COMPORTAMIENTO DE LA RABIA HUMANA EN HUAMBO, ANGOLA EN LOS AÑOS 2008-2009

A.M.A.F. Pereira*, J. Morais*, M.A. Abeledo**, E. Roque***, J. Álvarez ***, A. José**** B.C.N Canele***** *Facultad de Medicina Veterinária Huambo-Universidad José Eduardo dos Santos, Huambo, Angola **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba ***Universidad Agraria de la Habana, Cuba ****Dirección General del Instituto de los Servicios de Veterinaria *****ADRA-Angolana Acción para el Desarrollo Rural y Ambiente correo electrónico: Kidiuami@yahoo.com.br La rabia es una zoonosis reportada por la Organización Mundial de la Salud con una

elevada mortalidad en África e Asia. Estudios realizados en Angola en las décadas de

1930- 1960 hacen mención a los perros como principales transmisores de la enfermedad

diagnosticada en caninos salvajes en el laboratorio. En los últimos años se registra un

número elevado de casos en el país, lo que crea un impacto de gran importancia para la

salud pública. En este trabajo se analiza el comportamiento de la rabia humana en los

años 2008 y 2009 en Huambo y para ello se obtuvieron los datos de los registros del

Hospital General de Huambo, Departamento de Salud Pública de Huambo, informes

anuales de la Dirección General y Provincial de Huambo del Instituto de los Servicios de

Veterinaria, e Informes Síntesis del Municipio Sede do Huambo. Los indicadores

analizados fueron los casos de rabia humana, número de personas mordidas y la

cobertura vacunal animal. El mayor número de casos se registro en el municipio de

Huambo sede y la franja etaria más afectada fue el grupo de 1-10 años. La tasa de

mortalidad calculada en humanos fue de 0,96 % en 2008 y se incrementó a 1% en 2009,

a pesar de registrarse un incremento del número de animales vacunados. Se concluye que

es necesario incrementar la vigilancia epidemiológica y el control de esta zoonosis en la

provincia de Huambo, así como implementar labores educativas en las comunidades.

162

VACD-4. ESTABLECIMIENTO DE UN PROGRAMA DE EDUCACIÓN SANITARIA SOBRE LA RABIA EN LA PROVINCIA DE HUAMBO, ANGOLA

A.M.A.F Pereira*, J. Morais*, M.A. Abeledo**, E. Roque***, J. Álvarez***, B.C.N Canele***** *Facultad de Medicina Veterinária Huambo-Universidad José Eduardo dos Santos, Huambo, Angola. Kidiuami@yahoo.com.br **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba. ***Universidad Agraria de la Habana, Mayabeque, Cuba. ****Dirección General del Instituto de los Servicios de Veterinaria. *****ADRA – Acción Angolana para el Desarrollo Rural y Ambiente. La rabia es considerada una zoonosis mundial, siendo África e Asia los continentes que

registran el mayor número de casos. Se estima una mortalidad humana mundial de la

rabia canina de 55.000 muertes al año. Varios son los factores que concurren para el

fracaso del combate contra esta zoonosis siendo los principales: el nivel bajo de

compromiso político, la falta de datos cuantitativos y el bajo nivel de educación de la

población. En este trabajo se presentan los resultados de un programa de educación

comunitaria en el municipio Huambo sede, que contó con la integración de los líderes

tradicionales, profesores (las escuelas), dirigentes políticos, y técnicos de salud y

veterinaria con el objetivo de sensibilizar a la población, principalmente niños e jóvenes de

los riesgos, prevención y actuación durante la exposición a la enfermedad.

VACD-5. DETERMINACION DE LA EXTENSIDAD DE INVASION POR FASCIOLA SPP.

EN REBAÑOS BOVINOS EN HUAMBO, ANGOLA Kialanda M. Monteiro-Noel*, L. Mutaquileno-Lucas*, E. Roque-López**, R. Castillo-Torres***, M. I. Percedo-Abreu**** *Universidade José Eduardo Dos Santos, Faculdade Medicina Veterinaria, Huambo, Angola. Kialandanoel@yahoo.com.br **Faculdad de Medicina Veterinaria, Universidad Agraria de la Habana (UNAH), Cuba ***Universidad de Matanzas, Faculdad de Medicina Veterinaria, Matanzas, Cuba. ****Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Mayabeque, Cuba En Angola están identificadas las especies Fasciola hepatica y F. gigantica afectando a los

rebaños bovinos. Con el objetivo de determinar el nivel de infestación por Fasciola spp. en

la provincia de Huambo se realizó muestreo coprológico en rebaños bovinos de sistemas

extensivos de producción de carne, por ser este el principal tipo de ganadería en el

territorio. Los muestreos se realizaron durante el período de noviembre/2009 a

noviembre/2010. Las muestras de heces fecales se tomaron directamente del recto de los

animales de diferentes categorías zootécnicas (terneros, novillas y adultos). Se investigó el

49 % del total de bovinos de los rebaños objeto de estudio, de los cuales 1101 resultaron

positivos (864 adultos, 173 novillas y 74 terneros), para un 76,14 % de extensión de

invasión (E.I) por Fasciola spp. Aunque la E.I fue mayor en unos municipios que en otro,

163 en general fue muy alta la prevalencia de animales infectados en todos ellos. Por otra

parte, la mayor EI se observó en los rebaños estudiados en los meses de noviembre y

diciembre de 2009, correspondientes a la época de lluvia.

VACD-6. ANÁLISIS DE CEPAS DE ANAPLASMA MARGINALE UTILIZANDO LAS

SECUENCIAS REPETIDAS DE LA PROTEÍNA PRINCIPAL DE SUPERFICIE 1A (MSP1A)

Belkis Corona, A. Rodríguez, S. Martínez Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. bcorona@censa.edu.cu Anaplasma marginale es un patógeno del ganado bovino, que causa severas pérdidas

económicas en las regiones tropicales y subtropicales. Las proteínas principales de

superficie de los cuerpos iniciales de este hemoparásito están involucradas en las

interacciones patógeno-hospedero y garrapata-patógeno y han sido utilizadas como

marcadores para la caracterización genética de cepas de Anaplasma marginale y estudios

filogenéticos. La proteína MSP1a varía entre cepas de regiones geográficas diferentes en

el número y secuencias de las regiones repetidas en tandem en la región amino-terminal.

En el presente estudio caracterizamos 24 cepas de Anaplasma marginale utilizando la

secuencia descrita para la proteína MSP1a. Estos resultados corroboran la heterogeneidad

de cepas de Anaplasma marginale en regiones endémicas y que el análisis filogenético de

las secuencias repetidas en tandem de esta proteína MSP1a no resulta en clusters

relacionados con el origen geográfico de las cepas, pero contribuye a entender la

diversidad genética y la evolución de A. marginale.

VACD-7. DETECCION DE ANAPLASMA MARGINALE EN BUFALOS (BUBALUS BUBALIS) DE LA REGIÓN OCCIDENTAL DE CUBA MEDIANTE UN ENSAYO DE

NPCR.

D. Obregón*, E. Roque*, M. Santos**, S. Martinez**, A.H. Fonseca***, B. Corona** *Universidad Agrária de La Habana, Autopista Nacional Km 23 ½, Mayabeque, Cuba. dasiel@isch.edu.cu **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Autopista Nacional, Km 23 ½, Mayabeque, Cuba ***Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR 465, Km 7, Seropédica,R.J, Brasil. La especie bubalina fue introducida en Cuba recientemente, mostrando excelentes

resultados productivos y reproductivos. La situación de salud en ellos ha sido poco

estudiada, aunque se reconoce su resistencia natural a varias enfermedades reportadas en

el país, incluidas las hemoparasitosis. Los búfalos también son susceptibles a la infección

por Anaplasma marginale, pero la anaplasmosis clínica difícilmente se presenta,

164 permaneciendo como portadores asintomáticos, lo que facilita la trasmisión a los bovinos.

El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la presencia de A. marginale en búfalos

de la región occidental de Cuba. Para ello se desarrolló un ensayo de nPCR, a partir de la

amplificación del gen msp5 de este hemoparásito. Se analizaron 52 muestras de ADN,

extraído de sangre de animales, seleccionados al azar en 6 granjas del occidente de Cuba,

a los que se le realizó Frotis Sanguíneo. Del total de muestras analizadas, 47 (90,4%)

muestras resultaron positivas por el nPCR, visualizándose en todos los casos una banda

de 345 pb, mientras que solo 5 animales (9,6%) fueron positivos en el Frotis Sanguíneo,

sin diferencias significativas entre las proporciones, según las granjas de procedencia, o

las categorías de los animales, confirmándose la presencia de A. marginale en búfalos en

esta región.

VACD-8. A SYBR GREEN-BASED REAL-TIME RT-PCR ASSAY FOR THE DETECTION

OF AVIAN H5 HEMAGGLUTININ SUBTYPES Carmen L. Perera*, L.J. Pérez*, H. Díaz de Arce*, F. Cilloni**, A. Salviato**, S. Marciano**, A. Salomoni**, M.S. Beato**, A. Romero**, I. Capua**, G. Cattoli** *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Mayabeque, Cuba **Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie, Research and Development Department, OIE/FAO and National Reference Laboratory for Newcastle Disease and Avian Influenza, OIE Collaborating Centre for Epidemiology, Training, and Control of Emerging Avian Diseases, Viale dell‘Università 10, Legnaro, Padova, Italy Accurate and rapid detection and subtyping of avian influenza outbreaks allows measures

to be implemented at a time when the disease situation is more amenable to control. In this

study a SYBR Green real time reverse transcription-PCR (RRT-PCR) was developed for

the detection of avian H5 hemagglutinin (HA) subtype. Sequence analysis of the Mexican

lineage H5N2 isolates (subgroup B) revealed several mismatches in the primer/hydrolysis

probe set reported in a previous RRT-PCR. To circumvent the challenge that these viruses

represent for the molecular diagnosis the present assay have been designed to detect all

North American H5 avian influenza isolates published in GenBank at present including the

low pathogenic H5N2 Mexican lineage. The method successfully detected a range of

different avian influenza strains belonging to subtype H5 from both Eurasian and North

American lineages representing different avian H5 clades from various geographic

locations. The linear ranges of the SYBR Green RRT-PCR assay span within 107-103

EID50/mL and 4.2 x 105-4.2 x 100 gene copies/µl. The analytical sensitivity of the RRT-PCR,

relative to the detectable infectious virus titer, was consistently observed to be 0.1

EID50/mL, and in terms of HA gene copy number, the limit of detection for the H5 reference

viruses was 4.2 gene copies/µl of in vitro transcribed RNA. The assay proved to be useful

165 for the detection of H5 avian influenza viruses in clinical samples from experimental and

natural infected birds.

VACD-9. REASSORTANT LOW PATHOGENIC AVIAN INFLUENZA H5N2 VIRUSES IN

AFRICAN WILD BIRDS Chantal J.Snoeck*, A.T. Adeyanju**, S. De Landtsheer*, U. Ottosson***, S. Manu**, W. Hagemeijer****, T. Mundkur****, C.P.Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel.: +352 490604 220, Fax: +352 490686. claude.muller@LNS.ETAT.LU **AP Leventis Ornithological Research Institute, University of Jos, Jos, Nigeria ***Ottenby Bird Observatory, Degerhamn, Sweden ****Wetlands International, Wageningen, the Netherlands Although wild birds are the major reservoir of low pathogenic avian influenza (LPAI) and

migratory flyways connect wildlife from Northern and Southern hemisphere, the presence

and persistence of avian influenza in African birds is poorly understood. As part of the

surveillance for highly pathogenic avian influenza (HPAI) H5N1 viruses in Africa, we

monitored avian influenza in wild and domestic birds in two different regions in Nigeria. We

found low pathogenic avian influenza (LPAI) H5N2 viruses in three Spur-winged Geese

(Plectropterus gambensis) in the Hadejia-Nguru Wetlands. Phylogenetic analyses revealed

that all genes, except NS, of the LPAI H5N2 viruses were more closely related to genes

recently found in wild and domestic birds in Europe. The NS genes formed a sister group to

other African NS genes. This suggested that the Nigerian LPAI H5N2 viruses found in wild

birds were reassortants exhibiting a NS gene that circulated for at least 7 years in African

birds, and is part of the African influenza gene pool, and genes that were more recently

introduced into Africa from Eurasia most probably by intercontinental migratory birds.

Interestingly the HA and NA genes formed a sister branch to HPAI H5N2 strains found in

the same wild bird species in the same wetland only one year earlier. The presence of LPAI

H5N2 in wild birds in the Hadejia-Nguru Wetlands where wild birds and poultry occasionally

mix provides ample opportunities for infections across species boundaries with the potential

risk of generating HPAI viruses after extensive circulation in poultry.

REFERENCES

CJ Snoeck, AT Adeyanju, S De Landtsheer, U Ottosson, S Manu, W Hagemeijer, T

Mundkur, CP Muller. Reassortant low pathogenic avian influenza H5N2 viruses in African

wild birds. J Gen Virol. Epub ahead of print

166

MF Ducatez, CM Olinger, AA Owoade, S De Landsheer, W Ammerlaan, HGM Niesters,

ADME Osterhaus, RA Fouchier, CP Muller. 2006. Avian flu: multiple introductions of H5N1

in Nigeria. Nature 442, 37.

MF Ducatez, CM Olinger, AA Owoade, Z Tarnagda, MC Tahita, A Sow, S De Landtsheer,

W Ammerlaan, JB Ouedraogo, ADME Osterhaus, RA Fouchier, CP Muller. 2007. Molecular

and antigenic evolution and geographical spread of H5N1 highly pathogenic avian influenza

viruses in western Africa. J Gen Virol 88, 2297-306.

VACD-10. NEUTRALIZING ANTIBODIES AGAINST PANDEMIC (H1N1) 2009,

SEASONAL H1N1 2007/2008 AND AVIAN-LIKE H1N1 SWINE INFLUENZA VIRUS IN SWINE CONTACTS, WESTERN-EUROPE

Nancy A. Gerloff*, L. Nina*, P. Weicherding**, C.P Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel.: +352 490604 220, Fax: +352 490686. claude.muller@LNS.ETAT.LU **Health Inspection, Health Directorate, 5A rue de Prague, L-2348 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg Serological studies for swine influenza viruses (SIVs) in humans with occupational

exposure to pigs have only been reported from the Americas, but not from Europe. Human

infections with SIV have been rare and mostly reported in contacts with swine (Myers,

Olsen et al. 2007), as serological studies suggest that swine workers are at increased risk

of zoonotic infection with SIV (Gray, McCarthy et al. 2007) (Newman, Reisdorf et al. 2008).

In this study, we analyzed neutralizing antibodies against pandemic H1N1 2009 influenza

virus, a 2007/2008 seasonal H1N1 virus and an avian-like, enzootic H1N1 SIV in 211 swine

contacts in Luxembourg compared to a matched general population. We showed that swine

workers have more often and higher titers of antibodies against pandemic flu and SIV than

the control population, and that these titers cannot be explained by cross-reactivity with

antibodies at least from recent seasonal flu. Antibodies against SIV and pandemic

correlated with each other but not with the 2007/2008 seasonal H1N1. Antibodies

neutralizing SIV were also found in the Luxembourg swine population. Sequential infections

with variants of human seasonal H1N1 viruses may have increased the chance of

serological cross-reaction with the antigenically distinct H1N1 viruses tested for. We

assume that these cross-reactive antibodies may provide some level of cross-protection but

further studies are required to determine to what extent the serological responses correlate

with infection.

167 REFERENCES

Gray, G. C., T. McCarthy, et al. 2007. "Swine workers and swine influenza virus infections."

Emerg Infect Dis 13(12): 1871-8.

Myers, K. P., C. W. Olsen, et al. 2007. "Cases of swine influenza in humans: a review of

the literature." Clin Infect Dis 44(8): 1084-8.

Newman, A. P., E. Reisdorf, et al. 2008. "Human case of swine influenza A (H1N1) triple

reassortant virus infection, Wisconsin." Emerg Infect Dis 14(9): 1470-2.

VACD-11. UNUSUAL HEPATITIS B VIRUS SUBGENOTYPE A AND ABSENCE OF

TYPICAL WEST AFRICAN GENOTYPES IN AFRICAN DESCENDANTS, HAITI Iris E. Andernach*, C. Nolte**, J.W. Pape**, C.P. Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel. : +352 490604 220, Fax : +352 490686. claude.muller@LNS.ETAT.LU, **Les Centres GHESKIO, B.P. 15727, Port-au-Prince, Haiti In sub-Saharan Africa Hepatitis B virus (HBV) is highly endemic and most infections are

caused by genotype E and A. The low genetic diversity of genotype E, suggesting its short

natural history in Africa, is however difficult to reconcile with (a) its high prevalence and

extensive geographic spread and (b) a long natural history of genotype A in Africa. In Haiti,

with >90% of the population descending from African slaves, HBV infections were mostly

caused by genotype A1, today mainly found in East-Africa. Surprisingly, 20% belong to a

rare subgenotype A5, which so far was only found in the former Bight of Benin, a primary

slave trading post. A sizeable portion also belonged to genotype D (D4 and D3).

Phylogenetic analyses also indicate that Haitian A subgenotypes separated early from their

African ancestors and that similar genotype D3/D4 strains (and prevalences) are found in

Rwanda. In contrast, the most prevalent sub-/genotypes in West Africa of today (E and A3)

are very rare in Haiti. This strongly indicates that this genotype emerged in the general

population in Africa only after the transatlantic slave trade had come to an end, e.g. within

the last 200 or 300 years, and explains the low genetic diversity of genotype E. The high

prevalence of HBV genotype E in large part of Africa further suggests that HBV

hyperendemicity is a recent phenomenon, and probably the result of the extensive use of

unsafe needles, therefore shedding new light on the current African genotype E puzzle in

Africa.

REFERENCES

Andernach, I. E., J. M. Hubschen, and C. P. Muller. 2009. Hepatitis B virus: the genotype E

puzzle. Rev Med Virol 19:231-40.

168

Andernach, I. E., C. Nolte, J. W. Pape, and C. P. Muller. 2009. Slave Trade and Hepatitis B

Virus Genotypes and Subgenotypes in Haiti and Africa. Emerg Infect Dis 15:1222-8.

Hubschen, J. M., J. Mugabo, C. A. Peltier, J. C. Karasi, A. Sausy, P. Kirpach, V. Arendt,

and C. P. Muller. 2009. Exceptional genetic variability of hepatitis B virus indicates that

Rwanda is east of an emerging African genotype E/A1 divide. J Med Virol 81:435-40.

VACD-12. EFFECT OF COILED-COIL PEPTIDES ON A TYPE III SECRETORY SYSTEM

MEDIATED MODEL OF BACTERIAL PATHOGENICITY

M. Larzábal*, E. Zotta***, B.C. Rabinovitz**, Elsa C. Mercado**, Á. Cataldi*. *Instituto de Biotecnología and **Instituto de Patobiología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Los Reseros y Las Cabañas, (1712) Castelar, Buenos Aires, Argentina. emercado@cnia.inta.gov.ar ***Laboratorio de Fisiopatogenia, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, Paraguay 2155 (1121) C.A. Buenos Aires, Argentina. Many animal and human pathogenic gram-negative bacteria such as Salmonella,

Enterohmorrhagic (EPEC) and Enteropathogenic (EHEC) Escherichia coli, Yersinia

possess a type III secretion system (TTSS) that is used to deliver virulence proteins directly

into the host cell. In this study we assayed coiled-coil peptides, previously tested as

effective against TTSS from EPEC and EHEC, in a mice model of Citrobacter rodentium

infection. For this, a group of 5 C57BL/6J mice (Group 1) was orally treated daily with CoilA

and CoilB peptides prior to challenge with C. rodentium and for 6 days after inoculation

(dpi). Group 2 was the untreated control. Both groups were orally inoculated on day 8 with 5

x 109 CFU of a strain of C. rodentium. Stool samples were recovered at different dpi to

determine the number of CFU/g of feces. Group 1 excreted a smaller amount of CFU/g

during the first 3 dpi, compared to Group 2. After sacrifice at 13 dpi, small and large

intestine samples were taken for histological analysis. Colon samples of the untreated

group showed areas with loss of superficial epithelium, damaged cells and endoluminal

mononuclear inflammatory infiltrate, consistent with histological lesion induced by

C.rodentium. Mice treated with peptides CoilA and CoilB kept normal the surface epithelium

showing a similar structure as an uninfected control group. These results suggest that pre-

treatment with coiled-coil peptides prevents colon damage of mice inoculated with C.

rodentium. These encouraging results prompted us to test coiled-coil peptides as treatment

or vaccines in other models of bacterial infections.

REFERENCES

Larzábal M, Mercado EC, Vilte DA, Salazar-González H, Cataldi A, Navarro-García F.

2010. Designed coiled-coil peptides inhibit the type three secretion system of

169 enteropathogenic Escherichia coli. PLoS ONE; 5(2): e9046.

doi:10.1371/journal.pone.0009046.

Vilte DA, Larzábal M, Cataldi AA, Mercado EC. 2008. Bovine colostrum contains

immunoglobulin G antibodies against Intimin, EspA, and EspB and inhibits hemolytic

activity mediated by the type three secretion system of attaching and effacing Escherichia

coli. Clin Vaccine Immunol; 15:1208-13.

Johnson-Henry KC, Nadjafi M, Avitzur Y, Mitchell DJ, Ngan BY, Galindo-Mata E, Jones NL,

Sherman PM. 2005. Amelioration of the effects of Citrobacter rodentium infection in mice by

pretreatment with probiotics. J Infect Dis; 191:2106–17.

VACD-13. VIRULENCE GENES OF ESCHERICHIA COLI STRAINS ISOLATED FROM

CALVES IN BUENOS AIRES, ARGENTINA

D.A. Vilte, B.C. Rabinovitz, A.M. Elizondo, Elsa C. Mercado Instituto de Patobiología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Los Reseros y Las Cabañas, (1712) Buenos Aires, Argentina. emercado@cnia.inta.gov.ar Several virulence factors homologous to those identified in Escherichia coli pathogenic for

humans, have been recognized in E. coli isolated from diarrheic calves, and eventually,

healthy animals. In this study we investigated the virulence profile of E. coli strains isolated

from 137 diarrheic or septicemic calves less than 90 days old submitted for diagnostic by 38

farms during 2007-2010. Three multiplex PCRs were used to determine 15 virulence genes

on 410 E. coli isolates. P, Afimbrial Afa-8, F17 and S adhesins were identified in 52%, 42%,

29% and 3% of animals, respectively. The gene eae, associated to a type 3 secretion

system, was detected in 12% of animals, while the Cytolethal Distending Toxin III and IV,

Cytotoxic Necrotizing Factor (CNF) 2 and Shiga toxin (Stx) encoding genes were detected

in isolates from 18%, 7%, 13% and 12% of animals, respectively. F5, F41, heat-stable

enterotoxin a, Stx2 and CNF1 encoding genes were not detected. Aerobactin gene was

identified in isolates from 50% of animals. Enterohemolysin and alfa-hemolysin were

produced by isolates from 14% and 8% of animals, respectively. E. coli isolates showed

adhesins that allow them to colonize and in some cases destroy the bovine intestinal

microvilli, and toxins that are highly cytotoxic to epithelial cells. These results suggest that

the strains of E. coli isolated in Argentina from diarrheic or septicemic calves do not belong

to a pathotype stable characteristic, such as enterotoxigenic, but have a variable profile of

virulence. That should be taken into account to design new vaccines.

REFERENCES

Van Bost S, Jacquemin E, Oswald E, Mainil J. 2003. Multiplex PCRs for identification of

necrotoxigenic Escherichia coli. J Clin Microbiol, 41:4480-2.

170

Franck SM, Bosworth B, Moon HW. 1998. Multiplex PCR for enterotoxigenic, attaching and

effacing, and Shiga toxin-producing Escherichia coli strains from calves. J Clin Microbiol,

36:1795-7.

VACD-14. 16S rDNA PCR - DENATURING GRADIENT GEL

ELECTROPHORESIS (DGGE) AND AMPLIFICATION OF INTERGENIC SPACER REGION 16S- 23S rRNA GENE IN STUDY OF CUBAN ISOLATE OF MYCOPLASMA

HYOPNEUMONIAE

Evelyn Lobo*, C. Poveda**, A. Suárez**, Y. Hernández*, A. Ramírez**, J.B. Poveda**

*Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas (MYCOLAB), grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología, CENSA, Cuba. elobo@censa.edu.cu **Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas, Instituto Universitario de Sanidad Animal (IUSA), Universidad de Las Palmas de Gran Canarias, España

In Cuba has been detected in the presence of Mycoplasma hyopneumoniae (M.

hyopneumoniae) from lungs with lesions typical of enzootic pneumonia, but never there has

been a study of molecular characterization of this microorganism. The aim of this study was

to investigate the heterogeneity of isolates of M. hyopneumoniae by DGGE technique

(denaturing gradient gel electrophoresis). The results obtained in the characterization of

isolates of M. hyopenumoaniae, determined the presence of at least three different

genotypes circulating in the western and central regions of the country. The difficulties in

the identification by traditional breeding techniques in the case of porcine mycoplasmas and

the advantages of DGGE in the rapid detection and differentiation of isolated makes this

technique a very useful tool for studies of characterization of these microorganisms

VACD-15. COMPARACIÓN FILOGENÉTICA DE AISLADOS DE MYCOBACTERIUM

BOVIS OBTENIDOS DE GANADO SACRIFICADO EN RASTROS DE BAJA CALIFORNIA

C. Martínez-Vidal*, S. Hori-Oshima*, A. De la Mora-Valle*, R.M. Bermúdez-Hurtado*, L. Galván-Lara**, T.B. Rentería-Evangelista*, G. López-Valencia*, G.E. Medina-Basulto*.

*Instituto de Investigaciones en Ciencias Veterinarias UABC. Obregón y Julián Carrillo S/N Col. Campestre CP. 21386, Mexicali Baja California, México. Tel/Fax: (686) 5 63 69 06. gerardom@uabc.edu.mx **Rastro TIF 54. Km. 9.5 Carret. Mexicali-San Felipe S/N Col. Colorado VII, Mexicali Baja California, México. En México, la Tuberculosis bovina (TBB) es uno de los principales problemas que enfrenta

la ganadería y es un serio problema de salud pública. Las diferentes técnicas de

genotipificación pueden ayudar a establecer la relación que existe entre las diferentes

cepas presentes en una región y determinar algunos factores que incidan posteriormente

en los programas de control y erradicación de la enfermedad. En el presente trabajo se

171 aplicó la técnica de VNTR a 11 aislados provenientes de ganado sacrificado en un rastro

de Mexicali B.C. y a 10 aislados de ganado sacrificado en un rastro de Tijuana B.C. Se

utilizaron oligonucleótidos específicos para amplificar los loci ETR-A, ETR-B, QUB11a,

QUB11b, QUB1895, QUB26, QUB3232 y QUB3336, determinándose el parentesco relativo

entre las cepas aisladas, así como el poder discriminatorio para cada locus en particular y

para todos los loci en su conjunto. Se obtuvieron 14 perfiles alélicos al utilizar los 8 loci con

un poder discriminatorio de 0.90 siendo el locus QUB 3336 el que mostró el mayor poder

discriminatorio (h=0.72) en tanto el locus ETR-B mostró un nulo poder discriminatorio

(h=0.00). En un dendrograma, se observaron 6 grupos genéticos, en los cuales se

encuentran indistintamente aislados de Tijuana y Mexicali Baja California, sin embargo, se

encontraron genotipos específicos para cada una de las dos regiones. Los resultados

sugieren que aúnque el movimiento de ganado y la compra venta en la región han

provocado la dispersión de cepas en estas dos áreas, se puede discernir el origen de la

mayoría de los aislados.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Martinez LR, Harris B, Black IV WC, Meyer RM, Brennan PJ, Vissa VV, Jones RL. 2008.

Genotyping North American animal M. bovis isolates using multilocus variable number

tandem repeat analisis. J Vet Diagn. Invest; 20: 707-715.

Roring S, Alistair NS, Hewinson RG, Neill SD, and Robon AS. 2004. Evaluation of variable

number tandem repeat (VNTR) loci in molecular typing of Mycobacterium bovis isolates

from Ireland. Vet. Microbiol; 101: 65-73.

VACD-16. DEVELOPMENT AND VALIDATION OF A NOVEL SYBR GREEN 1 REAL-

TIME RT-PCR ASSAY FOR DETECTION OF CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS VALIDATED IN DIFFERENT REAL-TIME PCR PLATFORMS

Heidy Díaz-de Arce*, L.J. Pérez*, J. Tarradas**, R. Rosell**,***, C.L. Perera*, M. Muñoz**, M.T. Frías*, J.I. Nuñez**, Ll. Ganges**. *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), La Habana, Cuba. **Centre de Reserca in Sanitat Aimal (CReSA), UAB Bellaterra, 08193 Barcelona, Spain. ***Departament d´Agricultura, alimentación i Acció Rural de la Generalitat de Catalunya 10 (DAR), Spain. Classical swine fever is a highly contagious viral disease causing severe economic losses

in pig production almost worldwide. The rapid dissemination of the virus and the variability

of the clinical signs demand the adoption of rapid and accurate methods for CSFV detection

as basis for the implementation of effective control measures. Here we describe the

development and evaluation of a novel quantitative real time RT-PCR assay for the

detection of CSFV based on SYBR-Green coupled to melting curve analysis. The analytical

172 and diagnostic performances of the method using two real time PCR instruments were

compared. The assay was specific and proved to detect the major genotypes of CSFV. The

assay limit of detection in cell culture medium and serum was 0.1TCID50/reaction and 1

TCID50/reaction in tissue homogenate for both platforms. The limit of detection was 1, 10

and 102 gene copies/µL when nuclease free water, serum and tissue homogenate were

used as sample matrices, repectively, for both instruments. The assay analysis of 108

tissue homogenate and serum samples from naturally and experimentally CSFV infected

and non-CSFV infected animals proved that the SYBR-Green real time RT-qPCR for

diagnosis and quantification of CSFV provides a highly sensitive and specific method for

classical swine fever diagnosis.

VACD-17. ESTUDIO RETROSPECTIVO DE AGENTES INFECCIOSOS QUE AFECTAN LA REPRODUCCION BOVINA EN EL DEPARTAMENTO DEL CAQUETÁ, COLOMBIA

J.L. Motta-Giraldo*, I. Y. Waltero-García**, M. A. Abeledo***, O. Fernández*** *Florencia, Caquetá, Colombia. motta41@gmail.com **Laboratorio de Diagnóstico Veterinario ICA, Florencia, Caquetá, Colombia. ***Dirección de Salud y Producción Animal, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba. Los agentes infecciosos que afectan la reproducción bovina causan un gran efecto sobre la

producción, amenazando la potencialidad pecuaria de cualquier región. Para conocer el

comportamiento de los agentes infecciosos que afectan la reproducción, se analizaron los

resultados de las investigaciones serológicas para brucelosis, leptospirosis, herpesvirus

bovino -1 (HVB-1), diarrea viral bovina (DVB) y Neospora caninum, de los casos enviados

al laboratorio por los propietarios de los hatos bovinos en el departamento del Caquetá,

Colombia, en los años 1999 - 2009. La información fue obtenida de la base de datos del

ICA (Instituto Colombiano Agropecuario), seccional Caquetá. Los mayores porcentajes de

animales seropositivos se concentraron en los municipios del norte, centro y oriente del

departamento, mientras que al sur fue menor. Los animales seropositivos en promedio por

meses durante los 11 años fueron estables para brucelosis; para IBR y DVB se

acumularon principalmente en los meses del segundo semestre, mientras que para

Leptospirosis entre Junio y Septiembre. En el caso de Neospora, las investigaciones

comenzaron en 2007 y en los 3 años solo se trabajaron 36 muestras, de las cuales 12

fueron positivas (33,3%). Se concluye que aunque la tasa investigación fue baja, los

agentes infecciosos que afectan la reproducción parecen ser de importancia en el

departamento de Caquetá y es necesario profundizar en su papel entre las causas de

problemas reproductivos.

173

VACD-18. MOLECULAR DETECTION OF TORQUE TENO SUS VIRUS IN LYMPHOID TISSUES IN CONCOMITANT INFECTIONS WITH OTHER PORCINE VIRAL

PATHOGENS L.J. Pérez*, Heidy Díaz-de Arce*, M.T. Frias*, C.L. Perera*, Ll. Ganges*, J.I Núñez ** *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), La Habana, Cuba **Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Campus de la Universitat Autònoma de Barcelona, 08193 Bellaterra, Barcelona, Spain In this study, 40 pigs with respiratory and wasting disorders from Cuban swine herds were

screened by PCR for the presence of TTSuV1, TTSuV2, PCV-2, PPV and CSFV in spleen

samples. Besides, the variability of the porcine TTSuV sequences obtained was

investigated by phylogenetic analysis. The current study showed for the first time the

presence of TTSuV1 and TTSuV2 in Cuban swine herds. The investigation revealed the

following infection rates: TTSuV1 40%, TTSuV2 37.5%, PCV-2 70%, PPV 37.5% and CSFV

in 52.5%. The presence of two or more of these viruses in different rates in the same

spleen samples was revealed. Also, a higher genetic diversity of TTSuV2 sequences was

observed regarding TTSuV1 sequences.

VACD-19. GESTIÓN DE LA SEGURIDAD BIOLÓGICA EN EL LABORATORIO DE

VIROLOGÍA DEL CENSA

Marvis E. Suárez-Romero, V.V. Barceló-Pérez, L. Pastor-Chirino. Centro Nacional de Seguridad Biológica, CSB, ORASEN-CITMA. Calle 28 No. 502, CP 11300, Playa, C. Habana, Cuba. Telf. 2023255. marvis@orasen.co.cu El trabajo en las instalaciones destinadas a la sanidad animal presentan riesgos de

contaminación para el trabajador y el medio ambiente, situación que la bioseguridad debe

considerar para establecer criterios de seguridad que han de tenerse en cuenta durante su

diseño y explotación (Rodríguez J, 2007) Se reconoce internacionalmente que los agentes

biológicos utilizados en dichas instalaciones pudieran tener efectos adversos sobre la salud

humana, animal y la biodiversidad si no son manipuladas correctamente en sus diferentes

actividades o conservadas en instalaciones no seguras.

El Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria solicitó autorización al Centro Nacional de

Seguridad Biológica (CSB) para la explotación del laboratorio de virología, en el cual se

llevan a cabo actividades con cepas virales veterinarias para el diagnóstico y la obtención

de vacunas. Dicho laboratorio fue sometido a una evaluación de riesgo teniendo en cuenta

el diseño del mismo, el cumplimento de las prácticas y procedimientos y el empleo de los

equipos de seguridad (Menéndez, JC et al. ,2005). Los resultados de la evaluación

realizada declararon que se debía perfeccionar básicamente la gestión de la bioseguridad

174 en relación al diseño de la instalación, la cual fue cumplida por la entidad a partir de los

señalamientos realizados.

Es objetivo de nuestro trabajo mostrar el proceso de identificación e implementación de

medidas que debió cumplir el laboratorio de virología para reducir el riesgo a un nivel

aceptable, el cual trajo consigo el otorgamiento de la licencia de seguridad biológica para la

explotación del mismo.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Rodríguez, J. Bioseguridad en el diseño de instalaciones con riesgo biológico. Tomo I.

Ciudad Habana: Editorial Academia, 2007. p.15.

Menéndez, JC y Rodríguez, J. Evaluación de Riesgo. En: Menéndez, JC et al. Manual de

Inspección de Seguridad Biológica. Ciudad Habana: Editorial Academia, 2005. p.88.

VACD-20. IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ESTRONGÍLIDOS

GASTROINTESTINALES EN CAPRINOS DEL VALLE DEL CAUTO EN LA PROVINCIA DE GRANMA

Niurky Rojas-Gámez*, M. La O-Arias*, J. Arece-García**, M. Carrión-Muchulí*, C. San Martín-Acosta*, K. Pérez-Corría* y P. Valerino-Cambar*** *Instituto de Investigaciones Agropecuarias‖ Jorge Dimitrov‖ km 16 y ½ Carretera Manzanillo Bayamo. CP. 85100. Granma. Cuba. niurkis@dimitrov.cu **Estación Experimental de Pastos y Forrajes ―Indio Hatuey‖. Central España Republicana. CP. 44280. Matanzas, Cuba. ***Universidad de Granma km 17 Carretera Manzanillo Bayamo. C.P: 85100. Granma Este trabajo se realizó con el objetivo de identificar y caracterizar las especies de

estrongilidos gastrointestinales que afectan los caprinos del Valle del Cauto en la provincia

de Granma, así como aportar elementos cognoscitivos, relacionados con su diagnóstico.

Para el mismo se separaron los diferentes compartimientos del tracto digestivo (cuajar,

intestino delgado e intestino grueso) y se colectaron todos los parásitos adultos para su

posterior caracterización e identificación. Los géneros se identificaron sobre la base de la

morfología general y las especies en función de las características morfométricas de las

espículas de los machos, la identificación estructural de la corona cervical y la vesícula

cefálica. En el caso del género Haemonchus, por la similitud de las especies que lo

conforman, se midió el largo total de las espículas, distancia de la punta de la espícula

derecha a su respectivo gancho y distancia de la punta de la espícula izquierda a su

respectivo gancho. En el caso de las demás especies se observaron y cuantificaron las

estructuras claves para su identificación. Los resultados obtenidos determinaron que los

caprinos del Valle del Cauto se encuentran infestados por cuatro especies de estrongílidos

gastrointestinales Oesophagopstomun columbianum, Trichostrongylus colubriformis,

175 Haemonchus contortus y Haemonchus placei con espículas de 797, 171, 398 y 429 µm

respectivamente. La identificación de la especie Haemonchus placei en el ganado caprino

implica variaciones en las estrategias de prevención y control para la especie y no para el

género. En la población de parásitos del género Haemonchus se encontraron

particularidades en el diagnóstico de las especies, dada por el largo de las espículas.

VACD-21. FEEDING PERFORMANCE OF TWO SPECIES OF IXODIDAE TICKS ATTACHED ON RESISTANT RABBITS

P.H. Nunes*, K.C.S. Furquim**, G.H. Bechara**, M.I. Camargo-Mathias***

*Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina, Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS/FMVZ/USP), Universidade de São Paulo (USP), Av. Prof. Orlando Marques de Paiva, 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, Brazil, CEP 05508-270. **Departamento de Patologia Veterinária, FCAV, UNESP, Via de Acesso Prof. Paulo Castellane, s/n, CEP: 14884-900, Jaboticabal, S.P., Brazil. ***Departamento de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP, Av. 24 A, nº 1515, Cx. Postal 199, CEP: 13506-900, Rio Claro, S.P., Brazil. In certain tick-host relationships tick‘s saliva inoculation can induce resistance by the host

as demonstrated by alterations in several alimentary and reproductive biological

parameters of the ectoparasite (Jittapalapong et al., 2000). The aims of this study were to

analyse the necessary feeding time to reach full engorgement and the engorgement weight

of Amblyomma cajennense and Rhipicephalus sanguineus females tick fed on resistant

rabbits. The resistance of hosts was induced by successive infestations (Amblyomma

cajennense) and by inoculation of salivary gland extracts (SGE) (Rhipicephalus

sanguineus). The results revealed that rabbits acquire resistance against A. cajennense

from the second infestation as demonstrated by the increase in female feeding time to full

engorgement and decrease in its engorgement weight. Concerning R. sanguineus, the

results of the challenge test, the averages obtained did not present significant differences,

except for the average weight of engorgement for females of the test group immunized with

extract of salivary glands of females in the sixth day of feeding (p < 0.05) in relation to

control group. The glandular extract of salivary glands of females in the sixth day of feeding

(SGE6) was not efficient in the immunization against R. sanguineus infestation, instead

induced the hosts to a response that significantly benefited the progression of females‘

feeding, even more than what was observed in control group.

Supported by FAPESP

176 REFERENCES

S Jittapalapong, RW Stich, JC Gordon, TE Wittum, OO Barriga. 2000. Performance of

female Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) fed dogs exposed to multiple

infestations or immunization with tick salivary gland or midgut tissues. J. Med. Entomol.

37(4), 601-611.

VACD-22. HISTOLOGICAL DESCRIPTION OF THE SALIVARY GLANDS OF ADULT TICKS ORNITHODOROS BRASILIENSIS, ARAGÃO, 1923.

L.F.S. Costa*, P.H. Nunes**, J.F. Soares**, M.B. Labruna**, J.R. Martins***, J.R. Júnior****, M.I. Camargo Mathias*. *Departamento de Biologia, Instituto de Biociências, Unesp, Av. 24 A, nº 1515, CEP 13506-900, Rio Claro, SP, Brazil. **Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina, Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS/FMVZ/USP), Universidade de São Paulo (USP), Av. Prof. Orlando Marques de Paiva, 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, Brazil, CEP 05508-270. ***Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada do Conde nº 6000 / Acesso 02: BR 116, Km 291CEP: 92900-000 Eldorado do Sul / RS. ****Laboratório de Peptídeos e Enzimas Proteolíticas Universidade Federal do Rio Grande do Sul Centro de Biotecnologia. Rua Sarmento Leite, 245 – Centro Porto Alegre - RS, 90050-170.

The ticks of the genus Ornithodoros are parasites of birds, reptiles and mammals, including

man. Ornithodoros are vectors of borrélias that causes relapsing fever in different parts of

the world and they are also potential reservoirs and vectors of other pathogens. The

Ornithodoros brasiliensis that is found eventually parasitizing humans in the south area of

Brazil was already described as being vector of the Borrelia brasiliensis. The objective of

this work was of accomplishing the first histological description of the salivary glands of this

species that can become a problem in the public health of the areas of its occurrence. The

obtained results showed that the salivary glands of males and females of Ornithodoros

brasiliensis present the same structure of other argasids species. They are formed by two

types of acini, one of them agranular (type I) and the other granular (type II). The agranular

acinus consists of a big central cell and smaller cells around it with a lot of membrane folds

and, probably, have important role in the osmorregulation process. The granular acinus

presents three types of secretory cells denominated as a, b and c as in other argasids

species. These cells differ amongst themselves mainly as for the type of secretion granules

present in its cytoplasm.

177 REFERENCES

Mans B.J., Venter J.D., Coons L.B., Louw A.I., Neitz A.W. 2004. A reassessment of argasid

tick salivary gland ultrastructure from an immuno-cytochemical perspective. Exp. Appl.

Acarol. 33:119–129.

Roshdy M.A. 1972. The subgenus Persicargas (Ixodoidea, Argasidae, Argas). 15. Histology

and histochemistry of the salivary glands of A. (P.) persicus (Oken). J.Med.Entomol. 9:143–

148.

Sonenshine, D.E. 1991. The female reproductive system. In: SONENSHINE, D.E. (Org.).

Biology of Ticks. New York: Oxford University Press, p. 280-304.

VACD-23. EVALUACIÓN DE LA TÉCNICA SEROLÓGICA AUBIODOT PARA EL

DIAGNÓSTICO RÁPIDO DE LA LEPTOSPIROSIS CANINA

R.L. García*, M.A. Abeledo**, H. Machado***, D. Feraud*. *Facultad de Medicina Veterinaria, UNAH; Mayabeque, Cuba. rada@isch.edu.cu **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba ***Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, La Habana, Cuba. La leptospirosisis es una enfermedad reemergente presente en muchos países,

principalmente con clima húmedos tropicales. Dentro de las especies muy vinculadas al

hombre se encuentran los caninos, los mismos han sido reconocidos como posibles

reservorios presentando una infección subclínica. Ha sido el objetivo de este trabajo la

evaluación de la técnica serológica rápida Aubiodot con el empleo del antígeno de

Leptospira biflexa (saprófita), cepa patoc. Para ello se tomaron 84 muestras de suero a

caninos recogidos aparentemente sanos y mantenidos en instalaciones. Las muestras

fueron analizadas por la técnica de Aubiodot y después enviadas para su análisis y

comparación con la Técnica Microaglutinación (MAT) de referencia, en el Centro Nacional

de Epizootiología y Diagnóstico. Como resultado se obtuvo una coincidencia en 73

(86.9%), de estos 26 sueros como verdaderos positivos y en 47 como verdaderos

negativos: Los indicadores mostraron una sensibilidad de 83.8% y una especificidad

88.6%, con un Valor Predictivo Positivo (81.2%) y el Coeficiente Kappa (0.72) aportó

favorable correspondencia entre las dos técnicas. Predominó, el serovar canicola con 15

muestras (13%) y el serovar pomona en 9 muestras (8%) además en casos aislados los

serovares australis, ballum y icterohaemorrhagiae. Se concluye que el Aubiodot es capaz

de identificar en breve tiempo la leptospirosis canina de forma cualitativa, lo que permitirá

aplicar con seguridad y rapidez las medidas terapéuticas en la Clínicas Veterinarias.

Además, el empleo de una cepa no patógena disminuye los riesgos de contaminación en la

manipulación.

178 VACD-24. DESARROLLO DE UN PCR ESPECIE ESPECÍFICO PARA LA DETECCIÓN DE MYCOPLASMA GALLISEPTICUM Y SU DIFERENCIACIÓN CON MYCOPLASMA

IMITANS Y. Lozada*, Evelyn Lobo*, M Colas**, S. Martínez*. *Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas (MYCOLAB). Grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología, CENSA, Cuba. yoesley@censa.edu.cu **Laboratorio de Investigaciones y Diagnóstico Aviar.

El Síndrome respiratorio crónico de las gallinas (SRC) es una enfermedad infecto

contagiosa de curso crónico, su etiología es un complejo multifactorial donde intervienen

varios agentes y factores, reconociéndose a Mycoplasma gallisepticum el agente etiológico

principal, aunque en los últimos años se ha reportado la participación de cepas altamente

virulentas de Mycoplasma synoviae produciendo lesiones típicas del SRC, incluso

actualmente de reconoce que micoplasmas no patógenos bajo determinadas condiciones

epizootiológicas pueden participar en la etiología del SRC, tal es el caso de Mycoplasma

gallinarum y Mycoplasma imitans, quienes fueron capaces de inducir aerosaculitis, cuando

se combinaron con el virus de la Bronquitis infecciosa aviar. En el siguiente trabajo nos

propusimos evaluar un PCR especie específico para la detección de Mycoplasma

gallisepticum utilizando como diana el gen mgc2. Como parte de este trabajo se llevó a

cabo estudios de factibilidad en nuestras condiciones, también se evaluó la robustez

empleando diferentes temperaturas de alineamiento, además se estimó la sensibilidad

analítica del ensayo que resultó ser de 1 pg/µL. La utilización de cebadores diseñados

sobre la base de la secuencia del RNAr 16S de los micoplasmas garantiza la especificidad

de especie, en el caso particular de Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma imitans no

se emplea ya que presentan en su genoma una alta homología alrededor de un 99%, por

eso en nuestro trabajo se decidió emplear como diana el gen mgc2 lo que nos hace contar

en nuestro laboratorio con un sistema altamente específico y nos evita diagnosticar

muestras falsas positivas.

179

VACD-25. RELACIÓN DE LOS ÍNDICES DE INFESTACIÓN DE VARROA DESTRUCTOR CON LOS INDICADORES BIOMÉTRICOS LONGITUD DEL ALA

ANTERIOR Y DIÁMETRO DE LAS CELDAS DE OBRERAS Anisley Pérez-Hernández, J. Demedio-Lorenzo Universidad Agraria de La Habana. Autopista Nacional y Carretera de Tapaste, San José de las Lajas, Provincia Mayabeque. Cuba. Telf. 047-86-0101. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootécnia. anisley_perez@isch.edu.cu

Estudiando los primeros trabajos biométricos realizados en Cuba hace ya más de 20 años

resulta del máximo interés poder evaluar los índices de infestación de Varroa destructor en

colmenas maternas y paternas de un centro de crianza de reinas y determinar su relación

con las características biométricas que permitan comprender los posibles cambios sufridos

por la especie bajo la influencia de diversos factores en este período. El estudio se

desarrolló en un Centro de Crianza de Abejas Reinas (CCR) de la provincia de La Habana,

durante los meses de febrero/2007 a mayo/2008. No se apreció relación entre los índices

de infestación por V. destructor y los indicadores longitud del ala y diámetro de las celdas

de obreras. Hubo predominio de la coloración negra en las abejas de las colmenas

maternas, procedentes de un mismo apiario de genética, donde se aplica como criterio de

selección la baja tasa de infestación resultando un predominio de abejas de coloración

negra. Se hizo evidente la necesidad de profundizar en los estudios biométricos,

conductuales y moleculares de las abejas y los ácaros Varroa presentes en el país.

VACD-26. PREVALENCIA DE NEUMONÍA EN CERDOS DE CEBA DESTINADOS A LA

PRODUCCIÓN DE UN SURFACTANTE NATURAL C. Bulnes*, R. Durand*, A. Pérez** y E. Lobo*** *Dpto. Patología, **Dir. Calidad y ***Grupo de Bacteriología. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). cbulnes@isch.edu.cu Con el objetivo de estudiar la prevalencia de neumonía en cerdos de ceba criados bajo

condiciones experimentales de explotación, para la producción de un surfactante natural,

se trabajaron 615 animales del cruce comercial York-Shire, Landrace x Duroc que fueron

sacrificados al arribar a los 87 ± 3Kg de masa corporal. Los cerdos correspondientes al

grupo I, (459 animales) fueron mantenidos durante el periodo de preceba y ceba en una

unidad experimental con control estricto de las condiciones de manejo y alimentación, el

Grupo II (156 animales) proceden de una granja controlada con ciclo cerrado de

producción que fue utilizada como control del ensayo. Los resultados evidenciaron la

presencia de Neumonía en el 47% de los cerdos estudiados en el grupo I y de 98% en el

grupo II (p<0.001), el análisis del grado de severidad de las lesiones demostró también

180 diferencias significativas entre grupos (p<0.001), se aisló P. multocida, P. hemolítica y

Mycoplasma spp entre otros microorganismos de los cerdos afectados de ambos grupos y

se demostró la efectividad de un sistema de manejo estrictamente controlado en la

disminución de la prevalencia de neumonía en cerdos donantes de pulmones como

materia prima de un surfactante natural.

VACD-27. MANIFESTACIONES CLÍNICAS Y CAMBIOS ANATOPATOLÓGICOS EN POLLOS DE CEBA INOCULADOS CON LA CEPA R. LOW DE MYCOPLASMA

GALLISEPTICUM

C. Bulnes* y E. Lobo**

*Dpto Patología, Dirección Salud y Producción Animal y **Dpto. Bacteriología, Dirección

Microbiología. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). cbulnes@isch.edu.cu

Se infestaron experimentalmente 20 pollos de ceba de 21 días de edad (grupo I) que

fueron inoculados simultáneamente por las vías senoinfraorbital e intratraqueal con 25

mg/ml de una cepa R low de M. gallisepticum para valorar las manifestaciones clínicas y

las lesiones anatomopatológicas más significativas. Otros 20 pollos de igual edad y raza

(grupo II) fueron utilizados como controles. Se realizó observación clínica durante 14 días

posteriores a la inoculación, momento en el que fueron sacrificados por el método de

desangrado. Desde el punto de vista clínico se observó, tos, disnea, secreciones nasales y

oculares e inflamación de los senos infraorbitarios en el 95% de los animales inoculados y

la presencia de un cuadro lesional caracterizado por discreto engrosamiento y opacidad de

los sacos aéreos, así como hemorragias petequiales en la porción superior de la tráquea,

ligera y de la laringe. No se apreciaron otras alteraciones en el resto de los órganos del

tracto respiratorio de las aves inoculadas. Estos cambios no fueron observados en los

animales utilizados como controles. Se demostró que la cepa R low de M. gallisepticum, es

patógena en pollos de 21 días inoculados por las vías seno infraorbital e intratraqueal de

forma combinada lo que quedó demostrado por las manifestaciones clínicas y

morfopatologícas observadas que se caracterizaron por sinusitis, laringitis, traqueitis y

aerosaculitis discreta.

181 VACD-28. CONTROLES OFICIALES DE TRIQUINA EN MATADEROS DE PORCINO EN

ESPAÑA

F.A. Pérez-Pérez*, Maria J. Estévez-Herrera** *Veterinario. Área G. S. Sierra De Huelva. Junta de Andalucía. Centro de Salud Cumbres Mayores. C.P. 21380 .España **Dra. Veterinaria. Laboratorio Sanidad Animal. Junta de Extremadura. Ctra Los Santos S/N. C.P.06300 Zafra. España. En la zona de explotación de ganado porcino extensivo (zonas adehesadas del suroeste

de España), es muy significativo el consumo de carne de cerdo y derivados cárnicos, que

pueden estar infestados por nematodos del género Trichinella.

Las pruebas de diagnóstico de triquina se encuadran dentro de las pruebas de laboratorio

que deben realizarse en el marco de los Controles Oficiales Veterinarios y como tales,

deben seguir los procedimientos de acreditación necesarios y exigidos conforme a

normativas de la Unión Europea, para cumplir las garantías satisfactorias de implantación

de sistemas de control de calidad de estos análisis, y según los parámetros establecidos

sobre los controles oficiales efectuados para garantizar la verificación del cumplimiento de

la legislación en materia de piensos y alimentos y la normativa sobre salud animal y

bienestar de los animales, donde especifica que los laboratorios deben estar acreditados

según las normas europeas. En el presente trabajo se tratan los procedimientos

registrados en la acreditación de los laboratorios que se quieren autorizar para la

realización de estas técnicas, de modo que las unidades analíticas de los mataderos,

cumplan la legislación española y europea vigente. Podemos concluir que asistiremos a un

escenario futuro en el que el diagnóstico oficial de triquina podrá realizarla el matadero en

las modalidades de acreditación de su laboratorio por ENAC, o mediante la concertación

de los análisis con un laboratorio ajeno acreditado para la técnica de triquina, o bien por el

sistema de laboratorio de referencia y laboratorio satélite vinculado (localizado en

matadero).

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

REGLAMENTO (CE) 2075/2005 DE LA COMISIÓN por el que se establecen normas

específicas para los controles oficiales de la presencia de triquinas en la carne. (DO L 338

de 22.12.2005, p. 60)

REGLAMENTO (CE) 882/2004 DEL PARLAMENTO EUROPEO Y DEL CONSEJO sobre

los controles oficiales efectuados para garantizar la verificación del cumplimiento de la

legislación en materia de piensos y alimentos y la normativa sobre salud animal y bienestar

de los animales (DO L 191 de 28.5.2004, p. 1).

182

VACD-29. SEROPREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A BRUCELOSIS DE LOS CAPRINOS EN CINCO MUNICIPIOS DEL CENTRO DE

VERACRUZ M. Arilla*, S.G. Hernández-Ruiz**, M. Villanueva-Valencia**, D.I. Martínez-Herrera**, L.X. Nouvel*, J.A. Villagómez-Cortés**, V. Vela-Cerón***, A.E.J. Peniche-Cardeña**, J.F. Morales-Alvarez****, R. Flores-Castro**** *Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse 23, chemin des Capelles, 31076 Toulouse cedex 03, France. **Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación esq. Yañez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, México. Telf. +52 (229) 9342075 y 9344053. dmartinez@uv.mx. ***Centro Universitario Interamericano del Pacífico. Licenciatura en Medicina Veterinaria y Zootecnia. Calle Francisco Villa s/n, Colonia Santa Cecilia, Tapachula, Chiapas, CP 30739. ****Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P. 05110, Cuajimalpa, México, Distrito Federal. Para conocer la prevalencia y factores de riesgo asociados a brucelosis caprina en cinco

municipios de la zona centro de Veracruz, México, se realizó un estudio polietápico

estratificado. El tamaño de muestra se calculó con Win Episcope Ver. 2.0 para obtener 182

animales y una fracción de muestreo de seis por unidad de producción (UP). Las UP se

determinaron por conglomerados con las tablas de valores propuestas por Canon y Roe,

obteniéndose 26. Se realizaron las pruebas de tarjeta al 3% e inmunodifusión radial (IDR)

como tamiz y confirmatoria, respectivamente. Para determinar los factores de riesgo se

realizaron dos cuestionarios, uno general por cada UP seleccionada y uno individual por

animal muestreado. Los resultados se analizaron por epidemiología descriptiva y la

asociación por Odds Ratio (OR). De los 182 sueros, seis resultaron positivos (3.3%) a

tarjeta; sin embargo ninguna se confirmó por IDR, por lo tanto la seroprevalencia general

fue de 0%. Ninguno de los datos obtenidos resultó factor de riesgo (P>0.05); sin embargo,

la ingestión de calostro y vacunación contra brucelosis resultaron ser factores protectores.

Se concluye que la seroprevalencia es baja en los municipios y que el consumo de calostro

y la vacunación protegen contra la infección.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Al-Majali, A.M., Talafha, A.Q., Ababneh, M.M. 2009. Seroprevalence and risk factors for

bovine brucellosis in Jordan. Journal of Veterinary Science. 10(1):61-5

Coelho AM, Coelho, A.C., Roboredo, M., Rodriguez, J. 2007. A case-control study of risk

factors for brucellosis seropositivity in Portuguese small ruminants herds. Preventive

Veterinary Medicine. 14;82(3-4):291-301

183

Martínez H.D.I, Morales M.J.A., Peniche C.A., Molina S.B., Rodríguez C.M.A., et al. 2010.

Use of RB51 vaccine for small ruminants brucelosis prevention, in Veracruz, México.

International Journal of Dairy Science. 5(1): 10-17

VACD-30. SEROPREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS CON

NEOSPOROSIS CAPRINA EN CINCO MUNICIPIOS DEL CENTRO DEL ESTADO DE VERACRUZ, MEXICO

J.C. Huerta-Peña*, D.I. Martínez-Herrera*, A.E.J. Peniche-Cardeña*, M. Villanueva-Valencia*, S.G. Hernández-Ruiz*, J.A. Villagómez-Cortés*, F.T. Barradas-Piña**, J.F. Morales-Alvarez***, R. Flores-Castro*** *Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Tel. y Fax: +52 (229) 9342075 y 9344053. dmartinez@uv.mx **Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro de Investigación Regional Golfo Centro. Campo Experimental La Posta. Km. 22.5 Carretera Veracruz-Cordoba Paso del Toro, Paso del Toro, C.P. 94277, Medellín de Bravo, Veracruz, México. ***Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, México, Distrito Federal. El objetivo del trabajo fue determinar la seroprevalencia y los factores de riesgo asociados

con la neosporosis caprina mediante un estudio polietápico y estratificado en municipios de

la zona centro del estado de Veracruz; se muestrearon 182 animales de 26 unidades de

producción (UP), con una fracción de muestreo de seis por UP estimado con Win Episcope

Ver. 2.0. Las UP fueron seleccionadas por conglomerados con las tablas de valores de

Cannon y Roe. El diagnóstico se realizó con un ELISA comercial. La seroprevalencia se

determinó con el programa VassarStats® y los factores de riesgo por Razón de Momios

(RM). La seroprevalencia general fue de 3.84%, por municipios afectados 60% y por UP

15.38%. El municipio de Coacoatzintla es de riesgo para la infección (RM=5.958; IC95%:

1.271–27.940) y los municipios de Coatepec, Chiconquiaco, así como los sementales son

factores protectores (RM=0; IC95%: 0–0). Se concluye que la neosporosis caprina tiene una

seroprevalencia baja, pero con distribución media dentro de los municipios y UP. Los

caprinos que se encuentran en Coacoatzintla tienen 5.9 más veces riesgo de infectarse

con Neospora caninum, en cambio los ubicados en Coatepec y Chiconquiaco, así como los

sementales son factores protectores.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Chartier, CH., Baudry C., Losson, De Meerschman F. B., Romand S., Thulliez P. 2000.

Neosporosis en la cabra: resultados de dos encuestas serológicas en el oeste de Francia.

Le Point Veterinaire 31(209): 82

184

Figliuolo, L.P.C., Kasai N., Ragozo A.M.A., de Paula V.S., Dias R.A., Souza S.L.P.,

Rodrigues A.A.R., Viana R.B., Aguilar D.M., Gennari S.M. 1998. Prevalencia de anticorpos

anti-Neospora caninum em ovinos e caprinos do Estado de Sao Paulo. I Fórum Brasileiro

de Estudos sobre Neospora caninum 28 47-49.

Gondim, L.F., McAllister M.M., Mateus-Pinilla N.E., Pitt W.C., Mech L.D., Nelson M.E.

2004. Transmission of Neospora caninum between wild and domestic animals. Journal of

Parasitology. 90, 1361-1365.

VACD-31. SEROPREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A LEPTOSPIROSIS DE LOS CAPRINOS EN CINCO MUNICIPIOS DEL CENTRO DE

VERACRUZ, MÉXICO J.A. Santos-Bonilla*, D.I. Martínez-Herrera*, D. Romero-Salas*, F.T. Barradas-Piña**, A.E. Peniche-Cardeña*, J.A. Villagómez-Cortés*, J.V. Ornelas-Cruz*, J.F. Morales-Álvarez***, A.R. Pérez-Mata***, R. Flores-Castro***. *Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Tel. y Fax: +52 (229) 9342075 y 9344053. dmartinez@uv.mx. **Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro de Investigación Regional Golfo Centro. Campo Experimental La Posta. Km. 22.5 Carretera Veracruz-Cordoba Paso del Toro, Paso del Toro, C.P. 94277, Medellín de Bravo, Veracruz, México. ***Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, México, Distrito Federal. Con objeto de determinar la seroprevalencia y factores de riesgo asociados con

leptospirosis caprina se realizó un estudio transversal polietápico, estratificado en

Unidades de Producción (UP) de cinco municipios del estado de Veracruz, México. La

muestra se calculó con el programa Win Episcope Ver. 2.0; así, se obtuvieron 182

animales con fracción de muestreo de 6 por UP, determinadas por conglomerados con las

tablas de Cannon y Roe, para obtener 26 UP. Se realizó la prueba de aglutinación

microscópica (MAT), para 7 serovares. La seroprevalencia se calculó con el programa

VassarStat® y para los factores de riesgo, la Razón de Momios (RM). La seroprevalencia

general fue 13.74% y por municipios 80%. Las seroprevalencias para Chiconquiaco,

Coatepec, Coacoatzintla, Tlacolulan y Yecuatla fueron 18.75%, 17.07%, 30.56%, 0% y

2.94%, respectivamente. El municipio de Coacoatzintla es factor de riesgo para Leptospira

spp y para L. hardjo y; Coatepec para L. tarassovi. Los municipios de Chichonquiaco y

Tlacolulan son factores de protección para L. tarassovi y, los de Tlacolulan y Yecuatla, para

L. Bratislava; así como las cabras en ordeña para Leptospira spp. Se concluye que la

seroprevalencia de leptospirosis caprina es moderada, pero tiene gran distribución en los

municipios.

185 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Cunha, E.L.P., Mota, R.A., Meireles, L., Silva, A.C.C., Silva, A.V., Langoni, H. 1999.

Pesquisa de Aglutininas anti-Leptospira em soros de caprinos no estado de Pernambuco,

Brasil. Revista Brasileira Medicina Veterinária 21: 38–40

Lilenbaum, W., Nunes de Souza, G., Ristow, P., Cortez Moreira, M., Fraguas, S., da Silva

Cardoso, V., Roland Oelemann, W.M. 2007. A serological study on Brucella abortus,

caprine arthritis-encephalitis virus and Leptospira in dairy goats in Rio de Janeiro, Brazil.

Veterinary Journal, 173(2): 408-412.

Lilenbaum, W., Varges, R., Medeiros, L., Cordeiro, A.G., Cavalcanti, A., Nunes de Souza,

G., Richtzenhain, L.J., Vasconcellos, S.A. 2008. Risk factors associated with leptospirosis

in dairy goats under tropical conditions in Brazil. Research in Veterinary Science, 84(1): 14-

17.

VACD-32. ESTUDIO EPIDEMIOLÓGICO DE ARTRITIS-ENCEFALITIS CAPRINA EN

MUNICIPIOS DEL CENTRO DE VERACRUZ

S.G. Hernández-Ruiz*, D.I. Martínez-Herrera*, A.E.J. Peniche-Cardeña*, J.A. Villagómez-Cortés*, M. Villanueva-Valencia*, J.F. Morales-Álvarez**, R. Flores Castro**. *Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Telf. y Fax: +52 (229) 9342075 y 9344053. dmartinez@uv.mx **Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, México, Distrito Federal. La Artritis - Encefalitis Caprina (AEC) es una enfermedad de amplia distribución mundial

que afecta a caprinos sin distinción de sexo, raza o edad. Es considerada una enfermedad

crónica que presenta diversas manifestaciones clínicas y que conlleva a grandes pérdidas

económicas para la caprinocultura. Así, el objetivo de este trabajo fue estimar la

seroprevalencia y los factores de riesgo asociados a la presencia de AEC en 14 municipios

del centro de Veracruz, México; para ello, se realizó un estudio polietápico estratificado. El

tamaño de muestra se calculó con Win Episcope Ver. 2.0 bajo la modalidad ―estimar

proporciones‖ para una prevalencia de 50%, error 5% y confiabilidad 95%, lo que implicó al

menos 385 animales con una fracción de muestreo de seis por unidad de producción (UP).

Las UP en cada municipio se seleccionaron por conglomerados con las tablas de valores

propuestas por Canon y Roe y se obtuvieron 81 para los 14 municipios. Fueron

muestreadas hembras a partir de los tres meses de edad y todos los sementales. Las

muestras séricas obtenidas se procesaron con dos kits comerciales de ELISA indirectos en

modalidades de tamiz y confirmatorio. Para la determinación de los factores de riesgo se

realizó un cuestionario general por cada UP muestreada y un cuestionario individual por

186 animal muestreado. Los resultados obtenidos se analizaron por epidemiología descriptiva y

la asociación entre las variables se calculó por Razón de Momios (RM). Así se obtuvieron

565 muestras, de las cuales 43 resultaron positivas y se confirmaron sólo 36 para una

seroprevalencia general de 6.3%; de los 14 municipios muestreados 9 (64.2%) resultaron

afectados y; de las 81 UP muestreadas, 18 (22.2%). Así, fueron identificados como

factores de riesgo animales pertenecientes a las municipalidades de Coatepec y

Coacoatzintla, los sementales, el rango de 7 a 12 meses de edad, animales cuyo origen

fueron los estados de Querétaro y Guanajuato, los tipos de explotación estabulada y

semiestabulada y, la presencia de artritis. Por otro lado, la ausencia de signos clínicos

resultó ser un factor protector. Se concluye que la seroprevalencia de AEC es baja pero de

alta distribución dentro de los municipios y rebaños, así como una marcada diversidad de

factores de riesgo contribuyen a su presencia.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Lilenbaum, W., Nunes de Souza, G., Ristow, P., Cortez Moreira, M., Fraguas, S., da Silva

Cardoso, V., Roland Oelemann, W.M. 2007. A serological study on Brucella abortus,

caprine arthritis-encephalitis virus and Leptospira in dairy goats in Rio de Janeiro, Brazil.

Veterinary Journal, 173(2): 408-412.

VACD-33. CIRCOVIROSIS PORCINA Y SÍNDROMES ASOCIADOS EN CUBA.

DESCRIPCIÓN DEL CUADRO CLÍNICO LESIONAL

Patricia Domínguez, M.I. Precedo, O. Fonseca, L. Pérez, C.L. Perera. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. patricia@censa.edu.cu Actualmente se conoce la existencia de una epizootia mundial conocida como el Síndrome

Multisistémico de Emaciación Postdestete (PMWS) o circovirosis porcina (CP) que

ocasiona importantes pérdidas en la producción. La infección por PCV2 se ha asociado a

diversos procesos patológicos que afectan al cerdo, incluyendo la circovirosis porcina (CP),

fallo reproductivo, síndrome de dermatitis y nefropatía porcino (SDNP), neumonía

proliferativa necrotizante (NPN) y complejo respiratorio porcino (CRP). En varias provincias

del país se ha reportado la presencia de CVP2 asociado a cuadros clínico-lesionales

compatibles con PMWS y PDNS. Es por ello que resulta necesario profundizar en el

diagnóstico de la circovirosis y otros problemas asociados al CVP2. Se estudiaron treinta y

seis cerdos de cinco granjas ubicadas en tres provincias del país. Los signos clínicos

evaluados incluyeron la condición corporal, signos respiratorios y digestivos (tos, disnea y

diarrea), palidez en la piel, y el aumento de tamaño de los ganglios linfáticos inguinales

superficiales así como lesiones hemorrágicas en piel. Los cerdos afectados tenían entre 7-

187 15 semanas. La morbilidad osciló entre 10-25% y la mortalidad fue menor al 50% en los

animales afectados. Se realizó la necropsia en todos los animales. El 64% de los cerdos

fueron positivos a la presencia de antígeno de PCV2 en uno o más tejidos por HIC e IHQ.

El marcaje se limitó al citoplasma de las células. El 50% de los animales resultaron

además positivos a PVP y PPC.

VACD-34. EVALUACIÓN DE LA INTERFERENCIA DE LOS ANTICUERPOS MATERNOS EN CRÍAS INMUNIZADAS CON UN CANDIDATO VACUNAL DE

SUBUNIDAD PROTEICA (E2)

E. Vega*, M. Barrera*, M.A. Abeledo*, P. Alfonso*, M.P. Rodríguez-Moltó**, M.T. Frías-Lepoureau*, M.I. Percedo, J. M. Figueredo*, S. Castell*. *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apdo 10, San José de Las Lajas, Habana, Cuba. evega@censa.edu.cu **Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB). Habana, Cuba. El objetivo fue evaluar la inmunidad inducida por un candidato vacunal de subunidad

proteica E2, contra la Peste Porcina Clásica en cerdos con diversas condiciones de

inmunidad pasiva. Para ello, se evaluó la respuesta inmune humoral inducida por la

administración del candidato vacunal ante la presencia de anticuerpos maternos derivados

de la inmunización de las madres con la vacuna viva atenuada de la Cepa China y con el

propio candidato vacunal de subunidad proteica E2. Se concluye que el candidato vacunal

de subunidad proteica E2, es capaz de inducir una respuesta inmune humoral satisfactoria

frente a anticuerpos de origen materno homólogos y heterólogos, lo que representa un

aspecto fundamental para su aplicación en edades tempranas y en condiciones de

endemismo de la enfermedad.

VACD-35. EVALUACION EN CAMPO DE LA VACUNA DE MYCOBACTERIUM BOVIS

BCG CONTRA LA TUBERCULOSIS BOVINA

G. López-Valencia*, T. Renteria-Evangelista*, J. de Jesús-Williams**, A. Licea-Navarro***, A. De la Mora-Valle*, G. Medina-Basulto*, J.C. Herrera*, R.M. Bermúdez*, S. Hori*, C. Pujol*.

*Instituto de Investigaciones en Ciencias Veterinarias Universidad Autónoma de Baja California. Obregón y Julián Carrillo S/N Col. Campestre CP. 21386, Mexicali Baja California, México. Tel/Fax: (686) 5 63 69 06. gilbertolopez@uabc.edu.mx **Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma de Yucatán, México. ***Centro de Investigación Científica y de Educación Superior-Ensenada, México. La tuberculosis (TB) en animales sigue siendo un problema de salud a nivel mundial. La

mejor opción para el control de la TB a largo plazo en bovinos es el desarrollo de vacunas.

La vacuna de Mycobacterium bovis-BCG (Mb-BCG) ha sido evaluada a nivel experimental,

188 pero es necesario que esta, sea evaluada bajo condiciones de infección natural. En el

presente trabajo, se evaluó bajo condiciones de campo, la vacuna de Mb-BCG en un hato

lechero con alta prevalencia (40%) de TB. Un total de 140 becerros negativos a

tuberculosis (<2 semanas de edad) fueron incluidos en el estudio. El grupo 1: incluyó 70

becerros vacunados (una sola dosis 1x106) y el grupo 2: incluyó 70 no vacunados. Todos

los animales permanecieron juntos durante todo el estudio (12 meses) compartiendo el

mismo corral y expuestos de forma natural al estar en contacto con vacas tuberculosas.

Los resultados muestran que la TB fue mayor en el grupo no vacunado (22.7% Vs 9.2%)

(p=0.03). Además, se observó que los becerros no vacunados tienen 2.6 (IC95%: 1.07–

5.68) veces más probabilidad de infectarse que los vacunados. Adicionalmente, se realizó

la prueba PCR de muestras de exudado nasal. Las diferencias entre las proporciones de

eliminación de los dos grupos (21.7% Vs 0%) fueron diferentes (p=0.03). Todos los casos

positivos a PCR (5/44) se presentaron en los no vacunados, ese hallazgo sugiere que el

uso de la vacuna puede ser capaz de prevenir que los animales tuberculosos eliminen

bacilos en su secreción nasal hasta el primer año de edad.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Buddle, M.B. 2001. Vaccination of cattle against Mycobacyerium bovis. Tuberculosis. 81:

125-132.

Vordermeier, H.M.; Chamber, M.A.; Buddle, B.M.; Pollock, J.M.; Hewinson, R.G. 2006.

Progress in the development of vaccines and diagnostic reagent to control tuberculosis in

cattle. The Veterinary Journal. 171: 229-244.

VACD-36. VACUNAS AVICOLAS Y PARA PORCINOS

Irina Díaz-Alfonso, E. Rodríguez-Pérez Novartis AG. Dirección: Calle A, Esquina 21, Vedado, Habana, Cuba. irina2005diazal@yahoo.com, enrique.rod@enet.cu Novartis es una compañía multinacional que se dedica a la elaboración de productos

farmacéuticos y biotecnológicos tanto para la salud humana como animal, tiene como

objetivo mejorar la salud, el bienestar y la productividad del ganado y asegurar que las

mascotas disfruten de una vida más sana y prolongada. Las unidades de negocios en que

se divide Sanidad Animal son: Mascotas, Equinos, Ganado Vacuno, Aves y Cerdos. Desde

su creación su prioridad fundamental ha sido la innovación y el desarrollo de nuevos

productos medicinales entre los que cabe destacar las vacunas avícolas y para porcinos.

Dentro de la amplia cartera de vacunas tenemos para las aves TABIC MC, TABIC VH, H

120, VH + H-120, COXABIC y para los porcinos se encuentran MYCO SHIELD, PARVO

189 SHIELD L5E, PORCINE PILE SHIELD. Estas vacunas prevén enfermedades como

Gumboro, Newcastle Cepa VH, Bronquitis infecciosa, Coccidiosis, Neumonía, Parvovirus,

Escherichia Coli, entre otras. Es importante tener en cuenta que si el pie de cría está

siendo inmunizado se debe considerar la vacunación cuando los anticuerpos maternos

estén bajos para aplicar la dosis en la línea de producción. Durante los últimos años,

Novartis ha sido la empresa con el mayor número de nuevas entidades moleculares

aprobadas por la Food and Drug Administration (FDA) de EE.UU. Los científicos se centran

especialmente en las enfermedades que siguen presentando necesidades médicas

insatisfechas y trabajan para garantizar que Novartis mantenga su importante cartera de

productos en desarrollo y su trayectoria de grandes éxitos en el descubrimiento de

fármacos innovadores.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Forward research, Convenient formulation study, enero 2007

ESCCAP de las siglas en inglés “European Scientific Councel Companion Animal

Parasites” o Consejo Científico Europeo para el estudio de parásitos de Animales de

Compañía), www.esccap.com

Ensayo de palatabilidad/aceptabilidad: datos sobre el estudio de archivo número NAH-02-

0054

VACD-37. RETROVIRUS AVIARES COMO CONTAMINANTES DE VACUNAS:

MÉTODOS ACTUALES DE DETECCIÓN.

Julia Noda, D. Relova, A.M. Acevedo

Grupo de Virología Animal, Dir. De Microbiología, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apdo 10, San José de las Lajas, CP 32 700, La Habana, Cuba. jnoda@censa.edu.cu

Los retrovirus de la Leucosis aviar (VLA) y Reticuloendoteliosis (VRE) se han descrito

como contaminantes de vacunas utilizadas para el control de enfermedades en la

avicultura comercial. La transmisión vertical del VLA por vía del huevo embrionado, tanto

congénita (virus exógenos) como genética (virus endógenos) posibilita la infección de

pollos libres de patógenos específicos destinados a la producción de embriones para la

elaboración de vacunas y la contaminación de los bancos de semillas y/o el producto final.

La posibilidad de recombinación genética entre los virus exógenos y endógenos se

reporta, con riesgo potencial de infección por estos retrovirus cuando vacunas

contaminadas son aplicadas por vía parenteral, en la fase de mayor susceptibilidad de las

aves causando inmunotolerancia o tumores. La detección de retrovirus en vacunas

establecida por los organismos reguladores requiere de la multiplicación en cultivos

190 celulares e identificación por fijación del complemento (COFAL) y la inmunofluorescencia

para ALV y REV, respectivamente. La menor sensibilidad de estos ensayos y la

emergencia de recombinantes y variantes de VLA no revelados por ellos, ha determinado

el desarrollo de métodos alternativos como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y

la PCR en tiempo real complementados por análisis con enzimas de restricción y

secuenciación de ácidos nucleicos, han dado lugar a herramientas más rápidas, sensibles

y especificas para revelar retrovirus en vacunas comerciales. Este trabajo está dirigido a la

discusión de los riesgos del empleo de vacunas contaminadas con retrovirus aviares y la

aplicación de las tecnologías moleculares actuales para la detección e identificación de

estos virus en el control de calidad de vacunas aviares.

VACD-38. CHANGES IN SALIVARY GLANDS OF FEMALES TICKS FED ON HOST IMMUNIZED WITH GLANDULAR EXTRACTS OF RHIPICEPHALUS SANGUINEUS

K.C.S. Furquim*, M.I. Camargo-Mathias**, G.H. Bechara*

*Departamento de Patologia Veterinária, FCAV, UNESP, Via de Acesso Prof. Paulo Castellane, s/n, CEP: 14884-900, Jaboticabal, S.P., Brazil **Departamento de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP, Av. 24 A, nº 1515, Cx. Postal 199, CEP: 13506-900, Rio Claro, S.P., Brazil

The pharmacological and immunological properties of ticks‘ saliva provide them with a very

successful spoliative action on hosts (Wikel, 1999). The saliva acts in the modulation of

immune-inflammatory response of the host, allowing feeding of the ticks (Sauer et al. 2000).

The aim of this study was verify the action of hosts resistance (rabbits) acquired by the

immunization with the extracts in the several secretor time of salivary glands cycle of

females fed on them. It was verified that the resistance to salivary gland extracts of R.

sanguineus females fed for 2 (SGE2) and 4 days (SGE4) acted in the cells of acini II and III,

being c1 and c5 (II) and d (III) inactivated due to the action of SGE2 and c1 and c4 (II) and f

(III) inactivated by the action of SGE4. As for the resistance to salivary gland extract of

females fed for 6 days (SGE6) the effect was only on cells of acini II (c1, c3 e c4), which

were also inactivated. In addition, the hosts‘ resistance to SGE2-SGE6 extracts made the

degenerative process precoceous in comparison to naïve hosts. These results making it

clear that the immunization of the hosts with glandular extracts SGE2-SGE6 had influenced

the glandular physiology of R. sanguineus, which is an important information in the search

for a way to control these ectoparasites.

Supported by FAPESP

191 REFERENCES

JR Sauer, RC Essenberg, AS Bowman. 2000. Salivary glands in ixodid ticks: control and

mechanism of secretion. J Insect Physiol 46, 1069-1078.

SK Wikel. 1999. Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen

transmission. Int J Parasitol 29, 851-859.

VACD-39. TEST DEL GAMMA-INTERFERON COMO PRUEBA COMPLEMENTARIA A LA INTRADERMOTUBERCULINIZACION EN EL PROGAMA DE ERRADICACION DE

TUBERCULOSIS BOVINA EN ESPAÑA

Maria J. Estévez-Herrera*, F.A. Pérez-Pérez**. *Dra. Veterinaria. Laboratorio Sanidad Animal. Junta de Extremadura. Ctra Los Santos S/N. C.P.06300 Zafra. España. **Veterinario. Área G. S. Sierra De Huelva. Junta de Andalucía. Centro De Salud Cumbres Mayores. C.P. 21380 .España

Los Programas Nacionales de Erradicación de Tuberculosis Bovina en España han sufrido

diversas modificaciones a lo largo de los años, con el fin de adaptarse a los cambios y

conocimiento científico de la enfermedad. Un pilar principal fue incrementar la sensibilidad

del diagnóstico, tanto a nivel de rebaño como individual. En España se consideran como

pruebas de diagnóstico oficial: Intradermotuberculización (IDTB) simple y comparativa,

prueba de gamma-interferón (γ-IFN) e Identificación del agente.

La prueba de γ-IFN mide la liberación de una linfoquina (interferón gamma) en un sistema

de cultivo de sangre completa ―in vitro‖ tras la estimulación de los linfocitos con tuberculina

bovina y aviar. La detección de este componente mediante realización de un ensayo ELISA

indicaría la presencia de la enfermedad.

Comparada con la IDTB, la prueba de γ-IFN posee una sensibilidad elevada pero parece

menos específica.

El test de γ-IFN, en el ámbito de la normativa europea y española, se contempla como una

prueba complementaria y paralela a la técnica de diagnóstico de IDTB.

Podemos concluir que el uso de la tecnica del γ-IFN permitirá la detección del máximo

número de animales infectados en rebaños positivos y que el aumento de sensibilidad de

esta prueba como complementaria a la cutánea en la erradicación de la tuberculosis

bovina, ofrece incuestionables beneficios a toda la sociedad por la lucha y eliminación de

esta grave zoonosis.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los Animales Terrestres

(actualizado: 16.04.2008).

192

Programa Nacional de Erradicación de Tuberculosis Bovina presentado por España para el

Año 2011. Dirección General de Recursos Agrícolas y Ganaderos. Subdirección General

de Sanidad de Producción Primaria. Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino.

Gobierno de España.

VACD-40. CONTROL DE GARRAPATAS (RIPHICEPHALUS BOOPHILUS MICROPLUS)

EN BOVINOS CON EL INMUNÓGENO HERBER BIOGAR EN GUANARE, PORTUGUESA, VENEZUELA

A.R Botello*, A.L. Botello**, C.N. Borroto***, M. Suárez***, D. Pérez****, Y.V. Rodríguez*****, H. Fajardo**, K. Pérez**, A.O. González******, A.N. Rodríguez*******, B. Linares****, M. Colicchia****, I. Gómez**, P. Peraza****, A.M. Gort*******. *Empresa Agropecuaria, Mayarí, Holguín, Cuba. **Instituto de Investigaciones Agropecuarias ―Jorge Dimitrov‖. Granma, Cuba. abotellol@dimitrov.cu ***Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, La Habana, Cuba. ****Servicio Agropecuario de Sanidad Animal, Venezuela. *****Universidad de Granma. Cuba. ******Empresa Agropecuaria Genética de Matanza, Cuba. Empresa Agropecuaria Genética de Matanza, Cuba. *******Instituto de Medicina Veterinaria, Cuba. La presente investigación se realizó con el objetivo de controlar la garrapata

(Riphicephalus Boophilus microplus) por medio del inmunógeno Herber biogar en bovinos

en el municipio de Guanare, Portuguesa, Venezuela. Se investigaron 28 unidades con una

masa bovina de 1 776 animales mestizos (Holstein x Cebú) de doble propósito y se

conformaron dos tratamientos bajo un diseño completamente aleatorizado no pariado,

cada uno compuesto por 888 animales, al primer grupo, no se le aplicó el inmunógeno, al

segundo se le administró por vía intramuscular el inmunógeno contra la garrapata

(Riphicephalus Boophilus microphlus) (dos mL/animal). A los que se les midió: proporción

de animales afectados con garrapatas, morbilidad y morbiletalidad. Las comparaciones se

realizaron mediante una prueba de hipótesis de Z. El 100% de las muestras de garrapatas

investigadas (Riphicephalus Boophilus microphlus) lo que propició la acción del

inmunógeno Herber biogar que disminuyó el número de bovinos afectados con garrapatas

a 6% en dos años, como un efecto indirecto se redujo la morbilidad de las enfermedades

hemoparasitarias (babesia y anaplasma).

193 VACD-41. HISTOPATOLOGÍA DE EMBRIONES DE POLLO INOCULADOS CON LECHE

DE VACAS SEROPOSITIVAS A BRUCELLA ABORTUS E. Pulido-Camarillo*, D.I. Martínez-Herrera**, V.T. Pardío-Sedas**, A. López-Merino***, J.F. Morales-Álvarez*, H. Ramírez-Mendoza****, F. Rivera-Benítez****, O. Padrón-Tello**, A.E.J. Peniche-Cardeña**, R. Flores-Castro*. *Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, Distrito Federal, México. **Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Tel. y Fax: +52 (229) 9342075 y 9344053. dmartinez@uv.mx ***Instituto Politécnico Nacional. Escuela Nacional de Ciencias Biológicas. Campus Santo Tomas. Prolongación de Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Santo Tomas, C.P. 11340, Delegación Miguel Hidalgo, México D.F. ****Universidad Nacional Autónoma de México, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Circuito Exterior, Ciudad Universitaria, C.P. 04510, Delegación Coyoacán, México, D.F. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto histopatológico que produce Brucella

spp. en embriones de pollo (EP) inoculados con leche de bovinos infectados. Se usaron

100 EP de siete a nueve días de edad divididos en tres grupos. El Grupo I integrado por 80

EP, se dividió en ocho subgrupos de 10 EP que se inocularon con leche de 8 vacas

seropositivas de una unidad de producción infectada con brucelosis y con una

seroprevalencia de 24% a pruebas serológicas oficiales. El Grupo II fue el testigo positivo

de 10 EP inoculados con una cepa de campo de Brucella abortus. El Grupo III de otros 10

EP, inoculados con leche ultra pasteurizada adicionada con antimicrobianos del medio de

Farrell como testigo negativo. Los resultados se analizaron por la prueba de Kruskal-Wallis.

El EP sirvió para lograr la infección e inducción de daños en la citoarquitectura del hígado y

membrana corioalantoidea al observar inflamación y necrosis en tejidos de EP tanto del

testigo positivo como en los inoculados con 7/8 muestras de campo con tinción de H&E

(Hematoxilina y eosina) con una Suma de Rangos de 210. Se concluye que la técnica de

H&E es adecuada para la identificación de alteraciones histológicas causadas por Brucella

abortus.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Meador V.P., Tabatabai L.B., Hagemoser W.A., Deyoe B.L.1986. Identification of Brucella

abortus in formalin-fixed, paraffin embedded tissues of cows, goats and mice with avidin-

biotin-peroxidase complex immunoenzymatic staining technique. Amer J Vet Res 47:2147-

2150.

194

Xavier N., Paixao T. A., Poester F. P., Lage A. P., and Santos R. L. (2009): Pathological,

immunohistochemical and bacteriological study of tissues and milk of cows and fetuses

experimentally infected with Brucella abortus. J. Comp. Path.140:149-157.

VACD-42. IDENTIFICACIÓN DE INMUNOTOLERANCIA EN PROGENIE DE VACAS

INFECTADAS CON BRUCELLA ABORTUS O. Padrón-Tello*, D.I. Martínez-Herrera*, A. Peniche-Cardeña*, E. Pulido-Camarillo**, J.F. Morales-Álvarez**, A. López-Merino***, F.T. Barradas-Piña****, M.A. Rodríguez-Chessani*, R. Flores-Castro** *Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Telf. (229) 9342075 y 9344053. dmartinez@uv.mx **Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, México, D.F. ***Instituto Politécnico Nacional. Escuela Nacional de Ciencias Biológicas. Campus Santo Tomas. Prolongación de Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Santo Tomas, C.P. 11340, Delegación Miguel Hidalgo, México D.F. ****Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro de Investigación Regional Golfo Centro. Campo Experimental La Posta. Km. 22.5 Carretera Veracruz-Cordoba Paso del Toro, Paso del Toro, C.P. 94277, Medellín de Bravo, Veracruz, México. La progenie de vacas infectadas con Brucella abortus podrían adquirir la bacteria durante

su estadio fetal y generar tolerancia inmune. Para identificarlos, se realizó un ensayo

clínico con dos grupos de becerros seronegativos. El grupo I, con siete hembras se vacunó

con cepa S19 a dosis normal y el grupo II; con ocho machos, sirvió como control. Sin

excepción, se tomaron muestras de suero sanguíneo en siete ocasiones cada 45 días y,

sangre completa con anticoagulante los días 45 y 135 postvacunación. Se realizaron las

pruebas serológicas oficiales y la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Los

resultados obtenidos se analizaron por la prueba de proporciones. En la evaluación

serológica del grupo I, todos los animales observaron el título máximo de anticuerpos en el

primer muestreo y a partir del cuarto descendieron de manera heterogénea hasta que

resultaron seronegativos al tamizaje. Los animales del grupo II se mantuvieron negativos.

Los resultados de la PCR fueron negativos para ambos grupos. Sólo se observaron

diferencias significativas entre grupos (P< 0.05) para la seroconversión en los primeros dos

muestreos. Se concluye que el hato carece de animales inmunotolerantes y que la PCR no

fue un método adecuado para demostrar ese evento.

195 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Baek, K. B., Lee, O. B., Hur, J., Rahman, M.S., Lee, I. S., Kakoma, I. 2005. Evaluation of

the Sprague-Dawley rat as a model for vertical transmission of Brucella abortus. The

Canadian Journal of Veterinary Research. 69: 305–308.

Crowford, R. P., Adams, G. A., and William J.D.1988. Relationship of days in gestation at

exposure and development of Brucellosis in strain 19 vaccinated heifers. Am J Vet Res.

49:1037-1039.

Rentería, E.T.B.; Nielsen, K.; Licea, N.A.F.; Montaño, G.M.F.; Moreno, R.J.F. 2003.

Evaluación de un programa de control de la brucelosis bovina en hatos lecheros de Baja

California. Tec. Pecu. Méx. 41: 275-282.

VACD-43. RESPUESTA HUMORAL A DOS PRODUCTOS VACUNALES CONTRA LA

PESTE PORCINA CLÁSICA EN CONDICIONES DE CAMPO

O. Fonseca*, P. Domínguez*, R. González***, M. Reyes***, E. Ferrer*, M. Suárez**, M.P. Rodríguez**, O. Fernández*, M.T. Frías*, M.I. Percedo*

*Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Habana, Cuba. osvaldo@censa.edu.cu **Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB), La Habana, Cuba. ***Empresa Agropecuaria Pinar del Río, Candelaria, Pinar del Río.

La peste porcina clásica (PPC), es una enfermedad altamente contagiosa presente en

Cuba de forma endémica y está sujeta a un programa de control que incluye la vacunación

con la Cepa China (CCh), de LABIOFAM, S.A, de probada seguridad y eficacia. Buscando

las bondades de una vacuna marcadora que permita diferenciar animales enfermos de

vacunados, entre otros beneficios, se desarrolló un candidato vacunal por subunidad

proteica E2 (VE2) que tras resultados preclínicos favorables, se evaluó en condiciones de

campo en una granja porcina que había sido vacunada sistemáticamente con la CCh.

Mediante neutralización de la peroxidasa (NPLA) se evaluó la respuesta inmunológica de

animales vacunados con la CCh y con el nuevo candidato. Para ello se investigaron

muestras de sangre obtenidas en diferentes momentos del ciclo tecnológico (de preceba a

ceba). Se pudo determinar que los animales vacunados con el candidato vacunal tuvieron

20,85 veces más probabilidad de tener títulos de anticuerpos ≥1:50 que los vacunados con

la CCh. También se comprobó que a diferencia de los primeros, estos animales

mantuvieron altos títulos hasta el final de la ceba (p<0.05).

196

VACD-44. AISLAMIENTO DE BORDETELLA AVIUM EN PONEDORAS WHITE LEGHORN EN CUBA: PRIMER REPORTE

J. Vichi*, M. Colas**; J. Lopez**, I. Espinosa*, M García**, A. Merino**, S. Martinez* *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). vichi@censa.edu.cu **Laboratorio de Investigaciones y Diagnóstico Aviar (LIDA) Bordetella avium es un bacilo pequeño, gram negativo, mótil, que coloniza la tráquea de

pavos, pollos y otros tipos de aves. La infección producida por esta bacteria ocasiona

considerables pérdidas económicas y su importancia reside en su alta morbilidad y las

complicaciones con otras infecciones concurrentes. Con el objetivo de aislar e identificar

los agentes bacterianos asociados a trastornos respiratorios, 11 muestras biológicas se

colectaron de ponedoras White Leghorn provenientes de una granja del occidente del país,

con manifestaciones clínicas respiratorias. Muestras de tráquea, seno infraorbital y pulmón

se seleccionaron y sembraron en Agar Sangre. Colonias aisladas, lisas, grises,

sospechosas de Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) se les realizó tinción de gram, y se

sembraron por estrías en Agar Sangre suplementado con gentamicina 5µg/mL y Agar

Mackonkey. Los aislamientos sospechosos de ORT que no crecieron en Agar Mackonkey

se identificaron por PCR a partir de colonia, mientras que aislados microbianos con

crecimiento positivo se identificaron por perfil de pruebas bioquímicas mediante el Sistema

API (Biomériux). Tres de los aislados crecidos en formas de colonias blanco-amarillo con

cambios en la coloración del medio se identificaron como Bordetella avium (0000063, API

20 NE). Los aislados con crecimiento en forma de colonias rosadas en Agar Mackonkey se

identificaron como Escherichia coli (5144562, API 20 E). Este estudio constituye el primer

reporte de aislamiento de Bordetella avium en Cuba, en ponedoras White Leghorn, y

destaca el papel de ORT, E. coli y B. avium como bacterias patógenas del tracto

respiratorio de aves ligeras.

VACD-45. OBTENCIÓN DE ANTISUEROS EN CONEJOS AL GENOTIPO CPS 2J+ DE

STREPTOCOCCUS SUIS. CARACTERIZACIÓN PRELIMINAR M. Baez, I. Espinosa, S. Martínez. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. Streptococcus suis es una bacteria gram-positiva que produce infecciones altamente

patológicas en el ganado porcino. Se reconocen 35 serotipos de esta especie, según los

polisacáridos capsulares, de ellos el serotipo 2 resulta de mayor patogenicidad y causa

eventuales zoonósis en humanos. En Cuba el diagnóstico de esta enfermedad se realiza

mediante el cultivo y aislamiento del agente causal, sin embargo no existen herramientas

diagnósticas disponibles para la tipificación rápida con un mínimo de condiciones de

197 equipamiento. El objetivo del trabajo es obtener sueros específicos al genotipo cps 2J+

Streptococcus suis. Para ello se utilizó un aislado de campo del genotipo cps 2J+ de

Streptococcus suis caracterizado por pruebas bioquímicas y tipificación molecular por

PCR, a partir del cual se prepararon los inmunógenos correspondientes. Como modelo

experimental se utilizaron conejos inoculados por vía endovenosa. La titulación se realizó

mediante la técnica de aglutinación rápida en placa. Los sueros resultaron específicos a los

aislados del genotipo cps 2J+ de Streptococcus suis con títulos hasta 1/32, lo que permitió

distinguir entre otros aislados de otros genotipos y excluyente para otras entidades que

afectan el sistema respiratorio del cerdo. Este trabajo permite contar con un antisuero

específico promisorio para el desarrollo de técnicas serológicas que facilitan la

serotipificación de aislados del serotipo 2 de Streptococcus suis.

VACD-46. PRIMER REPORTE DE RETICULOENDOTELIOSIS AVIAR EN CUBA

Damarys Relova*, A. Merino**, O. Gonzalez***, Y. Miranda**, S. Cuello*, J. Noda* *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). Apartado 10, CP 32700. San José de Las Lajas. La Habana. Cuba. drelova@censa.edu.cu **Laboratorio de diagnostico aviar (LIDA). Mulgoba. Santiago de las Vegas. La Habana, Cuba. ***Instituto de Investigaciones Avícolas (IIA). Cacahual. Santiago de las Vegas. La Habana, Cuba. El virus de la reticuloendoteliosis aviar (REV) constituye en la actualidad un importante

agente infeccioso causante de neoplasia del tejido linfoide y otros tejidos, atraso en el

crecimiento e inmunosupresión. A partir de los antecedentes en nuestro país de aves

seroreactoras a este virus y afectadas por enfermedad tumoral en granjas de pollos

comerciales, se procedió a determinar la presencia de este agente viral con el empleo del

ensayo de PCR en tiempo real (con las siglas en ingles, rPCR). La detección por rPCR se

realizó a partir del DNA extraído de sangre u órganos hematopoyéticos de gallinas con

enfermedad tumoral procedentes de seis granjas comerciales de dos regiones geográficas.

Para este ensayo se diseñaron una pareja de cebadores y una sonda de hidrólisis

específicos para el segmento LTR del VRE. La confirmación de la identidad del fragmento

amplificado, se llevo a cabo en una muestra representativa de cada región mediante PCR

convencional con el uso de la misma pareja de cebadores. Los resultados obtenidos

revelaron amplificación de VRE en 6 de las 20 muestras evaluadas. Las secuencias

nucleotídicas obtenidas y analizadas por el programa BLAST revelaron que los dos

fragmentos amplificados de las dos muestras tienen identidad del 97% y 100%

respectivamente con cepas de referencia de VRE. Estos resultados confirman la presencia

por primera vez en Cuba del VRE y su participación en la etiología de la enfermedad

198 tumoral en las granjas avícolas. Estudios posteriores deberán ser realizados para conocer

la situación epidemiológica de este agente en el país.

VACD-47. APPLICATION OF FREEMAN-WIMLEY PREDICTION ALGORITHM TO

COMPUTATIONAL IDENTIFICATION OF BETA-BARREL MEMBRANE PROTEINS IN MYCOPLASMA PREDICTED PROTEOMES: COMPARISON WITH ANOTHER METHOD J.A. Agüero*, L. Aguilar-Bultet*, Y. Estévez-Diepa**, Y. Abreu-Jorge** and A. Lage-Castellanos*** *Microbial Genomics and Bioinformatics Laboratory. Molecular Biology Department. Microbiology Direction. National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. jaaguero@censa.edu.cu **Computer Science Department, Direction of Technological Innovation Management, National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. *** Statistics and Mathematics Department, Cuban Neuroscience Center. Havana. Cuba. The attachment of mycoplasmas to mucosal epithelium of respiratory tract of birds is

thought to be a prerequisite for infection and disease. The critical role of cytadherence in

virulence is reflected by the inability of noncytadhering mycoplasma strains to cause

disease in experimentally infected animals. Data emerging from mycoplasma studies

indicate that several cytadhesion or related components have yet to be identified, defined,

and characterized, steps which are crucial to understand the exact contribution of each of

these molecules in promoting and maintaining a successful infection in the avian host.

Proteins involved in this process are anchored and/or exposed in mycoplasma surface.

Transmembrane beta-barrels (TMBBs) constitute one of the known structural classes of

integral membrane proteins. They perform critical functions, including active ion-transport,

passive nutrient intake and osmotic regulation, also act as proteases, lipases and may be

important for cell-cell adhesion, having great potential for using in vaccine or drug therapy

development. In a previous work TMBBs from Mycoplasma gallisepticum (MG) and

Mycoplasma synoviae (MS) predicted proteomes were in silico identified using PROB

software. Recently, Freeman and Wimley developed a TMBBs prediction algorithm which

showed better performance than any other previously published. This algorithm was

implemented by our group in a web-based application and this allowed to re-annotate the

earlier results using the new approach.

199

VACD-48. LA ACTIVIDAD DE SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD Y DE ACREDITACIÓN EN MYCOLAB

Evelyn Lobo*, Y. Lozada*, Y. Burgher*, A. Betancourt**, S. Martínez***, M. Santos***, B. Corona***, Y. Riveron**, A. Vega****, E. Roque**, O. Pérez****, E. Pérez*****, S. Roman******, R. Sánchez****** *MYCOLAB, Laboratorio para el diagnóstico de micoplasmas, Dirección de Microbiología, CENSA. Dra. Evelyn Lobo, PhD, Investigador Titular. Jefe de MYCOLAB. Directora de Microbiología. elobo@censa.edu.cu **Grupo de calidad. Dirección de Calidad, CENSA ***Grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología, CENSA ****Dirección de Microbiología, CENSA *****Dirección de Servicios tecnológicos ******Grupo de Metrología, CENSA La actividad de los sistemas de gestión de la calidad, el proceso de acreditación de

ensayos y certificación de laboratorios se ha visto potencializada, en los últimos años, en

los centros de investigación que pertenecen al Ministerio de Educación Superior de nuestro

país. MYCOLAB1, perteneciente al CENSA2, tiene como misión realizar servicios científico

técnicos para la detección de micoplasmas en los productos biotecnológicos de aplicación

biomédica que son desarrollados por la Biotecnología cubana, como la vacuna contra la

Hepatitis B, candidatos vacunales contra el cáncer de cabeza y cuello, eritropoyetina

recombinante utilizada en pacientes con afecciones renales crónicas, anticuerpos

monoclonales utilizados en tratamientos y como diagnósticadores, entre otros productos.

Además realiza investigaciones encaminadas al diagnóstico y control de las micoplasmosis

que afectan a ganados de interés económico como el cerdo, aves y bovinos. En la última

década este laboratorio, único de su tipo en el país, ha desarrollado la actividad de gestión

de la calidad aplicada al sistema de diagnóstico, basada en la norma internacional ISO/IEC

17025 para laboratorios acreditados, con ensayos validados lo cual permite brindar un

servicio de alta confiabilidad, seguridad y rapidez con los mismos estándares de los

laboratorios de referencia a escala internacional. MYCOLAB recibe auditorías externas,

tanto nacionales (CIM3, CIGB4, ONARC5) como internacionales (OMS6 y la OIE7) y ha

participado en estudios interlaboratorio que han demostrado la competencia técnica del

mismo. En la actualidad el personal del laboratorio fue evaluado por el ONARC con

resultados satisfactorios, se encuentra acreditando ocho ensayos y fue entregado a la OIE,

para su valoración, el expediente de Laboratorio de Referencia de la OIE para el

diagnóstico de la micoplasmosis en Mesoámerica y el Caribe.

1Laboratorio para el diagnóstico de micoplasmas 2Centro Nacional de sanidad Agropecuaria 3Centro de Inmunología Molecular 4Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología

200 5Organo Nacional de Acreditación de la república de Cuba 6Organización Mundial de la Salud 7Organización Internacional para la sanidad Animal

VACD-49. INTOXICACIÓN EN CABRAS ESTABULADAS DE LA RAZA BOER ASOCIADO A LA INGESTIÓN DE PASTO MULATO (BRACHIARIARUZIZIENSIS Y

BRACHIARIABRIZANTHA) Patricia Domínguez-Pérez, J.M. Figueredo, M.I. Percedo-Abreu, M. Díaz, Y. Martínez-García, P. Alfonso-Zamora Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. patricia@censa.edu.cu Se realizó el estudio-diagnóstico en un rebaño estabulado de 98 caprinos (23 machos y 75

hembras), importados de Canadá de la raza Boer. La alimentación básica de inicio

consistió en pienso de producción nacional, forraje de pasto Mulato (B.ruzizienses x B.

brizanta), procedente del área forrajera de la propia unidad, heno elaborado a partir de la

misma planta y agua ad libitum. Se realizaron estudios bacteriológicos, virológicos y

hematológicos, a los animales fallecidos se les realizó la necropsia y se practicaron

estudios histopatológicos. La enfermedad tuvo un proceso de curso sub-agudo,

caracterizado principalmente por inapetencia, desmedro progresivo, parálisis ruminal en

casos aislados, ictericia y ausencia de fiebre en la mayoría de los animales, posteriormente

se sucedieron afectaciones respiratorias. La morbilidad llegó a un 50 % y la mortalidad

alcanzó el 16% debido a un síndrome de insuficiencia hepato-renal y diátesis hemorrágica

por insuficiencia hepática aguda. El proceso ocurrido fue producto del consumo de pasto

Mulato como forraje y heno, inducido por la existencia de saponinas presentes en esta

especie de Brachiaria.

VACD-50. EVIDENCIA DE MARCADORES GENETICOS DE VIRULENCIA EN CEPAS DE STREPTOCOCCUS SUIS Y PASTEURELLA MULTOCIDA DE ORIGEN CUBANO

Ivette Espinosa, G. Miranda, M. Báez, S. Martínez, P. Domínguez, M.I. Percedo, E. Lobo, P. Alfonso Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, espinosa@censa.edu.cu Streptococcus suis y Pasteurella multocida son dos entidades bacterianas de alta

diversidad genética, que participan como agentes secundarios en procesos respiratorios

del cerdo, sin embargo existen cepas de alta virulencia que ocasionan diversos cuadros

clínicos. S.suis se asocia a meningitis, artritis y septicemia incluso en humanos con riesgo

profesional, mientras las cepas toxigénicas de P.multocida, inducen la rinitis atrófica. En

este trabajo se realizó la identificación mediante reacción en cadena de la polimerasa de

fragmentos de diferentes genes relacionados con la virulencia de ambas entidades,

201 específicamente la presencia de serotipos capsulares 2 y 9 a través de fragmentos de

genes relacionados con la biogénesis de polisacáridos capsulares (cps2J y cps9J) y tres

proteínas suilisina (syl), muramidasa (mrp) y factor extracelular (ef). Para P.multocida se

estudió la presencia del gen de la toxina dermoncrótica (toxA), polisacáridos capsulares de

los serotipos A y D, así como otros genes relacionados con factores de adhesión. Se

detectó por primera vez en el país la presencia de aislados del serotipo 2(cps2J+) de

S.suis procedentes de casos clínicos con procesos invasivos, los cuales fueron negativos

para los marcadores syl, mrp y ef. Se detectaron aislados de los serotipos 2 y 9 asociados

a proceso respiratorios en los cuales se evidenció la amplificación de los marcadores syl,

ef y mrp. Todos los aislados estudiados de P.multocida corresponden al serotipo A y se

detectaron 4 aislados positivos para el fragmento del gen toxA. En este estudio se

evidencia la diversidad genética de aislados de ambas entidades asociados a diferentes

procesos clínicos en cerdos.

VACD-51. CONSIDERACIONES EN LA IMPLANTACION DE LA GESTION DE CALIDAD

EN EL DIAGNOSTICO DE LA BRUCELOSIS EN ESPAÑA Maria J. Estévez-Herrera*, F.A. Pérez-Pérez** * Dra. Veterinaria. Laboratorio Sanidad Animal. Junta de Extremadura. Ctra Los Santos S/N. C.P.06300 Zafra. España.

** Veterinario. Área G. S. Sierra De Huelva. Junta de Andalucía. Centro de Salud Cumbres Mayores. C.P. 21380 .España

Los primeros programas de lucha contra la brucelosis en España se inician en los años 50

con las llamadas Campañas de Saneamiento Ganadero. En nuestros días esta lucha se

engloba dentro de los Programas Nacionales de Erradicación de la Enfermedades de los

Animales, donde se establece que el diagnóstico de Brucelosis se llevará a cabo por los

laboratorios oficiales de Sanidad Animal, de acuerdo con los métodos oficialmente

aprobados, mediante la realización de las pruebas de rutina del Rosa de Bengala y

confirmación con fijación del complemento.

En este trabajo destacamos la importancia del resultado laboratorial para la elaboración de

un diagnóstico dentro del Plan Nacional de Erradicación de la Brucelosis en España, a

través de la implantación de un sistema de gestión de calidad en los laboratorios oficiales

de diagnóstico, incluyendo parámetros de sensibilidad y especificidad. Estos datos

laboratoriales se relacionan con la prevalencia de la enfermedad en los últimos años.

Todo ello analizado en cumplimiento con el marco normativo de la Unión Europea y

basado en las directrices de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE).

202 Las estimaciones sobre sensibilidad y especificidad diagnóstica serán tan exactas como

sea posible, puesto que, cuando los valores de la prueba se indican sin disponer de datos

acerca de ambos parámetros, no es posible inferir predicciones sobre el estado infectivo o

prevalencia de la enfermedad en la población estudiada; de ahí la importancia de

implantación de la gestión de calidad en los laboratorios de realización de pruebas

veterinarias.

VACD-52. IMPLEMENTATION OF FREEMAN-WIMLEY PREDICTION ALGORITHM IN A WEB-BASED APPLICATION, FOR IN SILICO IDENTIFICATION OF BETA-BARREL

MEMBRANE PROTEINS

J.A. Agüero*, Y. Estévez-Diepa**, L. Aguilar-Bultet*, Y. Abreu-Jorge** and A. Lage-

Castellanos***

*Microbial Genomics and Bioinformatics Laboratory. Molecular Biology Department.

Microbiology Direction. National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana.

Cuba. jaaguero@censa.edu.cu

**Computer Science Department, Direction of Technological Innovation Management,

National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba.

*** Statistics and Mathematics Department, Cuban Neuroscience Center. Havana. Cuba.

Integral membrane proteins (IMPs) constitute about 20-30% of all bacterial proteins. IMPs

come in two structural classes, alpha-helical (AMPs) and transmembrane beta-barrels

(TMBBs). TMBBs are embedded in the outer membranes of bacteria (both gram negative

and acid fast gram positive), mitochondria and chloroplasts. They perform critical functions,

including active ion-transport, passive nutrient intake and osmotic regulation, also act as

proteases, lipases and may be important for cell-cell adhesion, having great potential for

use in vaccine or drug therapy development. Several methods have been applied for

TMBBs prediction, utilizing different algorithmic techniques and there is a number of freely

available predictors. They can be divided to those based on Hidden Markov Models, Neural

Networks and Support Vector Machines. Recently Freeman and Wimley developed a

prediction algorithm based on the physicochemical properties of TMBBs, accuracy of which

(99%) is comparable to the accuracy of AMPs prediction and exceeds the accuracy of other

TMBBs prediction methods, and a Matthews Correlation Coefficient (MCC) of 0.748 when

using the most efficient prediction criteria, which is better than any previously published

algorithm. With its use it was implemented a web-based application using Grails, which is

an open source web application framework that leverages the Groovy programming

language. This system is capable of processing from one protein sequence to complete

predicted proteomes up to 3000 proteins with a response time of about 0.65 seconds per

500-residue protein, allowing graphical analyses for each protein.