SYBR Green miRNA荧光定量 PCR

miRNA 简介

microRNA(miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为 22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子 , 它们在动植物中参与转录后基因表达调控。

miRNA 形成过程

前体

成熟体

SYBR 荧光定量检测 miRNA

• 加尾法定量 PCR(QIAGEN)

• 茎环法定量 PCR(RIBO)

加尾法原理

茎环法原理

两种方法的比较 加尾法 茎环法

逆转录 一次逆转录得到全部miRNA 、 pre-miRNA和 mRNA 的 cDNA ，操作简单，但是没有选择性

特异的茎环结构逆转录引物，每条 miRNA单独逆转录，特异性好，但是成本更高，工作繁琐

PCR 特异性 检测 mature miRNA的同时，也会检测到 pre-miRNA

特异性检测 mature miRNA ，可以避开 pre-miRNA

加尾法 茎环法

rno-miR-34b

加尾法 茎环法

hsa-miR-99a

hsa-miR-99a 表达量比较

Sample 加尾法表达量 茎环法表达量

1 1.00 1.00

2 1.05 0.91

3 0.64 0.77

策略1. 根据我们的经验，大部分样品中 pre-miRN

A 含量很低甚至没有，可以采用 QIAGEN加尾法进行 miRNA 的定量 PCR 检测。

2.PCR 特异性都很好的时候，两种方法得到的相对表达量一致。

3. 对于加尾法预实验有非特异性扩增的样品，采用 RIBO 茎环法进行检测。

谢 谢！