Subpopulace B lymfocytů v klinické imunologii

Marcela Vlková Ústav klinické imunologie a alergologie, FN u sv. Anny v Brně

B lymfocyty základními buňkami specifické humorální imunity primární funkce - produkce protilátek – imunoglobulinů (Ig) Ig- zaměřeny proti mikroorganismům nebo jejich toxinům

působících v tělních tekutinách či dutinách tj. mimo buňky

Tucker W. LeBien and Thomas F. Tedder. Blood 2008; 112: 1570-1580

Vývoj B lymfocytů

Tucker W. LeBien and Thomas F. Tedder. Blood 2008; 112: 1570-1580

BCR receptor Coombs RR, Feinstein A, Wilson AB. Immunoglobulin

determinants on the surface of human lymphocytes. Lancet 1969;2:1157-1160

Molekuly Ig přítomny na povrchu B lymfocytu jako součást specifického receptoru pro antigen – BCR komplexu:

Ig + transmembránové molekuly Igα, Igβ (CD79α, CD79β)

Povrchové znaky B lymfocytů CD19 - celá vývojová linie B lymfocytů CD20 - maturované B lymfocyty CD21 - C3d a EBV receptor CD22 – lektin pro α2,6-sialicylovou kys. CD23 – nízce afinitní receptor pro IgE CD24 – GPI glykoprotein s neznámou funkcí CD27, CD38, CD72, CD80, CD40….

CD znaky a vývoj B lymfocytů

T1 B T2 B FO B MZ B P-SW PLB

CD21 - +++ + +++ + -

CD24 +++ +++ + +++ ++ -

CD23 - +++ +++ -/+ - -

IgM +++ +++ + +++ - +/-

IgD + ++++ +++ + - +/-

CD27 - - - + + +++

CD38 +++ +++ + - +/- +++

I.přep. B

Plasmatické bb.

Paměťové B lymfocyty

T1 T2

MZ

FO

IgMhigh

IgDlow

CD21-

CD23-

IgMl low

IgD high

CD21+

CD23+

IgMhigh

IgDlow

CD21high

CD23-

IgG,IgA or IgE

IgMhigh

IgD+

CD21+

CD23+

(Modified from C. Schiff)

AFC

Transientní B lymfocyty

Sledování subpopulací B lymfocytů v periferní

krvi

IgG,IgA or IgE

CD27

IgD

CD38

IgM

CD19+ CD20+ CD27-

CD21+/- CD38+/- s IgM+ s IgD+

CD19+

CD20-/+ CD27+ CD21+ CD38- s IgM+ s IgD+

CD19+ , CD20-/+ CD27+, CD38-/+

s IgM-, s IgD-

CD21+

CD23+

IgD

PE

CD27 FITC

Naivní

IgM paměťové

Paměťové IgG, IgA, IgE

Plasmablasty CD19+/- CD20 -- CD27++ CD21 -

CD38++ s IgM + s IgD-/+

Loder J et al J Exp Med 1999;190:75-89 Klein U et al J Exp Med

1998;188:1679-89

Agematsu K et al Immunol Today 2000; 21:204-206

Protilátkové imunodeficity

Zvýšená náchylnost k bakteriálním infekcím, zejména respiračního systému.

Jako infekční agens dominují opouzdřené baktérie- Haemophily, pneumokoky, St aureus

Infekce mají tendence ke komplikacím – objevují se pneumonie, sinusitidy, otitidy.

Pacienti mohou trpět meningitidami, chronickými průjmy, artritidami….

Nástup příznaků po vymizení mateřských protilátek. Ale primární humorální imunodeficit -CVID se může manifestovat v kterémkoliv věku pacienta!

10

Nejčastější typy primárních humorálních imunodeficiencí

11

12

Běžný variabilní imunodeficit CVID heterogenní skupina onemocnění, vyznačující se

porušenou schopností tvorby protilátek produkovaných B lymfocyty: snížené hladiny sérového IgG, IgA; hladina IgM bývá variabilní

patogeneze těchto chorob nebyla dosud až na některé výjimky objasněna ( např. deficit ICOS, BAFF-R, TACI CD19, CD20….)

popsány B i T lymfocytární defekty vedoucí k neschopnosti kooperace mezi B a T lymfocyty ⇒ porucha v produkci protilátek

Běžný variabilní imunodeficit CVID

13

patogeneze těchto chorob nebyla dosud až na některé výjimky objasněna

v příbuzenstvu častý výskyt selektivního deficitu IgA!!!

14

Selektivní deficit IgA

nejčastější porucha tvorby protilátek s frekvencí 1:400 v ČR postižení jedinci - minimální nebo žádné příznaky

imunodeficitu prokázán zvýšený výskyt autoimunitních chorob, snad i

alergií laboratorní definice - hladina IgA menší než 0.05g/l při

nesnížených hladinách IgG a IgM může se jednat o lehčí fenotypovou manifestaci stejného

genetického základu vedoucího k závažnějšímu onemocnění CVID (přechod IgAD – CVID)

možný výskyt anti-IgA protilátek

Vyšetření počtu B-lymfocytů

15 15

Vyšetření počtu B-lymfocytů

16

Absence B-lymfocytů pacienti s X-vázanou agamaglobulinémií autosomálně recesivními agamaglobulinémiemi asi 10% pacientů s CVID Goodův syndrom X-LP

Normální počet B-lymfocytů CVID IgAD hyper-IgM syndromy přechodná hypogamaglobulinémie kojenců

Vyšetření zastoupení B-lymfocytárních subpopulací

17

18

Pupečníková krev

Transientní B-lymfocyty Zdravý dárce

19

CD19+ CD20+ CD27- CD38l+/- s IgM+ s IgD+

CD21+/-

CD23+

CD19+ CD20-/+ CD27+ CD38-/+ s IgM+ s IgD+

CD21+

CD23+

CD19+ , CD20-/+ CD27+, CD38-/+ s IgM-, s IgD-

CD21+

CD23+

IgD

PE

CD27 FITC

Naivní IgM paměťové

Paměťové IgG, IgA, IgE

Vyšetření zastoupení B lymfocytárních subpopulací

20

IgD

IgD

CD27 CD27

Pacient CVID Zdravá kontrola

21

CD21low B lymfocyty

Vyšetření zastoupení B lymfocytárních subpopulací

Výsledky vyšetření B-lymfocytárních subpopulací u pacientů s CVID

22

Pokles: Plazmablastů (CD27++ CD38++IgM+/-) Izotypově přepnutých paměťových B lymfocytů

(CD27+IgM-IgD-)

Vzestup: naivních (CD27-IgD+), transientních (CD24++IgM++CD38++) „CD21low“ (CD21-CD38-) B-lymfocytů

Pacienti s IgA deficitem

23

24 24

Pacienti s IgA deficitem

Výsledky vyšetření B-lymfocytárních subpopulací u pacientů s IgAD

U části pacientů nalezen pokles izotypově přepnutých

paměťových B-lymfocytů vzestup CD21low B-lymfocytů korelace mezi % i absolutním počtem

izotypově přepnutých paměťových B lymfocytů a hladinou IgG

25

Poděkování Prof. MUDr. Jiří Litzman, CSc. MUDr. Dagmar Štikarovská MUDr. Zdeňka Pikulová MUDr. Dana Bartoňková Sestřičky ÚKIA Mgr. Jana Nechvátalová Mgr. Olga Tichá, Ph.D. RNDr. Martina Štouračová

Kolektiv laborantů ÚKIA!!!!

26

Děkuji za pozornost

27