29 & 30 octobre 2015

SNT - Tours 2015

5e Symposium national « Niches Tumorales »

Clarion Hôtel Belmont

www.cancer-­‐niches-­‐cgo.fr  

   

www.micronit.fr    c  

Premier  congrès  du  GDR  3697  Micronit  «  Microenvironnement  des  niches  tumorales  »  

20-­‐22  January,  2016  (La  Rochelle,  France)  

lieu  :  MMV  Le  Domaine  du  Château***  www.mmv.fr/residence-­‐club-­‐la-­‐rochelle-­‐le-­‐domaine-­‐du-­‐chateau  

     

     

SNT – Tours 2015

Jeudi 29 et vendredi 30 octobre 2015

Berger Marc CHU Clermont-Ferrand & EA 7283 CREaT mberger@chu-clermontferrand.fr Blanchard Frédéric INSERM UMR 957 - Equipe Labellisée Ligue Contre le Cancer 2012 frederic.blanchard@univ-nantes.fr Bonnin-Rouleux Florence CNRS UMR 7292 - LNOx Tours florence.bonnin@univ-tours.fr Bourgeais Jérôme CHU & CNRS UMR 7292 - LNOx Tours jerome.bourgeais@lnox-team.org Coulouarn Cedric INSERM UMR 991 Rennes cedric.coulouarn@inserm.fr Corlu Anne INSERM UMR 991 Rennes anne.corlu@univ-rennes1.fr Coronas Valérie CNRS ERL 7368 Poitiers valerie.coronas@univ-poitiers.fr Delhommeau François APHP (St Antoine) & UPMC Paris francois.delhommeau@sat.aphp.fr Domenech Jorge CHU & CNRS UMR 7292 - LNOx Tours domenech@med.univ-tours.fr

Dumas Pierre-Yves CHU & UMR CNRS 5164 Bordeaux pierre-yves.dumas@chu-bordeaux.fr Eychene Alain INSB-CRNS / ITMO cancer AVIESAN INSERM U 1021 - CNRS UMR 3347, Institut Curie Orsay alain.eychene@curie.fr Formstecher Pierre INSERM U837 - Université de Lille 2 - Centre de Recherche Jean-Pierre Aubert Lille pierre.formstecher@inserm.fr Gardano Laura INSERM UMR 978 Bobigny lgardano@gmail.com Gouilleux Fabrice CNRS UMR 7292 - LNOx Tours fabrice.gouilleux@univ-tours.fr Guittat Lionel INSERM UMR 978 Bobigny lionel.guittat@univ-paris13.fr Halty Christelle CHU & CNRS UMR 7292 – LNOx Tours christelle.halty@univ-tours.fr Herault Olivier CHU & CNRS UMR 7292 Tours olivier.herault@univ-tours.fr Lazennec Gwendal INSERM FRE 3690 Sys2Diag Montpellier gwendal.lazennec@inserm.fr Le Bousse-Kerdiles Marie-Caroline INSERM 972 - Institut André Lwoff Villejuif caroline.le-bousse-kerdiles@inserm.fr

Le Nail Louis-Romée INSERM UMR 957 - Equipe Labellisée Ligue Contre le Cancer 2012 Nantes lrlenail@hotmail.com Louache Fawzia INSERM U1009 - Institut Gustave Roussy Villejuif fawzia.louache@gustaveroussy.fr Maguer-Satta Véronique U1052- UMR 5286 - Centre de Recherche en Cancérologie de Lyon Lyon veronique.maguer-satta@lyon.unicancer.fr Mancini Stéphane Inserm U1068 - CNRS UMR 7258 - Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille stephane.mancini@inserm.fr Mazure Nathalie CNRS UMR 7284 – INSERM U1081 – UNS – IRCAN Nice mazure@unice.fr Mazurier Frederic CNRS UMR 7292 - LNOx Tours frederic.mazurier@inserm.fr Mechta-Grigoriou Fatima INSERM U830 – laboratoire “Stress & cancer” – Institut Curie Paris fatima.mechta-grigoriou@curie.fr Mourcin Frédéric INSERM UMR U917 MiCa Rennes frederic.mourcin@univ-rennes1.fr Pellat-Deceunynck Catherine INSERM 892 - CNRS 6299 Nantes catherine.pellat-deceunynck@univ-nantes.fr Pflumio Françoise Unité INSERM-Université Paris 7 et 11- UMR 967 - CEA Fontenay-aux-Roses francoise.pflumio@cea.fr

Praloran Vincent CHU & UMR CNRS 5164 Bordeaux vincent.praloran@u-bordeaux2.fr Rochet Nathalie CNRS UMR 6235 Nice rochet@unice.fr Sola Brigitte EA 4652 MILPAT Caen brigitte.sola@unicaen.fr Suner Ludovic APHP (St Antoine) & UPMC Paris ludovic.suner@aphp.fr Sunter Nicola CNRS UMR 7292 – LNOx Tours nicola.sunter@univ-tours.fr Tarte Karin UMR INSERM-Université Rennes 1-EFS UMR U917 MiCa Rennes karin.tarte@univ-rennes1.fr Trichet Valérie INSERM UMR 957 - Equipe Labellisée Ligue Contre le Cancer 2012 - Université de Nantes valerie.trichet@univ-nantes.fr Uzan Benjamin Unité INSERM-Université Paris 7 et 11- UMR 967 - CEA Fontenay-aux-Roses benuz@netcourrier.com Zhang Yanyan INSERM U1009 - Institut Gustave Roussy Villejuif yanyan_gh@yahoo.com

SNT – Tours 2015 jeudi 29 et vendredi 30 octobre 2015

Programme

Jeudi 29 octobre

12h00 Déjeuner - buffet 14h15 Ouverture du symposium Olivier Herault, CNRS & CHU, Tours Structure de la niche Modérateurs : Véronique Maguer-Satta & Marie-Caroline Le Bousse-Kerdiles 14h15 Nouveau mécanisme de contrôle qualité de la mitochondrie dans des conditions d'hypoxie.

Nathalie Mazure, CNRS, Nice 14h45 Les programmes de différenciation des cellules souches hématopoïétiques et des cellules B

précoces dépendent d'une unique niche périvaculaire multispécifique. Stéphane Mancini, INSERM-CNRS, CRCM, Marseille 15h15 Approche des modifications du microenvironnement médullaire au cours de la leucémie

lymphoïde chronique et de la leucémie myéloîde chronique Marc Berger, CHU, Clermont-Ferrand 15h45 Dormance tumorale du mélanome dans un modèle murin : implication de cellules

quiescentes de type souche et du contrôle de leur activation par le facteur de transcription GILZ

Pierre Formstecher, INSERM, Lilles 16h15 Pause Dynamique de l’interaction microenvironnement / tumeur (part. 1) Modérateurs : Stéphane Mancini & Frédéric Mazurier 16h45 Des nouvelles du front leucémies aiguës lymphoblastiques T et microenvironnement Benjamin Uzan, CEA-INSERM, Fontenay-aux-Roses 17h15 Dynamique de la beta-caténine dans le dialogue entre cellules B et leur microenvironnement

dans les syndromes lymphoprolifératifs CD5+ Laura Gardano, INSERM, Bobigny

17h45 PRIMA-1met cible le métabolisme oxydatif indépendamment de p53 Catherine Pellat-Deceunynck, INSERM-CNRS, CRCNA, Nantes 18h15 Les cellules souches mésenchymateuses augmentent la prolifération mais ne modifient pas

l'état de quiescence des cellules d'ostéosarcomes : implications avant et après résection tumorale. Valérie Trichet, INSERM, Nantes

20h00 Apéritif 20h30 Dîner Vendredi 30 octobre

Dynamique de l’interaction microenvironnement / tumeur (part. 2) Modérateurs : Fawzia Louache & Gwendal Lazennec 8h30 Role de la voie MEK dans l'oncogénèse ovarienne. Fatima Mechta-Grigoriou, INSERM, Institut Curie, Paris 9h00 Boucle IL-4/CXCL12 dans le lymphome folliculaire : une histoire de niche.

Karin Tarte, INSERM & CHU, Rennes 9h30 Fonctions anti- et pro-oxydantes des protéines Stat5 dans les cellules leucémiques.

Fabrice Gouilleux, CNRS, Tours Biomarqueurs, ciblage thérapeutique Modérateurs : François Delhommeau & Jorge Domenech 10h00 Ciblage des cellules primaires de leucémies aiguës myéloïdes par un anticorps anti-

CXCR4 chez les souris NOD/SCID. Yanyan Zhang, INSERM, Institut Gustave Roussy, Villejuif

10h30 ARN non-codants longs et voie du TGF-beta dans le cholangiocarcinome intrahépatique. Cédric Coulouarn, INSERM, Rennes

Discussion générale - évolution du réseau Modérateur : Olivier Herault

11h00 INCa & AAP "Hétérogénéité fonctionnelle des relations cellulaires des tumeurs dans leur

écosystème" Alain Eychene, Institut Curie & ITMO Cancer AVIESAN 12h00 Déjeuner 14h00 Fin du symposium

Symposium organisé par l’Association Hématologie Biologique - CHRU de Tours - Pr Olivier Herault

                                         

ABSTRACTS

Nouveau mécanisme de contrôle qualité de la mitochondrie dans des conditions d'hypoxie

M. Christiane Brahimi-Horn, Sandra Lacas-Gervais, Ricardo Adaixo, Karine Ilc, Matthieu Rouleau, Annick Notte, Marc Dieu, Carine Michels, Thibault Voeltzel, Véronique Maguer-Satta, Joffrey Pelletier, Marius Ilie, Paul Hofman, Bénédicte Manoury, Alexander Schmidt, Sebastian Hiller, Jacques Pouysségur and Nathalie M. Mazure

Institute for Research on Cancer and Aging of Nice, CNRS-UMR 7284-Inserm U1081, University of Nice Sophia-Antipolis, Centre Antoine Lacassagne, 33 Avenue de Valombrose, 06189 Nice, France; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » The oxygen-limiting microenvironment (hypoxia) of tumors induces metabolic reprogramming and cell survival, but the underlying mechanisms implicating mitochondria remain poorly understood. We previously demonstrated that the hypoxia-inducible factor-1 mediated hyperfusion of mitochondria, by inducing Bcl-2/adenovirus E1B 19-kDa interacting protein 3, and post-translational truncation of the mitochondrial ATP transporter, the outer-membrane voltage-dependent anion channel 1, in hypoxic cells. In addition, we showed that truncation was associated with increased resistance to drug-induced apoptosis and was indicative of increased patient chemoresistance. We now show that silencing of the tumor suppressor TP53 decreased truncation and increased drug-induced apoptosis. We also show that TP53 regulated truncation through induction of the mitochondrial protein Mieap. While we found that truncation was independent of mitophagy we observed local microfusion between mitochondria and endolysosomes in hypoxic cells in culture and in patient’s tumor tissue. Since we found that the endolysosomal asparagine endopeptidase was responsible for truncation, we propose that it is a readout of mitochondrial-endolysosomal microfusion in hypoxia. These novel findings provide the framework for a better understanding of hypoxic cell metabolism and cell survival through mitochondrial-endolysosomal microfusion regulated by the hypoxia-inducible factor-1 and TP53.  

Hematopoietic Stem Cell and early B cell differentiation programs depend on a unique multispecific perivascular niche

M. Balzano1,2, M. De Grandis1, T.P. Vu Manh2, L. Chasson2, A. Boned2, A. Cartier-Michaud1, A.L. Bailly1, A. Sergé1, G. Bidaut1, M. Aurrand-Lions1, C. Schiff2, S.J. Mancini1,2,3

1Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille (CRCM), 27 Bd Leï Roure, BP30059, 13273 Marseille Cedex 09 ; 2CIML, Parc Scientifique de Luminy, Case 906, 13288 Marseille cedex 09 ; 3CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Introduction: In the bone marrow, stromal cells influence the development of hematopoietic stem cells (HSC) and early B cells. Many stromal cell niches specific for HSC have been described but recent results show that CXCL12+ and Stem Cell Factor (SCF)+ perivascular stromal cells are crucial for HSC maintenance. When committed to the B cell lineage, progenitors localize close to CXCL12+ cells, before their migration toward IL7+ cells when differentiating into pro-B cells. We have finally demonstrated that the following pre-B cells are in contact with galectin-1+ stromal cells. While these data show the existence of numerous niches, the level of heterogeneity of these cellular niches is still unclear. This heterogeneity has been recently downscaled in a study showing that the CXCL12+ and the SCF+ perivascular stromal cells, described as both being HSC specific niches, were indeed the same. Furthermore, the IL7+ pro-B cell niche that we have recently characterized is very similar to this HSC niche in term of morphology, localization and expression of markers described in the different studies. These results suggest that stromal cells could be "multispecific" and therefore supply factors required for distinct hematopoietic cells. Results: In the current study, we have compared the gene expression signatures of IL7-YFP+ with CXCL12-GFP+ and SCF-GFP+ stromal cells and found that they were indeed similar. In addition, we purified this stromal subpopulation from wild type animals using specific phenotypic markers and confirmed that SCF, CXCL12 and IL7 were co-expressed at the single cell level. These results strongly support that, in opposition to what was thought before, HSC and progenitor B cells depend on the same stromal cell niche. The interactome settled specifically between the perivascular niche and HSC, pre-pro-B or pro-B cell has been characterized and genes involved in adhesion were functionally tested. Conclusion: These results clearly demonstrate that peri-sinusoidal stromal cells can support differentiation programs of distinct hematopoietic cells by supplying specific factors to each of them. This work paves the way to the analysis of stromal cell niches that could support the growth of malignant hematopoietic cells. Molecules involved in the interaction between B-Acute Lymphoblastic Leukemia and the bone marrow stromal cells have been identified and their role in leukemic progression is under investigation. Recent citations: 1. Mourcin F., Breton C., Tellier J., Narang P., Chasson L., Jorquera A., Coles M., Schiff C. and Mancini S.J.C. Galectin-1 expressing stromal cells constitute a specific niche for pre-BII cell development in mouse bone marrow. Blood (2011), 117:6552-6561 2. De Grandis M, Lhoumeau AC, Mancini SJ, Aurrand-Lions M. Adhesion receptors involved in HSC and early-B cell interactions with bone marrow microenvironment. CMLS (2015), in press

Approche des modifications du microenvironnement médullaire au cours de la leucémie lymphoïde chronique

et de la leucémie myéloïde chronique

Alexandre Janel, Juliette Berger, Céline Bourgne, Eric Hermet, Oliver Tournilhac, Marc Berger EA7283 CREaT, Université d’Auvergne, Service d’Hématologie Biologique, CHU Estaing, 1 place Lucie et Raymond Aubrac, 63003 Clermont-Ferrand cedex 1 Introduction : La Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) et la Leucémie Myéloïde Chronique (LMC) sont deux hémopathies chroniques, l’une correspondant à la prolifération de cellules lymphoïdes B CD19+ CD5+, l’autre correspondant à une prolifération myéloïde à partir d’une CSH porteuse du chromosome Ph1. Ces deux hémopathies présentent initialement un envahissement médullaire systématique, sont sensibles à des thérapies ciblées, mais une hétérogénéité intra-clonale est responsable de la persistance d’une sous-population de cellules résistantes. Nous étudions l’impact des clones leucémiques sur le microenvironnement tumoral, considéré comme protecteur à l’égard des cellules résiduelles. Méthode : Nous avons dans un premier temps analysé les cellules mésenchymateuses de moelle osseuse, en particulier de la LLC. Puis, afin de se rapprocher autant que possible des conditions physiopathologiques in vivo, nous nous avons étudié les agrégats cellulaires appelés hématons Résultats : En utilisant les outils classiques d’identification des progéniteurs mésenchymateux, nous avons montré que les CFU-F de moelle osseuse de LLC étaient nettement diminués voire absents. Lorsqu’ils sont détectables, ils sont en majorité sénescents, remettant en question le dogme de la protection du clone par les cellules mésenchymateuses à l’égard de la chimiothérapie. Dans la LMC, la détection de CFU-F est possible dans la majorité des cas, avec des fréquences hétérogènes. Dans une première étude de moelles osseuses normales, nous avons réuni des arguments démontrant que la grande majorité (90%) des hématons contiennent les éléments de la niche stromale et des cellules immatures y compris des LTC-IC, et représentent vraisemblablement une unité élémentaire fonctionnelle complète de la moelle osseuse. Dans la LLC, le clone B désorganise ces structures notamment par diminution voire disparition des progéniteurs mésenchymateux. Dans la LMC, il semble que ces structures sont partiellement conservées mais pourraient être le siège de modifications particulières. Conclusion : Bien qu’envahissant toutes deux la moelle osseuse et évoluant sur plusieurs années, les clones LLC et LMC ont un impact différent sur le microenvironnement, notamment sur les cellules mésenchymateuses et les hématons. Les hématons apparaissent un modèle séduisant pour comprendre les relations entre le clone malin et le microenvironnement « in vivo », et évaluer l’efficacité de ciblage des nouvelles thérapies, en particulier les ITK dans la LMC. Références : - Janel A, Dubois-Galopin F, Bourgne C, Berger J, Tarte K, Boiret-Dupré N, Boisgard S, Verrelle P, Déchelotte P,

Tournilhac O, Berger MG. The Chronic Lymphocytic Leukemia Clone Disrupts the Bone Marrow Microenvironment. Stem Cells Dev, 23(24), 2972-2982, 2014.

- Bourgne C, Bamdad M, Janel A, Libert F, Gagnieu MC, Rapatel C, Pigeon P, Pereira S, Hermet E, Guerci A, Pereira B, Cony Makhoul P, Johnson Ansah A, Cahn JY, Guyotat D, Trouillier S, Berger J, Boiret-Dupré N, Berger MG. Measurement of imatinib uptake by flow cytometry. Cytometry A, 81(11), 996-1004, 2012.

- Veyrat-Masson R, Boiret-Dupré N, Rapatel C, Descamps S, Guillouard L, Guérin J-J, Pigeon P, Boisgard S, Chassagne J, Berger MG. Mesenchymal content of fresh bone marrow : a proposed quality control method for cell therapy. British Journal of Haematology, 139(2), 312-320, 2007 (4.080).

- Boiret N, Rapatel C, Boisgard S, Charrier S, Tchirkov A, Bresson C, Camilleri L, Berger J, Guillouard L, Guérin J-J, Pigeon P, Chassagne J, Berger MG. CD34(+)CDw90(Thy-1)(+) subset colocated with mesenchymal progenitors in human normal bone marrow hematon units is enriched in colony-forming unit megakaryocytes and long-term culture-initiating cells. Experimental Hematology, 31(12), 1275-1283, 2003.

Dormance tumorale du mélanome dans un modèle murin : implication de cellules quiescentes de type souche et du contrôle de leur activation

par le facteur de transcription GILZ Yasmine Touil1, Pascaline Ségard1, Séverine Begard1, Pauline Ostyn1, Caroline Aspord2, Bernadette Masselot1, Raja El-Machhour1, Jerôme Vandomme1, Pilar Flamenco1, Thierry Idziorek1, Martin Figeac3, Pierre Formstecher1,4, Bruno Quesnel1,4 and Renata Polakowska1,4

1Inserm UMR-S1172 Centre de Recherche Jean Pierre Aubert (JPArc), Institut pour la Recherche sur le Cancer de Lille (IRCL), 1 Place de Verdun, 59045 Lille, France ; 2Institut A. Bonniot, Ontogenèse et Oncogenèse Moléculaires, UMR EFS-UJF-INSERM 823, Immunobiology and Immunotherapy of Cancers, Grenoble, France ; 3Plateforme de Génomique Fonctionnelle, IRCL, 59045 Lille, France ; 4CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Les cancers métastatiques rechutent suite à la réactivation de cellules tumorales dormantes disséminées. Les caractéristiques précises des cellules dormantes et les mécanismes impliqués dans leur réactivation commencent seulement à être identifiés. Nous avons construit un modèle syngénique de dormance tumorale du mélanome chez la souris utilisant la lignée tumorale B16 et une approche par immunisation. Nous avons obtenu des lignées cellulaires « dormantes » à partir de ce modèle. Nous avons montré que ces cellules dormantes présentent des caractéristiques de cellules souches tumorales quiescentes. Elles expriment des marqueurs membranaires de cellules souches tels que CD24 et CD133, forment davantage de mélanosphères que les cellules B16F1 d’origine et sont plus tumorigènes que ces cellules quand on les injecte à des animaux naïfs. Nous avons mis en évidence le rôle du facteur de transcription « Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper (GILZ) dans la régulation de la quiescence/activation in vitro de ces cellules dormantes et du délai d’apparition et de croissance tumorale du mélanome après injection in vivo. L’expression de GILZ est faible dans les cellules dormantes, une observation déjà faite dans un autre modèle de dormance développé au laboratoire (1), tandis que sa réexpression régule négativement le facteur de transcription Foxo3A et sa cible d’aval p21, responsable de la quiescence des cellules. La downrégulation de GILZ retarde l’apparition et la croissance des tumeurs à partir des cellules dormantes. Ces résultats ont été validés dans des cellules de mélanome humain. Nous avons utilisé pour cela un système d’induction conditionnelle d’H2B-GFP permettant de tracer et d’isoler les cellules tumorales quiescentes. La downrégulation transitoire de GILZ induit la quiescence de cellules humaines de mélanome in vitro et retarde leur croissance tumorale après xénogreffe à des souris immunodéprimées CB17-SCID, tout en conduisant à un accroissement de leur tumorigénicité (passage de 20 à 60% de prise de tumeur). La croissance tumorale s’accompagne d’une réexpression de GILZ. Conclusion : les cellules dormantes de mélanome présentent des propriétés de cellules souches quiescentes. Le facteur de transcription GILZ joue un rôle essentiel dans le contrôle de leur passage de la quiescence à l’activation in vitro et de la dormance à la rechute in vivo. Référence : 1. L Joha S, Nugues AL, Hétuin D, Berthon C, Dezitter X, Dauphin V, Mahon FX, Roche-Lestienne C, Preudhomme C, Quesnel B, Idziorek T. GILZ inhibits the mTORC2/AKT pathway in BCR-ABL(+) cells. Oncogene. 2012 Mar 15;31(11):1419-30.

Conséquences d’un environnement hypoxique sur la croissance et la chimiorésistance des leucémies aiguës lymphoblastiques T

L Fahy ; J Calvo ; F Pflumio & B Uzan.

UMR967 Inserm, CEA, Laboratoire des cellules Souches Hématopoïétiques et Leucémiques, Fontenay aux Roses ; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Introduction : La leucémie aiguë lymphoblastique T (LAL-T) est une hémopathie maligne caractérisée par une prolifération clonale de blastes, précurseurs lymphoïdes T indifférenciés incapables d’achever leur maturation. Ces blastes sont retrouvés dans la moelle osseuse, le sang, le thymus et/ou les ganglions. La prise en charge thérapeutique des LAL-T comporte une chimiothérapie d'induction, qui chez l’enfant, donne lieu à la rémission complète dans 95% des cas. Néanmoins, les enfants présentant une rechute ont un pronostic très défavorable de même que les traitements actuels ont des effets secondaires importants qu’il convient idéalement de réduire. L’idée actuelle est donc de trouver des voies de traitements complémentaires permettant une désescalade thérapeutique. Outre l'implication des voies oncogéniques intracellulaires dans le développement leucémique, des signaux extracellulaires délivrés par le microenvironnement participent aussi à l'apparition et à la progression des LAL-T. Le microenvironnement médullaire, lieu de propagation et de maintien de la leucémie, est hypoxique, avec des taux d’oxygène variant de 0.1% à 5%. Dans ce travail, nous avons étudié les conséquences d’un environnement hypoxique sur le développement et la chimiorésistance des LAL-T. Méthodes : La croissance, l’apoptose, le cycle cellulaire, la chimiorésistance, et la capacité de greffe en souris NSG de blastes de LAL-T humaines cultivés en normoxie (21% d’O2) ou en conditions hypoxiques (3.5% et 1% d’O2), ont été quantifiés. Résultats : Comparée à la condition normoxique, l’hypoxie inhibe la croissance des blastes en freinant leur avancement dans le cycle cellulaire et en induisant leur apoptose. Toutefois, les blastes incubés en hypoxie conservent leur capacité à propager la leucémie après transplantation à des souris immunodéficientes. De plus, les blastes de LAL-T cultivés en hypoxie et traités par la vincristine sont protégés de cette chimiothérapie et conservent toujours, après l’arrêt du traitement, leur capacité à croître en culture et à initier des leucémies in vivo. Discussion : Ces résultats suggèrent que les niches hypoxiques pourraient jouer un rôle majeur dans la chimiorésistance des leucémies. Par ailleurs, nous avons montré que les sites adipocytaires de la moelle osseuse de souris induisent des phénomènes similaires en terme de prolifération, d’apoptose et de chimiorésistance des blastes de LAL-T. Etablir un lien fort entre la quantité d’adipocytes et des taux bas d’oxygène permettrait 1) une meilleure caractérisation des zones les plus hypoxiques de la moelle osseuse et 2) d’améliorer la prise en charge des patients en ciblant spécifiquement les blastes les plus susceptibles d’entraîner une rechute.

Dynamique de la b-caténine dans le dialogue entre cellules B et leur microenvironnement dans les syndromes lymphoprolifératifs CD5+

Gregory Lazarian, Kalyankumar Matti, Florence Cymbalista, Nadine Varin-Blank, Fanny Baran-Marszak et Laura Gardano INSERM U978- Université Paris 13-Labex Inflamex- rue Marcel Cachin- Bobigny 93017 Introduction : la leucémie lymphoïde chronique et le lymphome du manteau sont deux pathologies caractérisées par l’accumulation de cellules B CD5+ au niveau du sang et organes lymphoïdes secondaires. Cette accumulation, due à un défaut de l’apoptose et du contrôle de prolifération, est aussi causée par une altération du dialogue des cellules B tumorales avec leur microenvironnement. Au cours de notre étude des voies de signalisation impliquées dans le dialogue des cellules B de LLC et du MCL avec leur microenvironnement, nous avons concentré notre attention sur la voie Wnt/b-caténine. En effet, cette voie est connue pour être altérée dans la LLC et dans le MCL ainsi que dans nombreuses tumeurs. L’activation de la voie Wnt entraine la stabilisation de la ß-catènine qui transloque dans le noyau pour activer la transcription de gènes qui contrôlent le cycle cellulaire et la prolifération. Résultats : nous avons observé une augmentation de la protéine b-caténine suite à la co-culture des cellules B-LLC et B-MCL. Ceci suggère une activation de la voie Wnt dans les cellules B par le microenvironnement. De façon intéressante, nous avons aussi constaté que le niveau de b-caténine augmente lorsque l’on stimule la voie de signalisation du BCR qui est la voie fondamentale de survie des cellules B. Toutefois, la stabilisation de la b-caténine suite à la stimulation du BCR n’entraine pas le même effet transcriptionnel que la stimulation via Wnt. La voie du BCR pourrait réguler d’autres fonctions de la ß-caténine, notamment au niveau de la membrane cellulaire.

PRIMA-1Met induit l’apoptose des cellules de myélome en dérégulant la balance GSH/ROS indépendamment de p53 et de l’environnement

Benoît Tessoulin, Sylvanie Surget, Géraldine Descamps, Philippe Moreau, Sophie Maïga, Laurence Lodé, Catherine Godon, Séverine Marionneau-Lambot, Thibauld Oullier, Steven Le Gouill, Martine Amiot, Catherine Pellat-Deceunynck CRCNA, INSERM892, CNRS6299, Université de Nantes, Service et Laboratoire d’Hématologie, CHU Nantes, Plate-forme in vivo, Cancéropôle Grand Ouest, Nantes ; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Introduction : Dans le Myélome Multiple (MM), tumeur plasmocytaire, l’hétérogénéité oncogénomique (anomalies chromosomiques du locus 14q32, IGH) détermine la réponse aux traitements. Indépendamment de ces anomalies primaires, la perte du bras court du chromosme 17 (del17p) est associée à une forte résistance aux traitements et aucun traitement actuel ne gomme ce mauvais pronostic. Les anomalies de TP53 (mutation ponctuelle, délétion d’exons..) sont essentiellement voire exclusivement retrouvées dans les cellules del17p+. Le but de travail était d’évaluer l’efficacité de molécules réactivatrices de p53 sauvage et/ou mutée (Nutlin3a, RITA, PRIMA-1MET) dans des lignées et cellules primaires caractérisées pour leur anomalie de TP53 et/ou del17p. Méthodes : Cette étude repose sur l’analyse de 27 lignées de MM reproduisant la diversité onco-génomique des patients, d’une vingtaine de cellules myélomateuses isoléess de patient au diagnostic ou en rechute et sur un modèle de xénogreffe dans la souris Scid beige. Nous avons évalué le rôle de la voie p53 et des ROS dans la réponse à PRIMA-1Met qui a été initialement isolé et décrit comme un réactivateur de la protéine p53 mutante. Résultats: Les lignées ont une sensibilité variable à PRIMA-1MET avec des DL50 variant de 4 µM à plus de 200 µM. Cette sensibilité n’est pas corrélée à l’hétérogénéité oncogénomique ni aux anomalies de TP53, contrairement à la Nutlin3a, inhibiteur de l’E3ligase de p53 MDM2, qui n’induit l’apoptose que des lignées et cellules primaires p53 sauvage. Contrairement à la nutlin3a, PRIMA-1MET ne réactive pas la voie p53, attestée par l’absence l’induction de l’expression de gens cibles de p53 (DR5, p21). Cependant, PRIMA-1MET induit une forte expression de Noxa mais de façon p53 indépendante. Contrairement à la Nutlin3a, PRIMA-1MET induit la formation de ROS et la sensibilité des lignées est corrélée à l’expression de la gluthation synthase (GSS). PRIMA-1MET, mais pas la nutlin3a, induit une forte diminution du GSH et synergise avec le BSO, inhibiteur de la gamma-Glutamylcysteine synthetase (enzyme de la synthèse du GSH). Dans les cellules primaires, PRIMA-1Met induit la mort des cellules del17p+ ou del17p- et synergise avec le BSO. Les cellules stromales protègent les cellules tumorales de la mort induite par PRIMA-1MET mais pas de celle induite par PRIMA-1MET+BSO. Enfin, PRIMA-1MET+BSO induit une regression tumorale dans la xénogreffe TP53neg JJN3. Conclusion : PRIMA-1MET dérégule la balance ROS/GSH et induit efficacement l’apoptose indépendamment de la voie p53 et de l’environnement stromal. Tessoulin B, Descamps G, Moreau P, Maiga S, Lodé L, Godon C, Marionneau-Lambot S, Oullier T, Le Gouill S, Amiot M, Pellat-Deceunynck C. PRIMA-1Met induces myeloma cell death independent of p53 by impairing the GSH/ROS balance. Blood 2014;124:1626 Surget S, Descamps G, Brosseau C, Normant V, Gomez-Bougie P, Maiga S, Gouy-Colin N, Godon C, Béné MC, Moreau P, Le Gouill S, Amiot M, Pellat-Deceunynck C. RITA (Reactivating p53 and Inducing Tumor Apoptosis) is very efficient against TP53abnormal myeloma cells independently of the p53 pathway. BMC Cancer. 2014;14:437. Surget S, Chiron D, Descamps G, Gomez-Bougie P, Ménoret E, Moreau P, Bataille R, Le Gouill S, Amiot M, Pellat-Deceunynck C. Cell death via DR5, but not DR4, is regulated by p53 in myeloma cells. Cancer Res. 2012;72:4562-73.

Les cellules souches mésenchymateuses augmentent la prolifération mais ne modifient pas l'état de quiescence des cellules d'ostéosarcomes : implications

avant et après résection tumorale.

L-R Le Nail ; P Avril ; P Rosset ; P Layrolle ; D Heymann ; P Perrot ; G De Pinieux & V Trichet. INSERM UMR 957 Equipe Labellisée LIGUE 2012, Université de Nantes Laboratoire de Physiopathologie de la Résorption Osseuse et Thérapie des Tumeurs Osseuses Primitives Faculté de Médecine, Nantes ; Centre hospitalier universitaire service de Chirurgie Plastique et des Brûlés, Nantes ; Centre hospitalier universitaire service de Chirurgie Orthopédique et Traumatologique et service d'Anatomie Pathologique, Tours ; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Introduction : L’ostéosarcome (OS) est une tumeur osseuse primitive maligne qui atteint des patients jeunes (âge médian 20 ans). Cette tumeur rare (150 cas par an en France) se distingue par une forte résistance aux traitements conventionnels (30% de tumeurs résistantes) et par une propension à métastaser aux poumons (20% de patients métastatiques au diagnostique). La présence de cellules souches cancéreuses (CSC) dans ces tumeurs pourrait expliquer ces résistances, mais aussi l’aspect histologique variable observé (prédominance ostéoblastique associée à des zones fibroblastiques ou chondroblastiques). De telles CSC dériveraient de cellules souches/stromales mésenchymateuses (CSM). Méthodes : A partir de pièces de résection d’OS de patients, des cellules sont isolées et comparées aux CSM dérivées de la moelle osseuse de ces patients ou d’individus sains. Les marqueurs membranaires des CSM sont analysés par cytométrie en flux et la capacité de différenciation vers les lignages ostéoblastique, chondroblastique et adipocytaire est testé. En relation avec une éventuelle transformation tumorale sont testés leur capacité à former des sphères en milieu de culture semi-solide, leur caryotype et enfin leur développement dans des souris immunodéficientes (SCID). Lorsque ces cellules dérivées d’OS ne démontrent pas d’effet tumoral propre, elles sont été co-injectées avec une lignée d’ostéosarcome humaine dans des souris nude pour observer leur capacité à soutenir le développement d’ostéosarcome. L’effet de milieux conditionnés de CSM sur le cycle cellulaire de cellules d’ostéosarcome en prolifération ou en quiescence a été analysé. Résultats : Notre étude montre que les cellules dérivées d’ostéosarcome après chimiothérapie expriment des marqueurs des CSM mais sont déjà engagées dans une différenciation ostéoblastique. Elles présentent des caractéristiques de CSC (formation de sphères, métabolisme oxydatif réduit) mais n’ont pas induit la formation de tumeur in vivo. Par contre elles peuvent soutenir le développement d’ostéosarcome primitif et le processus métastatique. Cet effet est au moins en partie du à des facteurs solubles de haut poids moléculaires (>50kDa) puisque in vitro la prolifération est augmentée de 150 à 180% par les milieux conditionnés de CSM. Cependant ces facteurs sécrétés par les CSM n’étaient pas capables d’activer l’entrée en cycle cellulaire de cellules d’ostéosarcome cultivées en sphère. Discussion : Nous n’avons pas isolé des CSC d’OS, mais des cellules stromales associées à la tumeur. Elles présentent un métabolisme mitochondrial oxydatif réduit et sont capables d’augmenter la prolifération des cellules d’OS en division in vitro et in vivo. Par contre, ces facteurs sécrétés par les CSM n’ont pas montré d’effet sur la quiescence des cellules d’ostéosarcome. Leur utilisation après la résection tumorale lors de reconstruction osseuse ne représenterait pas un risque accru de récidive par l’activation de cellules tumorales quiescentes.

Role of MEK pathway in ovarian tumorigenesis

V. Mieulet & F. Mechta-Grigoriou “Stress and Cancer” laboratory, Institut Curie, Inserm U830, 26 rue d’Ulm, 75005 Paris, France ; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Introduction: High-grade ovarian cancer (EOC) is the fifth most common cancer among women in western countries and remains one of the deadliest gynaecologic malignancies. Despite a first response to therapy, many patients relapse, become resistant and ultimately die. To date, ovarian carcinomas have been mainly classified according to their histological subtype, grade and stage. These observations underline the pressing need to better understand the biology of EOC, in order to improve the current treatment protocols or potentially develop more adapted care strategies. Methods: Low-grade (20%) and high-grade (80%) EOC exhibit distinct genetic alterations, molecular patterns, and clinical behaviours. KRAS/BRAF mutations are present in more than 70% of low-grade EOC and result invariably in constitutive activation of the downstream kinase MEK. Based on these observations, MEK inhibitors have been included in clinical trials for the treatment of low-grade serous ovarian cancer patients. By combining analyses on EOC patient cohorts, ovarian cancer cells and patient-derived xenografts (PDX), we tested the activation of MEK and the potential interest of MEK inhibitors in high-grade EOC, representing 80% of EOC, still associated with a dismal prognosis. Results: We provide new insights into the role of MAP3K8 (TPL-2/COT), the other well-known MAP3K upstream MEK, in EOC tumorigenesis and identify this kinase as a new prognostic marker for these tumours. We demonstrate that MAP3K8 pro-tumourigenic properties are mainly mediated by MEK/ERK/p90RSK pathway. Furthermore, we identify key regulators of the G1/S transition and adhesion dynamics – namely cyclin D1 and focal adhesion kinase (FAK) – as MAP3K8 effectors. As there are no fully validated targetable molecular markers currently available for this pathology, our data indicate that MAP3K8/TPL-2/COT could be such a biomarker and define MEK inhibitors as a new promising therapeutic option for HGSC patients, in combination with conventional therapy. Discussion: Our data highlight key roles for MAP3K8 in high-grade EOC and indicate that MEK inhibitors could be a useful treatment strategy, in combination with conventional chemotherapy, for this disease. Anti-MEK treatments, currently tested in low-grade EOC due to RAS/RAF mutations, could thus be interesting therapeutic avenues in high-grade EOC accumulating MAP3K8 protein. Recent citations: MAP3K8/TPL-2/COT is a potential predictive marker for MEK inhibitor treatment in high-grade serous ovarian carcinomas. Gruosso T, Garnier C, Abelanet S, Kieffer Y, Lemesre V, Bellanger D, Bieche I, Marangoni E, Sastre-Garau X, Mieulet V* and Mechta-Grigoriou F*. (* Co-authors) Nature Communications, 2015 Oct 12;6:8583. doi: 10.1038/ncomms9583.

Characterization of tumor-infiltrating stroma in follicular lymphoma : Identification of a supportive IL-4/CXCL12 loop

S. Pandey1, F. Mourcin1, T. Marchand1, M. Coles2, J. Dulong1, F. Barone3, K. Tarte1*

1INSERM U917, University of Rennes 1, Rennes, France ; 2University of York, UK ; 3University of Birmingham, UK ; 4CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » ; *corresponding author Introduction: Follicular lymphoma (FL) is the most frequent indolent lymphoma. Beside recurrent genetic alterations, tumor microenvironment has been shown to play a key role in FL development, progression, and drug resistance within invaded lymph nodes (LN) and bone marrow (BM). Within FL niches, CD4pos T-cells, macrophages and stromal cells support malignant B-cell growth. However, how infiltrating stromal cells acquire specific features in situ has not been studied yet. Results: We first highlighted an overexpression of transglutaminase-2 (TGM2), a marker of fibroblastic reticular cells (FRC), combined to a loose of the follicular dendritic cell (FDC)-marker CD21L within infiltrated follicles. In agreement with the crucial role of LTα1β2 in FDC differentiation, FL B cells displayed a decreased expression of LTα and LTβ compared to their normal counterpart. Moreover, stromal cells overexpressed CXCL12 in situ. Interestingly, an ectopic lymphoid stroma developed within FL-invaded BM and is associated with an up-regulation of CXCL12. Whereas malignant FL B cells induced expression of CCL2 in stromal cells in a TNF-dependent manner, they did not contribute to CXCL12 induction. Conversely, IL-4 a cytokine strongly overexpressed by FL-infiltrating CD4pos T cells, showed positive correlation with CXCL12 expression. Moreover, based on our in vitro model of adipose derived stromal cells (ADSC) differentiation into lymphoid stroma, we demonstrated that IL-4 triggered CXCL12 expression in stromal cells. Such IL-4 dependent CXCL12 regulation is more pronounced in ADSC committed towards FRC like cells owing to an increased STAT6 activation. By utilizing ectopic lymphoid stroma mice model, we also demonstrate that increased CXCL12 induction is related to IL-4 expression. Finally, CXCL12 efficiently affected FL B cell migration, adhesion and B-cell receptor (BCR) signaling. Discussion: Altogether, these data reinforce our understanding of the "ménage-à-trois" between stromal cells, T cells, and malignant B cells within FL cell niche and highlight the IL-4/CXCL12 loop as a potential therapeutic target in this still fatal malignancy.

Fonctions anti- et pro-oxydantes des protéines Stat5 dans les cellules leucémiques Jérome Bourgeais1, Nicole Ishac1, Laura Desbourdes1, Valerie Gouilleux-Gruart1,2, Emmanuel Pecnard1, Florence Rouleux-Bonnin1, Emmanuel Gyan1,3, Jorge Domenech1,4, Frederic Mazurier1, Olivier Herault1,4,5,6 and Fabrice Gouilleux1*

1CNRS UMR 7292, GICC, Université F Rabelais, Tours, France; 2CHRU de Tours, Laboratoire d’Immunologie, Tours, France ; 3CHRU de Tours, Service d’Hématologie Clinique et Thérapie Cellulaire, Tours, France; 4CHRU de Tours, Service d’Hématologie Biologique, Tours, France; 5FHU GOAL « Grand-Ouest Acute Leukemia »; 6CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Les facteurs de transcription STAT5A et B jouent un rôle important dans l'hématopoïèse normale et leucémique. Ce sont en effet des effecteurs essentiels d’oncogènes à activité tyrosine kinase, tels que BCR-ABL ou JAK2V617F, responsables de la genèse d’hémopathies malignes. Ces oncogènes régulent la production de ROS (Reactive Oxygen Species) via l’activation de différentes voies de signalisation impliquées dans la prolifération et la survie cellulaire. Nos travaux indiquent que l’activation oncogénique de STAT5, induite par BCR-ABL, favorise le stress oxydatif via la répression d’expression des enzymes anti-oxydantes catalase et glutaredoxine-1. Nous montrons également, pour la première fois, que l’effet pro-oxydant de STAT5 est régulé par la phosphorylation sur tyrosine de ces protéines et que les formes non phosphorylées et transcriptionnellement inactives exercent un effet anti-oxydant et protecteur contre le stress oxydatif via des mécanismes non canoniques. Cette dualité de fonction est illustrée in vivo chez la souris ainsi que dans un modèle de co-culture de cellules de LMC et de cellules stromales médullaires que nous avons développé dans le laboratoire afin de mimer le microenvironnement médullaire des cellules leucémiques. Dans ce modèle, nous montrons que le contact avec les cellules stromales permet d’inactiver STAT5 dans les cellules leucémiques et donc de promouvoir son activité anti-oxydante. Nous observons également un arrêt de prolifération et une entrée en phase G0 du cycle cellulaire des cellules leucémiques au contact des cellules stromales ainsi qu’une résistance accrue de ces cellules à l’Imatinib, un inhibiteur de BCR-ABL. Ces données suggèrent un lien important entre activité anti-oxydante de STAT5, quiescence et chimio résistance des cellules leucémiques

Targeting acute myeloid leukemia with a new CXCR4 antagonist IgG1 antibody (PF-06747143) in NOD/SCID mice

Yanyan Zhang, PhD1*, Erika Saavedra, MD1*, Ruoping Tang2*, Shu-Hui Liu3*, Tod Smeal4*, Valeria Fantin, PhD4*, Stephane De Botton, MD, PhD5*, Ollivier Legrand, MD, PhD6, William Vainchenker, MD, PhD1,7,8, Flavia Pernasetti4* and Fawzia Louache, PhD1,9,10*

1Gustave Roussy, Inserm 1170, Villejuif, France; 2Service d'Hématologie et Thérapie cellulaire, Hôpital St Antoine, Paris, France; 3Oncology-Rinat R&D, Pfizer Worldwide Research and Development, La Jolla, CA; 4Oncology Research Unit, Pfizer Worldwide Research and Development, San Diego, CA; 5Gustave Roussy, Service d'hématologie, Villejuif, France; 6Hopital Saint Antoine, APHP, Hematology Dpt, Paris, France; 7LABEX GR-Ex, Paris, France; 8Université Paris 11, Orsay, France ; 10CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Introduction: Chemoresistance represents a considerable barrier to improving outcomes for patients with acute myeloid leukemia (AML) and therapeutic approaches using multiple lines of therapy have been unsuccessful as cancer cells acquire resistance to the chemotherapeutic agents to which they are exposed. This vulnerable patient group needs individualizing therapy through careful selection of appropriate agents based on specific signaling pathways. The chemokine receptor CXCR4 mediates cell anchorage in the bone marrow microenvironment, is highly expressed in 25-30% of patients with AML and its expression is correlated with poor prognosis and drug resistance. Objective: The purpose of this study was to investigate a new humanized monoclonal IgG1 antibody to CXCR4 (PF-06747143) and its effects as a monotherapy in AML primary patient samples and in chemotherapy resistant patient-derived xenotransplantation (PDX) models. This antibody was previously shown to be able to induce cell death through its effector function (CDC and ADCC) and to be efficacious in cell-based xenograft models of AML, NHL, CLL and MM. Results: Here we have shown that PF-06747143 binds strongly and specifically to AML cell lines and to AML primary cells, by flow cytometry. Of 16 samples evaluated, 7 displayed low CXCR4 expression (CXCR4neg/low) whereas 9 displayed high expression (CXCR4high). A good correlation was observed between 12G5, a commercially available CXCR4 Ab, and PF-06747143 staining, indicating that PF-06747143 can be used to stratify AML patients. Chemotaxis in response to CXCL12 was significantly inhibited in all AML patient primary samples analyzed. Administration of PF-06747143 to mice engrafted with AML patient cells (PDX models) induced rapid malignant cell mobilization into the peripheral blood at 4 hrs after a single antibody dose, with mobilized cell levels going back down to baseline at 24 hrs post-dose. This is in line with the ability of the antibody to block malignant cell homing to the bone marrow, inducing cell mobilization, as well as induction of cell death through effector function. To characterize the effects of PF-06747143 on leukemia progression, we used two different models: 1) P15 model characterized by high CXCR4 expression, inducing aggressive disease, with rapid progression of leukemia and widespread dissemination and chemoresistance; 2) P17 model characterized by a low CXCR4 expression, a less aggressive disease and limited dissemination. Weekly administration of PF-06747143 to leukemic mice previously engrafted with P17 or P15 malignant cells induced a sharp reduction of leukemia cells in the bone marrow, spleen and blood leading to increased survival of leukemic mice in both models. Activity of the antibody as monotherapy was superior to daunorubicin in the P15 chemoresistant model. Secondary transplantation of bone marrow cells from PF-06747143-treated or IgG1 control-treated animals showed that leukemic progenitors were also

targeted by PF-06747143 treatment, with slower tumor growth in mice transplanted with PF-06747143-treated cells. Discussion: In summary, PF-06747143, a CXCR4 IgG1 antibody, is significantly efficacious as a monotherapy and superior to daunorubicin in AML chemoresistant PDX models. These findings support evaluation of this antibody in AML therapy, with particular appeal to patients resistant to chemotherapy and to unfit patients, unable to tolerate intensive chemotherapy. Recent reference: Zhang Y, et al. CXCR4 inhibitors selectively eliminate CXCR4-expressing human acute myeloid leukemia cells in NOG mouse model. Cell Death Dis. 2012, Oct 4;3:e396. doi: 10.1038/cddis. 2012.137.

ARN non-codants longs et voie TGF-beta dans le cholangiocarcinome intrahépatique A Merdrignac, C Allain, G Angenard, C Père, A Fautrel , D Bergeat, B Turlin, K Boudjema, L Sulpice, B Clément & C Coulouarn Inserm UMR991 « Foie, Métabolismes et Cancer », Hôpital Pontchaillou, Univ. de Rennes 1, Rennes ; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » Projet « Emergence 2014-2015 » soutenu par le Cancéropole Grand-Ouest Porteur: cedric.coulouarn@inserm.fr Présentation des résultats à 10 mois. Introduction : La voie du Transforming Growth Factor beta (TGFβ) est fréquemment dérégulée dans le cancer. Cependant son rôle est complexe car en fonction du stade tumoral elle exerce soit des effets onco-suppressifs (action cytostatique à un stade précoce), soit des effets oncogéniques (action pro-métastatique à un stade tardif). Les mécanismes à l’origine de cette dualité fonctionnelle ne sont pas clairement identifiés. Récemment, nous avons démontré que l’expression du TGFβ dans la niche des cholangiocarcinomes intrahépatiques (CCI) est associée à un mauvais pronostique et corrélée à l’expression de plusieurs ARN non-codants longs (lncRNA). En s’appuyant sur la découverte récente d’un lncRNA capable d’induire les effets pro-métastatiques du TGFβ, nous émettons l’hypothèse que les lncRNA contribuent à propager et à moduler l’activité de la voie TGFβ dans les cellules cancéreuses. Méthodes : Le projet repose sur i) l’analyse supervisée de T-LINC (TGFβ-induced lncRNA), un lncRNA induit par le TGFβ récemment découvert par notre équipe et ii) l’identification non supervisée de lncRNA régulateurs de la voie TGFβ basée sur la construction de lignées senseur de la voie TGFβ et le criblage d’une banque de siRNA dirigés contre des lncRNA. Résultats préliminaires: Des signatures d’expression génique dépendantes du TGFβ ont été établies dans 2 lignées de CCI, HuCCT1 et Huh28. La dérégulation de plusieurs gènes cibles de la voie TGFβ (e.g. SMAD7, SNAI1) a été validée par RT-PCR, dont T-LINC, un lncRNA de fonction inconnue. Nous rapportons que T-LINC est induit par le TGFβ dans plusieurs lignées tumorales hépatiques et extra-hépatiques ainsi que dans des cellules du stroma. In vivo, l’étude du profil d’expression de CCI humains a montré que T-LINC est surexprimé dans les cholangiocytes tumoraux et le stroma. Une analyse par hybridation in situ a mis en évidence une expression nucléaire et cytoplasmique de T-LINC. Les premiers résultats obtenus après gain et perte de fonction suggèrent que T-LINC pourrait contribuer à propager les fonctions pro-fibrotiques du TGFβ, notamment en modulant l’expression de l’IL8. Parallèlement, des lignées stables de CCI senseur d’activité de la voie TGFβ ont été établies et validées. Les conditions de transfection pour le criblage d’une banque de siRNA dirigés contre >2000 lncRNA sont actuellement en cours de mise au point. Conclusion : L’étude est la première à identifier un lncRNA dont l’expression est contrôlée par le TGFβ et qui pourrait contrôler ses effets dans le CCI. Le projet a pour ambition d’apporter un éclairage nouveau sur les mécanismes moléculaires responsables de la dualité fonctionnelle du TGFβ dans le cancer et de fournir un rationnel pour des traitements ciblés. Recent citations:

1. Coulouarn C. Modulating the activation of hepatic stellate cells: a cunning way for metastatic cells to create a permissive soil for seeding in the liver? Hepatology. 2015 Jan;61(1):37-40. 2. Sulpice L, Rayar M, Desille M, Turlin B, Fautrel A, Boucher E, Llamas-Gutierrez F, Meunier B, Boudjema K, Clément B, Coulouarn C. Molecular profiling of stroma identifies osteopontin as an independent predictor of poor prognosis in intrahepatic cholangiocarcinoma. Hepatology. 2013 Dec;58(6):1992-2000.

                                         

NOTES