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No.C84 LAAN-A-LM056 トリプル四重極型LC/MS/MSを用いた 油脂中の3-MCPD脂肪酸ジエステルの分析 Analysis of 3-MCPD Fatty Acid Diesters in Palm Oil Using Triple Quadrupole LC/MS/MS [LCMS-8030] 3-MCPD（3-monochloropropane-1,2-diol）は，脱 脂 大 豆や小麦グルテンなどの植物性たん白を塩酸で加水分解し た醤油などの調味料を製造する際に生成する副産物です。 FAO/WHO合同食品添加物専門家会議（JECFA）によるリ スク評価では，3-MCPDに遺伝毒性発がん性は認められな いとされましたが，動物試験では長期間大量に摂取した場 合に腎臓に悪影響が生じるとされています。日本の醤油生 産量の85 ％を占める「本醸造方式の醤油」には製法の違い により3-MCPDが含まれないことが確認されています。一 般的な食生活より摂取する量が健康上問題のない量である ことから，日本では規制の対象にはなっていません。しかし， 食品中への混入を製造法の改善でできる限り低くする対策 が進められています。 最近は，精製食用油を含む多くの食品中に3-MCPD脂 肪酸エステルの存在が報告されました。3-MCPD脂肪酸エ ステルの毒性についてはまだ解明されておりません。各種 研究を進める上で，3-MCPD脂肪酸エステルの分析が重要 となっています。3-MCPD脂肪酸エステルの分析は，フェ ニルボロン酸で誘導体化後，GC/MSで分析する手法（DGF Standard methods 2009, Section C-Fats）が知られていま すが，誘導体化なしに直接分析が可能なLC/MS/MSでの 分析が注目されています。3-MCPD脂肪酸エステルは，天 然の植物性油脂に多く存在し，特にパーム油の含有量が多 いのが特徴です。今回は，LC/MS/MSによるパーム油中 の定量分析をご紹介します。3-MCPDジパルミチン酸エステ ルと3-MCPDジオレイン酸エステルの合成品を標準品として 使用しました。エレクトロスプレーイオン化法（ESI法）では 3-MCPDジ脂肪酸エステルは酢酸アンモニウムを含む移動 相使用の条件下でNH4 + が付加したイオンが検出されます。 そのイオンをプリカーサイオンとして得られたMS/MSスペク トルをFig. 1に示します。上段から，コリジョンエネルギー （CE）10，30，40 Vです。各々1つの脂肪酸が脱離したも のがプロダクトイオンとして検出されています。Fig. 2には合 成品（1 μg/L）のMRMクロマトグラムを示しました。 0.0 0.5 1.0 A O O Cl O O 100 200 300 400 500 600 m/z 0.0 1.0 Inten.(×100,000) 604 331 100 200 300 400 500 600 m/z Inten.(×100,000) 100 200 300 400 500 600 m/z Inten.(×10,000) 10 V 30 V 40 V [M+H-C16H32O2] + [M+NH4] + 331 0.0 0.5 1.0 1.5 331 57 85 0.0 5.0 C35H67ClO4 Exact Mass: 586.47 Mol. Wt.: 587.36 O O O Cl O B 100 200 300 400 500 600 m/z Inten.(×100,000) 100 200 300 400 500 600 m/z Inten.(×100,000) 100 200 300 400 500 600 m/z Inten.(×10,000) 10 V 30 V 40 V [M+H-C18H34O2] + [M+NH4] + 0.0 0.5 1.0 1.5 0.0 5.0 C39H71ClO4 Exact Mass: 638.50 Mol. Wt.: 639.43 656 357 357 357 95 69 0 5 10 15 20 25 30 656.50>357.20(+) 6.083 0 5 10 15 20 25 30 35 40 604.40>331.10(+) 5.985 A B 4.0 5.0 6.0 7.0 min 5.0 6.0 7.0 8.0 min Fig. 1 合成品のMS/MSスペクトル（A: 3-MCPDジパルミチン酸エステル，B: 3-MCPDジオレイン酸エステル） MS/MS Spectra of the Synthetic (A: 3-MCPD Di-palmitoyl ester, B: 3-MCPD Di-oleoyl ester) Fig. 2 合成品のMRMクロマトグラム（1 μg/L，A:3-MCPDジパルミチン酸エステル，B: 3-MCPDジオレイン酸エステル） MRM Chromatograms of the Synthetic (1 μg/L, A: 3-MCPD Di-palmitoyl ester, B: 3-MCPD Di-oleoyl ester)
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No.C84LAAN-A-LM056
トリプル四重極型LC/MS/MSを用いた油脂中の3-MCPD脂肪酸ジエステルの分析
Analysis of 3-MCPD Fatty Acid Diesters in Palm Oil Using Triple Quadrupole LC/MS/MS [LCMS-8030]3-MCPD（3-monochloropropane-1,2-diol）は，脱脂大
豆や小麦グルテンなどの植物性たん白を塩酸で加水分解し
た醤油などの調味料を製造する際に生成する副産物です。
FAO/WHO合同食品添加物専門家会議（JECFA）によるリ
スク評価では，3-MCPDに遺伝毒性発がん性は認められな
いとされましたが，動物試験では長期間大量に摂取した場
合に腎臓に悪影響が生じるとされています。日本の醤油生
産量の85 ％を占める「本醸造方式の醤油」には製法の違い
により3-MCPDが含まれないことが確認されています。一
般的な食生活より摂取する量が健康上問題のない量である
ことから，日本では規制の対象にはなっていません。しかし，
食品中への混入を製造法の改善でできる限り低くする対策
が進められています。
最近は，精製食用油を含む多くの食品中に3-MCPD脂
肪酸エステルの存在が報告されました。3-MCPD脂肪酸エ
ステルの毒性についてはまだ解明されておりません。各種
研究を進める上で，3-MCPD脂肪酸エステルの分析が重要
となっています。3-MCPD脂肪酸エステルの分析は，フェ
ニルボロン酸で誘導体化後，GC/MSで分析する手法（DGF
Standard methods 2009, Section C-Fats）が知られていま
すが，誘導体化なしに直接分析が可能なLC/MS/MSでの
分析が注目されています。3-MCPD脂肪酸エステルは，天
然の植物性油脂に多く存在し，特にパーム油の含有量が多
いのが特徴です。今回は，LC/MS/MSによるパーム油中
の定量分析をご紹介します。3-MCPDジパルミチン酸エステ
ルと3-MCPDジオレイン酸エステルの合成品を標準品として
使用しました。エレクトロスプレーイオン化法（ESI法）では
3-MCPDジ脂肪酸エステルは酢酸アンモニウムを含む移動
相使用の条件下でNH4+が付加したイオンが検出されます。
そのイオンをプリカーサイオンとして得られたMS/MSスペク
トルをFig. 1に示します。上段から，コリジョンエネルギー
（CE） 10，30，40 Vです。各 1々つの脂肪酸が脱離したも
のがプロダクトイオンとして検出されています。Fig. 2には合
成品（1 μg/L）のMRMクロマトグラムを示しました。
0.0
0.5
1.0
A O
O
Cl
O
O
100 200 300 400 500 600 m/z0.0
1.0
Inten.(×100,000)
604331
100 200 300 400 500 600 m/z
Inten.(×100,000)
100 200 300 400 500 600 m/z
Inten.(×10,000)
10 V
30 V
40 V
[M+H-C16H32O2]+
[M+NH4]+
331
0.0
0.5
1.0
1.5
33157 85
0.0
5.0
C35H67ClO4
Exact Mass: 586.47Mol. Wt.: 587.36
O
O
O
Cl
OB
100 200 300 400 500 600 m/z
Inten.(×100,000)
100 200 300 400 500 600 m/z
Inten.(×100,000)
100 200 300 400 500 600 m/z
Inten.(×10,000)
10 V
30 V
40 V
[M+H-C18H34O2]+
[M+NH4]+
0.0
0.5
1.0
1.5
0.0
5.0
C39H71ClO4
Exact Mass: 638.50Mol. Wt.: 639.43
656
357
357
357
9569
0
5
10
15
20
25
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5
10
15
20
25
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35
40604.40>331.10(+)
5.985
A B
4.0 5.0 6.0 7.0 min 5.0 6.0 7.0 8.0 min
Fig. 1 合成品のMS/MSスペクトル（A: 3-MCPDジパルミチン酸エステル，B: 3-MCPDジオレイン酸エステル）MS/MS Spectra of the Synthetic (A: 3-MCPD Di-palmitoyl ester, B: 3-MCPD Di-oleoyl ester)
Fig. 2 合成品のMRMクロマトグラム（1 μg/L，A:3-MCPDジパルミチン酸エステル，B: 3-MCPDジオレイン酸エステル）MRM Chromatograms of the Synthetic (1 μg/L, A: 3-MCPD Di-palmitoyl ester, B: 3-MCPD Di-oleoyl ester)
島津コールセンター 0120-131691TEL:075-813-1691
No.C84
次に，3-MCPDジパルミチン酸エステルと3-MCPDジオレ
イン酸エステルの検量線をFig. 3AとFig. 3Bに示します。1
～1000 μg/Lと広範囲において寄与率0.999以上の良好な
直線性でした。3-MCPDジパルミチン酸エステルと3-MCPD
ジオレイン酸エステルの6回繰り返し再現性は，1 μg/Lの
時，面積値%RSDが15.47と19.64，10 μg/Lの時，6.54，9.32
でした。
0 250 500 750 濃度0
25000
50000
75000
100000
125000面積
0 250 500 750 濃度0
2500050000
75000100000
125000150000
175000
面積
A B
R2=0.9992873 R2=0.9998887
4.0 5.0 6.0 7.0 min 5.0 6.0 7.0 8.0 min
0
25
50
75
100
125
150
175
200 2:656.50>357.20(+)
6.108
0
50
100
150
200
250
300
3501:604.40>331.10(+)
6.020 BA
Fig. 3 検量線（1-1000 μg/L, n=6）Calibration Curves (1-1000 μg/L , n=6)
Fig. 4 パーム油中の3-MCPD脂肪酸ジエステルのMRMクロマトグラム（A：3-MCPDジパルミチン酸エステル，B: 3-MCPDジオレイン酸エステル）MRM Chromatograms of 3-MCPD Fatty Acid Diesters in Palm Oil (A: 3-MCPD Di-palmitoyl ester, B: 3-MCPD Di-oleoyl ester)
次のFig. 4では，パーム油分析の例をご紹介します。パー
ム油は169.9 mg を秤量し，ヘキサン1 mL に溶解後，アセ
トンで100倍に希釈したものを分析に供しました（588.6倍
希釈）。この希釈した溶液中には約10 μg/Lの3-MCPDジ
パルミチン酸エステルと3-MCPDジオレイン酸エステルが検
出されました（Fig. 4AとB）。パーム油中には，それぞれ約
6 mg/Lの 濃 度 で3-MCPDジパルミチン 酸 エステルと
3-MCPDジオレイン酸エステルが含まれている計算となりま
す。このようにトリプル四重極型質量分析計では油脂に含
まれる3-MCPD脂肪酸エステルを希釈するのみの簡単な処
理で検出することができます。
M. Kobayashi
Table 1 分析条件Analytical Conditions
Column : Shim-pack XR-ODSⅡ (75 mmL. × 2.0 mmI.D., 2.2 μm)Mobile Phase A : Methanol with 3 mmol/L Ammonium Acetate / Acetonitrile = 9 / 1Mobile Phase B : Acetone / Methanol with 3 mmol/L Ammonium Acetate / Acetonitrile = 8 / 1 / 1Time Program : 0 %B (0-2.5 min) → 65 %B (7.5 min) → 100 %B (7.51-10 min)→ 0 %B (10.01-15 min)Flow Rate : 0.4 mL/minInjection Volume : 2 μL Column Temperature : 40 °CProbe Voltage : 4.5 kV (ESI-Positive mode) Nebulizing Gas Flow : 1.5 L/minDL Temperature : 300 °C Block Heater Temperature : 400 °CDL / Q-array Voltage : Using default values Drying Gas Flow : 20 L/min
3100-09103-570-IK2011.11
2011年11月
