SEROLOGICAL IDENTIFICATION OF YEASTS : SECOND REPORT

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SEROLOGICAL IDENTIFICATION OF YEASTS : SECONDREPORT

湯川, 又夫九州帝國大學農學部

太田, 正九州帝國大學農學部

https://doi.org/10.15017/20778

出版情報：九州帝國大學農學部學藝雜誌. 3 (2), pp.200-216, 1928-12. Fakultato Terkultura, KjusuImperia Universitatoバージョン：権利関係：

酵母菌類の血清學的分類(第二報)

湯川叉夫

太田正

(昭和三年十月三十日受領)

余等の研究成績第一報に於て示せる如く適當なる血清學的操作に依りては酵母菌類も亦同

じく細菌類の如くに其近縁的關係を識別し得可く其結果は酵母菌類の植物學的分類の上に重

要なる意義を及ぼす可く信ぜらるLなり。近時は沈降反応を試むることに依りて近

縁せる酵母菌類の種叉は亜種の識別に之を適用するに足ることを報告せり。然れども其研究

に於ては余等の場合と相違し甚だしく濃厚なる酵母菌細泡の自巳消化液を使用し且つ之を調

製するには頗る多量の細胞を要するなり加之単に沈降反応のみを適用せるに止まり余等の如

き輪環反鷹を試みることなかりしを以て余等の結果より之を考ふれば躍に沈降反応のみに依

りて果して常に所要の識別を全ふし得るや否やは頗る奴問とする所にして從つて共の価値に

就ても伺考慮を要す可きものありとす。

最近に於ても亦単に沈降反応のみに依りて酵母菌類を確實に分類し得可き

ことを豫報的に発表したるが未だ詳細なる報告に接するに至らざるを以て茲には之を批評す

る能はざることを遣憾とす。

余等は更に前研究に引綾き次の如き十種の酵母菌類を取りて共近縁的關係を識別せんと試

たり。

OTTENSOONER2)

BALLS1)

1. Carlsberg's Bottom Yeast No. 1. (Saccharomyces Carlsbergensis HIANSEN)

2. Bottom Beer Yeast " Yebisu."

3. Wine Yeast " Johannisberg "

〔略號:麥酒酵母(C)〕

〔略號:麥酒酵母(Y)〕

〔略號:葡萄酒酵母(J)〕

4. Saccharomyces ellipsoideus I HANSEN (Saccharomyces ellipsoideus HANsEN)

〔略號:葡萄酒酵母(E.)〕

5. Saccharomyces ellipsoideus II HANSEN (Saccharomyces turbidans HANSEN)

〔略號= Sacch. turbidansj

6. Sacchromyces Pastorianus I HANSEN (Saccharomyces Pastorianus HANSEN)

〔略號: Sacch. Pastorianus)

7. Saccharomyces Paslorianus III HANSEN (Saccharomyces Validus HANSEN)

〔略號: Sacch. validusj

8. Sake Yeasts (Saccharomyces Sake YABE var. A2, A13, B2, B4, B5, B33)

9. Debaryomyces globosus KLOCBER

10. Pichia Membranuefaciens HANSEN

〔略號3清酒酵母A2,Aエ3,..,.〕

〔略號:

〔略號2

Debaryomycesj

PichiaD

既知の分類法に從へば以上の供試酵母菌類の1,2,3,4,5,6,7,8は敦れも

騰に包括せらるNも實用的には1及び2は麥酒酵母類として・3及び4は葡萄酒酵母類と

して,5,6及び7は醸造上の見地より病害酵母類として・8の各種は清酒酵母類として認め

らるSものなり。9と10は各猫立ぜる属のものにしては共胞子の被膜が瘤状

の小突起を有する点に於てと相違するなり。及び

に於ては敦れも胞子形成に先だち二個の細胞互に癒合することに於て

と異なれり。Pichiaは産膜性なると酒精を生産せざる点に於てより区

別せらるLなり。

以上十種の酵母菌類を用ぴて冤疫抗髄を構成せしむる方法は第一報に於けるそれと同様な

るも此場合には注射回数を4-5同とし比較的若齢の家兎(体重1-1.5kg,)を撰びて静脈内注射

を行ぴたり。

酵母菌盟の浸溶液を調製する操作方法に就きても亦第一報の場合と全く同一なれども沈降

反応を行ふには能ふ限り濃厚なるものを作成する必要を知りたるを以て麹液に培養したる酵

母細胞を濾別し能く殺菌水にて洗ひ素焼粘土板上に塗り鑛げて乾燥し此乾燥酵母の0.lg.に

対し1cc.の殺菌水を用ぴ既報の如く30。C.にて6日間自已溝化をなさしめたり。但し此

際にはO.5%に相當するを加へて防腐せり。然る後之を遠心分離して其上澄液を

O,85%の食臨溶液として使用したり。

●此の如くして調製したる酵母浸溶液を用ひて沈降反応を試みたるに以下に示せる多数の沈

降反応試鹸の結果に於て見る如く2000倍附近の稀訳度のものにても積極的に反応を認識す

ることを得たり◎從來此方面に關する研究者の報告せる如く僅かに60-80倍の稀訳度までの

ものに於て反応を認めたるに過ぎざりしことをも考ふれば余等の場合の如く著しき高度の反

慮を見るを得たるは全く酵母浸溶液を調製する方法に依れることを知るなり。

第一一報に於ける實験結果の如く酵母菌類を血清學的に分類するには凝集反応叉は補体結合

反応を応用するよりも寧ろ沈降反応と飽和法とに依ることが勝れるを知りたるを以て余等は

以上の酵母菌類に就きて後の両種の反応を試みたり。司

charomyces

myces

Zygosaccharomyces

Toluol

Debaryomyces

Debaryomyces

Saccharomyces

Zygosac-

Saccharo-

Saccharomyces

1.供試酵母菌類相互間の反応

A.沈降反応

先づ供試酵母菌類に就き第一報の場合と同様に輪環反応を応用して沈降反応を試みたるが

其結果は第一表1乃至10に示せる如し。

第一衷

抗清酒酵母(A13)免疫血清

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. ralidus

Debaryomyces

Pichia

清酒酵毎(A13)

葡萄酒酵母(J)

葡萄酒酵母(E1)

麦酒酵母(Y)

麦酒酵母(C)

8

抗葡萄酒酵母(の免疫血濡

清酒酵母(A13)

葡萄酒酵母(J)

葡萄酒酵母(Eユ)

婆酒酵母(Y)

饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

Pichia

抗葡萄酒酵母(Eエ)免疫血濡

清酒酵母(A13)

葡萄酒酵母(J)

葡萄酒酵母(E、)

饗酒酵母(Y)

饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans Sacch. Pastorianus Sacch. vaZidus Debaryomyces Pichia

抗饗酒酵母(Y)免疫血清

清酒酵母(A13)

葡萄酒酵母(J)

葡萄洒酵母(Eエ)

麦酒酵母(Y)

歩酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus Debaryomyces

Pichia

抗饗酒酵母(C)免疫血清

清酒酵母(A13)

葡萄酒酵母(」)

葡萄酒酵母(E且)

雰酒酵母(Y)

饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

Pichia

抗8αeeh.twbidan8免疫血清

罰育酒酉馨母(A13)

葡萄酒酵母(J)

葡萄酒酵母(】i】ユ)

饗酒酵母(Y)

饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

Pichia

7.

抗、免疫血溝Sacch. Pastorianus

清酒酉孝母(A13)

葡萄酒酵母(J)


饗酒酵母(Y)

麥酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

Pichia

8.

抗免疫血清Sacch. validus

満酒酵母(A13)

葡萄酒醒母(J)

葡萄酒酵母(Eエ)

饗酒灘母(Y)

麥酒酷母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaromyces

Pichia

9.

抗免疫血漉 Debaryomyces globosus

清酒酵母(A13)



婆酒酵母(Y)

麥酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. Validus Debaryomyces

Pichia

抗免疫血清Pichia membrunaefaciens

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch, validus

Debaryomyces

Pichia

清酒酵母(A13)

葡萄酒酵母(J)


麦酒酵母、Y)

蓼酒酵母(C}

1

B.飽和法

供試酵母菌類に就きて試みたる飽和法の結果をあぐれば次の如し。

第二表

抗清酒酵母(B.4)免疫血清+葡萄酒酵母(J)浸溶液(1:2.5)

清詔1雪i"iPri母(B.4)

葡萄酒酵母(J)

葡萄酒酵母(Ea)

夢酒酵母(Y)

饗酒酵母(Cノ

Sacch. turbidans

抗清酒酵母(B.4)免疫血清+葡萄酒酵母(E、)浸溶液(1:25)

清酒酵母(B.4)



饗酒酵母(Y,

饗酒酵母(C)

抗清酒酵母(B.4)免疫血清十饗酒酵母(Y)浸溶液(1:2.5)

清酒酵母(B.4)

葡萄酒酵母(J)


黎酒酵母(Y)

饗酒酵母(C)

Sacch. validus

抗清酒酵母(B.4)免疫血清+饗酒酵母(C)浸溶液(1:5、

清酒酵母(B.4)

葡萄酒酵母(J)


麥酒酵母(Y)

麥酒酵母くC)

抗清酒酵母(B,4)免疫血清+SCt.cch.t・urbidans浸溶液(1:25)

清酒酵母(B.4)

葡萄酒酵母(の


麥酒酵母(Y)

饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

抗葡萄酒纏母(J)免疫血清+清酒酵母(A.13)浸溶液

清酒酵母(A.13)

葡萄酒酵母(J)


麥酒酵母(Y)

饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

抗葡萄酒酵母(J)免疫血清+麥酒酵母(Y)浸溶液(1:3)

清酒酵母(B.33)

葡萄酒酵母(J)


麥酒酵母(Y)

麥酒酵母(C)

sαcch.tdibiaahs

抗葡萄酒酵母`J)免疫血清+Sαcch.turbiaαns浸溶液(1:1.15)

清酒酵母(B.33)

葡萄酒酵母(J)

葡萄酒養母(E、)

饗酒酵母(Y)

麥酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. validus

抗葡萄酒酵母(E、)免疫血清+饗酒酵母(C)浸溶液(1:1)

葡萄酒酵母(E1)

歩酒酵母(C}

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

抗葡萄酒酵母(E1)免疫血清+Sαccゐ.ごurbidα"s浸溶液(1=2)


饗酒酵母(C)

Sacch. turbidaris

Sacch. Pastoriavus

Sacch. validus

Debaryomyces

抗葡萄酒酵母(E1)免疫血清+Sαccゐ,1,αlidus浸溶液(1:1)


麥酒酵母(C)

8α σoんturbidαns

Sαceh.Pastoria'nus

8αc¢ ん.vαlidms

Debarnyomyces

抗葡萄酒酵母(Eエ)免疫血清+浸溶液(1:1)Debaryomyces globosus


黎酒際母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

抗麥酒酵母(Y)免疫血清十消酒酵母(A.13)浸溶液(1:1)

清酒酵母(A.13}

葡萄酒酵母(J)

婆酒酵母(Y)

&acels.turbi(lans

&hcch.vαZidus

抗夢酒酵母(Y)免疫血清十葡萄酒酵母(J)浸溶液(1:1.5)

清酒酵母(A.13)

葡萄酒酵母(J)

屡酒酵母(Y)

Sacch. turbidans

Sacch. validus

抗饗酒酵母(C)冤疫血清+饗酒酵母(Y)浸溶液(1:1)

清酒酵母(B.33)

葡萄酒酵母(Er)

饗酒酵母(Y)

饗酒酵母(C♪

8α6cゐ.t秘r乙idα ηs

抗饗酒酵母(C)免疫血清十清酒酵母(B.33)浸溶液(1:1)

清酒酵母(B.33)


屡酒酵母(Y)

麥酒酵母(C)

Sacoh. turbidans

抗麦酒酵母(C)免疫血清+葡萄酒酵母(E、)浸溶液(1:1)

消罰酉iy・母(]3.33)

葡萄酒酵母(Eヱ)

饗酒酵母(Y)

肇酒酵母(C)

Sacch. turbidans

抗Sαcch,turbidαns免疫血清+葡萄酒酵母(E、)浸溶液(1:2)

葡萄酒酵母(E,)

饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. I'astoria,lus

Sacch. validus

抗Sαceh.turbidαns免疫血清十夢酒騨母(C)浸溶液(1:15)


饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. ralidus

抗免疫血清+浸溶液(1=2) S icch. turbidans Sacch. Pastorianus


饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Px: torianus

Sacch. validus

抗挽疫血清浸溶液(1:05) Sacch. turbidans +Sacch. validus

葡萄酒酵母(E1)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

抗琵疫血清+蓼酒酵母(C)浸溶液(131) Sacch. Pastorianus


饗酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

抗免疫血清+葡萄酒酵母(E、)浸溶液(1:1.5) Sacch. Pastorianus


饗滴酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

Debaryomyces

抗免疫血清浸溶液(1:1)Sacch. Pastorianus -1-Sacch . turbid ans


夢酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus

抗免疫血清浸溶液(1=1)Sacch. Pastorianus +Sacch. validus

婆酒酵母(C)

Sacch. turbid ans

Sacch. Paslorianu:,

Saoch. validus

抗Saceh.Pastorianus免疫血清+Debαromycesglobosus浸溶液(1:1)


麥酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastorianus

Sacch. validus Debaryomyces

抗免疫血清浸溶液(0.6:0.5)Sacch. validus +Sacch. turbidans

Sacch. turbidans

Sacch. validus

Debaryomyces

Picl6ia

抗Sacch.validus免疫血清浸溶液(0.6:0.6) +Debaryomyces globosus

Sacch. turbidans

Sacch. validus

Debaryomyces

Pichia

抗免疫血清浸溶液(0.6:0.06)Sacch. validus +Pichia rnembranaefaciens

Sacch. turbidays

Sacch. validus

1, ebaryomyces

Pichia

抗免疫血清十葡萄酒酵母(J)浸?容液(1:0.5) Debaryomrces globosus

㌃南萄酒禾孚肇母(J)

葡萄酒酵母(Eコ)

Sacch. Past orianus

Sacch. validus

Debaryomyces

Pichia

抗免疫血清+葡萄酒酵母(E1)浸溶液(1:1) 1)ebaryomyces globosus

葡萄酒酵母(E1)

Sacch. turbidans

Sacch. Pastarianus

Sacch. validus

Debarvomvices

抗免疫血清十清酒酵母(B.33)浸溶液(1:0.5)Debaryomyces globosus

漕酒酵母(B.33)

葡萄酒酵母(J)


Sacch. validus

Debaryomyces

Pichia

抗免疫血清浸溶液(1:1) Debaryomyces globosus +Sacch. Pastorianus

葡萄酒醒母(E、)

Sacch. tvrbidans

Sacch. Pastorianns

Sacch. validrts

Debaryomyces

・抗免疫血清浸潴液(1:1) Debaryomyces globosus +Sacch. validus

清酒酵母(B.33)



Saceh. validus

Debaryomyces

Pichia

抗免疫血消浸溶液《1:0.5) Debaryomyres globosu. +Pichia membranaefaciens

清酒酵母(】3.33)

葡萄酒酵母(J》


Sacch. validus

Debaryomyces

Pichia

抗免疫血清+麥酒酵母(C)浸溶液(1:1) Pichia membranaefacie,zs

饗酒酵母(C)

Sacch. turbidaus

Sacch. validus

Debar yomyces

Pehin.

抗免疫血清浸溶液(1:1)Pichia membranefaciens +Sacch. validus

麥酒酵母(C)

Sacch. turbidans

Sacch. validus

Dcbaryom yce.

Pichia

抗P56痂 α7nembrαnaefaciens免疫血清浸溶液く1:1) +7)ebaryomyces ylobosus

麥酒酵母(C)

&tcch. turbidarns

H'acch. validl.us

Debaryomyces

1'•ichia

II.清酒酵母菌類相互の反応

供試せるの清酒酵母菌の六種は敦れもに包

括せらる可き菌種にして内生胞子の形成及び糖類に対する醗酵關係等に於て互に相違するも

のなり。3)然れども沈降反応と飽和法とに依りては供試の清酒酵母菌類の相互の間には判然

たる区別を見出すを得ざりしことは第三表に示せるが如し。

A2, A .,::, Bz, 14, I3,, 1333 Saccharomyces Sakc

第三表

清酒酵母菌類(A2,A13,B2,B4,B33)相互間の反応

沈降反応

矛r腎7酉酉柴一」区ナ(A.2)一卜矛1薯∫沈兀il響彦r多解:(B,33)茅受セ容霞突(1:2)

清酒酵母(B.33)十清酒酵母(A.2)浸i溶液(1:2)

綜括的結論

第・表1-10に見る如く(a)清酒酵母菌類葡萄酒酵母菌類

及び麥酒酵母菌類

は輪環反応に依りて執れも同様に反応し之を麗別し難

く共近縁的關係は五に接近せり。(b)に從へば同・・のに包括せらるN

.及びの如き醸造

上の病源酵母菌類とも呼ぱるL種類は清消酵母菌麹1,葡萄酒酵母菌類及び委酒酵母菌の如き

有用酵母類とも云はる」種類に対して1飢清學的にも区別せらるNは興味ある事實なり。

第二表1-38は(c)輪環反鷹に依りては類属反応を呈する清酒酵母菌類,葡萄酒酵母菌類及

び麥酒酵母菌類の如き.btに近縁なる酵母類に於ても試験管内飽和法に依る時はかなり明瞭に

相互を識別し得ることを示せり。

第三表の結果は(d>清酒酵母菌類の各種は7乙に区別し能はざることを明瞭ならしむ。

以上の成績は從來一・般に認めらる酵母菌類の分類法のみに從ひ共位避を決定することは

隅より絶対に正確且つ必然的のものに非す。細菌類の場合と同様に更に血清学的観察の結果

をも考慮するの必要あることを指示するなり。

(Saccharomyces Sake),

romyces ellipsoideus, \Vine yeast " Johannisberg ")

yensis, Bottom Beer Yeast " Yebisu ")

HANMEN

Saccharomyces J'astorian.os, Saccharomyces turbidans

(Succha

(Saccharomyces Carl: ber-

Untergrtipi)e

Saceharomycys validas

(昭和四年四月)

文献

1) A. K. BALLS: The precipitin test in the identificati )n of Yeasts. J. of 1mmn. 1925, No. 5

'2) F: arrENTS>oNEn : Serologische Differenz erung von Hefen , auc,i Gageniiber Mucor n.

Endomyeeten. Wochschr. 1. Brauerei 39, 1926

3)東京帝國大學農學部紀要第七巻第二號,

SEROI.,OGICAI, IDENTIF'ICATION OF ,YEASTS

SECOND REPORT

Matao YUKAWA

Masashi OHTA

To investigate the interrelationship of yeasts more widely, the writers

have used the following yeasts : (1) Carlsberg's bottom yeast no. 1 (Sacch-

aromyces Carlsbergensis Hansen), (2) bottom beer yeast " Yebisu ", (3) wine

yeast " Johannisberg ", (4) Saccharomyces ellipsoideus Hansen, (5) Sacch-aromyces turbidans Hansen, (6) Saccharomyces Pastorianus Hansen, (7) Saccharomyces validus Hansen, (8) Saccharomyces Sake Yabe, (9) Debaryo-

inyces globosus KlOcker, (10) Pichia membranaefaciens Hansen. "Ringprobe " and " Absattiguiigsverfahren " were employed in the

examination of these yeasts. While methcd of preparing the macera-tion juices was much the same as that covered in the first report, it differed

from the former in using 20 times the amount of dried yeast powde1, and

in incubating the mixture of yeast and water for 6 days. Carrying on the Ringprobe" test with these maceration juices, the

writers have demonstrated that precipitin reaction could be positively

recognised even in dilution as high as 2000 times.

The results are summarised in the following : (1) sake yeasts, wine

yeasts, and beer yeasts are to be judged to be very closely allied organisms in their serological relationship, because they are undistinguishable from

each other by " Ringprobe ", (2) It is a very interesting fact that Sacch-

arounyces turbidans, Saccharomyces Pastorianus and Saccharomyces validus,

which are involved in the same undergroup with Sake yeast, wine yeast

and beer yeast according to Hansen's classification, and are known as the

pathogenic yeasts from industrial points of view, are precisely distinguished from the latter three species which are called the useful yeasts. (3) The closely related yeasts such as sake yeast, wine yeast and beer yeast were

clearly differentiated from each other by " Absattigungsverfahren ". (4) The

varieties of sake yeast have never been distinguished one from another by

either tests. (5) In the case of the identification of yeasts, it seems to be necessary to consider the serodiagnostic results with the classifications

depending upon their morphological and cultural characteristics.

SEROLOGICAL IDENTIFICATION OF YEASTS : SECOND REPORT

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