LUIS DANIEL URIBE MONTOYAMANUELA ZAMBRANO SALDARRIAGA

INTRODUCTION

NEISSERIA

 Is a large genus of bacteria that 

colonize the mucosal 

surfaces of many animals. 

Neisseria species are Gram 

negative bacteria included among the proteobacteria, a large group of Gram-negative 

forms.

Of the 11 species that colonize 

humans, only two are pathogens, N. meningitidis and N.

gonorrhoeae. 

These two species produce meningitis and gonorrhea respectively.

N. gonorrhoeae has a size ranging between 0.6 and 1 micron in diameter , the average

size of 0.8 microns in diameter. Microorganisms are displayed by light microscopy as intracellular diplococci

within neutrophils.

NEISSERIA GONORRHOEAE

VIRULENCE FACTORS

It only affects

humans.Fimbriae:

high rate of antigenic variation

Can hidrolize

Iga.Leucocidinsβ -

lactamase

Resistance to ampicillin and

first generation cephalosporins

PILI

Penicilinase

PFGEThis electrophoresis use a different size camera, the traditional camera has two positive electrodes and two negatives, this one has four of each this kind of camera is useful for bigger DNA molecules.

OBJECTIVE

This study aimed to ascertain the molecular

epidemiology of circulating gonococci from remote

regional WA over the 3-year period from 2011 to 2013.

MATERIALES Y METODOS

POBLACIÓN

APROBACION ETICA

El  estudio  no requería  aprobación ética  porque  solo  se usaron  bacterias,  sin embargo  “  Western Australian  Health Department  and  the Queen  Elizabeth  II Medical Centre, Perth el de” manifestaron la aprobación.

VITEK 2

Sistema que utiliza tarjetas con reactivos colorimétricos, las que son inoculadas con la suspensión de un cultivo puro microbiano y el perfil de desarrollo es interpretado de forma automática. Existen 4 tipos:

GN – Bacilos Gram

negativos fermentadores

y no fermentadores

GP - Cocos y bacilos no

formadores de esporas Gram

positivos

YST – Levaduras y organismos

levaduriformes

BCL – Bacilos formadores de esporas Gram

positivos

En el estudio usaron el Vitek 2 para la identificación de colonias bacterianas de la N gonorrhoeae.

MALDI Se usó para la

identificación de colonias

bacterianas de N. gonorrhoeae

La tecnología MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight) examina los patrones de proteínas detectadas directamente de la bacteria intacta.

MALDI PROCEDIMIENTO

La muestra analizada se llama matriz.

La mezcla es aplicada a un plato de metal e irradiada con 

una luz laser

La matriz absorbe el laser y vaporiza durante la ionización

Los campos electricos luego guían los iones y se separan

de acuerdo a su masa.

Finalmente la cantidadde cada ion es determinada

Se realiza la detección

PCR

Reacción enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos 

repetidos en los que la secuencia blanco es copiada fielmente. Consiste en aumentar un segmento especifico de ADN usando 

la polimerasa, obteniendo miles o millones de copias.

PCRPOSEE 3 PASOS BASICOS

HIBRIDACIÓN

DENATURACIÓN

SINTESIS

PFGE• Se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de 

separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.

•   Separación de grandes fragmentos de DNA induciendo su reorientación mediante cambios periódicos en el campo eléctrico.

PFGEPROCEDIMIENTO

Cuanto mayor sea el tamaño de los fragmentos a separar, mayor ha de ser la duración de los campos aplicados.

PFGESe diferencia de la electroforesis tradicional por su número de cámaras

Su utilidad es similar a la de la electrophoresis convencional con la salvedad de que los

fragmentos de DNA separados son de mayor tamaño.

SECUENCIACIÓNEs  un  conjunto  de  métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad  es  la  determinación del  orden  de los nucleótidos (A, C, G y T) en un oligonucleótido de ADN. 

APLICACIONES:• Procesos       biológicos fundamentales• Investigación forense• Mutaciones somáticas• Proyecto genoma humano

SECUENCIACIÓN

TIPOS• Secuenciación por terminador-fluorescente• Secuenciación alelo-específica por bisulfito

Todos los aislamientos fueron confirmados como N. gonorrhoeae por ambos métodos fenotípicos y PCR.

No se identificó susceptibilidad reducida o resistencia a la ceftriaxona.

Se identificó resistencia a la penicilina con mayor frecuencia en aislamientos metropolitanas (23%) en comparación con los

aislados remota región (8%).

RESULTADOS

AUTHOR CITATION AGREED OR DISAGREED

Goire N, Lahra MM, Chen M, Donovan B, Fairley CK, Guy R, et al.

“Neisseria gonorrhoeae, the etiological agent of the sexually transmitted disease gonorrhoea, has emerged as a challenging pathogen due to its propensity to acquire resistance to a wide range of antimicrobial agents. With the world-wide spread of antimicrobial resistant strains, epidemiological surveillance has acquired new importance for the control of gonorrhea.”

AUTHOR CITATION AGREED OR DISAGREED

Speers DJ, Fisk RE, Goire N, Mak DB

“As a result, amoxycillin combined with probenecid remains successful for the empiric management of gonorrhoeae acquired locally in these remote regions.”

AUTHOR CITATION AGREED OR DISAGREED

Lahra MM.

“The remote and indigenous populations of Western Australia (WA), Australia’s largest state by area, have one of the highest notification rates of gonorrhoea in the world yet the circulating gonococci in these populations harbour very low levels of penicillin resistance.”

AUTHOR CITATION AGREED OR DISAGREED

Thakur SD, Levett PN, Horsman GB, Dillon JA.

“Therefore we classified our isolates based on the relatively more conserved tbpB gene as this was more likely to demonstrate linkages over time.”

DISCUSSION

The great diversity observed amongst the NG-MAST types in this study is most likely due to the hyper-variable nature of the target loci, especially the

porB locus, evolving under selection pressure over years.

The tbpB-group based classification identified the presence of four large clusters- namely tbpB-groups 29, 349, 1330 and 1749 which accounted for 67

% percent of all isolates in the study .

The constantly evolving NG-MAST loci are known to undergo changes to their porB and tbpB alleles over relatively short periods of time which would

explain their distribution over a wide range of PT.

MANUELA ZAMBRANO

PERSONAL CONCLUSIONS

This study show us how usefull are some tests as the PCR which is used for the information that it gave us about the batery and the PGFE which is a very specific  test that allows the researchers to determinate the bacterian colonies that have a 

bigger size DNA.

The preparation of the study takes a lot of importance in the field of public health since gonorrhea is an easily transmittable disease and its increasing the infected population, which is why an investigation about it can give the doctors many tools 

for generate p&p campaigns and decrease the infected population.

LUIS DANIEL URIBE

PERSONAL CONCLUSIONS

This kind of investigations are essential for the correct understanding of how a bacteria can mutate and develop a new defense against drugs because this way 

we can learn a correct form of treating it.

A correct understanding of how the bacteria propagates and how it interacts with the population of an specific area can hep us to develop more efficient p&p 

control.