Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018...

17
61 Lampiran 1 Kerangka Konsep Penelitian DMBA Karsinogen Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom P-450 untuk membentuk ikatan kovalen dengan DNA pada sel Acetogenin menghambat ubiquinon oxireduktase pada kompleks I mitokondria Abnormalitas sel konfluenitas cepat Kerusakan DNA atau DNA adduct sel kanker Mengaktifkan gen P53 (tumor suppresor) Ekstrak daun sirsak Konsentrasi 10 ppm 20 ppm 40 ppm 80 ppm 100 ppm Menghentikan siklus G1pembelahan sel Mencegah proliferasi sel berlebih Mengganggu transport elektron pada Mitokondria Penurunan ATP apoptosis sel

Transcript of Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018...

Page 1: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

61

Lampiran 1 Kerangka Konsep Penelitian

DMBA

Karsinogen

Sel Hati Fetus

Hamster

Dmba bereaksi dengan sitokrom P-450

untuk membentuk ikatan kovalen

dengan DNA pada sel

Acetogenin menghambat ubiquinon

oxireduktase pada kompleks I

mitokondria

Abnormalitas sel konfluenitas cepat

Kerusakan DNA atau DNA adduct

sel kanker

Mengaktifkan gen P53 (tumor

suppresor)

Ekstrak daun sirsak Konsentrasi 10 ppm 20 ppm 40 ppm 80 ppm 100 ppm

Menghentikan siklus G1pembelahan sel

Mencegah proliferasi sel berlebih

Mengganggu transport elektron

pada Mitokondria

Penurunan ATP

apoptosis sel

Page 2: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

62

Lampiran 2 Diagram Kegiatan Penelitian

Fetus Hamster

Pengisolasian Sel Hati Fetus Hamster Dan Penginduksian DMBA

0,1%

Inkubasi Selama 48 Jam

Pengamatan Konfluenitas dan Morfologi Sel Hati

Fetus Hamster

Pemberian Ekstrak Daun Sirsak Dengan Konsentrasi Berbeda Pada

Kelompok Perlakuan (10 ppm, 20 ppm, 40 ppm, 80 ppm, dan

160).ppm)

Inkubasi Selama 24

Jam

Pengamatan dan Perhitungan Viabilitas Sel, Apoptosis Sel,

Serta Sitotoksitas Sel

Hasil

Page 3: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

63

Lampiran 3. Diagram Pembuatan Media DMEM Stok 100 ml

DMEM Powder 1,35

gram

Dimasukkan Dalam Tabung

Erlenmayer 100 ml

Diaduk Sampai

Homogen DI Steril 20 ml NaHCO3 0,37 gr

Hepes 0,238 gr

Penicilin 0,06 gr

Ditambah DI 80 ml

Dihomogenkan

DMEM Stok

Page 4: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

64

Lampiran 4. Diagram Isolasi Fetus Hamster

Fetus Umur 2 Hari

Didislokasi

Dicuci PBS 3X

Dicacah Sampai Halus

Diinkubasi Selama 20 menit

Disaring Dengan Nylon Mesh 180

Disentrifuge 10 Menit, 1500

rpm

Disentrifuge 10 Menit, 1500rpm

Dibuang Supernatan, Disisakan Pelet

Dibuang Supernatan, Disisakan Pelet 3 ml

Sel Dihitung Kemudian

Ditanam

Ditambah Tripsin

0,25%

Ditambah DMEM

non Serum 3 ml

Ditambah Medium

DMEM + 10%

FBS 3 ml

Disentrifuge 10 menit, 1500 rpm

Page 5: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

65

Lampiran 5 Diagram Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata

Linn)

Daun Sirsak Pada Pucuk Ke- 3 dan ke-4

Diambil dan dicuci bersih

Dikering anginkan di

suhu ruang

Dibuat bubuk simplisia

kering

Ditimbang 200 gram serbuk dan ditambah 1

liter etnol 70%

Direndam selama 3 hari dan

dilakukan pengadukan berkala

Campuran disaring dan ampas dilakukan

perendaman berulang-ulang hingga tidak

berwarna

Maserat yang diperoleh lalu dipartisi kemudian sisanya

dipekatkan dengan rotary evaporator suhu 500C

dengan kecepatan 50 rpm

Dibuat larutan stok dengan dihitung

konsentrasinya sesuai dengan kebutuhan

Page 6: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

66

Lampiran 6. Data Viabilitas dan Mortalitas Kultur Sel Setelah Pengamatan Jam

ke-72

Perlakua

n

Ulanga

n Jumlah sel dalam 5 kotak haemocytometer ∑sel /mL

%

Viabilita

s

%

Mortalita

s

Kotak Sel hidup Sel Mati Jumlah

1 14 3 15

2 12 4 16

1 3 8 4 12

4 8 3 11 248000 77.42 22,58

5 6 3 9

jumlah 48 14 23

∑sel /mL 192000 56000

1 5 3 8

2 8 3 11

K(-) 2 3 8 1 9 216000 74.07 25.93

4 10 4 14

5 9 3 12

jumlah 40 14 54

∑sel /mL 160000 56000

1 9 5 14

2 9 5 14

3 3 13 8 21 356000 66.29 33.71

4 17 6 23

5 11 6 17

jumlah 59 30 89

∑sel /mL 236000 120000

rata-rata jumlah sel 196000 232000

273333.3

3 72.59 27,41

1 12 4 16

2 11 3 14

1 3 12 2 14 288000 80.55 19.45

4 11 3 4

5 12 2 14

jumlah 58 14 72

∑sel /mL 232000 56000

1 13 3 16

2 12 3 15

K(+) 2 3 17 4 21 360000 77.77 22.23

4 15 5 20

5 13 5 18

jumlah 70 20 90

∑sel /mL 280000 80000

1 10 0 10

2 18 4 22

3 3 14 3 17 296000 95.94 4.06

4 15 3 18

5 14 2 16

jumlah 71 12 83

∑sel /mL 284000 48000

rata-rata jumlah sel

195666.6

7 61333.33

314666.6

7 84.75 15.25

1 10 4 14

2 7 5 12

1 3 10 6 16 304000 65.79 34.21

Page 7: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

67

4 10 4 14

5 13 7 20

jumlah 50 26 76

∑sel /mL 200000 104000

1 8 4 12

2 9 4 13

P1 2 3 7 4 11

4 10 5 15 256000 65.63 34.37

5 8 5 13

jumlah 42 22 64

∑sel /mL 168000 88000

1 9 6 15

2 6 5 11

3 3 7 6 13

4 5 4 9 248000 58.06 41.94

5 9 5 14

jumla

h 36 26 62

∑sel

/mL 144000 104000

rata-rata jumlah sel

170666.6

7 98666.67

269333.3

3 63.16 36,84

1 15 8 23

2 13 8 21

1 3 10 9 19

4 7 8 15 336.000 63.09 36.91

5 8 8 16

jumlah 53 31 84

∑sel /mL 212000 124000

1 6 8 14

2 5 8 13

P2 2 3 7 9 16 292000 43.84 56.16

4 8 8 16

5 6 8 14

jumlah 32 41 73

∑sel /mL 128000 164000

1 6 11 17

2 7 8 15

3 3 6 7 13 308000 41.46 58.54

4 7 7 14

5 8 10 18

jumlah 34 48 82

∑sel /mL 116000 192000

rata-rata jumlah sel 152000 160000 312000 49.46 50.54

1 5 8 13

2 5 7 12

1 3 6 8 14 272000 42.65 57.35

4 8 7 15

5 5 9 14

jumlah 29 39 68

∑sel /mL 116000 156000

1 6 8 14

2 5 8 13

P3 2 3 3 6 9

4 6 7 13 240000 41.67 58.33

5 5 6 11

jumlah 25 35 60

∑sel /mL 100000 140000

1 5 9 14

Page 8: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

68

2 5 8 13

3 3 6 7 13

4 5 7 12 256000 39.06 60.94

5 4 8 12

jumlah 25 39 64

∑sel /mL 100000 156000

rata-rata jumlah sel

105333.3

3

150666.6

7 256000 41.13 58.87

1 6 8 14

2 7 10 17

1 3 5 11 16

4 5 12 17 320000 35 65

5 5 11 16

jumlah 28 52 80

∑sel /mL 112000 208000

1 4 8 12

2 3 8 11

P4 2 3 6 6 12 232000 36.21 63.79

4 3 7 10

5 5 8 13

jumlah 21 37 58

∑sel /mL 84000 148000

1 4 8 12

2 4 6 10

3 3 5 9 14

4 3 8 11 236000 37.66 62.34

5 4 8 12

jumlah 20 39 59

∑sel /mL 80000 156000

rata-rata jumlah sel 92000

170666.6

7

262666.6

7 35.03 64.97

1 4 15 19

2 4 10 14

1 3 2 12 14 308000 24.67 75.33

4 6 8 14

5 3 13 16

jumlah 19 58 77

∑sel /mL 76000 232000

1 4 13 17

2 3 14 17

P5 2 3 3 17 19

4 5 12 17 364000 21.98 78.02

5 4 15 19

jumlah 20 71 91

∑sel /mL 80000 284000

1 5 11 16

2 6 10 16

3 3 2 11 13 316000 26.58 73.42

4 3 12 15

5 5 8 13

jumlah 21 58 79

∑sel /mL 84000 232000

rata-rata jumlah sel 80000

249333.3

3

329333.3

3 24.41 75.59

Page 9: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

69

Lampiran 7 Analisis Statistik Tentang Pengaruh Ekstrak Daun Sirsak Dengan

Konsentrasi Berbeda Terhadap Viabilitas Sel Hepar Baby Hamster

Yang Diinduksi DMBA 0,1μg/mL selama 48 jam

Perlakuan Ulangan Jumlah Rata-Rata

1 2 3

K(-) 61, 62 59,34 54,45 175,41 58,47

K(+) 62,79 61,82 28,11 152,72 50,90

P1 54,15 54,09 49,6 157,84 52,61

P2 52,51 41,44 40,06 134,03 44,67

P3 40,74 40,16 3,65 119,55 39,85

P4 36,27 36,99 37,23 110,49 36,83

P5 29,73 27,9 30,98 88,61 29,53

Total 938,65

X = ∑𝑇

𝑟𝑥𝑡 =

938,65

21 = 44,69

FK = ∑𝑇2

𝑟𝑥𝑡

= (938,65)2

21= 41955,42

JKT = ∑𝑌𝑖𝑗2 – FK

= 61,622 + 59,34

2 + + 88,61

2 – FK

= 44695 – 41955,42

= 2739,98

JKP = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑃𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 2

𝑈𝑙𝑎𝑛𝑔𝑎𝑛 – FK

= 175,412 + 152, 72

2 + ............+ 88,61

2 -FK

3

= 1818,42

JKG = JKT – JKP

= 2739,98- 1818,429

= 921,55

KTP = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝐾𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑡 𝑃𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛

𝑡−1

Page 10: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

70

= 1818 ,42

6= 303,07

KTG = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝐾𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑡 𝐺𝑎𝑙𝑎𝑡

𝑡 (𝑟−1)

= 921,55

14= 65,82

F hitung = 𝐾𝑇𝑃

𝐾𝑇𝐺 =

303,07

65,82

= 4,60

ANOVA

SK db JK KT F hitung F tabel 5%

Perlakuan 6 188,43 303,07 4,60 2,77

Galat 14 921,56 65,82

Total 20

Kesimpulan: karena F hitung (4,60) > F tabel (2,77) maka H1 diterima

Jadi, ada pengaruh pemberian ekstrak daun sirsak dengan konsentrasi berbeda

terhadap viabilitas sel hepar baby hamster yang diinduksi DMBA 0,1μg/ml

selama 48 jam

Karena ada pengaruh dan memiliki nilai KK sebesar 0,86%, maka diuji lanjut

dengan uji BNJ 0,05

Tabel uji Beda Nyata Jujur 0,05

Perlakuan Rata-Rata (%) Notasi BNJ 0,05

K(-) 58,47 d

K(+) 50,90 bcd

P1 52,61 cd

P2 44,67 abcd

P3 39,85 abc

P4 36,83 ab

P5 29,53 a

Page 11: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

71

Lampiran 8 Analisis Statistik Tentang Pengaruh Ekstrak Daun Sirsak Dengan

Konsentrasi Berbeda Terhadap Konfluenitas Sel Hepar Baby

Hamster Yang Diinduksi DMBA 0,1μg/mL selama 48 jam

Perlakuan Ulangan Jumlah Rata-Rata

1 2 3

K(-) 40 35 35 110 36,66

K(+) 63 65 65 193 64,33

P1 50 50 45 145 48,33

P2 40 38 40 118 39,33

P3 35 30 35 100 33,33

P4 20 15 20 55 18,33

P5 10 15 10 35 11,66

Total 756

X = ∑𝑇

𝑟𝑥𝑡=

756

21 = 36

FK = ∑𝑇

2

𝑟𝑥𝑡

= (756)2

21 = 27216

JKT = ∑𝑌𝑖𝑗2 – FK

= 632 + 65

2 + + 10

2 – FK

= 32938 – 27216

= 5722

JKP = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 2

𝑈𝑙𝑎𝑛𝑔𝑎𝑛− 𝐹𝐾

= 1102

+ 1932 + ................+35

2 - FK

3

= 32849,33 – 27216

=5633,33

JKG = JKT – JKP

= 5722 – 5633,33

= 88,67

Page 12: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

72

KTP = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝐾𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑡 𝑃𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛

𝑡−1

= 5633,33

6= 938,88

KTG = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝐾𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑡 𝐺𝑎𝑙𝑎𝑡

𝑡 𝑟−1

= 88,67

14= 6,33

F hitung = 𝐾𝑇𝑃

𝐾𝑇𝐺

= 938,88

6,33= 148,25

ANOVA

SK db JK KT F hitung F tabel 5%

Perlakuan 6 5633,33 938,88 148,25 2,77

Galat 14 88,66 6,33

Total 20

Kesimpulan: karena F hitung (148,25) > F tabel (2,77) maka H1 diterima

Jadi, ada pengaruh ekstrak daun sirsak dengan konsentrasi berbeda terhadap

konfluenitas sel hepar baby hamster yang diinduksi DMBA 0,1μg/ml

selama 48 jam.

Karena nilai KK 0,33%, maka diuji lanjut dengan menggunakan uji BNJ 0,05

Tabel Uji Beda Nyata Jujur 0,05

Perlakuan Rata-Rata Notasi BNJ 0,05

K(-) 36,66 bc

K(+) 64,33 c

P1 48,33 c

P2 39,33 c

P3 33,33 abc

P4 18,33 ab

P5 11,33 a

Page 13: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

73

Lampiran 9. Tabel hasil Analisis Probit

Page 14: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

74

Lampiran 10. Gambar Sel Hepar Setelah Diinduksi DMBA 48 Jam

(Kontrol Negatif) (Kontrol Positif)

(P1) (P2)

(P3) (P4)

(P5)

Page 15: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

75

Lampiran 11. Gambar Hasil Pengamatan Sel Hasil Kultur Setelah Pengamatan

jam ke-72 Dengan Perbesaran 200x

(Kontrol Negatif) (Kontrol Positif)

(P1) (P2)

(P3) (P4)

(P5)

Page 16: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

76

Lampiran 12. Gambar Bahan-Bahan Yang Digunakan

DMBA

Stok DMBA,DMEM, PBS, NaCl

Ekstrak Daun Sirsak Dengan Konsentrasi Berbeda

Page 17: Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018 Lampiran.pdf · 2015-07-27 · Dmba bereaksi dengan sitokrom P DMBA Karsinogen Sel Hati

77

Lampiran 13 Gambar Alat-Alat Yang Digunakan