Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018...
-
Upload
truonghanh -
Category
Documents
-
view
233 -
download
0
Transcript of Sel Hati Fetus Hamster Dmba bereaksi dengan sitokrom Petheses.uin-malang.ac.id/575/11/08620018...
61
Lampiran 1 Kerangka Konsep Penelitian
DMBA
Karsinogen
Sel Hati Fetus
Hamster
Dmba bereaksi dengan sitokrom P-450
untuk membentuk ikatan kovalen
dengan DNA pada sel
Acetogenin menghambat ubiquinon
oxireduktase pada kompleks I
mitokondria
Abnormalitas sel konfluenitas cepat
Kerusakan DNA atau DNA adduct
sel kanker
Mengaktifkan gen P53 (tumor
suppresor)
Ekstrak daun sirsak Konsentrasi 10 ppm 20 ppm 40 ppm 80 ppm 100 ppm
Menghentikan siklus G1pembelahan sel
Mencegah proliferasi sel berlebih
Mengganggu transport elektron
pada Mitokondria
Penurunan ATP
apoptosis sel
62
Lampiran 2 Diagram Kegiatan Penelitian
Fetus Hamster
Pengisolasian Sel Hati Fetus Hamster Dan Penginduksian DMBA
0,1%
Inkubasi Selama 48 Jam
Pengamatan Konfluenitas dan Morfologi Sel Hati
Fetus Hamster
Pemberian Ekstrak Daun Sirsak Dengan Konsentrasi Berbeda Pada
Kelompok Perlakuan (10 ppm, 20 ppm, 40 ppm, 80 ppm, dan
160).ppm)
Inkubasi Selama 24
Jam
Pengamatan dan Perhitungan Viabilitas Sel, Apoptosis Sel,
Serta Sitotoksitas Sel
Hasil
63
Lampiran 3. Diagram Pembuatan Media DMEM Stok 100 ml
DMEM Powder 1,35
gram
Dimasukkan Dalam Tabung
Erlenmayer 100 ml
Diaduk Sampai
Homogen DI Steril 20 ml NaHCO3 0,37 gr
Hepes 0,238 gr
Penicilin 0,06 gr
Ditambah DI 80 ml
Dihomogenkan
DMEM Stok
64
Lampiran 4. Diagram Isolasi Fetus Hamster
Fetus Umur 2 Hari
Didislokasi
Dicuci PBS 3X
Dicacah Sampai Halus
Diinkubasi Selama 20 menit
Disaring Dengan Nylon Mesh 180
Disentrifuge 10 Menit, 1500
rpm
Disentrifuge 10 Menit, 1500rpm
Dibuang Supernatan, Disisakan Pelet
Dibuang Supernatan, Disisakan Pelet 3 ml
Sel Dihitung Kemudian
Ditanam
Ditambah Tripsin
0,25%
Ditambah DMEM
non Serum 3 ml
Ditambah Medium
DMEM + 10%
FBS 3 ml
Disentrifuge 10 menit, 1500 rpm
65
Lampiran 5 Diagram Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata
Linn)
Daun Sirsak Pada Pucuk Ke- 3 dan ke-4
Diambil dan dicuci bersih
Dikering anginkan di
suhu ruang
Dibuat bubuk simplisia
kering
Ditimbang 200 gram serbuk dan ditambah 1
liter etnol 70%
Direndam selama 3 hari dan
dilakukan pengadukan berkala
Campuran disaring dan ampas dilakukan
perendaman berulang-ulang hingga tidak
berwarna
Maserat yang diperoleh lalu dipartisi kemudian sisanya
dipekatkan dengan rotary evaporator suhu 500C
dengan kecepatan 50 rpm
Dibuat larutan stok dengan dihitung
konsentrasinya sesuai dengan kebutuhan
66
Lampiran 6. Data Viabilitas dan Mortalitas Kultur Sel Setelah Pengamatan Jam
ke-72
Perlakua
n
Ulanga
n Jumlah sel dalam 5 kotak haemocytometer ∑sel /mL
%
Viabilita
s
%
Mortalita
s
Kotak Sel hidup Sel Mati Jumlah
1 14 3 15
2 12 4 16
1 3 8 4 12
4 8 3 11 248000 77.42 22,58
5 6 3 9
jumlah 48 14 23
∑sel /mL 192000 56000
1 5 3 8
2 8 3 11
K(-) 2 3 8 1 9 216000 74.07 25.93
4 10 4 14
5 9 3 12
jumlah 40 14 54
∑sel /mL 160000 56000
1 9 5 14
2 9 5 14
3 3 13 8 21 356000 66.29 33.71
4 17 6 23
5 11 6 17
jumlah 59 30 89
∑sel /mL 236000 120000
rata-rata jumlah sel 196000 232000
273333.3
3 72.59 27,41
1 12 4 16
2 11 3 14
1 3 12 2 14 288000 80.55 19.45
4 11 3 4
5 12 2 14
jumlah 58 14 72
∑sel /mL 232000 56000
1 13 3 16
2 12 3 15
K(+) 2 3 17 4 21 360000 77.77 22.23
4 15 5 20
5 13 5 18
jumlah 70 20 90
∑sel /mL 280000 80000
1 10 0 10
2 18 4 22
3 3 14 3 17 296000 95.94 4.06
4 15 3 18
5 14 2 16
jumlah 71 12 83
∑sel /mL 284000 48000
rata-rata jumlah sel
195666.6
7 61333.33
314666.6
7 84.75 15.25
1 10 4 14
2 7 5 12
1 3 10 6 16 304000 65.79 34.21
67
4 10 4 14
5 13 7 20
jumlah 50 26 76
∑sel /mL 200000 104000
1 8 4 12
2 9 4 13
P1 2 3 7 4 11
4 10 5 15 256000 65.63 34.37
5 8 5 13
jumlah 42 22 64
∑sel /mL 168000 88000
1 9 6 15
2 6 5 11
3 3 7 6 13
4 5 4 9 248000 58.06 41.94
5 9 5 14
jumla
h 36 26 62
∑sel
/mL 144000 104000
rata-rata jumlah sel
170666.6
7 98666.67
269333.3
3 63.16 36,84
1 15 8 23
2 13 8 21
1 3 10 9 19
4 7 8 15 336.000 63.09 36.91
5 8 8 16
jumlah 53 31 84
∑sel /mL 212000 124000
1 6 8 14
2 5 8 13
P2 2 3 7 9 16 292000 43.84 56.16
4 8 8 16
5 6 8 14
jumlah 32 41 73
∑sel /mL 128000 164000
1 6 11 17
2 7 8 15
3 3 6 7 13 308000 41.46 58.54
4 7 7 14
5 8 10 18
jumlah 34 48 82
∑sel /mL 116000 192000
rata-rata jumlah sel 152000 160000 312000 49.46 50.54
1 5 8 13
2 5 7 12
1 3 6 8 14 272000 42.65 57.35
4 8 7 15
5 5 9 14
jumlah 29 39 68
∑sel /mL 116000 156000
1 6 8 14
2 5 8 13
P3 2 3 3 6 9
4 6 7 13 240000 41.67 58.33
5 5 6 11
jumlah 25 35 60
∑sel /mL 100000 140000
1 5 9 14
68
2 5 8 13
3 3 6 7 13
4 5 7 12 256000 39.06 60.94
5 4 8 12
jumlah 25 39 64
∑sel /mL 100000 156000
rata-rata jumlah sel
105333.3
3
150666.6
7 256000 41.13 58.87
1 6 8 14
2 7 10 17
1 3 5 11 16
4 5 12 17 320000 35 65
5 5 11 16
jumlah 28 52 80
∑sel /mL 112000 208000
1 4 8 12
2 3 8 11
P4 2 3 6 6 12 232000 36.21 63.79
4 3 7 10
5 5 8 13
jumlah 21 37 58
∑sel /mL 84000 148000
1 4 8 12
2 4 6 10
3 3 5 9 14
4 3 8 11 236000 37.66 62.34
5 4 8 12
jumlah 20 39 59
∑sel /mL 80000 156000
rata-rata jumlah sel 92000
170666.6
7
262666.6
7 35.03 64.97
1 4 15 19
2 4 10 14
1 3 2 12 14 308000 24.67 75.33
4 6 8 14
5 3 13 16
jumlah 19 58 77
∑sel /mL 76000 232000
1 4 13 17
2 3 14 17
P5 2 3 3 17 19
4 5 12 17 364000 21.98 78.02
5 4 15 19
jumlah 20 71 91
∑sel /mL 80000 284000
1 5 11 16
2 6 10 16
3 3 2 11 13 316000 26.58 73.42
4 3 12 15
5 5 8 13
jumlah 21 58 79
∑sel /mL 84000 232000
rata-rata jumlah sel 80000
249333.3
3
329333.3
3 24.41 75.59
69
Lampiran 7 Analisis Statistik Tentang Pengaruh Ekstrak Daun Sirsak Dengan
Konsentrasi Berbeda Terhadap Viabilitas Sel Hepar Baby Hamster
Yang Diinduksi DMBA 0,1μg/mL selama 48 jam
Perlakuan Ulangan Jumlah Rata-Rata
1 2 3
K(-) 61, 62 59,34 54,45 175,41 58,47
K(+) 62,79 61,82 28,11 152,72 50,90
P1 54,15 54,09 49,6 157,84 52,61
P2 52,51 41,44 40,06 134,03 44,67
P3 40,74 40,16 3,65 119,55 39,85
P4 36,27 36,99 37,23 110,49 36,83
P5 29,73 27,9 30,98 88,61 29,53
Total 938,65
X = ∑𝑇
𝑟𝑥𝑡 =
938,65
21 = 44,69
FK = ∑𝑇2
𝑟𝑥𝑡
= (938,65)2
21= 41955,42
JKT = ∑𝑌𝑖𝑗2 – FK
= 61,622 + 59,34
2 + + 88,61
2 – FK
= 44695 – 41955,42
= 2739,98
JKP = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑃𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 2
𝑈𝑙𝑎𝑛𝑔𝑎𝑛 – FK
= 175,412 + 152, 72
2 + ............+ 88,61
2 -FK
3
= 1818,42
JKG = JKT – JKP
= 2739,98- 1818,429
= 921,55
KTP = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝐾𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑡 𝑃𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛
𝑡−1
70
= 1818 ,42
6= 303,07
KTG = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝐾𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑡 𝐺𝑎𝑙𝑎𝑡
𝑡 (𝑟−1)
= 921,55
14= 65,82
F hitung = 𝐾𝑇𝑃
𝐾𝑇𝐺 =
303,07
65,82
= 4,60
ANOVA
SK db JK KT F hitung F tabel 5%
Perlakuan 6 188,43 303,07 4,60 2,77
Galat 14 921,56 65,82
Total 20
Kesimpulan: karena F hitung (4,60) > F tabel (2,77) maka H1 diterima
Jadi, ada pengaruh pemberian ekstrak daun sirsak dengan konsentrasi berbeda
terhadap viabilitas sel hepar baby hamster yang diinduksi DMBA 0,1μg/ml
selama 48 jam
Karena ada pengaruh dan memiliki nilai KK sebesar 0,86%, maka diuji lanjut
dengan uji BNJ 0,05
Tabel uji Beda Nyata Jujur 0,05
Perlakuan Rata-Rata (%) Notasi BNJ 0,05
K(-) 58,47 d
K(+) 50,90 bcd
P1 52,61 cd
P2 44,67 abcd
P3 39,85 abc
P4 36,83 ab
P5 29,53 a
71
Lampiran 8 Analisis Statistik Tentang Pengaruh Ekstrak Daun Sirsak Dengan
Konsentrasi Berbeda Terhadap Konfluenitas Sel Hepar Baby
Hamster Yang Diinduksi DMBA 0,1μg/mL selama 48 jam
Perlakuan Ulangan Jumlah Rata-Rata
1 2 3
K(-) 40 35 35 110 36,66
K(+) 63 65 65 193 64,33
P1 50 50 45 145 48,33
P2 40 38 40 118 39,33
P3 35 30 35 100 33,33
P4 20 15 20 55 18,33
P5 10 15 10 35 11,66
Total 756
X = ∑𝑇
𝑟𝑥𝑡=
756
21 = 36
FK = ∑𝑇
2
𝑟𝑥𝑡
= (756)2
21 = 27216
JKT = ∑𝑌𝑖𝑗2 – FK
= 632 + 65
2 + + 10
2 – FK
= 32938 – 27216
= 5722
JKP = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 2
𝑈𝑙𝑎𝑛𝑔𝑎𝑛− 𝐹𝐾
= 1102
+ 1932 + ................+35
2 - FK
3
= 32849,33 – 27216
=5633,33
JKG = JKT – JKP
= 5722 – 5633,33
= 88,67
72
KTP = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝐾𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑡 𝑃𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛
𝑡−1
= 5633,33
6= 938,88
KTG = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎 ℎ 𝐾𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑡 𝐺𝑎𝑙𝑎𝑡
𝑡 𝑟−1
= 88,67
14= 6,33
F hitung = 𝐾𝑇𝑃
𝐾𝑇𝐺
= 938,88
6,33= 148,25
ANOVA
SK db JK KT F hitung F tabel 5%
Perlakuan 6 5633,33 938,88 148,25 2,77
Galat 14 88,66 6,33
Total 20
Kesimpulan: karena F hitung (148,25) > F tabel (2,77) maka H1 diterima
Jadi, ada pengaruh ekstrak daun sirsak dengan konsentrasi berbeda terhadap
konfluenitas sel hepar baby hamster yang diinduksi DMBA 0,1μg/ml
selama 48 jam.
Karena nilai KK 0,33%, maka diuji lanjut dengan menggunakan uji BNJ 0,05
Tabel Uji Beda Nyata Jujur 0,05
Perlakuan Rata-Rata Notasi BNJ 0,05
K(-) 36,66 bc
K(+) 64,33 c
P1 48,33 c
P2 39,33 c
P3 33,33 abc
P4 18,33 ab
P5 11,33 a
73
Lampiran 9. Tabel hasil Analisis Probit
74
Lampiran 10. Gambar Sel Hepar Setelah Diinduksi DMBA 48 Jam
(Kontrol Negatif) (Kontrol Positif)
(P1) (P2)
(P3) (P4)
(P5)
75
Lampiran 11. Gambar Hasil Pengamatan Sel Hasil Kultur Setelah Pengamatan
jam ke-72 Dengan Perbesaran 200x
(Kontrol Negatif) (Kontrol Positif)
(P1) (P2)
(P3) (P4)
(P5)
76
Lampiran 12. Gambar Bahan-Bahan Yang Digunakan
DMBA
Stok DMBA,DMEM, PBS, NaCl
Ekstrak Daun Sirsak Dengan Konsentrasi Berbeda
77
Lampiran 13 Gambar Alat-Alat Yang Digunakan