RESULTADOS DEL ENSAYO INTERLABORATORIO...

INTERLABORATORIO DE FANGOS ACTIVOS (2003)

GrupoBioindicación sevilla

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RESULTADOS DEL ENSAYOINTERLABORATORIO PARAFANGOS ACTIVOS (17/6/03)

ORGANIZADO POR GBS

Grupo Bioindicación Sevilla

www.grupobioindicaciónsevilla.com



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ÍNDICE

Introducción

Participantes

Resultados

Análisis de datos

Caracterización macroscópica y microscópica del fango activo ( IF)

Identificación y cuantificación de bacterias filamentosas

Caracterización protozoaria

Conclusiones

• Generales

• Valoración de la muestra

Anexo fotográfico ( Se adjunta en un documento aparte para evitar problemas de aberturadebido al tamaño excesivo del informe)



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INTRODUCCIÓN

Con el objetivo de unificar criterios GBS organiza ejercicios interlaboratorio de fango

activo con muestras de distintas características.

Estos ejercicios de intercomparación entre laboratorios son una herramienta básica,

sobretodo en análisis de tipo microbiológico, para unificar criterios debido a la alta densidad de

microorganismos por mililitro y a la gran dispersión de valores que pueden ocasionar pequeñas

diferencias en la metodología de análisis de los fangos activos. Así pues, estos ejercicios ofrecen

la oportunidad de comparar los resultados y métodos con los demás laboratorios participantes, con

objeto de detectar errores sistemáticos y eliminar este tipo de desviaciones.

El ensayo del 17 de Junio de 2003 se realizó sobre una muestra puntual de Fango Activo,

distribuida desde Huelva junto con los formatos de remisión de datos.

La metodología de trabajo está descrita en el “manual de trabajo” de GBS disponible en

www.grupobioindicacionsevilla.com.

PARÁMETROS ESTADÍSTICOS UTILIZADOS

El cálculo de la media nos informa sobre el valor más probable de la variable a estudio.

Se ve fuertemente afectada por los valores extremos de la población.

La desviación estándar muestra como de agrupados o dispersos se encuentran los valores.

Si la varianza tiende a cero, quiere decir que la dispersión de nuestros datos es muy baja. Los datos

se encuentran muy concentrados en torno a la media.

Los intervalos de confianza indican los valores aceptables para que los resultados se

encuentren en torno a la media en una probabilidad determinada ( 95 % en la mayoría de los

casos). Se ve afectado por la varianza y el número de datos disponibles.

Dada la dispersión natural de los datos biológicos y más de este tipo de análisis que no

presentan capacidad de control con un patrón, hemos preferido realizar una invalidación de

medidas que se ha realizado mediante el test de la Q de Dixón, en el que tiene en cuenta la

diferencia de los valores máximos y mínimos respecto a la media, inhabilitando aquellos que

superen el valor preestablecido para este estimador.

http://www.grupobioindicacionsevilla.com/



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PARTICIPANTES

El número de participantes ha sido de 9, de los cuales 6 eran Laboratorios de Sevilla, 1 de

Huelva, 1 de Valencia y 1 de Vigo.

Los Laboratorios de Sevilla, Valencia y Vigo reciben la muestra, vía mensajería urgente,

el día siguiente a su toma, con lo que algunos aspectos pueden alterarse con el tiempo e incluso

con los problemas de transporte (pérdidas, temperatura,..).

Para minimizar estos problemas, cada participante que no pueda recoger personalmente la

muestra, envía una nevera para que se le remita con la muestra y se eviten al menos los problemas

de estabilidad y pérdida de esta.

De los nueve participantes, la experiencia en la aplicación de las técnicas descritas en el

manual de GBS es bastante variable:

- El 50 % de los participantes trabajan usualmente con esta

metodología

- El 12 % de los participantes tiene altos conocimientos en

análisis biológicos de fangos activos, pero no específicos de esta

metodología

- El 38 % de los participantes se ha iniciado recientemente en

esta metodología y no tiene prácticamente ningún conocimiento previo en

análisis biológicos de fangos activos.

A la hora de analizar los resultados hay que tener en cuenta que:

• Los participante 3, 6, 8 y 10 estudian la muestra después de 24 horas.• El participante 1Y 5 estudian la muestra después de 48 horas.



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RESULTADOS

MUESTREO 10/07/03

PARTICIPANTE 1 3 4 5MACROSCOPIA 16,5 21 21 7,5MICROSCOPIA 50 46 50 43

INDICE DE FANGO 66,5 67 71 50,5CATEGORIA DE FILAMENTOS 3-4 3-4 3-4 3-4

FILAMENTO DOMINANTE MICROTHRIX TIPO 021 N HALISCO-MICROTHRIX TIPO 021 NFILAMENTO SECUNDARIO HALISCO HALISCO NOCARDIA HALISCO

EFECTO FLOCULO PUENTES INTERFLOCULARES, DISGRAGACION FLOCULAR PUENTES INTERFLOCULARES DISGREGACION DISGREGACION POR 021 N

OTROS FILAMENTOS NOCARDIA, TIPO 021 N, NOSTOCOIDA L. I Y III, 1701

NOCARDIA, MICROTHRIX, NOSTOCOIDA L. I Y III, CIANOFICEA NOSTOCOIDA- 021 N TIPO 0041, NOSTOCOIDA LIMICOLA II Y III.

NOCARDIA, BEGGIATOA.

CORTES DIAGONAL - - - -m/ml FILAMENTOS - 1791,04 1234,94 -DENSIDAD ( org/l) 1,63,E+07 29,56,E+06 19,42,E+06 14,75,E+06

INDICE DE SHANON 1,68 1,42 1,42 1,02INDICE DE MADONI 9 10 10 9

CLASE MADONI 1 1 1 1NUMERO DE ESPECIES 11 22 13 11

GRUPO DOMINANTE TECAMEBAS TECAMEBAS TECAMEBAS TECAMEBAS

OBSERVACIONES

MUESTRA OBSERVADA DESPUES DE 48 HORAS DEL MUESTREO. CLARIFICADO TURBIO

DEBIDO A LA PRESENCIA DE ABUNDANTES BACTERIAS LIBRES. PRESENTA NATAS Y

ESPUMAS EN SUPERFICIE. ABUNDANCIA DE ZOOGLEA . PRESENCIA DE CUMULOS DE

BACTERIAS NITRIFICANTES. MICROFAUNA CARACTERISTICA DE PROCESOS DE NITRIFICACION. BUENA DIVERSIDAD.

BACTERIA FILAMENTOSAS ASOCIADAS A BAJAS CARGAS MASICAS, BAJAS

CONCENTRACIONES DE OXIGENO DISUELTOY POSIBILIDAD DE VERTIDOS INDUSTRIALES. CALIDAD PREVISIBLE DEL AGUA TRATADA:

REGULAR.

BASTANTES NATAS Y ESPUMA EN SUPERFICIE. SE DETECTAMEJORIA DE LA DECANTACION CON EL TIEMPO. ZOOGLEA EN COLONIAS ABUNDANTES, CLARIFICADO MUY TURBIO DEBIDO A BACTERIA COCALES Y BACILARES LIBRES. NO MEJORA EL CLARIFICADO CON EL TIEMPO. ACUMULOS DE

NITRIFICANTES DETECTADOS DE MANERA ABUNDANTE. ESPIROUQETAS Y BASTANTES AMEBAS

DESNUDAS. LAS BACTERIA ENCONTRADAS SON INDICADORAS POR UNA PARTE DE DEFICIENCIAS DE

OXIGENO (HALISCO Y SPIROQUETAS).LA DOMINANCIA DE 021 N CON CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS ESPECIALES LLEVA A PENSAR EN

LA EXISTENCIA DE ALGUN TIPO DE VERTIDO EN PLANTA, QUE PODRIA CORRESPONDER CON LOS

PROTOZOOS ENCONTRADOS. NITRIFICACION CONSISTENTE, ALTA DIVERSIDAD DE PROTOZOOS.

PRESENCIA DE ESPUMAS EN SUPERFICIES. MEJORIA DEL CLARIFICADO AL AUMENTAR EL TIEMPO DE

DECANTACION. CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS ADECUADAS CON UN IVF BAJO. BUENA DIVERSIDAD

PROTOZOARIA.. ORGANISMOS ASOCIADOS A CARGAS MÁSICAS BAJAS Y BAJO CONTENIDO EN O.D.. FANGO ESTABLE Y BIENCOLONIZADO. BUEN

FUNCIONAMIENTO. ALTA CONCENTRACION DE TECAMENBAS ASOCIADO A PROCESOS DE

NITRIFICACION. CALIDAD PRVISIBLE DEL AGUA: BUENA. MEJORABLE CON CAUDALES MAS BAJOS QUE AUMENTEN EL TIEMPO DE RESIDENCIA EN

CLARIFICADORES.

ANALISIS REALIZADO A LAS 48 HORAS DEL MUESTREO. BUENA SEDIMENTABILIDAD PERO CON

CLARIFICADO CON ALTA TURBIDEZ ASOCIADO A PEQUEÑOS FLOCULOS EN SUSPENSION.

ABUNDANTES BACTERIAS, TANTO LIBRES COMO EN AGLOMERACION.ESPECIES PROPIAS DE

SITUACIONES CON ELEVADO TIEMPO DE RETENCION Y CARGA DEBIL. LAS ESPECIES FILAMENTOSAS

ENCONTRADAS EN PRESENCIA SIGNIFICATIVA SON TIPICAS DE SISTEMAS CON BAJA CARGA MASICA Y

ALTAS EDADES DEL FANGO, APORTE DE AGUAS INDUSTRIALES Y/O DEFICIENCIAS DE

NUTRIENTES.CALIDAD PREVISIBLE DEL AGUA TRATADA: MALA O REGULAR.



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MUESTREO 10/07/03

PARTICIPANTE 6 7 8 9 10MACROSCOPIA 21 16,5 16,5 25,5 21MICROSCOPIA 47 47 34 59 52

INDICE DE FANGO 68 63,5 50,5 84,5 73CATEGORIA DE FILAMENTOS 4 4 4 - 4

FILAMENTO DOMINANTE MICROTHRIX 1851/0803 NOSTOCOIDA L I Y II - NOCARDIAFILAMENTO SECUNDARIO 021 N / TIPO 1851 021 N TIPO 0041 - 021 N

EFECTO FLOCULO DISGREGACION FLOCULAR

FORMACION DE ENLACES Y PUENTES INTERFLOCULARES,

DANDO LUGAR A ALTA TURBIDEZ

DISGREGACION FLOCULAR

-

DISGRAGACION FLOCULAR

OTROS FILAMENTOS NOCARDIA - NOCARDIA- TIPO 0961

-

MICROTHRIX- 1701- SHAEROTILUS

CORTES DIAGONAL - - 3,7 - -m/ml FILAMENTOS 176,32 - - - -DENSIDAD ( org/l) 1,46,E+07 1,24,E+07 1,73,E+07 2,88,E+07 2,04,E+06

INDICE DE SHANON 1,39 2,07 1,14 1,198 1,67INDICE DE MADONI 9 10 9 9 9

CLASE MADONI 1 1 1 1 1NUMERO DE ESPECIES 12 12 10 10 9

GRUPO DOMINANTE TECAMEBAS CARNIVORO NADADOR TECAMEBAS TECAMEBAS TECAMEBAS

OBSERVACIONES

MUESTRA CON OLOR A SALOBRIDAD, FANGO DE ASPECTO LIGERO Y COLOR MARRON CLARO. SE OBSERVAN COLONIAS DE ZOOGLEAS EN ALTA PROPORCION Y MATERIAL REFRACTARIO. SE

OBSERVAN FILAMENTOS EN ESPACIOS INTERFLOCULARES, DISGREGACION FLOCULAR EN MEDIDA MEDIA. LOS FILAMENTOS DETECTADOS SE

PUEDEN ASOCIAR A REACTORES DE AIREACION PROLONGADA QUE TRABAJAN A BAJAS CARGAS

MASICAS.MICROBIOTA CARACTERISTICA DE FANGO MADURO Y ESTABLE DONDE SE PRODUCEN

PROCESOS DE NITRIFICACION. BUENOS RENDIMIENTOS DE DEPURACION, AUNQUE LA

PRESENCIA DE FILAMENTOSAS PERJUDIQUE EL PROCESO POR FAVORECER LA PRESENCIA DE

FLOTANTES EN DECANTADORES. BAJAS CARGAS MASICAS, PH BASICOS.

EN LA V-30 QUEDAN FLOCULOS EN LA SUPERFICIE

FANGO CON BUENA CAPACIDAD DE DECANTACION.

ALTA EDAD DE FANGO (PRESENCIA DE NEMATODOS

Y ROTIFEROS) Y ELEVADO GRADO DE NITRIFICACION

(TECAMEBAS)

BUENA SEDIMENTABILIDAD. PRESENCIA DE BURBUJAS EN

SUPERFICIE. CALIDAD DEL FANGO BUENA.



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ANALISIS DE DATOS

En este apartado se realizara un análisis estadístico de los valores obtenidos en cada uno de losapartados en los que está dividido el análisis de fangos activos:

CARACTERIZACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROCÓPICA DEL FANGO ACTIVO

- MACROCOPÍA

- MICROSCOPíA

MACROSCOPIA1 16,53 214 215 7,56 217 16,58 16,59 25,510 21

MEDIA 19 VARIANZA 5,09

INTERV CONF

PARTICIP DESCARTADO 5 MEDIA CORREG 20

VAR CORREG 2,98

CARACTERISTICAS MACROSCÓPICAS

0

5

10

15

20

25

30

1 3 4 5 6 7 8 9 10

MACROSCOPIA MEDIA

MICROSCOPIA1 503 464 505 436 477 478 349 5910 52


CARACTERISTICAS MICROSCÓPICAS

0

10

20

30

40

50

60

70

1 3 4 5 6 7 8 9 10

MICROSCOPIA MEDIA



8

- ÍNDICE DE FANGO

- CATEGORIA BACTERIANA

INDICE DE FANGO ( IF)1 66,53 674 715 50,56 687 63,58 50,59 84,510 73


INDICE DE FANGO (IF)

0102030405060708090

1 3 4 5 6 7 8 9 10

INDICE DE FANGO ( IF) MEDIA

CATEGORIABUENOBUENOBUENO

REGULARBUENOBUENO

REGULARBUENOBUENO

% REPARTO CATEGORIAS IF

buena regular

CATEGORIA BACTERIANA1 3,53 3,54 3,55 3,56 47 48 4910 4


CATEGORIA BACTERIANA

3,0

3,2

3,4

3,6

3,8

4,0

4,2

1 3 4 5 6 7 8 9 10

CATEGORIA BACTERIANA MEDIA



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- DENSIDAD PROTOZOARIA

- ÍNDICE DE SHANON

DENSIDAD PROTOZOARIA ( EXP 6)1 16,33 29,564 19,425 14,756 14,67 12,48 17,39 28,810 2,04

MEDIA 17,24 VARIANZA 8,36

INTERV CONF

PARTICIP DESCARTADO 10MEDIA CORREG 19

VAR CORREG 6,18

DENSIDAD PROTOZOARIA

0

5

10

15

20

25

30

35

1 3 4 5 6 7 8 9 10

DENSIDAD PROTOZOARIA ( EXP 6) MEDIA

INDICE DE SHANON1 1,683 1,424 1,425 1,026 1,397 2,078 1,149 1,210 1,67

MEDIA 1,45 VARIANZA 0,32

INDICE DE SHANON

0

0,5

1

1,5

2

2,5

1 3 4 5 6 7 8 9 10

INDICE DE SHANON MEDIA



10

- ÍNDICE DE MADONI

INDICE DE MADONI1 93 104 105 96 97 108 99 910 9


INDICE DE MADONI

8,48,68,8

99,29,49,69,810

10,2

1 2 3 4 5 6 7 8 9

INDICE DE MADONI MEDIA

% REPARTO CATEGORIAS ÍNDICE DE MADONI

1

CLASE111111111



11

- Nº ESPECIES PROTOZOARIAS

- GRUPO DOMINANTE

- IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS FILAMENTOSAS

Nº DE ESPECIES PROTOZOARIAS1 113 224 135 116 127 128 109 1010 9


Nº ESPECIES PROTOZOARIAS

0

5

10

15

20

25

1 3 4 5 6 7 8 9 10

Nº DE ESPECIES PROTOZOARIAS MEDIA

GRUPO DOMINANTE1 TECAMEBAS3 TECAMEBAS4 TECAMEBAS5 TECAMEBAS6 TECAMEBAS7 CARNIVORO NAD8 TECAMEBAS9 TECAMEBAS10 TECAMEBAS

GRUPO DOM INANTE

testacea cil carnivoro

FILAMENTOS DOMINANTE SECUNDARIO OTROS1 MICROTHRIX HALISCO NOCARDIA/021N/NOSTOCOIDA I Y II/1701

3 021N HALISCO NOCARDIA/MICROTHRIX/NOSTOCOIDA I Y III/CIANOFICEA

4 HALISCO-MICOTRHIX NOCARDIA NOSTOCOIDA/021N

5 021N HALISCO 0041/NOSTOCOIDA II Y III/NOCARDIA/BEGGIATOA

6 MICOTHRIX 021N/1851 NOCARDIA

7 1851/0803 021N/1851

8 NOSTOCOIDA I Y II TIPO 0041 NOCARDIA/0961

910 NOCARDIA 021N MICOTHRIX/1701/SPHAEROTILUS



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- LISTADO DE ESPECIES DE PROTOZOOS

FILAMENTO DOMINANTE

MICOTHRIX021NOTROS

FILAMENTO SECUNDARIO

HALISCO021N/1851TIPO 0041NOCARDIA

Nº TOTAL DE SP BAC DETERMINADAS1 73 74 55 76 47 38 5910 5


NºTOTAL DE SP BAC DETERMINADAS

012345678

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Nº TOTAL DE SP BAC DETERMINADAS MEDIA

ESPECIES PROTOZOARIAS IDENTIFICADAS1 3 SP AMEBAS/LITONOTUS/PODOPHRYA/TOKOPHRYA/ASPIDISCA/ACINERIA/EPISTYLIS/OPERCULARIA3 PERANEMA, ARCELLA VULGARIS/ARCELLA GIBBOSA/ARCELLA HEMIESPHERICA/CENTROPYXIS/PYXIDICULA/LITONOTUS/PODOPHRYA/TOKOPHRYA/

ASPIDISCA/ACINERIA/ROTIFERO/NEMATODO/ OPERC MICRODISCUM/OPER MINIMA/V MICROSTOMA/2 SP OPERCULARIA4 GRAN FLAGELADO/TESTACEA/LITONOTUS/PODOPHRYA/TOKOPHRYA/

CHILODONELLA/CARCHESIUM/OPERCULARIA/VORT CAMPANULA/VAGINICOLA/OPERC HEBEX5 PERANEMA/OTRO GRAN FLAG/2 SP TESTACEAS/LITONOTUS/ACINERIA/TOKOPHRYA/ASPIDISCA/ACINETA/OPERCULARIA/ROTIFERO6 ARCELLA/PERANEMA/LITONOTUS/TOKOPHRYA/ASPIDISCA/ACINERIA/EPISTYLIS/VORT SP/ROTIFERO/NEMATODO7 PERANEMA/ARCELLA/LITONOTUS/ACINETA/PODOPHRYA/ASPIDISCA/ACINERIA/CARCHESIUM/VORT CAMPANULA/ROTIFERO89 PERANEMA/ARCELLA/LITONOTUS/ACINETA/ASPIDISCA/ACINERIA/EPISTYLIS/ROTIFERO/NEMATODO10 ARCELLA/LITONOTUS/TOKOPHRYA/ASPIDISCA/ACINERIA/OPERCULARIA



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- RELACION DE PORCENTAJES DE PROTOZOOS

PARTICIPANTE G FLAG AMEBAS T CAR NAD CARN SUCT B NADA B REPTANTE B SESIL METAZOO1 5% 67% 2% 2% 6% 18%3 3% 82% 1% 1% 3% 9% 1%4 3% 75% 2% 1% 7% 12%5 1% 85% 3% 1% 5% 4% 1%6 10% 77% 1% 1% 6% 4% 1%7 7% 66% 2% 10% 14% 1%89 2% 79% 1% 1% 4% 12% 1%

10 59% 1% 1% 34% 5%



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CONCLUSIONES

* VALOR ESTIMADO DE LA MUESTRA ANALIZADA

- CONCLUSIONES GENERALES

Estas conclusiones se han obtenido como compendio de las observaciones de los distintosparticipantes.Calidad previsible del agua tratada: buena/regular con tendencia a empeorar, cuando se acortan lostiempos de residencia en decantación secundaria.Tiempos de retención elevados y carga entrante débilSe trabaja con cargas másicas bajasDetección de posibles vertidos industriales y/o alteraciones de carga.Procesos de nitrificación aceptables.V30 estimada: 150 mLMLSS: en torno a 2200 mg/LMLVSS: Aproximadamente el 75 % de los MLSS.IVF: En torno a 70Uno de los participantes apunta a la posible salobridad de la muestra debido a la tensión osmóticadetectada.

- INDICE DE FANGO

En general, dado el carácter subjetivo de las características macroscópicas, se consideranaceptables los resultados obtenidos cuando se analiza el valor global dado para laMACROSCOPÍA.En este ejercicio es el parámetro que evalúa los flóculos en suspensión en el que aparece másdispersión, si bien la mayoría de los participantes (55 %) la valora como media.En el resto de los parámetros analizados existe una gran coincidencia en cuanto a su valoración:entre alta y media , variaciones que podrían achacarse a la comparación de esta muestra con lasque habitualmente se observan.El tiempo transcurrido desde la toma de muestra hasta el momento del análisis modificafundamentalmente la macroscopía de la muestra, sobre todo si excede a las 24 horas. Estasituación está muy clara en la calificación del participante 5, que queda descartado ( estápracticamente al límite), debido a un análisis tardío ( 48 horas).El clarificado en general se observa turbio, debido a la presencia de numerosas bacterias libres, sinmejorar en el transcurso del tiempoNatas en superficie

RESULTADOS MEDIOS ESTIMADOS DE LA MUESTRAÍNDICE DE FANGO BUENO

CATEFORIA BACTERIANA 3-4IDENTIF DE FILAMENTOS 021N/MICOTHRIX/HALISCOMENOBACTEREFECTO DEL FILAMENTO DISGREGACION/PUENTES

DENSIDAD PROTOZOARIA APROXIMADA 19 EXP 6ÍNDICE DE MADONI 9CLASE DE MADONI 1

Nº DE ESPECIES ENCONTRADAS 12GRUPO DOMINANTE TECAMEBAS

RENDIMIENTO SEGÚN MADONI OPTIMO



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En cuanto a la MICROSCOPÍA la coincidencia es grande (superior al 85 %) en todos losparámetros como excepto el tamaño y estructura, en los que existe algo más de dispersióndetectándose valores extremos, aunque el 67 % de los participantes los evalúan ambos comomedio.Es importante destacar que aunque la muestra era compleja, en cuanto a la diversidad de especiesque presentaba se refiere, todos los participantes han encontrado una alta diversidad de protozoos(más de nueve especies)El análisis retrasado de la muestra no parece afectar sustancialmente a la microscopía.

En general, la repetitividad del análisis macro y microscópico es buena, observándose una muyalta coincidencia en el Indice de Fango.

DENSIDAD Y DIVERSIDAD DE PROTOZOOS.

Es importante destacar que aunque la muestra era compleja, en cuanto a la diversidad de especiesque presentaba se refiere, todos los participantes han encontrado una alta diversidad de protozoos(más de nueve especies) y la coincidencia en cuanto grupo dominante es muy grande.Ha sido compleja la identificación de protozoos sésiles, el número de especies identificadas esmuy variable y está muy ligado a la experiencia en estudios de este tipo.Es importante anotar, que si bien para el índice de Madoni se contabilizan las distintas especies deflagelados y de metazoos como un único grupo, sin embargo la detección de diversas especiesafecta al índice de Shanon y muestra la complejidad real del ecosistema.Es posible que debido a la diversa experiencia de los participantes no se determinen igual númerode especies, pero es necesario, que si se detectan características morfológicas distintas, quepuedan diferencia a dos especies se recojan en el parte como genero+sp.La densidad protozooaria ha sido bastante homogenea, salvo el participante 10 ( descartado), queseguramente se deba a un error de cálculo.Como guía de referencia nos parece acertado utilizar la siguiente documentación en lasidentificaciones de protozoos:

- Curds, C.R. (1969).An illustrated key to the Brithish Freshwater ciliated protozoa commonlyfound in activated sludge. Water Pollution Technical. 12. London

- Foissner, W., Berger, H y Kohmann, F ( 1991,1992, 1994). Taxonomische and okologische.Landesamtes fur Wasserwirstschaft. Munchen.

- Madoni, P. (1988). I protozoi ciliati nel controllo di efficienza del fanghi attivi. Centro italianoStudi di Biologia Ambientale. Reggio Emilia.

- Warren, A. ( 1986). A revision of the genus Vorticella (Ciliophora: Peritrichida). Bull. Br.Mus. Hist. (zool). 50.

Respecto a los dos grupos más problemáticos para esta muestra a la hora de identificaciones son:

Amebas testaceas: En este grupo nos hemos encontrado desde participantes que las han agrupadotodas en una especie, hasta la determinación de 5 especies distintas, de las cuales 4 se puedenapreciar en el reportaje fotográfico.Las claves identificativas dentro de este grupo son: el tamaño, la forma de la teca y si presentaestructuras en esta.Centropyxis: Espinas características. 120-250 micras. Esta especie se ve muy afectada, incluso nose detecta con muestras de más de 24 horas.Pyxidícula: 17-21 micras.Arcella vulgaris: 100-145 micrasArcella Gibbosa: 70-125 micras. Teca con abolladurasArcella Hemiesphaerica: Muy parecida a vulgaris respecto al tamaño, 100-150 micras, pero con lateca casi semiesférica.



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Opercularia: La variación en este grupo ha sido notable, seguramente consecuencia de ladificultad que entraña la vista del opérculo, si la muestra ya se encuentra algo deteriorada, como eseste caso. Más del 50 % de los participantes realizó la primera observación tras 24 horas.

En ese caso siempre es recomendable tomar una alícuota de la muestra y oxigenarla previamente,con idea de mejorar el estado de los protozoos presentes.Nos hemos encontrado con varios participantes que no detectan su aparición, frente a otros quedeterminan hasta 3-4 especies.De las que parecen mas claras son:O. articulata: 60-260 micras. Macronucleo en forma de salchicha corta. Peristoma sin reborde.Grandes coloniasO mínima: 40 micras. Colonias de 2-4 individuos. Pedúnculo corto y estriado.O microdiscum: 70-90 micras. Cuerpo en forma de barril. Pedúnculo estriado y no segmentado.

Se detectan tambien dos especies más, que no se identifican claramente. De ellas una solitaria, O.Hebes, de hasta 100 micras, con un pedúnculo muy corto.

Una curiosidad en esta muestra ha sido la determinación de un suctor, no muy común,probablemente del género Solenophrya, que presenta un cuerpo hexagonal, sin pedúnculo y conhaces de fascículos en cada uno de los extremos del hexágono. La loriga es casi transparente y sepuede observar el citoplasma interior en forma elipsoidal.

Con idea de facilitar las identificaciones se aportan algunas tinciones de orgánulos ( colorantesvitales):

-Verde de metilo acidulado al 1 %.-Azul de metileno al 5 %-nigrosina al 10 %-Ferroina 0.02N.

En todas el procedimiento es similar. Mezclar una gota con el fango activo y observar in vivo.

- INDICE DE MADONI Y SHANON

Tanto el Índice de Madoni como el de Shanon presentan una repetitividad entre los participantesmuy buena.Si bien las características de ambos Índices son de muy buena calidad, no se corresponden con laestabilidad total de la muestra, ya que si bien la diversidad y el reparto funcional de protozoos esmuy bueno ( sectorizado hacia las testaceas), la concentración de filamentos provoca roturasfloculares que empeoran las calidades del fango.

- IDENTIFICACION DE ESPECIES BACTERIANAS.

A pesar de la complejidad de la muestra, la mayoría de los participantes han identificado lasmismas especies bacterianas ( de 5 a 7), el problema ha surgido a la hora de definir cual es ladominante.Las distintas especies encontradas generan dos tipos de problemas, disgregación (Halicomenobacter) y puentes interfloculares (021N).



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021N aparece con un tamaño un poco alterado, bastante más fino que lo normal, con tinción deGram diferenciada, lo que ha podido llevar a problemas de identificación.Micothrix se diferenciaría claramente de esta por su reacción positiva a la tinción de Gram.Para esta muestra en concreto, parece que existiría una agrupación bacteriana de 021N/Micothrix/Halisco, con abundancias parecidas, lo que ha llevado a confusión a la hora de definirdominantes y secundarios.Es curiosa la aparición de crecimiento epifítico sobre 0041 y el desarrollo de los esporangios enhongos, tras análisis posteriores a 24 horas.Acúmulos de bacterias nitrificantes y colonias de Zoogloea . Estas últimas de morfología extraña.Bacterias filamentosas asociadas a bajas cargas másicas, bajas concentraciones de oxígeno disueltoy posibilidad de vertidos industriales.

Para concluir felicitar a todos los participantes y desearles unas buenas vacaciones. Esta muestra,muy interesante, hubiera necesitado una reunión posterior para aclarar algunas puntos dudosos deidentificaciones tanto de protozoos como de bacterias, sin embargo esperamos que este informe osayude a aclararlas.

- INFORME DEL PARTICIPANTE 5

EJERCICIO INTERLABORATORIO JUNIO 2003(Comentarios e impresiones)

DEBIDO A QUE DESGRACIADAMENTE NO PUEDO ASISTIR A LAS REUNIONES QUEREALIZAIS DESPUES DEL INTERLABORATORIO (las cuales estoy seguro que deben sermuy interesantes), PIENSO QUE AL MENOS SERIA ACERTADO QUE OS PASARA UNOSCOMENTARIOS QUE QUIZAS PUEDAN SER ÚTILES BIEN PARA APORTARDISCREPANCIAS, OTRO PUNTO DE VISTA O UNIFICAR Y CORROBORAR LASCONCLUSIONES QUE ALLI SE DIGAN. APROVECHO LA OCASIÓN PARA PLANTEARLA POSIBILIDAD QUE ADEMÁS DE LA MUESTRA SE PUDIERA DISPONER DE OTROSDATOS DE LA PLANTA DEPURADORA QUE EXPONE A EXAMEN SU MUESTRA, MEREFIERO A DATOS COMO: CARGAS, EDADES, CARACTERISTICAS DEL AGUARESIDUAL, TIPO DE PLANTA,... PROBLEMAS EN GENERAL O TODO AQUELLO QUECONSIDERE OPORTUNO EL RESPONSABLE DE LA MUESTRA. COMPRENDOPERFECTAMENTE QUE ESTO RESULTE BASTANTE COMPLICADO POR NO DECIRIMPOSIBLE PARA ALGUNOS PARTICIPANTES ...DEBIDO PRACTICAMENTE A LA¿¿CONFIDENCIALIDAD?? DE LOS QUE MANDAN EN ALGUNAS EMPRESASEXPLOTADORAS (EN FIN TODOS SABEMOS DE SOBRA COMO SE EXPLOTAN LASE.D.A.R.... CREO QUE (ADEMAS DE LA TAXONOMIA Y EL PERFECCIONAMIENTO DELOS INDICES DE CALIDAD) PODRIAN ENRIQUECER BASTANTE LAS CONCLUSIONESDE LOS INTERLABORATORIOS DE CARA A NO LIMITARNOS EXCLUSIVAMENTE AEVALUAR CON SITUACIONES YA CONOCIDAS BAJO EL CAMPO EMPIRICO. ¡¡EN FINES TAN SOLO UNA OPINIÓN QUIZAS DEMASIADO AMBICIOSA¡¡.UN SALUDO Y FELICITAROS UNA VEZ MÁS POR EL GRAN TRABAJO QUE ESTAISREALIZANDO DESDE GBS.

La muestra, debido a un problema con la empresa de mensajería, se recibe el dia 18 de Junio tras48 horas después de su toma de muestra y a temperatura ambiente. Por tanto es muy posible que lamuestra haya sufrido alguna alteración tanto a nivel estructural como a nivel de especies.

La muestra no presenta olor desagradable y su color es marrón oscuro. La decantación (V 30) esnormal, con formación de flóculo y canales ascendentes. Pasado el tiempo del ensayo obtengo una



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V 30 equivalente a 170 mL y el clarificado presenta una alta turbiedad debido a la grancantidad de pequeños flóculos que no acaban de decantar. Otros datos de interés:

S.S.L.M : 2060 mg/LS.S.V.L.V: 1740 mg/L% S.S.V.L.M : 72 %V 30: 170 mLI.V.F : 82 ml/g

En el examen microscópico del floculo me encuentro con una porción elevada de flóculos depequeño tamaño (una media de 100 um de diámetro), también aprecio flóculos de tamaño superiora 150 um en estado de disgregación tal como se puede apreciar en las Fotos 1 y 2. Es posible quepudiera haber aumentado la porción de pequeños flóculos en las 48 horas antes del examen, noobstante opto por establecer que el tamaño es pequeño ya que la porción de estos es mayor y escon lo que realmente me encuentro (foto 3). Otro aspecto que me llama mucho la atención es laelevada cantidad de aglomeraciones circulares de bacterias, ya que en esta forma nunca antes lashabía observado (la foto 5 lo refleja muy bien). Si observamos bajo más aumentos estas bacteriasda la impresión de que son más bacilares que Zooglea spp. (foto 6). En el espacio interflocularaparecen gran cantidad de bacterias de vida libre.

ANALISIS DE PROTOZOOS Y METAZOOS

Una vez recibida la muestra y aislada una alicuota en refrigeración para el análisis debacterias filamentosas y características macroscópicas del flóculo, procedo a laoxigenación de la misma para intentar recuperar en lo posible unas condiciones más“normales”, minimizar el estrés, y así facilitar la clasificación de especies en lo posible.En el análisis cualitativo de la muestra observo que en general los protozoos existentesno presentan signos importantes de alteración, tan solo la mitad aproximadamente deOpercularia spp. se encuentran sin actividad. Lo que más me sorprende es la grancantidad de Rhizopodos tecameboides (protozoo claramente dominante) que seobservan, ¡nunca había visto tantos en una muestra¡. Incluso podrían haber hasta tresespecies distintas; una de ellas pudiera ser del género Arcella spp. (foto 7) y la otra esmuy similar a una que clasifica (Atlas de microorganismos de agua dulce. Pag. 225)como Pyxidicula operculata, las mediciones que he realizado del tamaño están entre17 y20 um, dimensiones que coinciden con la antes mencionada (fotos 8,9 y 10).De manera frecuente aparece Opercularia spp., decantandome por O. Articulata (fotos11 y 12). El análisis dimensional realizado es el siguiente:Pedúnculo grueso y liso: 13 umLongitud del zooide: 90 –125 um.Otro aspecto a destacar es la posición horizontal del macronucleo, rodeando la citofaringe enforma de “S” tal como se muestra en la imagen 13. Observo con frecuencia colonias con multitudde individuos (foto 14), aunque también es cierto que aparecen individuos solitarios que por elestado importante de deformación no puedo intentar clasificarlos; no descarto pues la posibilidadque hubiera otra especie de Opercularia, igual que creo que es muy probable que en el momento dela toma de muestra hubiera más que la que he podido observar (ya que con el paso de los dias trasla recepción he observado un detrimento importante de esta población).Otras especies que aparecen de forma frecuente son : Litonotus lamella , Tokophryaspp. (posiblemente T. Infusionum “foto 15”), Aspidisca cicada (foto 16), Trachelophylumpusillum / acineria uncinata (foto17), Peranema spp. (posiblemente P. Trichophorum “foto18”), Entosiphon spp. (foto 19).De forma mas ocasional me encuentro con: amebas desnudas (foto 20), Rotiferos (foto21) y Acineta spp. (quizás A. Cuspidata según R. C Curds foto 22). Por último destacar lapresencia común de pequeños euglenófitos (foto 23).Conclusiones: En general aparecen especies propias de situaciones con un elevadotiempo de retención del fango y carga débil. Desde mi punto de vista, creo que estamuestra daría mucho pie para que habláramos del papel de las “Tecas” en labioindicación y de su ¿inclusión? en el índice de madoni como especies en procesos deoptima calidad. En este ejercicio he obtenido un índice de Madoni de valor “9” y el cualestablece que la actividad biológica es excelente, sin embargo, yo me decantaría por un



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efluente regular-malo (¡ojo¡ si la muestra no ha sufrido alteración alguna). Se sabepor experiencia que las tecas tienen un fuerte carácter estacional y que necesitan

largos periodos de retención así como buena oxigenación, estados que comparten lasbacterias nitrificantes y las cuales podrían ser las “aglomeraciones” que tanto abundanen la muestra. En mi escasa experiencia en explotación he observado las Tecas comoespecie dominante en el fango y el efluente era de calidad mediocre y en ocasione malo.Si tuviera que dar una explicación a tan complicado asunto probablemente no lo haríapor el poco tiempo que llevo en esto, pero como se trata de participar diría que las heobservado en situaciones de buena calidad, pero cuando las condiciones han variado yel efluente a pasado a ser de mala calidad han continuado en dominancia (lo cual quizásme haría pensar que fueran capaces de resistir situaciones adversas). Me gustaría sifuera posible que en la reunión de este interlaboratorio se hablara sobre las tecas y quelos participantes con más experiencia en este campo expusieran sus distintos puntos devista. Otra especie que creo que merece especial atención y que seguramente abundaramás en el momento de su toma, es Opercularia spp., la cual podría estar indicando algúnaporte de residuos industriales (sustancias tóxicas) o choques de carga. Los pequeñosflagelados y abundancia de bacterias libres refuerzan la teoría de una posible alteraciónen el proceso.

IDENTIFICACION DE BACTERIAS FILAMENTOSAS

En el análisis de bacterias filamentosas el primer problema con el que me encuentro es establecerla categoría numérica, ya que hay flóculos con 1 - 5 filamentos / floculo pero también se aprecianflóculos de mayor tamaño con una densidad de 5-20 por flóculo; es decir no hay una clara porcióndominante con lo que al final opto por indicar una media entre los dos (3-4). La identificación dela bacteria dominante me ha resultado bastante complicada, al final he optado clasificarla comotipo 021 n (grupo bastante complicado para mi). Las características que me han hecho decantarmepor este filamento son:

- Diámetro del tricoma: aprox. 1 – 1,5 um- Forma del filamento: Curvados y enrollados formando “una especie de lazos” . Ver foto 24,

25 y 26.- Forma celular: Rectangular (foto 27).- Respuesta a tinciones: Gram – (foto 28. Partes de las células quedan sin teñir dejando espacios

blancos). Gránulos neisser + (foto 29). Tincion de vainas ¿débil? (foto 30).

Como filamento secundario establezco a Haliscomenobacter Hydrossis, el cual presenta uncrecimiento epifito más bien escaso (foto 31 y 32). De forma bastante frecuente hace su apariciónla tipo 0041, con escaso crecimiento epifito, en ocasiones libre en el espacio interflocular yejerciendo algunas veces un efecto de disgregación flocular junto con la tipo 021 n. En las fotos 33a 37 se muestra dicha filamentosa y en las fotografías 39, 40 y 41 la tinción de vainas.Ocasionalmente hace su aparición (posiblemente) Nostocoida limicola II apareciendo losfilamentos curvados en forma irregular (fotos 42 y 43)De forma ocasional aparecen Nocardia spp. (foto 44), Nostocoida limicola III (foto 48), Beggiatoaspp. (con movimiento y gránulos de “S” in situ. Foto 45), algas filamentosas (foto 46) y(posiblemente) hongos (foto 47).

Conclusiones: En general las especies de filamentosas en presencia significativa encontradas sontípicas de sistemas de baja carga másica y altas edades de fango. Las condiciones más comunesentre ellas son el aporte de aguas industriales y /o deficiencia de nutrientes. Me ha llamado laatención el escaso y en bastantes ocasiones nulo crecimiento epifito de la tipo 0041 ya que no esuna característica común en las visiones microscópicas de mi planta. Según el manual deEMASESA (y que tanto admiro) podría ser una consecuencia de aportes industriales.Como conclusión final decir bajo mi punto de vista que la calidad previsible del agua tratada lacalificaría de mala a regular ( con gran cantidad de pequeños flóculos, disgregación en los de



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mayor tamaño y con un análisis de especies encontradas (teniendo en cuenta los apuntesrealizados sobre las Tecas) que podrían indicar desde aportes industriales, deficiencia de

nutrientes hasta choques de carga (bien variaciones importantes de caudal, desigual reparto dellicor mezcla en balsas de aireación...). Todo esto teniendo en cuenta que dicha evaluación puedevenir sesgada por el tiempo tardado en recibir la muestra.

ANEXO FOTOGRAFICO

1.- ESTADO DE FLOCULACION MACROSCOPIA Y MICROSCOPIA.

Estado de floculación: 40 y 20X respectivamente. In vivo.

Estructura flocular tras 48 horas: 10 X. In vivo



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2.- BACTERIAS DISPERSAS Y FILAMENTOSAS

021 N: In vivo: 10X

021 N: In vivo: 40X



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021N. In vivo. 100X

021N: Tinción Gram. 100X



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021 N: Tinción Neisser: 100X

0041 : Tinción de Vainas. 100X; In vivo. 100X

Haliscomenobacter hydrossis: In vivo. 40X



24

Filamento 0041. In vivo. 40 X

Filamento 0041. Tincion de vainas. 100 X

Acúmulos de bacterias: Probablemente Zoogloea. In vivo. 40X y 100 X respectivamente



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Acúmulos de bacterias nitrificantes. Gram. 100X; In vivo. 20X

Nocardia. 100X. In vivo

Microtrhix. Tinción Gram. 100X



26

Esporangio de hongo. In vivo. 20 y 40X respectivamente.

Desarrollo hongo tras 48 horas. 40X. In vivo

Nostocoida limícola III. In vivo. 40X; Tinción de Neisser. 100X



27

Beggiatoa. In vivo. 40X. Tras 48 horas



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3.- PROTOZOOS Y METAZOOS.

Peranema sp ( P trichophorum ¿?). In vivo. 40X Entosiphon sp. In vivo. 40X

Ameba desnuda. In vivo. 40x



29

Aspidisca cicada. In vivo 40X Acineria uncinata. In vivo. 40XY Pyxidicula operculata.

Arcella vulgaris. In vivo. 20x y 40X .



30

Arcella junto con Pyxidicula. In vivo. 20X

Arcella gibbosa. In vivo. 20X

Centropyxis sp. In vivo. 40X



31

Pyxidicula sp. In vivo. 20X y 40X respectivamente.



32

Tokophrya sp. In vivo. 20X y 40X (T infusionum)

Suctor no identificado. Probablemente género Solenophrya ¿?. In vivo. 40X

Opercularia articulata. In vivo.40X Opercularia articulata. In vivo. 10X



33

Opercularia articulata. In vivo. 40X

Opercularia sp. In vivo. 40X

Opercularia minima. In vivo. 40x



34

Opercularia sp y Opercularia microdiscum. In vivo. 40X

Opercularia solitaria ( O. Hebes ¿?). In vivo. 20X

Rotífero. Rotaria sp. In vivo. 40 X



35

Ciliado nadador no identificado. In vivo. 20X



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4.- VARIOS

Grano de polen. 20 y 40X respectivamente. In vivo.

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