MECANISMOS HEMOSTATICOS Departamento de Patología Clínica H. U. Dr. Raúl Ramos Vázquez Marzo 2007.
Reporte Discu Fisiologia - Mecanismos Hemostaticos
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ESTUDIANTES
Argueta Flores, Sara ElizabethAguila Gòmez, Ana BeatrizAguilar Saravia, Irving VladimirAlbayeros Alvarez, Jorge AlejandroAlbayeros Romero, Wendy MayariAlfaro Arias, Samuel AntonioAlvarado Contreras, Nuria TatianaAlvarado Quiñonez, BillyAlvarado Rivas, Fátima GabrielaAlvarenga Fuentes, Silvia KatherineAlvarez Aguilar, Abdiel JahaziasAlvarez Aguilar, Susana NohemyAlvarez Perez, Angel DavidAmaya Garcia, Ricardo FranciscoAmaya Parada, Monica RocíoAparicio Castillo, Angélica MaríaAparicio Morales, Jaren LudinArgueta Argueta, Esmilson NoéArgueta Martínez, Laura AlejandraArgueta Martinez, Juan CarlosArias Sorto, Fharid MiguelArriaga Martínez, Laura EsperanzaArtola Campos,Glenda MarisolAscencio Chica, Karen AndreaAscencio Rodriguez, Reina IsabelAviles Quintanilla, Jesus AlbertoBado Villalobos, Norember JoséBarahona Flores, Ana MaríaBautista Fuentes, Luis EnriqueBenitez Moreira, Miguel GustavoBenitez Rosa, Daniela ElizabethBenítez Torres, Gabriel AlejandroBermúdez Zelaya, Gerson OmarBerrios Reyes, Ranulfo AlejandroBlanco Díaz, Diana CarolinaBlanco Flores, Jennifer Yajaira
Bonilla Cabrera, Yonatan AlexanderBonilla Maldonado, Gabriel OsmariBustillo Treminio, Juan JoseCáceres Mancia, Ivonne RoxanaCampos Hernandez, Jennifer ArmidaCarias Paniagua, Herber EduardoCastillo Gonzalez, Cesar DavidCastro Hernández, Gerber AlexanderCatzim Cantun, Ilai NestorCerrato Martinez, Eva MariaChavarria Sánchez, Clara NoemíChávez Araújo, Minerva KarinaChavez Castillo, David AntonioChávez Palacios, Oscar ArmandoChávez Segovia, Abner IsaíChicas Chavez, Josefa MarbellyCiciliano Turcios, Salvador EduardoCórdova Rodríguez, Diego AlejandroCruz Viera, Blanca FlorDe la O Bolaines, Jacobo AdilioDe Leon Contreras, Josselin IlianaDiaz Escobar, Fernando AlexanderDíaz Orellana, Héctor AntonioEscobar Sagastizado, Eliseo Ezequiel
INTRODUCCIÓN
La sangre es un tejido conectivo líquido, cuyas funciones son vitales en el mantenimiento de la homeostasis. Debido a ello todos los seres dotados de un Sistema Vascular deben ser capaces de reducir a un mínimo la pérdida de sangre posterior a una lesión vascular.
En el experimento realizado estudiamos los diversos mecanismos que previenen la pérdida de sangre, los cuales se conocen con el término Hemostasia.
Estudiaremos además algunos de los procedimientos por los cuales se puede lograr impedir, acelerar o retardar la coagulación de la sangre.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
1. Interpretar que mecanismos hemostáticos detienen el sangrado en la prueba de tiempo de sangramiento.
2. Explicar la importancia de la superficie de contacto por la activación del XII factor de coagulación.
3. Identificar qué factores intervienen en las vías intrínsecas y extrínsecas de la coagulación.
4. Interpretar la importancia de los iones Ca++ en la coagulación de la sangre.
5. Explicar la acción del oxalato de amonio y potasio y de la heparina en la sangre.
6. Explicar la retracción del coagulo en la sangre.
7. Explicar los efectos de la desfibrinación de la sangre.
MATERIAL DEL LABORATORIO:
Papel filtro
Tubos de ensayo
Algodón y alcohol
Curitas redondas
Lancetas
Jeringa descartable de 10cc
Guantes descartables
Gradilla para tubos de ensayo
Varilla de vidrio
Lupa
REACTIVOS:
Cloruro de calcio
Tromboplastina tisular
EDTA (En sustitución del oxalato de amonio y potasio)
Heparina
EQUIPO:
Baño de María (No utilizado en la práctica)
Procedimiento.
PARTE I
1. A dos miembros del grupo se les realizara la prueba de: tiempo de sangramiento.
Se frota y se limpia con algodón y alcohol la yema del dedo anular.
Se punciona con la lanceta, dejando que la sangre fluya sin hacer presión.
Tocar con papel filtro, cada 30 segundos, las gotas de sangre que vayan saliendo, procurando no presionar la herida.
Anotar el tiempo transcurrido hasta que deje de salir la sangre.
SUJETO 1 3 gotas ,dejo de sangrar a minuto 1.30
SUJETO 2 2 gotas, 1 minuto
¿Qué mecanismos hemostáticos han detenido el sangrado de esta pequeña herida?
El espasmo vascular
De manera inmediata a la producción de la rotura del vaso, se produce una potente contracción de las fibras musculares del mismo. El resultado es una vasoconstricción que disminuye el calibre del vaso, e incluso si es pequeño puede llegar a cerrarse, disminuyendo la pérdida de sangre.
La contracción es el resultado de:
1) Un espasmo miógeno local.2) Factores autacoides locales procedentes de los tejidos traumatizados y de las
plaquetas sanguíneas.3) Reflejos nerviosos, los cuales inician a partir de impulsos nerviosos de dolor u otros
impulsos sensoriales que se originan en los vasos con traumatismos o en tejidos cercanos.
Cuanto más gravemente se ha traumatizado un vaso, mayor es el grado de espasmo vascular. El espasmo puede durar muchos minutos o incluso horas.
Formación del tapón plaquetario
Este mecanismo es extremadamente importante para cerrar las roturas diminutas en los vasos sanguíneos muy pequeños que ocurren centenares de veces diariamente. En el lugar de cualquier
desgarro del vaso, la pared vascular dañada activa sucesivamente un mayor número de plaquetas que atraen hacia ellas cada vez más plaquetas adicionales, formando así un tapón plaquetario.
Cuando un vaso sanguíneo se lesiona, las plaquetas se adhieren al área dañada y se distribuyen a lo largo de la superficie para detener la hemorragia (este proceso se conoce como adhesión). Al mismo tiempo, pequeños sacos ubicados al interior de las plaquetas y llamados gránulos liberan señales químicas (este proceso es llamado secreción). Estas sustancias químicas atraen a otras plaquetas al sitio de la lesión y provocan su aglutinamiento para formar lo que se conoce como tapón plaquetario (a este proceso se le llama agregación).
Algunas veces el tapón plaquetario es suficiente para detener la hemorragia. Sin embargo, si la herida fuera grande, otras proteínas llamadas factores de coagulación se reclutan en el sitio de la lesión. Estos factores de coagulación trabajan en conjunto sobre la superficie de las plaquetas para formar y solidificar el coágulo de sangre.
¿Se han completado en estos tiempos todos los mecanismos hemostáticos?
NO, debido a que la herida era pequeña, con la formación del tampón plaquetario fue lo suficiente para detener la pérdida de sangre. Mientras que si la lesión hubiera sido lo suficientemente grande se tendría que haberse activado el proceso de coagulación.
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CUADRO DE RESULTADOS Y OBSERVACIONES
Tubo 1: Sangre con tromboplastina En este tubo la sangre coaguló de manera casi instantánea debido al factor de coagulación III o tromboplastina tisular que contribuye a acelerar el proceso de coagulación.
Tubo 2: 10 x 75 mm En la sangre contenida en este tubo no había ninguna sustancia agregada por lo que el tiempo de coagulación fue aproximadamente de 5 minutos.
Tubo 3: 30 x 95 mm Como en este tubo no se agregó ninguna sustancia y había una mayor superficie de contacto el tiempo de coagulación fue de unos 3 minutos.
Tubo 4: Sangre con oxalato (Sustituido por EDTA)
En este tubo no hubo una coagulación rápida pero debido a que el EDTA es un reactivador del calcio la coagulación se dio al cabo de varios minutos.
Tubo 5: Sangre con heparina La heparina es un anticoagulante por lo que en este tubo no se observó dicho fenómeno.
Tubo 6: Sangre desfibrinada Al agitar continuamente la sangre durante un periodo de tiempo de 6 minutos, se destruyeron los hilos de fibrina que contribuyen al proceso de coagulación por lo que la sangre después de este proceso ya no coaguló.
Tubo 1: Retracción del coágulo Pocos minutos después de formarse el coágulo este empieza a contraer, y al cabo de una hora en baño de maría este exprime el líquido que hay en su interior, el cual es llamado suero, debido a que elimina todo el fibrinógeno y la mayor parte de otros factores de coagulación.
PARTE II
A otro miembro del grupo se le extraerán 8ml de sangre, debiendo anotar la hora en que la sangre empiece a penetrar en la jeringa para que a partir de ella se mida el tiempo Para las pruebas siguientes.
Hora: 11:32am
Colocar inmediatamente 1ml de sangre en tubos identificados de la siguiente manera:
Tubo #1: de 10 x 75 mm con una gota de tromboplastina tisular.
Tubo #2: de 10 x 75 mm sin ninguna sustancia agregada
Tubo #3: de 30 x 95 mm sin ninguna sustancia agregada
Tubo #4: de 10 x 75 mm con oxalato de amonio y potasio
Tubo #5: de 10 x 75 mm con una gota de heparina
Los restantes 3ml de sangre en el tubo # 6 de 13 x 60 mm
Inmediatamente proceda de la siguiente forma con cada uno de los tubos:
El tubo #1
Deberá inclinarlo levemente cada 30 segundos y anote el tiempo que transcurra desde que la sangre penetro la jeringa hasta que observe coagulación. Anote este tiempo en el cuadro de resultados que aparece al final y observe las características morfológicas del coagulo
Enseguida coloque la sangre en baño de María a 37 °C durante una hora, para que al cabo de ella pueda observar la retracción del coagulo notando las diferencias en su morfología.
Los tubos # 2, 3, 4,5
Deberán mantenerlos en reposo durante 3 minutos, dándoles con su mano una temperatura de aproximadamente 37 °C. Luego inclinarlos cada 30 segundos en un máximo de 10 minutos y anotar el tiempo cuando en alguno de ellos observe coagulación.
Recuerde que el tiempo cuenta desde que la sangre penetro a la jeringa.Deberá discutir las diferencias obtenidas en los resultados.
El tubo #6
Usando una varilla de vidrio agitar suavemente la sangre con movimientos de rotación durante seis minutos, al final de los cuales trate de observar cuidadosamente la presencia de los hilos de fibrina depositados en la varilla (Ayúdese con buena iluminación y una lupa)
Deje la sangre en reposo hasta completar 15 minutos y anote si observa coagulación o no.
No se observa
Explique este fenómeno en base a la desfibrinación de la sangre
Es un fenómeno en el cual desaparece la fibrina de la sangre, lo que la vuelve incoagulable. Es por ello que en el tubo #6 no se observa la formación del coagulo sanguíneo.
Después de transcurridos 15 minutos desde que la sangre penetro a la jeringa, en los tubos 4 y 5 agregar 2 gotas de cloruro de calcio 0.5 M. Incline los tubos suavemente para mezclar, déjelos en reposo durante 30 minutos y luego inclínelos cada minuto y anote el tiempo en que observe la coagulación en alguno de ellos. Discuta los resultados en base a la acción del calcio en la coagulación de la sangre.
APUNTES:
Tubo nº4: sangre con oxalato
Después de agregar el cloruro de calcio a los 6 min aprox. Se observó la formación de micro coágulos.
Tubo nº5: con heparina
Aun después de haber añadido el cloruro de calcio al tubo no se observó coagulación, ya que la heparina es un anticoagulante de la sangre y ayuda a mantenerla liquida.
DISCUSIÓN
1. PRUEBA DEL TIEMPO DE SANGRAMIENTO.
Análisis de resultados experimentales.
Para la realización de esta prueba se necesitó de la ayuda de dos sujetos, a los cuales se les pinchó el dedo anular con una lanceta, con el objetivo de poder comprobar el tiempo de sangramiento. Al pinchárseles el dedo, comenzaron a experimentar una serie de reflejos, debido a que el traumatismo de la pared, hace que el musculo liso de esta se contraiga, como consecuencia de el corte de un vaso sanguíneo. El tiempo de sangrado oscilo entre los 2 y 3 minutos.
Mecanismos hemostáticos que investiga la prueba.
Espasmo vascular.
Inmediatamente después de que haya cortado o roto un vaso sanguíneo, el estímulo del traumatismo de la pared hace que el musculo liso de la pared se contraiga: esto reduce instantáneamente el flujo de sangre del vaso roto.
La contracción es el resultado de:
4) Un espasmo miógeno local.5) Factores autacoides locales procedentes de los tejidos traumatizados y de las
plaquetas sanguíneas.6) Reflejos nerviosos, los cuales inician a partir de impulsos nerviosos de dolor u otros
impulsos sensoriales que se originan en los vasos con traumatismos o en tejidos cercanos.
Cuanto más gravemente se ha traumatizado un vaso, mayor es el grado de espasmo vascular. El espasmo puede durar muchos minutos o incluso horas.
Formación de tapón plaquetario.
Este mecanismo es extremadamente importante para cerrar las roturas diminutas en los vasos sanguíneos muy pequeños que ocurren centenares de veces diariamente. En el lugar de cualquier desgarro del vaso, la pared vascular dañada activa sucesivamente un mayor número de plaquetas que atraen hacia ellas cada vez más plaquetas adicionales, formando así un tapón plaquetario.
2. CONDICIONES QUE MODIFICAN LA COAGULACIÓN SANGUÍNEA
Tromboplastina tisular:
La Tromboplastina es una proteína que se forma en el plasma por la combinación del factor tisular con los fosfolípidos de las membranas de las plaquetas y que participa en la coagulación de la sangre por medio de la conversión de protrombina en trombina.
Superficie de contacto:
Las superficies de contacto (plaquetas, células endoteliales, fibroblastos, monocitos) juegan un papel esencial en la coagulación sanguínea. Las células desempeñan dos papeles básicos en la hemostasia. El primero es proporcionar los factores esenciales para la hemostasia normal que no están presentes en el plasma normal, y el segundo es proveer una superficie para el ensamblaje de los complejos enzima/cofactor y su interacción con los sustratos para formar el coágulo de fibrina.
Oxalato de Amonio y Potasio:
Los oxalatos de amonio y de potasio se utilizan bajo forma de la mezcla de 3 partes del primero y dos partes del segundo (mezcla de Heller) y Paul de Wintrobe. La sal de amonio aumenta el volumen de los glóbulos rojos y la de potasio lo disminuye. Con la proporción utilizadas, los eritrocitos no se alteran, actúan por fijación de calcio.
Heparina:
Es anticoagulante excelente y natural. Es el mejor anticoagulante (seco) cuando se busca reducir al mínimo la hemolisis (por ejemplo, para mediciones de electrolitos y estudios de la fragilidad de glóbulos rojos). Produce una coloración azul difusa.
La heparina es un carbohidrato ácido complejo; puede obtenerse bajo forma de sus sales de sodio, calcio o amonio. Se utiliza para las gasometrías (análisis de gases en sangre).
No altera el tamaño de los eritrocitos (hematocrito).
Actúa formando un complejo con la antitrombina III del plasma; que inhibe la actividad de la trombina (trombosis) sobre el fibrinógeno u otras etapas de la activación de los factores de la coagulación.
No es satisfactoria para recuentos leucocitarios o plaquetarios debido a que produce agregación celular.
Cloruro de Calcio:
Los iones de calcio son necesarios para desarrollar actividad tromboplastínica, en concentraciones entre 5 y 20 mg por 100 ml. El tiempo de coagulación sólo se alarga de manera manifiesta cuando la concentración cálcica es menor de 2,5 mg por 100 ml; tales valores nunca se observan en clínica. La liberación de factores de crecimiento del coagulo es desencadenada por la activación de las plaquetas, esta puede ser iniciada por una gran variedad de sustancias o estímulos como la trombina, el cloruro de calcio, el colágeno, etc.
Agitación de la sangre (desfibrinación):
Desaparición de la fibrina de la sangre, que se vuelve incoagulable. Puede ser provocada in vitro por batido. Puede sobrevenir en el curso de ciertas enfermedades, bien por destrucción (fibrinólisis o proteólisis), o bien por consumo excesivo (síndrome de coagulación intravascular diseminada, del cual el síndrome de desfibrinación es, a veces, sinónimo).
3. USANDO UN ESQUEMA DEL PROCESO DE COAGULACIÓN, SEÑALE EN ÉN LO ANALIZADO EN LOS RESULTADOS EXPERIMENTALES.
En la prueba número uno del tiempo de sangramiento se observa los pasos 1 y 2 del esquema, luego los vasos se sellan debido a que los iones calcio activan a las plaquetas para que se adhieran a la lesión vascular formando una red de fibrina llamado coagulo.
4. RETRACCIÓN DEL COAGULO
Como se da dicho proceso
Cuando la cascada de coagulación se completa se forma el coagulo, la fibrina de este, actúa sobre el factor XII.
La capacidad del coagulo para contraerse depende de la acción de la trombina y la existencia de un número adecuado de plaquetas.
La retracción ocurre por la interacción entre los pseudópos de las plaquetas y las hebras de fibrina. Esto ocurre dentro de los 60 minutos y el coágulo ocupa el 50% del volumen total de sangre. La retracción del coágulo resulta en una masa estabilizada de plaquetas y de fibrina que cierra firmemente el vaso injuriado para prevenir futuras pérdidas de sangre.La retracción comienza a la hora con un máximo a las 24 horas.La retracción del coágulo depende de la función plaquetaria, de una proteína contráctil proveniente de la membrana plaquetaria (trombostenina), del magnesio, ATP y piruvato quinasa.La concentración y la habilidad funcional del fibrinógeno y el nivel del hematocrito deben estar dentro de los límites normales para arribar a una conclusión válida acerca de la función plaquetaria.La trombocitopenia y la trombastenia se caracterizan por un coágulo friable.La trombastenia de Glanzmann es una condición hemorrágica hereditaria donde el conteo de plaquetas es normal, pero el tiempo de sangría se encuentra prolongado, existe una marcada disminución de la retracción del coágulo, y agregación y adhesión de plaquetas anormales. La retracción del coágulo defectuosa puede reflejar una falla en la activación de la actina en la membrana plaquetaria. En la trombastenia de Glanzmann existe una disminución de la cantidad de glicoproteína IIa-IIIb de la membrana plaquetaria.
Elementos necesarios para que se de
1. Plaquetas 2. Proteínas contráctiles: actina y miosina 3. Protombina 4. Iones calcio
Importancia fisiológica del mismo
El proceso de retracción del coágulo conduce a la consolidación de un coágulo hemostático o trombo.
Cuando se retrae el coagulo, los bordes cortados de los vasos sanguíneos se unen
El coagulo disminuye su tamaño a más de la mitad. El fibrogeno sin suero se expulsa.