Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u

mnohočetného myelomu

Minařík J., Ordeltová M., Ščudla V., Vytřasová, M., Bačovský J., Špidlová A.

III.interní klinika a Oddělení klinické imunologie LF Univerzity Palackého a FN Olomouc

Brno 12/2004

MNOHOČETNÝ MYELOM

MM – klonální, nekontrolovaná proliferace a akumulace neoplasticky transformovaných el. B-buněčné linie/plazmocytů (CD138+) provázená produkcí M-proteinu („paraproteinu“) prokazatelného v séru nebo v moči a projevy orgánové dysfunkce „CRABI“

CRABI

K. DIFERENCIAČNÍ• dominující,největší• zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb

• ztráta My. bb- apoptóza- nekrobióza

K. DIFERENCIAČNÍ• dominující,největší• zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb

• ztráta My. bb- apoptóza- nekrobióza

K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý)• „totipotentní“• samoobnova• doplňování K. expanze

K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý)• „totipotentní“• samoobnova• doplňování K. expanze

MM – KLONÁLNÍ „KOMPARTMENTY“ MYELOMOVÝCH BUNĚK

• ~1% (

K. DIFERENCIAČNÍ• dominující,největší• zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb

• ztráta My. bb- apoptóza- nekrobióza

K. DIFERENCIAČNÍ• dominující,největší• zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb

• ztráta My. bb- apoptóza- nekrobióza

K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý)• „totipotentní“• samoobnova• doplňování K. expanze

K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý)• „totipotentní“• samoobnova• doplňování K. expanze

MM – KLONÁLNÍ „KOMPARTMENTY“ MYELOMOVÝCH BUNĚK

• ~1% (

MM : PF - VNITŘNÍ VLASTNOSTI MY. bb.

IMUNOFENOTYP• CD 38+ 45+ 19+ 56+VLA 5-

• CD 20+ CD 10+

• CD 105+

• CD 27-

My. bb.

PROLIFERACE• PC PI/CD 138

•BrdUr LI

•Ki 67

• S - TK• růst in

vitro

KARYOTYP• FISH, CGH

• del 13q, 22q

• abnormní klon

• t (4;14), t(14;18)

• akt. telomerázy

CITLIVOST K TERAPII

• KR → NR

• ER

MORFOLOGIE• Plasmobl. typ

• NCA

APOPTÓZA• Annexin V

• 7 - AAD

• TUNEL

• INSTA

• Kaspázy

Cíle studie

vyšetření cytokinetických parametrů při

diagnóze MM

zhodnocení jejich prognostického významu

stanovení optimálních diskriminačních hodnot

pro prognózu nemoci

Charakteristika souborun-117; věk M 66let (44-85); M/Ž 0,92:1 (56/61)

Léčba: konvenční chemoterapie (VBMCP, MP, VAD)

Stádium (Durie- Salmon)

st.II-5043%

st.I-1513%st.III-52

44%

Imunochemické typy

IgM 11%

BJ 119%

NS 11%

IgA 2320% IgG 81

69%

A 87 (74%) B 30 (26%) Kappa 77 (66%) Lambda 39 (33%)

Propidium-jodidový indexPC-PI/CD 138

• PC-PI/CD138 – kinetický ukazatel proliferačního potenciálu• Vyjadřuje procentuální výskyt plazmatických buněk v S-fázi

buněčného cyklu

Metoda stanovení:1) Izolace buněk aspirátu kostní dřeně pomocí konstantního gradientu2) Identifikace myelomových buněk pomocí specifické monoklonální

protilátky anti-CD138 3) Barvení intracelulární DNA pomocí propidium-jodidu4) Analýza vzorků systémem průtokové cytometrie

PI/CD138

S-fáze (%) (PI/CD138)

Mean G1 = 235.0 CV G1 = 3.5 % G1 = 97.0 Mean G2 = 449.6 CV G2 = 3.7 % G2 = 0.1

% S = 3.0G2/G1 = 1.93 Chi Sq. = 4.6 Cell No. = 4255

Propidium-jodidový indexKT

log rank test: p = 0,0005 [měsíce]

806040200

Cum

Sur

viva

l [%

]

100

80

60

40

20

0

PC-PI/CD138

< 2,8

>= 2,8

Mediány: 13 měsíců42 měsíců

Propidium-iodidový indexKT

log rank test: p = 0,008 [měsíce]

806040200

Cum

Sur

viva

l [%

]100

80

60

40

20

0

PC-PI/CD138

2,0-2,7

< 2,0

>= 2,8

log rank p=0,076

log rank p=0,14

log rank p=0,013

Apoptotický index

Apoptóza: „programovaná smrt buňky“Aktivní vícestupňový dějFyziologická odpověď na řadu podnětůEliminace nežádoucích či nepotřebných buněk z organismu

Apoptotický index: procento myelomovýchbuněk jevících známky apoptózy

Apoptotický indexFosfatidylserin (PS) uložen na vnitřní straně BMPři apoptóze transformace PS na vnější stranu BMZtráta integrity buněčné membrány, fragmentace DNA, kondenzace jádra a cytoplazmy

Metoda stanovení:1) Identifikace myelomových plazmocytů užitím

monoklonální protilátky anti CD-138 2) Navázání annexinu-V na fosfatidylserin3) Odečtení apoptotického indexu (průtoková cytometrie)

Annexin V FITC (%)

Prop

idiu

mio

did

B1: 0,5% B2: 1,2% B3: 96,7% B4: 1,7%

AI/CD138B1: 0,3% B2: 2,2% B3: 74,1% B4: 23,3%

Prop

idiu

mio

did

Annexin V FITC (%)

Apoptotický indexKT

log rank test: p = 0,012 [měsíce]

706050403020100

Cum

Sur

viva

l [%

]

100

80

60

40

20

0

PC-AI/CD 138

>= 4,0

< 4,0M 16 měsíců

Apoptotický indexKT

log rank test: p = 0,012 [měsíce]

706050403020100

Cum

Sur

viva

l

100

80

60

40

20

0

PC-AI/CD 138

> 8,0

4,0-8,0

< 4,0

log rank p=0,012

log rank p=0,031

log rank p=0,96

Souhrnný indexKT

log rank test: p = 0,032 [měsíce]

706050403020100

Cum

Sur

viva

l [%

]

100

80

60

40

20

0

PI/AI

< 0,7

>= 0,7M 18 měsíců

ZávěrPropidium jodidový a apoptotický index – významné ukazatele kinetiky myelomových plazmocytůMetodiky stanovení jsou dostupné, rychlé a výtěžné a použitelné v běžné klinické praxiStatisticky významná korelace PC-PI a PC-AI/CD 138 vzhledem k celkovému přežíváníPodstatný rozdíl v mediánech přežití u skupin s rozdílnou proliferační a apoptotickou aktivitouOptimální diskriminační hodnoty v našem souboru - u propidium-jodidového indexu 2,8%, u apoptotického indexu 4,0%Možnost rozdělení nemocných do prognosticky odlišných skupin a tím i výběr individuálně zvolené léčby

Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u mnohočetného myelomuMM : PF - VNITŘNÍ VLASTNOSTI MY. bb.Charakteristika souborun-117; věk M 66let (44-85); M/Ž 0,92:1 (56/61)Léčba: konvenční chemoterapie (VBMCP, MP, VAD)Propidium-jodidový indexPC-PI/CD 138Propidium-jodidový indexPropidium-iodidový indexApoptotický indexApoptotický indexApoptotický indexApoptotický indexSouhrnný indexZávěr