““PROSPECCIPROSPECCIÓÓN DE NEMATODOS N DE NEMATODOS

ENTOMOPATENTOMOPATÓÓGENOS PARA EL GENOS PARA EL

CONTROL DE GUSANO BLANCO CONTROL DE GUSANO BLANCO

((PremnotrypesPremnotrypes voraxvorax HustacheHustache) EN ) EN

ECUADOR ECUADOR ""Patricia Hernández

Jesús Alcázar

Sandra Garcés

Patricio Gallegos

INTRODUCCIINTRODUCCIÓÓNN�� En Ecuador el cultivo de la papa constituye una de las principalEn Ecuador el cultivo de la papa constituye una de las principales actividades es actividades

econeconóómicas en Carchi, Pichincha, Cotopaxi, Tungurahua, Chimborazo y Cmicas en Carchi, Pichincha, Cotopaxi, Tungurahua, Chimborazo y Caaññar.ar.

�� Alrededor de 80000 familias derivan su sustento de este productoAlrededor de 80000 familias derivan su sustento de este producto que cubre 49719 que cubre 49719 Ha, con una producciHa, con una produccióón promedio de 239715 n promedio de 239715 TnTn/a/añño. o.

�� El gusano blanco es reconocido como el insecto plaga mas daEl gusano blanco es reconocido como el insecto plaga mas daññino en la mayorino en la mayoríía de a de las provincias productoras de papa en el palas provincias productoras de papa en el paíís.s.

�� El daEl dañño es ocasionado cuando la larva al alimentarse dao es ocasionado cuando la larva al alimentarse dañña los tuba los tubéérculos en campo, rculos en campo, haciendo galerhaciendo galeríías, causando su as, causando su prudiciprudicióónn y afectando la calidad del producto.y afectando la calidad del producto.

�� En CaEn Caññar, Carchi, Chimborazo y Cotopaxi, los niveles de par, Carchi, Chimborazo y Cotopaxi, los niveles de péérdida del valor rdida del valor comercial de los tubcomercial de los tubéérculos oscilan entre 20 y 50%.rculos oscilan entre 20 y 50%.

�� La principal herramienta utilizada por los agricultores son los La principal herramienta utilizada por los agricultores son los insecticidas tinsecticidas tóóxicos xicos ((CarbofuranCarbofuran, , metamidafosmetamidafos, , acefatoacefato y y profenofosprofenofos).).

�� Ocasionando problemas de contaminaciOcasionando problemas de contaminacióón ambiental, efectos nocivos sobre la n ambiental, efectos nocivos sobre la salud del agricultor, resistencia a insecticidas, etc.salud del agricultor, resistencia a insecticidas, etc.

�� BBúúsqueda de nuevas alternativas de squeda de nuevas alternativas de control para el sistema de Manejo control para el sistema de Manejo integrado del gusano blanco.integrado del gusano blanco.

�� El uso de nematodos El uso de nematodos

entomopatentomopatóógenosgenos (NE) se establece (NE) se establece

como una alternativa de control como una alternativa de control

biolbiolóógico.gico.

�� Los NE al ser habitantes naturales Los NE al ser habitantes naturales

del suelo tienen la capacidad de del suelo tienen la capacidad de

buscar, parasitar y causar la muerte a buscar, parasitar y causar la muerte a

un gran numero de insectos plaga.un gran numero de insectos plaga.

OBJETIVOS ESPECOBJETIVOS ESPECÍÍFICOSFICOS

�� Colectar NE en muestras de suelos en diferentes campos, Colectar NE en muestras de suelos en diferentes campos,

bodegas y ambientes no disturbados de las provincias bodegas y ambientes no disturbados de las provincias

productoras de papa.productoras de papa.

�� Determinar la patogenicidad de los aislamientos hallados, sobre Determinar la patogenicidad de los aislamientos hallados, sobre

larvas de gusano blanco.larvas de gusano blanco.

�� Establecer la DLEstablecer la DL5050 de los NE sobre larvas de gusano blanco.de los NE sobre larvas de gusano blanco.

LOS NEMATODOS ENTOMOPATOGENOSLOS NEMATODOS ENTOMOPATOGENOS

CadCadááveres presentan bioluminiscencia.veres presentan bioluminiscencia.CadCadááveres sin bioluminiscencia.veres sin bioluminiscencia.

Los cadLos cadááveres son de color rojo veres son de color rojo óó cafcaféé

oscuro.oscuro.Los cadLos cadááveres son de color crema, veres son de color crema,

amarillo amarillo óó plomo.plomo.

48 horas.48 horas.La septicemia se presenta a las 48 h.La septicemia se presenta a las 48 h.

Localizada a lo largo del intestino.Localizada a lo largo del intestino.Localizada en la Localizada en la prorciprorcióónn ventricular ventricular

del intestino.del intestino.

Bacteria Bacteria PhotorhabdusPhotorhabdus spsp..Bacteria Bacteria XenorhabdusXenorhabdus spsp..

Segunda generaciSegunda generacióón n anfimanfimíícticactica y y

hermafroditahermafroditaSegunda generaciSegunda generacióón n anfimanfimíícticactica

Primera generaciPrimera generacióón hermafroditan hermafroditaPrimera generaciPrimera generacióón n anfimanfimíícticactica

Aberturas naturales y tegumento.Aberturas naturales y tegumento.Boca, ano y espirBoca, ano y espirááculos.culos.

HeterorhabditisHeterorhabditisSteinernemaSteinernema

MUESTREO EN CAMPOMUESTREO EN CAMPO

�� Se colectaron muestras de suelo en Carchi, Se colectaron muestras de suelo en Carchi, Cotopaxi y Chimborazo.Cotopaxi y Chimborazo.

�� Sistemas de producciSistemas de produccióón n

Papa Papa –– pastizalespastizales

Papa Papa –– otro cultivootro cultivo

Bosque Bosque –– vegetacivegetacióón nativan nativa

AlmacenamientoAlmacenamiento

�� En cada punto de muestreo se tomaron tres En cada punto de muestreo se tomaron tres

submuestrassubmuestras a una profundidad de 10 a 15 a una profundidad de 10 a 15

cm.cm.

�� Peso aproximado de 1 Kg.Peso aproximado de 1 Kg.

CRIA DE CRIA DE GalleriaGalleria mellonellamellonella

ADULTOS HUEVOS

LARVAS Y PUPAS

CRIA DE CRIA DE P. P. voraxvorax

ADULTOS HUEVOS

LARVAS I instarLARVAS de V instar

AISLAMIENTO DE NEAISLAMIENTO DE NE

5 Larvas de G. mellonellaIncubación a 20ºC por

5 días

Trampa White

Incubación a 20ºC por 15 días

MULTIPLICACIMULTIPLICACIÓÓN DE NEN DE NE

200 IJ3/ml

10 Larvas de G. mellonella

Incubación a 20ºC

Trampa White

Los NE se lavan por tres veces en AD

�� PruebaPrueba Five on one Five on one paraparaHeterorhabditisHeterorhabditisTubosTubos eppendorfeppendorf con 1 g arena con 1 g arena estestéérilril y 60 y 60 ulul aguaagua estestéérilril..

�� PruebaPrueba One on one One on one parapara SteinernemaSteinernemaMultiwellsMultiwells con con papelpapel filtrofiltro estestéérilril y 50 y 50 ululaguaagua estestéérilril..

�� IncubaciIncubacióónn a 20a 20°°CC

�� La La evaluacievaluacióónn se se realizorealizo a 24, 48, 72 y 96 a 24, 48, 72 y 96 horashoras. .

�� Las Las larvaslarvas se se disectarondisectaron parapara verificarverificar la la muertemuerte porpor nematodosnematodos..

PRUEBA DE PATOGENICIDADPRUEBA DE PATOGENICIDAD

DOSIS LETAL MEDIA DLDOSIS LETAL MEDIA DL50

�� 0, 1, 2, 4, 8 y 16 IJ3/larva0, 1, 2, 4, 8 y 16 IJ3/larva

�� 20 20 larvaslarvas/ / TratamientoTratamiento

�� HeterorhabditisHeterorhabditis

TubosTubos eppendorfeppendorf con 1 g arena con 1 g arena estestéérilril y y

60 60 ulul aguaagua estestéérilril..

�� IncubaciIncubacióónn a 20a 20°°CC

�� EvaluaciEvaluacióónn apatirapatir de 24horas. de 24horas.

�� Las Las larvaslarvas muertasmuertas se se disectarondisectaron..

RESULTADOSRESULTADOS

�� 357 muestras de suelo357 muestras de suelo

111 Carchi, 129 Chimborazo, 110 Cotopaxi y 111 Carchi, 129 Chimborazo, 110 Cotopaxi y 7 Tungurahua.7 Tungurahua.

�� Se aislaron 28 poblaciones de NE.Se aislaron 28 poblaciones de NE.

6 Carchi, 8 Chimborazo, 10 Cotopaxi y 4 6 Carchi, 8 Chimborazo, 10 Cotopaxi y 4 Tungurahua.Tungurahua.

�� 4 papa 4 papa –– pasto, 13 papa pasto, 13 papa –– otro cultivo, 3 otro cultivo, 3 almacenamiento, 4 vegetacialmacenamiento, 4 vegetacióón natural y 4 n natural y 4 frutales.frutales.

�� 7.8% de 7.8% de prevalenciaprevalencia de NE.de NE.

MUESTREO DE CAMPOMUESTREO DE CAMPO

POSTULADOS DE KOCHPOSTULADOS DE KOCH

94%H 01Papa – maizGuayllabambaChimborazo

90%Cc 01Papa – arvejaCuesacaCarchi

94%Ct 13PapaPatain NorteCotopaxi

Vegetación natural

Papa – pasto

Vegetación natural

Papa – melloco

Papa – haba

Papa – arveja

Papa

Papa – pasto

SISTEMA

90%H 01Tambo HuashaChimborazo

98%H 03RayolomaChimborazo

94%H 05Calerita Sta RosaChimborazo

94%H 4dLa DeliciaChimborazo

93%Cc 03CuesacaCarchi

98%Cb 13MonteverdeCarchi

95%Ch 07Chutan BajoCarchi

94%Ch 06Chutan BajoCarchi

% DE MORTALIDAD

CODIGOCOMUNIDADPROVINCIA

PRUEBA DE PATOGENICIDAD PRUEBA DE PATOGENICIDAD

0

20

40

60

80

100

% M

ort

alid

ad

Ct 13 H 01 T H 4 D H 01 G H 03 R H 05 C Cc 03 Cc 01 Ch 06 Ch 07 Cb 13

AISLAMIENTOS

PORCENTAJE DE MORTALIDAD DE LARVAS DE Premnotrypes vorax CON 11 AISLAMIENTOS DE NE

0

20

40

60

80

100

MO

RT

AL

IDA

D %

0 1 2 4 8 16

DOSIS

ENSAYO 1 ENSAYO 2 ENSAYO 3

0

20

40

60

80

100

MO

RT

AL

IDA

D %

0 1 2 4 8 16

DOSIS

ENSAYO 1 ENSAYO 2 ENSAYO 3

DOSIS LETAL MEDIA DLDOSIS LETAL MEDIA DL5050

Cc 01 Cc 03

DOSIS LETAL MEDIA DLDOSIS LETAL MEDIA DL5050

3.23.2Ensayo 2Ensayo 2

3.23.2Ensayo 3Ensayo 3

CcCc 0303

CcCc 0101

NENE

3.2 3.2 IJsIJs/larva/larvaPromedioPromedio

3.33.3Ensayo 1Ensayo 1

3.2 3.2 IjsIjs/larva/larvaPromedioPromedio

3.43.4Ensayo 3Ensayo 3

3.03.0Ensayo 2Ensayo 2

3.23.2Ensayo 1Ensayo 1

DLDL5050ENSAYOENSAYO

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONESCONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

�� De un total de 357 muestras de suelo se aislaron 28 poblacionesDe un total de 357 muestras de suelo se aislaron 28 poblaciones de nematodos de nematodos entomopatentomopatóógenosgenos..

�� La mayor parte de los NE corresponden a aislamientos de cultivo La mayor parte de los NE corresponden a aislamientos de cultivo de papa en de papa en rotacirotacióón con otro cultivo.n con otro cultivo.

�� Once aislamientos mostraron alta Once aislamientos mostraron alta patogenicidadpatogenicidad sobre larvas de sobre larvas de G. G. mellonellamellonella..

�� Los NE Los NE CcCc 01 y 01 y CcCc 03 presentaron alta 03 presentaron alta patogenicidadpatogenicidad sobre larvas de V instar sobre larvas de V instar de de P. P. voraxvorax..

�� La DLLa DL5050 establecida para la los dos aislamientos fue de 3.2 establecida para la los dos aislamientos fue de 3.2 IJsIJs/larva de /larva de P. P. voraxvorax..

�� Determinar la Determinar la suceptibilidadsuceptibilidad de los diferentes estadios del gusano blanco con de los diferentes estadios del gusano blanco con los NE los NE CcCc 01 y 01 y CcCc 03.03.

�� Establecer ensayos en invernadero y campo con los nematodos que Establecer ensayos en invernadero y campo con los nematodos que mostraron mostraron los mejores resultados en laboratorio.los mejores resultados en laboratorio.

GRACIAS