PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS

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Práctica número 2 PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS Dylan Xavier Mendieta Benítez. 3er Semestre

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Práctica número 2

PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS

Dylan Xavier Mendieta Benítez. 3er Semestre

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Bioquímica

PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS

Las proteínas son compuestos a base de carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno y

generalmente azufre y fósforo; Todas las enzimas, algunas hormonas y muchos

componentes estructurales importantes de la célula son proteínas. Las proteínas son

macromoléculas que presentan pesos moleculares entre 5000 y muchos millones de

Dalton. Todas las proteínas están compuestas por componentes más simples

llamados aminoácidos unidos mediante enlace peptídico. En base a su composición

cada una de estas moléculas muestran variaciones en sus propiedades biológicas, físicas

y químicas debido a la secuencia específica de aminoácidos, que se conoce como

estructura primaria. La proteína refleja las propiedades de los aminoácidos que la

componen, y por lo tanto muestra propiedades características. En la naturaleza existen

200 tipos de aminoácidos, de los cuales sólo 21 forman parte de las proteínas en general.

Las plantas pueden sintetizar todos los aminoácidos a partir de sustancias simples,

los aminoácidos que los animales no pueden sintetizar y que deben obtener en su

alimentación se llaman aminoácidos esenciales, se consideran como esenciales 10

aminoácidos: Fenilalanina, Triptófano, Lisina, Valina, Treonina, Metionina, Leucina,

Isoleucina, Arginina e Histidina: estos dos últimos son esenciales durante la infancia.

Existen varios métodos para la identificación y cuantificación de las proteínas, pero la

mayoría tiene como principio alguna reacción química característica de los grupos R de

los diferentes aminoácidos.

Los aminoácidos son compuestos sólidos; incoloros; cristalizables; de elevado punto de fusión (habitualmente por encima de los 200 ºC); solubles en agua; con actividad óptica y con un comportamiento anfótero.

La actividad óptica se manifiesta por la capacidad de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolución de aminoácidos, y es debida a la asimetría del carbono , ya que se halla unido (excepto en la glicina) a cuatro radicales diferentes. Esta propiedad hace clasificar a los aminoácidos en Dextrogiros (+) si desvian el plano de luz polarizada hacia la derecha, y Levógiros (-) si lo desvian hacia la izquierda.

Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa

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El comportamiento anfótero se refiere a que, en disolución acuosa, los aminoácidos son capaces de ionizarse, dependiendo del pH, como un ácido (cuando el pH es básico), como una base (cuando el pH es ácido) o como un ácido y una base a la vez (cuando el pH es neutro). En este último caso adoptan un estado dipolar iónico conocido como zwitterión.

Fig. 1. Proceso de un aminoácido.

El pH en el cual un aminoácido tiende a adoptar una forma dipolar neutra (igual número de cargas positivas que negativas) se denomina Punto Isoeléctrico.

Proteínas.

Dentro de las proteínas podemos decir que son constituyentes químicos fundamentales e imprescindibles en la materia viva porque:

a) son los "instrumentos moleculares" mediante los cuales se expresa la información genética; es decir, las proteínas ejecutan las órdenes dictadas por los ácidos nucleicos.

b) son sustancias "plásticas" para los seres vivos, es decir, materiales de construcción y reparación de sus propias estructuras celulares. Sólo excepcionalmente sirven como fuente de energía.

c) muchas tienen "actividad biológica" (transporte, regulación, defensa, reserva, etc...). Esta característica diferencia a las proteínas de otros principios inmediatos como glúcidos y lípidos que se encuentran en las células como simples sustancias inertes.

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Fig.2. Diagrama funciones enzimáticas y el ADN.

OBJETIVOS GENERALES DE LA PRÁCTICA:

Realizar algunas reacciones coloridas específicas para la identificación de

aminoácidos que constituyen a una proteína.

Comprender la importancia de estas reacciones para distinguir proteínas.

Observar el efecto de algunos agentes fisicoquímicos sobre la solubilidad de las

proteínas

MATERIAL:

1 Gradilla 24 Tubos de ensayo Pipetas de 1, 5 y 10 mL 3 Vasos de precipitados de 100 mL. 1 Baño María a ebullición 1 Pinzas para tubo 1 Agitador de vidrio

SOLUCIONES Y REACTIVOS:

SOLUCIONES PORCENTUALES:

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Ninhidrina al 1 % en etanol al 96 % Acetato de plomo al 5 % Cloruro de bario al 5 % Cloruro de sodio al 5% Cloruro mercúrico al 5 % Hidróxido de sodio al 10 % Hidroxido de sodio al 10 % Nitrito de sodio 30 % Nitrato de plata al 2 % Acido sulfanilico 0.5 %

Soluciones de aminoácidos y proteínas

Gelatina al 5 % Peptona al 5 % Albúmina al 5 % Tirosina al 1 % Triptofano al 1 % Fenilalanina al 1% Cisteina al 1 % Arginina al 1 %

Clara de huevo fresca y filtrada dil(1:4)

SOLUCIONES NORMALES:

Ácido clorhídrico 0.1 N Hidróxido de sodio 0.1 N Regulador de acetatos 0.1 M pH 4.7

Reactivo de BiuretReactivo de ElrichReactivo de MillonReactivo de Hopkins Cole

Reactivos:

Ácido acético glacial.Ácido nítrico concentradoHidróxido de amonio concentradoÓxido rojo de mercurioNitrito de sodioMagnesio en polvo o granallas.

TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS:Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa

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Algunas de las reacciones de identificación cualitativa para proteínas son:

REACCIÓN DE LA NINHIDRINA:

La ninhidrina (triceto hidrinina) reacciona con los grupos amino libres, con lo cual

hay una descarboxilación, dando lugar a un compuesto púrpura violeta o azul, CO2, agua

y el aldehído correspondiente.

Ácido oxálico saturado

Fig.3. Reacción con ninhidrina.

Es una reacción general para compuestos con grupos amino, descubierta por Ruhemman, por lo que se usa comúnmente para determinar la presencia de aminoácidos y proteínas. Es una reacción con alta sensibilidad detecta una parte de alanina en 500,00 partes de agua. La prolina y la hidroxiprolina dan productos amarillos con la ninhidrina.La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.

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Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteinas, pero si hay aminoacidos libres.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Discusión de resultados:

Esta reacción tuvo gran interés ya que dio lugar a una reacción coloreada de los

aminoácidos ,ampliamente utilizada para la identifición y sobre todo para su

dedterminación cuantitativa. La ninhidrina descarboxila y desamina el aminoácido gracias

a su fuerte poder oxidante.La ninhidrina reducida formada reacción con una molecula de

ninhidrina no reducida y con el amoniaco resultante de la desaminación para formar un

complejo que presentó coloración violeta. De esta forma se puedo determinar

cuantitativamente los aminoácidos por espectrofotometría por ejemplo, gracias al dióxido

de carbono que se formaría.

REACCIÓN DE MILLON

El reactivo de Millon contiene una mezcla de nitritos y nitratos mercúricos en ácido nítrico concentrado. Debido a la presencia del grupo fenólico se produce un compuesto de color rojo.El reactivo de Millon se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de ácido nítrico (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formación de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente ácido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja característica.

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A 1 mL de la solución

problema se le adicionan 5

gotas de la solución de

ninhidrina en etanol

El cambio de color a azul o violeta

se debe a la presencia de grupos

amino libres

Si es necesario calentar en baño María 1 o 2 minutos.

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Al finalizar la reacción, durante la cual se desprende gran cantidad de óxidos de nitrógeno, el reactivo se puede diluir con dos veces su volumen en agua y deberá ser decantada algunas horas después la solución clara sobrenadante..

Fig.4. Reacción de Millon.

PROCEDIMIENTO:

REACCIÓN XANTOPROTEICA

Salkowsky descubrió que los aminoácidos con anillo aromático pueden nitrarse con

HNO3 concentrado, dando como resultado un compuesto amarillo que en solución

alcalina se vuelve anaranjado. Triptófano y Tirosina reaccionan rápidamente, pero

Fenilalanina lo hace más lento, por lo que es necesario adicionar H2SO4 concentrado para

activar el anillo.

Fig.5. Reacción Xantoproteica.

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A 1 mL de las soluciones problemas

se les adiciona de 2 a 5 gotas del

reactivo de Millon

Se calienta en baño Maria a

ebullición. La aparición de un color

rojo será una prueba positiva.

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Cuando se trata una disolución proteica en medio ácido (nítrico concentrado) y a

elevada temperatura se forman compuestos nitrofenílicos, que son de color amarillo. Esta

reacción es positiva para aminoácidos aromáticos activados como proteínas en solución,

aunque es más sensible cuando se encuentran perfectamente secas.

Esta reacción depende de la nitración de los anillos bencénicos activados. La

prueba resulta negativa para proteínas que no contengan aminoácidos aromáticos

activados, pero todas las proteínas tienen todos los aminoácidos, por tanto darán positiva

a esta reacción, formándose más colorantes.

PROCEDIMIENTO:

La reacción XANTROPROTEICA es un método que se puede utilizar para

determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. El espectrofotómetro se puede

entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Este test específico es

para reconocer enlaces peptídicos, por lo tanto requiere de la presencia de al menos en

tetrapéptido para que de positivo. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu.5H2O.

Opera a través del ion Cu2+ el que en reacción alcalina interacciona con los iones de N-3

de los grupos amino formando un complejo color violeta. Cada átomo de Cu2+ reacciona

con dos átomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando

un complejo color violeta y es así como podemos catabolizar una reacción anastrófica de

la mayor enzima llamada octatriona.

Se obtuvo bajo forma cristalina, una sustancia extraída de las paratiroides de la vaca que Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa

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A 1 mL de la solución problema se

le adiciona 1 mL de ácido nítrico

concentrado, calentar la mezcla y

enfriar

Adicionar por estratificación

1 ml de Hidróxido de amonio

concentrado.

La aparición de un color

amarillo o naranja en la

interfase será prueba positiva.

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tiene los siguientes caracteres: polipéptido compuesto de muchos aminoácidos, todavía

no determinados, y probablemente unidos a una proteína; da las reacciones de las

proteínas por investigación química (reacción xantroproteica); contiene trazas de fierro y

azufre; su pH es de 4.8; insoluble en las grasas y en el éter, algo soluble en el alcohol y

muy soluble en el agua acidulada; es destruida por los fermentos digestivos y por esta

causa no se administra por la vía digestivo.

Al añadir NaOH, los nitrógenos se unen mediante un enlace doble (-N=N-) formando

colorantes azoicos (de color naranja).

La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de gruposaromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro.

La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH ácido.

Según las guías químicas es una reacción cualitativa, mas no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra reacción, como la deBiuret, y se hace un análisis espectro fotométrico.

La reacción XANTROPROTEICA es un método que se puede utilizar para

determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. El espectrofotómetro se puede

entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Este test específico es

para reconocer enlaces peptídicos, por lo tanto requiere de la presencia de al menos en

tetrapéptido para que de positivo. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu.5H2O.

Opera a través del ion Cu2+ el que en reacción alcalina interacciona con los iones de N-3

de los grupos amino formando un complejo color violeta. Cada átomo de Cu2+ reacciona

con dos átomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando

un complejo color violeta y es así como podemos catabolizar una reacción anastrófica de

la mayor enzima llamada octatriona.

Se obtuvo bajo forma cristalina, una sustancia extraída de las paratiroides de la vaca que

tiene los siguientes caracteres: polipéptido compuesto de muchos aminoácidos, todavía

no determinados, y probablemente unidos a una proteína; da las reacciones de las

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proteínas por investigación química (reacción xantroproteica); contiene trazas de fierro y

azufre; su pH es de 4.8; insoluble en las grasas y en el éter, algo soluble en el alcohol y

muy soluble en el agua acidulada; es destruida por los fermentos digestivos y por esta

causa no se administra por la vía digestiva.

Reacción de Biuret (Reacción de Piotrowsky)

El biuret se forma calentando la urea aproximadamente a 180°C

Fig.6. Transporte de Urea a Biuret.

Esta es una prueba general para proteínas y péptidos de cadena no menores a 3

aminoácidos, esta reacción es útil para seguir un proceso de hidrólisis proteínica, ya que

la reacción será negativa cuando la hidrólisis sea completa.

En soluciones fuertemente alcalinas, el sulfato de cobre puede formar un complejo del ión cobre en enlaces covalentes coordinados con los grupos amino de las proteínas formando un complejo de color violeta. Para formar el complejo se requieren al menos 2 grupos amino unidos mediante un enlace péptídico, por lo que la reacción sólo es positiva para péptidos o proteínas y no para aminoácidos solos. Los dipéptidos y los aminoácidos (excepto histidina, serina y treonina) no dan esta reacción. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.

Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalinonecesario para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopia ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+).

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MÉTODO DE LOWRY (NO SE REALIZARÁ EN LA PRÁCTICA)

El método de Lowry se basa en la reacción de las proteínas con el reactivo de

Folin-Ciocalteau dando un complejo coloreado. Este reactivo es una disolución de

tungstato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y ácido clorhídrico. El principal

constituyente del reactivo es el ácido fosfomolibdotúngstico, de color amarillo, que al ser

reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso, cuya

estructura se desconoce. Esta reacción es 100 veces más sensible que la determinación

por el método de Biuret en la cuantificación de proteínas. La intensidad del color depende

de la cantidad presente en las proteínas de estos aminoácidos aromáticos y será

proporcional a la concentración de proteínas en la disolución.

La concentración de una disolución problema puede calcularse interpolando el

valor obtenido de absorbancia en una recta de calibración trazada con valores conocidos

de concentración de una proteína y sus respectivas absorbancias a 750 nm ajustando el

aparato a cero con el blanco. Es un método muy usado para la cuantificación de

proteínas.

El mecanismo del proceso es el siguiente:

1) El Cu2+, en medio alcalino, forma un complejo con los enlaces peptídicos de las

proteínas. Los iones Cu2+, se unen a las proteínas formando complejos con los átomos de

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A 1 mL de cada solución

problema, añadirle 2 mL de

NaOH al 10 % y de 3 a 5

gotas del reactivo de biuret,

mezclarLa formación de un color

violáceo o la precipitación de

hidróxido cúprico será una

prueba positiva.

Si el color de la reacción no

es inmediatamente, dejar

reposar de 10 a 15 minutos.

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nitrógeno de los enlaces peptídicos, estos complejos Cu2+-proteína tienen un color azul

claro, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína,

exponiendo los residuos fenólicos.

2) Los grupos R de los residuos de tirosina y triptófano de las proteínas, se lleva a cabo la

reducción del reactivo de Folin-Ciocalteau, por los grupos fenólicos de los residuos de

tirosina presentes en la mayoría de las proteínas, actuando el cobre como catalizador;

inicialmente es un producto inestable, que se reduce para formar un compuesto

coloreado.

es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. Bajo condiciones alcalinas el Cu++ forma un complejo con los enlaces peptídicos de las proteínas y se reduce a Cu+. El Cu+ así como los grupos R de Tirosina, Triptofano y Cisteina reaccionan con el reactivo de Folin. Este reactivo reacciona primero produciendo un producto inestable que se reduce lentamente a azul de molibdeno/tungsteno esta reacción ocurre en medio ácido.Comentarios: aquellos agentes que acidifican las soluciones (por ejemplo: ácidos fuertes o buffers), los quelantes de Cu (por ej. EDTA) o los reductores de Cu (por ej.: mercaptoetanol, ditiotreitol, fenoles) serán interferentes de la reacción. Las proteínas producirán distintas intensidades de color dependiendo primariamente de su contenido de Tyr y Trp.

Fig.. 8 .Reacción de biuret.

REACTIVOS

• Lowry A: Na2CO3 al 2.0 % en NaOH

0.1N

• Lowry B: CuSO4 al 2 %.

• Lowry C: Tartrato Sodio-potasio ( KNaC4H4O6) al 2%

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• Reactivo de Folin-Ciocalteus: tungstato Na y molibdato sódico en PO4H3 y ClH

Se debe de preparar ´la solución D al momento, en la siguiente proporción: 30 ml Lowry

A, 0.3 ml Lowry B y 0.3 ml Lowry C.

Reacción de Ehrlich

El ácido sulfianílico diazotizado se condensa con el anillo fenólico de la tirosina e

imidazol, histidina para dar complejos coloridos de color rojo cereza, y que permite detectar

compuestos formados que se conocen como azo-compuestos.

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1) Se añaden 400 μl de

solución problema

diluida (1:100).

Mezclar y esperar 15 min a

temperatura ambiente.

Añadir a todos los tubos 200 μl de reactivo de Folin diluido en agua destilada 1/1 (vol/vol). Mezclar y esperar 30 min a temperatura ambiente.

Medir la absorbancia a 750

nm ajustando el

aparato a cero con un

blaco de reactivos

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PROCEDIMIENTO:

Reacción de Hopkins-Cole.

Implica la reacción del grupo indol del triptofano con el ácido glioxílico y las

proteínas que lo contienen, en presencia de ácido sulfúrico concentrado. La

positividad se reconoce por la aparición de un anillo color violeta-rojizo. El color

púrpura que se produce se debe a la condensación del anillo indol con el aldehído. Se

propone la siguiente reacción:

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A tubos de ensayo rotulados como: blanco y problemas. Agregue a cada tubo en el siguiente orden:

1 mL de ácido sulfanilico 0.5%

1 mL. de Nitrito de sodio, mezcle bien y deje en reposo durante 15 min.

Observe.

Posteriormente adicione 0.5 mL. de de NH4OH al 10%. Observe y anote los resultados.

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Bioquímica

.

Fig..9. Reacción de Hopkins-Cole..

Reacción para azufre de cisteína y cistina.

La cisteína y la cistina cuando se tratan en un medio de álcalis fuerte pueden formar

H2S que se detecta al hacerlo reaccionar con Pb formando un precipitado negro de PbS.

Este es uno de los R de las cadenas de proteínas más importantes de determinar, pues

proteínas más importantes de determinar, pues el ±SH cumple un papel determinante en

conformación de las proteínas y en su actividad biológica.

RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

Parte I

SOLUCIÓNES

REACCIÓN CON

LA

NINHIDRINA

(A.A. libres)

REACCIÓN

DE MILLON

REACCIÓN

XANTOPROTEI

CA

REACCIÓN DE

BIURET

REACCIÓN

DE

EHRILCH

REACCIÓN

DE

HOPKINS

COLE.

GELATINA No cambio

No tiene

Rosa

Positivo

Amarillo

traslúcido

Positivo

Violeta

Positivo

Naranja

/transpare

nte

negativo

PEPTONA Violeta

Si tiene

Naranja

Positivo

Amarillo

traslúcido

Positivo

Violeta

Positivo

Naranja

negativo

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ALBUMINA Violeta

Si tiene

Una parte

blanca y

otra roja

Positivo

Amarillo

Positivo

Violeta

Positivo

Naranjita

clara/

negativa

TIROSINA Amarilla

No tiene

Blanco

Negativo

No cambio

Negativo

Incoloro

Negativo

Amarilla

postivo

FENILALANINA Violeta

Si tiene

No cambio

Negativo

No cambio

Negativo

Azul

Negativo

Naranja/

negativo

CISTEINA No cambio

No tiene

Rojo

Positivo

Amarillo

Positivo

Azul

Negativo

pareja

No

cambio/

negativo

ARGININA No cambio

No tiene

No cambio

Negativo

No cambio

Negativo

Azul

Negativo

Rojo/

Positivo

AGUA No cambio

No tiene

No cambio

Negativo

No cambio

Negativo

Azul

Negativo

*Tabla 1

EFECTO POR SOLVENTES

La mayoría de las proteínas presentan un mínimo de solubilidad a un pH conocido

como punto isoeléctrico (pI), que es el valor del pH en el cual la carga neta de la proteína

es cero y no migra en un campo eléctrico, además la proteína presenta su máxima

viscosidad.

La acción de algunos solventes orgánicos como etanol (alcoholes), acetona

(cetonas) y éteres en una solución acuosa de proteína incrementan su tendencia a

precipitar, ya que disminuyen la constante dieléctrica del agua, desfavoreciendo la

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interacción agua-proteína y favoreciendo la interacción proteína--proteína, ocurriendo su

precipitación.

TUBO N° Vol. 1 2 3

Clara de huevo

filtrada dil (1:4)

(mL)3 3 3

SOLVENTE: (mL) ---- --- ---

HCl 0.1 M (mL) (mL) 1 --- ---

NaOH 0.1 M (mL) (mL)--- 1 ---

REGULADOR DE

ACETATOS 0.1 M

pH 4.7 ( mL)

(mL)

--- --- 1

DESCRIPCIÓN

DEL

EXPERIMENTO:

(mL) Se formaron burbujas en

la parte superior, es decir

una emulsión

Tambien se

formaron

burbujas pero

menos que en

la primera

Toda la

substancia se

opaco

ETANOL al 96%

(mL)

(mL) 3 3 3

Observación: Se formaron dos fases,

la de la parte superior,

organica, opaca y la

inferior que es

transparente

Se forman dos

fase, que no

son muy

visibles

porque una es

turbulenta y la

otra no, se le

agrego

Se formaron

dos fases una

blanca con

grumos

(proteínas) y

la otra medio

amarillenta

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fenoftaleina

para

distinguirlas y

la organica

quedo arriba

*Tabla 2.

Análisis de resultados:

La reacción del Millón se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molécula

proteica. Cualquier compuesto fenólico que no esté sustituido en la posición 3,5 como la

tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reacción. De estos

compuestos, sólo la tirosina está presente en las proteínas, de manera que sólo las

proteínas que tienen este aminoácido ofrecen resultados positivos.

En esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido (ácido nítrico del

reactivo) se condensan con el grupo fenólico formando un compuesto de color rojo ladrillo

rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgánicas en

gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Millón es precipitado y se vuelve

negativo, razón por la cual este reactivo no se usa para medir albúmina en orina .Debe

tomarse en cuenta que en el caso de que la solución a examinar sea muy alcalina, debe

ser previamente neutralizada, ya que el álcali precipitaría al ion mercurio en forma de

óxidos amarillos. Además, proteínas como la ovoalbúmina producen un precipitado blanco

que progresivamente por acción del calor se torna rojo.

Se realizó el primer experimento con la reacción de Millon, en todas las proteínas dio positiva, lo que indicó la presencia de un grupo hidroxifenilo en la molécula proteica excepto en la glicina debido a que este es un aminoácido. Se formaron soluciones rojas debido a que los compuestos mercúricos del reactivo se condensaron con el grupo fenólico de las proteínas.

En el segundo experimento (Biuret) también dio positivo para todas indicando que todas poseían 2 grupos carbamino unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno formando un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos provocando el cambio de coloración ya fuera violeta o rosado.

Para el tercer experimento (Xanproteico), dio negativo para el aminoácido ya que no es aromático y positivo para las proteínas por su grupo fenólico por la nitración del anillo

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bencénico presente en los residuos de aminoácidos de las proteínas obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo.

Con la reacción Xantoproteica, al calentar… la cisteína, la albúmina y la gelatina se pusieron color amarillo.Con la reacción de Ehlrich se dieron 2 fases… (se menciona primero la capa superior y después la capa inferior).En el experimento de precipitación por metales pesados se agrego cloruro de mercurio al 5% y observamos que se precipito porque cambio de color. Dé un color transparente a blanco con aspecto opaco espeso.

En el acetato de plomo 5% si se precipito en poco mas que el nitrato de plata pero menos que el cloruro de mercurio porque tomo un tono mas bajito, que con el cloruro de mercurio.

Con el nitrato de plata al 5% el cual se precipito pero no tanto como el cloruro de mercurio porque tomo un color blanco pero no tanto si no mas blanquizco- transparente.

Con el cloruro de bario no se precipito, pero se aclaró un poco

Con el cloruro de sodio no se precipito, pero se aclaró un poco

El agua fue nuestra muestra patrón, blanco.

En el caso del experimento efecto por solventes, en el tubo se agregó 3ml de clara de huevo, mas 2 mililitros de acido clorhídrico , y observamos que con lo primero añadido no se precipito , pero cuando agregamos etanol si se precipito y se separo en dos fases, la cual una era de color blanco y la otra mitad se formo un tono transparente.

Mientras que en el tubo dos agregamos por primera estancia un mililitro de hidróxido de sodio, el cual nos dio un resultado de burbujas , pero no cambio el color de nada , pero cuando agregamos el etanol se formaron dos fases , y cuando agregamos el etanol tampoco cambio , aunque como experimentación y para comprobar agregamos fenolftaleína nos pudimos dar cuenta que si había dos fases.

En nuestro tubo tres agregamos 3mL de clara de huevo y 1 mL de acetato regulador 0.1M con un pH 4.7 y se opaco nuestra muestra , pero cuando agregamos el etanol si hubo un precipitado porque se separo nuestra muestra en dos fases una blanca y la otro como babosa transparente y amarillosa.

Conclusiones:

Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa

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Page 21: PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS

Bioquímica

Se observaron algunas de las propiedades de las proteínas tanto físicas como fisicoquímicas, así como también las reacciones específicas para cada aminoácido que las constituye.

Las reacciones coloridas como por ejemplo la reacción de millón son sirve para identificar las proteínas formadas por grupos fenólicos y también proteínas que contengan tirosina.+

Las propiedades bioquímicas dependieron fundamentalmente del peso molecular de su carga eléctrica y de la conformación que adopte la molécula, por lo cuál se pueden interpretar los resultados de acuerdo a las características que se observen como por ejemplo la precipitación o turbidez que experimente la proteína en la reacción.

Bibliografía:

Rendina, G. 1974. Técnicas de bioquímica aplicada. Ed. Latinoamericaca. México Argentina España pp 59-

63

Stryer, L. 1993. Bioquimica 3 ed. Tomo I. Ed. Reverté Barcelona Bogóta Buenos Aires México pp:15-70.

BOHINSKI. 1991 Bioquímica. 5ed., Pearson. México.

Van Holde Mathews,. 2004 Bioquímica. 3ª ed. Pearson. España

Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa

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