Universidad Nacional San Luis Gonzaga De IcaFacultad De Obstetricia

prctica de laboratorio n 04: ACCION de la lipasa pancreatica en la hidrolisis de las grasas

ASIGNATURA: BIOQUMICADOCENTE: CHACALTANA RAMOS, LUZ PARI OLARTE, BERTHA CICLO: IIISECCIN: BALUMNAS: AYBAR HUAMN, MARA BAUTISTA HUAMANI DEYBI BERNEDO BERNEDO, ELENY CARRASCO HUAMN, ANGELICA CARTOLN IPARRAGUIRRE, LUZ VICTORIA PAREDES QUISPE, MIRELLA SNCHEZ RAMOS, ANIE YANCE LA ROSA, STEPHANYICA - PERU2015

ACCIN DE LA LIPASA PANCREATICA EN LA HIDROLISIS DE LAS GRASAS

I. OBJETIVOS:

1. Demostrar experimentalmente la hidrolisis enzimtica de los triglicridos.1. Realizaremos reacciones qumicas y pruebas caractersticas para identificar la presencia de una o varias biomolculas en una mezcla para cuantificar alguna de ellas.1. Observar cmo es que acta y que efectos trae las sales biliares sobre el aceite.1. Determinar los cidos grasos liberados por accin de la pancreatina.1. Aplicacin y manejo adecuado de tcnicas de laboratorio para la identificacin, aislamiento de enzimas y determinacin de la actividad enzimtica.1. Entender de forma prctica una parte importante del proceso digestivo que tiene lugar en el intestino delgado en el cual la lipasa pancretica consigue la hidrolisis de triacilgliceros a cidos grasos.

II. MARCO TEORICO

Emulsin de aceite de pepitaEs una mezcla de dos lquidos inmiscibles de manera ms o menos homognea. Un lquido (la fase dispersa) es dispersado en otro (la fase continua o fase dispersante). Muchas emulsiones son de aceite/agua, con grasas alimenticias. El proceso en el que se preparan las emulsiones se llama emulsificacin.Las emulsiones son parte de una clase ms genrica de sistemas de dos fases de materia llamada coloides. A pesar que el trmino coloide y emulsin son usados a veces de manera intercambiable, las emulsiones tienden a implicar que tanto la fase dispersa como la continua son lquidos.Buffer:Un tampn, buffer, solucin amortiguadora o solucin reguladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un cido dbil y su base conjugada, es decir, sales hidrolticamente activas. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolucin frente a la adicin de cantidades relativamente pequeas de cidos o bases fuertes. Este hecho es de vital importancia, ya que meramente con un leve cambio en la concentracin de hidrogeniones en la clula se puede producir un paro en la actividad de las enzimas.

Sales biliares:Son las sales de los cidos biliares, pueden ser sales sdicas o potsicas. Las sales biliares son la forma en que el cuerpo guarda los cidos biliares en la vescula biliar y son secretados al intestino para la digestin de lpidos.Los lpidos son apolares y necesitan de las sales biliares para estabilizar la emulsin y para facilitar el contacto entre enzima y sustrato, lo que permite la metabolizacin de los lpidos y su absorcin en la pared intestinal.Sales biliares emulsionan las grasas y vitaminas liposolubles (A, E y D), facilitando su absorcin intestinal.PancreatinaLa pancreatina es una mezcla de varias enzimas digestivas producidas por las clulas exocrinas del pncreas. Esta mezcla se utiliza para tratar condiciones en las que secreciones pancreticas son deficientes, tales como pancreatectoma quirrgica, pancreatitis y fibrosis qustica. La pancreatina es a veces llamado "cido pancretico", a pesar de que no es ni una sola sustancia qumica ni un cido.La pancreatina contiene el pncreas enzimas de tripsina, amilasa y lipasa. La tripsina se encuentra en pancreatina funciona para hidrolizar las protenas en oligopptidos; amilasa hidroliza almidones en oligosacridos y el disacrido maltosa; y lipasa hidroliza los triglicridos en cidos grasos y gliceroles. La pancreatina es un suplemento de la enzima eficaz para la sustitucin de enzimas pancreticas que faltan, y ayuda en la digestin de los alimentos en los casos de insuficiencia pancretica.

III. INSTRUMENTOS

TUBOS DE ENSAYOUtilizamos para contener y combinar todos los reactivos y luego ser llevados a bao maria

PIPETASMediante la absorcin mediremos 2ml de aceite de pepita en cada tubo, agregar buffer con ph8 en cada tubo de ensayo, las sales biliares con sus respectivas medida para cada tubo; y tambin para agregar la pancreatina

REJILLASPara colocar los tubos de ensayo, y para sostener los tubos de ensayo cuando son llevados a bao maria

MATRAZRecipiente donde colocamos el Aceite de pepita, las sales biliares y la pancreatina

BAO MARIASe lleva los 4 tubos de ensayo a bao maria a 37 por 20 a 30 min

IV. PROCEDIMIENTO:

1. Rotular cuatro tubos de ensayo.

2. Colocar 2 ml de aceite de pepita en cada tubo.

3. Agregar buffer con pH 8: 1er tubo: 8 ml 2do tubo: 6 ml 3er tubo: 3 ml 4to tubo: 1 ml

4. Agregar sales biliares: 2do tubo: 2 ml 3er tubo: 1 ml 4to tubo: 2 ml

5. Agitar vigorosamente en un lapso de 2 a 3 minutos.

6. Agregar la pancreatina: 3er tubo: 5 ml 4to tubo: 5 ml

7. Agitar los 4 tubos de 2 a 3 minutos.

8. Llevar al bao Mara 37C por 20 o 30 minutos.

9. Titulamos con NaOH 1N, gota a gota hasta que aparezca un color rosa plido. 1er tubo: 4 gotas 2do tubo: 7 gotas 3er tubo: 6 gotas 4to tubo: 6 gotas

10. Agitar cada tubo y controlar el tiempo que tarda en formar la capa de aceite. 1er tubo: 5 s 2do tubo: 20 s 3er tubo: 33 s 4to tubo: 58 s

RESULTADOS:

1. Interpretar la solubilidad de los tubos 1 y 2 comparando el grosor de la capa de aceite y el tiempo en que demora en forma dicha capa.El color de la capa del tubo 1 es rosado, a comparacin del tubo 2 que es un rosa plido, esto se debe a que en el tubo 1 solo contiene aceite de pepita neutralizado que es una mezcla de dos lquidos en diferentes fases; y El buffer mantiene estable el pH de una disolucin frente a la adicin de cantidades relativamente pequeas de cidos o bases fuertes; en cambio en el tubo 2 contiene aceite de pepita, buffer, sales biliares, lo que hace su diferencia es que, las Sales biliares emulsionan las grasas.Producto de la diferencia de reactivos hace que la capa de aceite demore:1er tubo: 5 s2do tubo: 20 s

2. Los tubos 1,2,3,4 titular con NaOH 1N, hasta que aparezca un color rosa plido (indique cuantas gotas gasto en cada tubo Por qu?)

3. Interprete los resultados de cada tubo.

4. Explique el fundamento del mtodo, importancia. Son el mtodo de emulsin y de titulacinEs importante porque la con la Titulacin hemos podido determinar la cantidad de pancreatina que se encuentra en el tubo 3 y 4La titulacin o valoracin de soluciones tiene como principal objetivo determinar la concentracin de una solucin cida o bsica desconocida. Denominada solucin analizada. Esto se logra a travs de la adicin de pequeos volmenes de una solucin cida o bsica de concentracin conocida - la solucin valoradaLa emulsin la hemos utilizado para mezclar el aceite de pepita con el buffer con las sales y la pancreatina al mezclarlo todo para luego llevarlo a bao maraLa emulsin es un proceso que consiste en la mezcla de dos lquidos diferentes que no se puedan mezclar, es decir, que sean inmiscibles entre s. Uno de los lquidos se encontrar formando la fase, conocida con el nombre de dispersa, que se encontrar constituida por el lquido que ser dispersado dentro del otro lquido que conforma la mezcla, el cual ser el formador de la fase conocida como, continua, o tambin, dispersante.

5. Qu funcin cumple las sales biliares?

Las sales biliares actan hasta cierto punto como un detergente, ayudando a emulsionar las grasas y participan as en su absorcin en el intestino delgado, por lo que tienen un papel importante en la absorcin de vitaminas D, E, K y A que se encuentra en la grasa.Adems de la funcin digestiva sirven para la eliminacin de bilirrubina, un producto de degradacin de lahemoglobina, que da el color tpico, tambin neutralizan el exceso de acidez en el estmago antes de alcanzar el leon, la seccin final del intestino delgado.Importante para la salud es tambin el efecto bactericida de microbios nocivos, otra funcin de las sales biliares.

6. Qu papel desempea la lipasa pancretica?L alipasa pancreticaes unaenzimaque se produce en elpncreasy se secreta en elintestino delgado. Ayuda a descomponer las grasas (lpidos) que comemos para convertirlas encidos grasosyglicerol. Fracciona las grasas (triglicridos) a componentes ms simples ( cidos grasos)que pueden absorberse en el intestino delgado El metabolizar las grasasproporciona energa durante las horas de ayuno. La lipasa selibera en el torrente sanguneo cuando las clulas pancreticas estn daadas.

V. DATOS Y OBSERVACIONES

Que el buffer es una sustancia de sales hidroliticamente activas que se disuelven en el agua Que en el tubo dos a comparacin de los dems tubos el aceite de pepita neutralizado se visualiz abajo a comparacin de los dems q se presentaba arriba Cuando realizamos la titulacin era necesario agitar las soluciones para as poder notar la diferencia en la formacin de la capa de aceite y tambin analizbamos el tiempo.

VI. CONCLUSIONES

Se pudo comprobar la accin de la pancreatina y las sales biliares que en conjunto son capaces de hidrolizar a los cidos grasos. Que las sales biliares participan en la digestin y absorcin de los lpidos Los lpidos son compuestos de gran importancia energtica ya que constituyen la reserva calrica, que se acumulan en el tejido adiposo.

VII. ANEXOS

4