Preinforme ICB690.pdf

PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DE VALPARASO

FACULTAD DE INGENIERA

ESCUELA DE INGENIERA BIOQUMICA

ICB 690 Laboratorio de Bioprocesos

PRODUCCIN DE LACTASA A ESCALA PILOTO MEDIANTE FERMENTACIN

BATCH DE Kluyveromyces marxianus

Marzo 2015

Claudia Caroca.

Gabriel Thun.

Mauro Torres

Alejandro Zarria

Irene Martinez

Estela Tapia

Integrantes:

Profesores:

RESUMEN

Esta investigacin se enfocar principalmente en monitorear el crecimiento en cultivo sumergido

de la cepa Kluyveromyces marxianus a escala piloto con la finalidad de producir y extraer la enzima

lctica B-galactosidasa.

Se realizaran dos fermentaciones sucesivas en modalidad por lotes, bajo las siguientes

condiciones: pH 4,7, manteniendo una temperatura entre 30-35C, agitacin de 200 rpm y un

caudal de aire de 1 vvm. La primera etapa de la fermentacin, conocida como etapa de

propagacin, se realizar en un Biorreactor Biolafitte de un volumen til de 15 [l] llegando a una

concentracin de 10 [g/l]. La segunda etapa de la fermentacin, conocida como fermentacin

piloto, se llevar a cabo en un fermentador de 120 [l] hasta alcanzar una concentracin de 10 [g/l].

Una vez alcanzada la concentracin deseada, el caldo de cultivo ser centrifugado con el fin de

obtener una nueva concentracin de 120 [g/l]. Posteriormente, mediante el rompimiento de las

clulas por friccin en un molino de bolas en modalidad continua se extraer la lactasa y se medir

la actividad enzimtica de esta enzima. Durante el proceso se realizarn distintas mediciones:

Mtodo de turbidimetra para determinacin de biomasa, azucares reductores con DNS para

medicin de lactosa, proteina total por mtodo de Bradford y actividad enzimtica utilizando el

mtodo ONPG.

INDICE GENERAL

CAPTULO 1

INTRODUCCIN

En la actualidad, el desarrollo de nuevos procesos industriales, en especial en la industria

alimentaria, ha permitido un enorme desarrollo en la produccin de enzimas. La formulacin de

enzimas puede ser tanto qumica como biolgica, siendo la ltima una variante importante en la

produccin masiva ya que el mercado es cada vez ms exigente con producir agentes amigables

con el medio ambiente.

La produccin de enzimas hace referencia a una serie de procesos agrupados en varias etapas,

siendo las bsicas la sntesis celular de la enzima, la recuperacin o aislamiento de la enzima

(incluye la separacin slido-liquido o clarificacin, extraccin y concentracin) y la purificacin en

s de la enzima (Olivares, 1996). La produccin de enzimas depende del origen o fuente de la

enzima y del fin de su uso o aplicacin.

La enzima producida debe ser aislada del organismo productor. Para ello, las operaciones de

recuperacin, que a diferencia de la produccin, no dependen del origen de la enzima sino de su

localizacin extracelular o intracelular, permiten obtener un extracto enzimtico crudo capaz de

ser purificado. En el caso de una enzima intracelular, la extraccin involucra la disrupcin o

permeabilizacin de las membranas celulares y una vez obtenido el extracto crudo, se procede,

por lo general, a liberarlo de contaminantes principalmente proteicos, es decir, a purificarlo

(Olivares, 1996).

La industria lctea es uno de los nichos que ms utiliza enzima en la industria de los alimentos,

desde la produccin de quesos hasta la deslactacin de la leche. En este ltimo caso, la enzima -

galactosidasa, ms conocida como lactasa, es usada ampliamente para degradar la lactosa en

glucosa y galactosa.

El presente trabajo, se basa en la produccin de la b-galactosidasa a nivel de escala piloto usando

la levadura Kluyveromyces marxianus con lactosa como fuente de carbono y energa. Para ello se

llevar a cabo el proceso desde la fermentacin hasta la extraccin de la enzima, permitiendo

determinar el rendimiento de cada etapa y el rendimiento global del proceso.

Objetivos

Objetivo General

Produccin de la enzima intracelular b-galactosidasa mediante una fermentacin por lotes

a escala piloto, utilizando la levadura Kluyveromyces Marxianus.

Objetivo especfico

Planificar una fermentacin por lotes de Kluyveromyces marxianus a escala piloto.

Calcular de los parmetros de crecimiento de Kluyveromyces marxianus, incluyendo

velocidad especfica de crecimiento, productividad de biomasa y producto as como

rendimiento de sustrato en biomasa y producto.

CAPTULO 2

REVISION BIBLIOGRAFICA

Kluyveromyces marxianus

Kluyveromyces marxianus es una especie de hongo del gnero Kluyveromyces que tiene la

capacidad de generar energa a travs de la fosforilacin oxidativa o por fermentacin a etanol.

Una caracterstica distintiva de esta levadura, es la capacidad de asimilar y utilizar la lactosa como

fuente de carbono, debido a que produce la enzima - galactosidasa (Lactasa), exclusivamente

intracelular. Otras caractersticas relevantes, es la capacidad de metabolizar una gran variedad de

sustratos, puede crecer en amplio rango de temperatura (20-39C) y a un pH ptimo entre los 6 y

7 (Mendoza , 2013).

En estudios anteriores se ha demostrado la obtencin de biomasa y b-galactosidasa a partir de

K.Marxianus a bajas concentraciones de lactosa, con rendimientos satisfactorios. (Araujo et al,

2010). Cabe destacar que la produccin de -galactosidasas por parte de K. Marxianus se ve

fuertemente inhibida por altas concentraciones de calcio en la leche, pequeas concentraciones

de sodio, la presencia de galactosa y glucosa. Tambin se ha determinado que el pH ptimo para la

fermentacin de K. marxianus es entre 4,0 -5,0 (Reyes y Acevedo, 1989). Mientras que el rango de

temperaturas en donde la actividad es ptima, vara entre 30C y 39C (Acosta et al, 2012).

-D-Galactosidasa (lactasa)

La b-galactosidasa hidroliza la lactosa hasta glucosa y galactosa. Su actividad depende de 6 grupos

sulfhdricos que posee en su estructura y a medida que se van oxidando a enlaces de disulfuro, la

enzima va disminuyendo su actividad (Jimnez, 2003).

Las caractersticas y propiedades de esta enzima varan dependiendo de la fuente de donde se

obtengan, para el caso de las de origen fngico, estas presentan mayor estabilidad a altas

temperaturas comparadas con las que se obtienen de bacterias (son ms termolbiles). La

temperatura ptima de esta enzima es alrededor de los 37C. En el caso del pH, mientras el valor

ptimo para la b-galactosidasa obtenida de levaduras y bacterias es cercano a 7.0, la actividad

decae a medida que disminuye el pH, perdiendo completamente su actividad a un pH de 4.5.

Hoy en da, esta enzima es de gran inters nutricional, tecnolgico y ambiental. Nutricional,

porque un porcentaje alto de la poblacin mundial, en torno al 70% (Chitunda, 2001) o ms del

70% (Ladero y otros, 2002) presenta problemas para metabolizar la lactosa de la leche y de los

productos lcteos, ello debido a las deficiencias de lactasa intestinal (Berka et al,2004), lo cual

finalmente provoca una mala absorcin e intolerancia (Montalto et al, 2005). Es en el campo

tecnolgico en donde est ms extendido el uso de la b-galactosidasa; su uso en la hidrlisis de la

lactosa en la leche, en el suero de leche y en sus respectivos filtrados sigue siendo una de sus ms

prometedoras aplicaciones en la industria alimenticia (Barberis y Segovia, 2002; Rodrguez et al,

2006). La b-galactosidasa tambin es de inters ambiental porque puede ser utilizada en la

eliminacin de la lactosa del suero de leche y sus filtrados, residuos de la industria quesera, que,

generalmente, son descargados a ros y desages (Ramrez y Rivas, 2003), causando problemas

ambientales debido a que presentan una alta demanda de oxgeno (Chitunda, 2001).

Produccin de b-galactosidasa

La -galactosidasa se encuentra bastante distribuida en la naturaleza (Fisher, 1995), es posible

encontrarla en plantas (ElTanboly, 2001), animales y microorganismos (Chitunda, 2001).

Segn la Administracin Estadounidense de Alimentos y Medicamentos (FDA), los siguientes

organismos son considerado GRAS (Generalmente reconocido como seguro) para la produccin a

nivel biotecnolgico de la -galactosidasa: Kluyveromyces sp (Golubev y Golubev, 2004), K. lactis

(Becerra, 1998; Becerra et al, 2004; Bridiau et al, 2006; Chockchaisawasdee y otros, 2005; Ramrez

y Rivas, 2003; Rodrguez et al., 2006), K. fragilis (Ladero et al., 2002) y K. marxianus (Lukondeh et

al, 2005; O'connell y Walsh, 2007), y destacan como buenos productores -galactosidasa tanto

extracelular como intracelular.

CAPTULO 3

METODOLOGA ANALTICA Y EXPERIMENTAL

3.1 METODOLOGIA ANALITICA

Tabla 3.1 Mtodos analticos

Mtodo Objetivo Descripcin

1. Turbidimetra Determinar

concentracin de

Biomasa

Este mtodo mide la reduccin de la transmisin

de la luz debido a las partculas en suspensin. La

absorbancia es directamente proporcional al peso

seco, independiente del tamao celular. Para la

determinar la concentracin de biomasa de K.

marxianus, la longitud de onda se mide a 650 nm.

2. Mtodo de DNS Determinar la

concentracin de

Lactosa

Este mtodo se basa en la medicin de los

azucares reductores libres por reduccin del

cido dinitrosalicilico (DNS), formando un

compuesto nitroaminado de color amarillo. La

densidad ptica, medida a 540 nm usando un

espectrofotmetro, es proporcional a la

concentracin de grupos reductores.

3. Mtodo de

Bradford

Determinar la

concentracin de

protenas

Este mtodo se basa en la unin del colorante

Comassie Blue G-250 a las protenas. El colorante,

en solucin cida, existe en dos formas una azul y

otra naranja. Las protenas se unen a la forma

azul para formar un complejo protena-colorante

con un coeficiente de extincin mayor que el

colorante libre. Esto permite determinar por

espectofotometra a 595 nm la concentracin de

protenas en solucin.

4. Mtodo del reactivo

ONPG

Determinar la

actividad enzimtica

En presencia de clulas galactosidasa positivas, el

reactivo incoloro ONPG ingresa al interior de la

clula sin la ayuda de la -galactsido permeasa,

donde es hidrolizado y libera un compuesto

cromgeno amarillo, -nitrofenol (ONP), la

reaccin de -galactosidasa positiva se basa en la

deteccin de ONP (MacFaddin, 2003).

3.2 METODOLOGA EXPERIMENTAL

3.2.1 Cepa, Condiciones y Desarrollo del cultivo

Para el cultivo en el reactor de propagacin y reactor piloto se utilizar una cepa Kluveromyces

marxianus productora de -galactosidasa, obtenida del cepario de la Escuela de Ingeniera

Bioqumica. En el caso del reactor de propagacin, se utilizar el reactor Constructeur Gourdon

Biolafitte con 10 L de medio de cultivo, se estima llegar a una concentracin de 10 [g/l] en este

reactor. Mientras que a escala piloto, se usar el reactor Piloto con 100 L de medio de cultivo.

Ambos reactores operarn bajo las siguientes condiciones de operacin: 30C, pH 4.7, 1 vvm y 180

rpm.

Adicionalmente, se estimaron los tiempos de cultivo para ambos reactores. Para ello se consider

una velocidad especfica de crecimiento de 0.4 h-1 y una concentracin de biomasa inicial de 0.1

g/L y 1 g/L para el reactor Biolafitte y Piloto, respectivamente. Cabe destacar que a lo largo de la

fermentacin a escala piloto, se realizar una muestra a tiempo cero y muestras cada 1 hora para

determinar la concentracin de biomasa y sustrato as como la actividad enzimtica de lactasa

intracelular.

3.2.2 Proceso Downstream

Una vez obtenida una concentracin celular de 10 g/l en el fermentador piloto, se proceder a

concentrar el caldo de cultivo por medio de una centrifuga de discos Westfalia Separator SA 1-01-

175, en modalidad continua. De esta separacin se obtendr un clarificado y la pasta celular que

posee la enzima lactasa (enzima intracelular). Posteriormente, se realizar la extraccin de la

enzima lactasa por medio del rompimiento celular por mtodos mecnicos a travs de un molino

de bolas en modalidad continua. Una vez extrada la enzima, se separar de los restos celulares

gracias a una segunda centrifugacin. Se calcular la actividad enzimtica de la enzima y medicin

de protenas. En la Figura X se muestra el diagrama de flujo desde el proceso de esterilizacin de

materiales hasta la extraccin de la enzima intracelular -galactosidasa.

Durante el proceso, se realizarn una serie de mediciones para determinar concentraciones

celulares, concentraciones de sustratos, actividades enzimticas y protenas totales, lo cual se

sintetiza en la tabla 3.1.

Tabla 3.2 Toma de muestras y mediciones.

Lugar de medicin

Mediciones

[Biomasa] [g/L]

[Sustrato] [g/L]

Actividad enzimtica [UI/g]

Protenas totales [g]

Antes de Fermentacin en R.B.

Antes de Fermentacin en B.P.

Antes de Centrifugacin

Antes de Molienda

Despus de Centrifugacin final

3.2.3 Medio de cultivo

Tanto para el cultivo de propagacin como para la planta piloto, el medio de cultivo fue diseado a

partir de los rendimientos de cada sustrato en biomasa de cada nutriente que compone el medio

de cultivo (Anexo A). En la tabla 3.3 se especifican las cantidades de nutrientes por volumen til de

reactor.

Tabla 3.3 Masas de reactivos en gramos para la preparacin del medio de cultivo

Compuesto Reactor de Propagacin Reactor Piloto

Lactosa, [g] 294.2 2650

(NH4)2SO4, [g] 47.1 425

MgSO47H2O, [g] 3.9 37.5

K2HPO4, [g] 1.2 107.5

Ext. Levadura, [g] 73.6 662.5

EsterilizacinPor autoclave

Propagacin (R.B)

V:10[l]

Fermentacin piloto (R.P)

V:100[l]

Centrifugacin X [l/h]

10 [g/l] Biomasa

Molienda12[l/h]

Concentrado 120 [g/l]

Centrifugacin

Medicin de actividad

Extracto enzimtico

Inculo V:1 [l]

Medio de cultivo V:9 [l]

Determinacin de: Biomasa SustratoSe realizar luego de inocular y al finalizar la fermentacin.

Esterilizacin de: Reactor de Propagacin Medio de cultivo Pipeteros con pipetas Mangueras y filtro de aire Embudo para Medio cultivo

EsterilizacinPor caldera

Medio de cultivo V:90 [l]

Esterilizacin de: Reactor de reactor piloto Medio de cultivo

Determinacin de: Biomasa (c/u hora) Sustrato (c/u hora) Act Enz. Intracelular (Al

finalizar la fermentacin)

Proceder a: Limpieza antes y despus

de la operacin. Construccin curva de

operacin centrfuga.

Clarificado

Fragmentos celulares

Determinacin de: Act. Enz. De extracto

enzimtico Protenas totales

Figura A. 1 Diagrama de Flujo

3.3.3 Solucin tampn citrato y hidrxido de sodio 8 M

En el ANEXO C se especifican los clculos para determinar la masa correspondiente de cada

solucin.

En el caso del tampn citrato en el reactor Biolafitte, se necesitarn agregar 132 g de NaOH y

428.1 g de cido ctrico a los 10 L de medio de cultivo del reactor.

En el caso de la solucin de hidrxido de sodio a utilizar en el reactor piloto, se calcul que se

necesitarn 0,65 L de solucin base para preparar una solucin 8 M.

PLAN DE TRABAJO

Carta Gantt

Lunes

Preparacin de materiales, soluciones y pre-inculo

8 9 10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

Encargado

Recoleccin y limpieza de materiales y reactivos

Mauro-Claudia

Preparacin y secado de capachos para curva de calibrado de biomasa

Preparacin de curva de calibrado DNS

Preparacin de curva de calibrado Bradford

Preparacin solucin NaOH

Preparacin de la solucin tampn citrato

Preparacin de solucin antiespumante

Esterilizacin de medios de cultivos (matraz) y materiales

Thun-Claudia

Martes

Esterilizacin y preparacin del inculo

8 9 10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

Encargado

Recoleccin y limpieza de equipos y materiales

Mauro-Claudia Preparacin del material para autoclavar

Preparacin del medio de cultivo (Matraz, Biolafite, P. Piloto)

Esterilizacin de medios de cultivos, equipos, materiales y soluciones

Thun-Alej.

Preparacin curva de calibrado Biomasa

Puesta en marcha R. B. para propagacin de incoulo

Medicin de biomasa y sustrato en Reactor

Miercoles

Fermentacin en R. Piloto

8 9 10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

Encargado

Medicin de biomasa y sustrato en Reactor

Claudia-Aleja

Preparacin bomba

Preparacin de R. Piloto

Inoculacin e incubacin del R.Piloto

Medicin de biomasa y sustrato en R. Piloto Thun-

Mauro

Control de pH y temperatura en R. Piloto

Medicin de actividad enzimtica

Jueves

Extraccin de la enzima

8 9 10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

Encargado

Preparacin Bomba

Mauro-Ale

Construccin curva de operacin de la centrfuga

Centrifugacin Continua

Preparacin del Molino

Toma de muestra de actividad enzimtica intracelular

Claudia-Thun

Medicin de biomasa

Molienda

Centrifugacin

Medicin de actividad enzimtica y protena total

Ficha de Registro de Actividades

Curva de Calibrado Biomasa Hora Fecha Encargado(a) Obs

Preparar de capachos

Secar de capachos a 105C por 24 hrs

Centrifugar del cultivo

Resuspender con NaCl 2,5 mM + centrifugacin x3

Resuspender en 5mL de agua desionizada

Pesar capachos secos antes

Secadar de suspensin en capachos a 105 por 24 hrs

Diluir 1-10 con 2,5 mM NaCl

Preparar del blanco con 2,5 mM NaCl

Medir de absorbancia a 650 nm

Limpiar materiales

Pesar capachos secos

Elaborar curva de calibrado

Curva de calibrado DNS Hora Fecha Encargado(a)

Lote React

Preparacin de la solucin

DNS

Aadir 50 mL de Agua

Aadir 1,6 g de NaOH

Aadir 30 g de tartrato de sodio y potasio

Agitar en placa calefactora

Aadir 1 g de reactivo DNS

Aforar a 100 mL

Transferir a frasco color mbar

Preparacin de la curva de calibrado para

lactosa

Aadir agua

Aadir lactosa

Diluirs 1-10 con agua desionizada

Preparar del blanco con agua desionizada

Mezclar 1 mL solucin + 1mL DNS

Calentar a ebullicin por 5 min

Aadir 10 mL de Agua

Medir absorbancia (540 nm)

Elaborar curva de calibrado

Curva de calibrado Bradford Hora Fecha Encargado(a)

Lote React

Preparacin de la solucin

Bradford

Aadir 50 mL etanol al 95%

Aadir 0,1 g azul brillante de comassie G-250

Aadir 100 mL de c. fosfrico al 85%

Aforar a 1 L con agua destilada

Filtrar por gravedad

Sellar el recipiente (indicar etiqueta)

Elaboracin curva de calibrado

Aadir 10 mL tampn fosfato 0,1 M a pH 6,6

Aadir 10 mg de albmina

Diluir 1-10 con tampn fosfato

Preparar del blanco con tampn fosfato

Mezclar 500 L solucin + 5mL de Bradford

Medir absorbancias (595 nm)

Preparacin de soluciones Masa Volumen Encargado(a)

Lote React

Medio de cultivo

(Inculo)

Solucin de Lactosa

Solucin MgSO4 7H2O

Solucin (NH4 )2SO4

Solucin KH2PO4

Solucin Extracto de Levadura

Tampn cido Ctrico

citrato

NaOH

Preparacin antiespumante

solucin antiespumante 10% v/v

Medio de cultivo (Piloto)

Solucin de Lactosa

Solucin MgSO4 7H2O

Solucin (NH4 )2SO4

Solucin KH2PO4

Solucin Extracto de Levadura

Preparacin solucin NaOH

Preparacin de Equipos Hora Fecha Encargado(a) Obs

Material para Autoclavar

Acondicionamiento de Material a esterilizar

Conectar mangueras en el reactor

Conectar manguera de salida del autoclave al reactor

Dejar vlvula abierta

Revisar el nivel del agua del autoclave

Colocar material a esterilizar en el autoclave

Encender botn rojo

Esperar a que salga vapor saturado por mangueras

Cerrar vlvula del autoclave

Esperar que la presin aumente hasta 1 atm

Apagar y esperar a que baje la presin

Retirar material con guantes

Eterilizacin de reactor

piloto

Revisar nivel de agua en la sala de calderas

Abrir vlvulas de flujo de agua hacia la caldera

Encender panel de la caldera

Esperar que salga vapor saturado por el despiche

Cerrar la vlvula

Abrir vlvula de salida del manifold y dirigir flujo de vapor hacia entrada de aire del R.P.

Manetener cerrada la vlvula hacia el rotmetro

Dejar abiertas las vlvulas de toma de muestra y salida de aire

Supervisar que la presin no supere los 0,5 psi

Esperar 20 min

Cerrar vlvula de salida de aire

Cerrar vlvula de toma de muestra

Cerrar vlvula de salida del manifold

Esterilizacin Agregar medio de cultivo bajo mechero

Medio de cultivo (R.

Piloto)

Abrir paso de vapor hacia el serpentn y vlvula de salida de trampa de vapor

Encender motor del R.P.desde el computador (180 rpm)

Esperar a que la T alcance los 105C y contar 45 min

Supervisar que la presin no supere los 0,5 psi

Cerrar vlvula de ingreso de vapor al sistema de fermentacin

Apagar el motor

Apagar caldera y cerrar las vlvulas de paso de agua hacia la caldera

Operacin de Equipos Hora Fecha Encargado(a) Obs

Operacin de Reactor

Conectar filtro en la entrada de aire del Bioreactor

Sumergir manguera de salida de aire en solucin de sulfato de cobre

Adicionar medio de cultivo

Poner en marcha el control de T

Encender motor (180 rpm-3 Hz)

Conectar rotmetro a la entrada de aire y airear a 1 vvm

Esperar que la T alcance los 30C

Inocular

Dejar fermentacin por 14 h

Operacin de Reactor Piloto

Sumergir manguera de salida de aire en solucin de sulfato de cobre

Abrir la vlvula

Abrir el programa "Adquisicin 2011"

Encender panel de control

Encender motor (180 rpm)

Abrir vlvula de aire para mantener a 1 vvm

Enfriar Biorreactor a 30C mediante el serpentn

Inocular

Operacin de la centrfuga

de discos

Limpiar

Construir curva de operacin a 3 flujos diferentes

Determinar concentracin del caldo de cultivo

Limpiar

Operacin del molino

Limpiar

Calibrar Bomba en 12 [L/h]

Determinar el volumen de bolitas de vidrio

Encender del sistema de refrigeracin

Molienda continua (3200 rpm)

Limpiar

Ficha de Registro de Mediciones

Biomasa

Hora Tiempo Fd Abs 1 Abs 2 Concentracin Encargado(a)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Sustrato

Hora Tiempo Fd Abs 1 Abs 2 Concentracin Encargado(a)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Temperatura y pH

Hora Tiempo T pH Obs Encargado(a)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Actividad enzimtica Proteina

1 2 3

Lectura de absorbancia

Obs

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ANEXO A

DISEO DEL MEDIO DE CULTIVO

Frmula

= ( )

( 0)

Dnde:

YX/S = Rendimiento del sustrato X en biomasa (g biomasa/ g sustrato)

Xf = Concentracin final de clulas

Xi = Concentracin inicial de clulas

S0 = Concentracin inicial de sustrato

Sf = Concentracin final de sustrato

Ejemplo de clculo para la lactosa

0,34 = (10 0,1)

S0

Luego,

S0 = 29,12 (g/L)

Consideraciones,

X0 (R. Propagacin) = 0.1 g/L

X0 (R. Piloto) = 1 g/L

V (R. Propagacin) =10 L

V (R. Piloto) = 100 L

Extracto de levadura 20% de la cantidad de lactosa

Para todos los nutrientes se le aadi un 25% a los mnimos requerimientos calculados.

Concentracin en medio de cultivo (g/L)

Compuesto Yx/s Biolafitte Fermentador piloto

Lactosa 0.34 29.12 26.47

(NH4)2SO4 2.65 4.48 4.07

MgSO47H2O 32.53 0.36 0.33

K2HPO4 10.48 1.13 1.03

Extracto levadura 6.98 6.35

ANEXO B

PREPARACIN DE SOLUCIN TAMPN DE CITRATO

Frmula

+ +

= [+][][] () = ([][]) + ([+])

= + ([][])

Dnde:

= Constante de disociacin del cido

[]= Concentracin molar del cido

[]= Concentracin molar de la base conjugada del cido

pH= - ([+])

pKa= - ()

Clculo

Para un volumen de 10 L se obtiene una masa de:

3 = 0,223 [] 10[] 192[] = 428.1 [ ]

= 0,33 [] 10[] 40[] = 132 [ ]

Consideraciones,

Se deben considerar todas las formas ionizadas del cido ctrico para hacer los clculos.

Para formar 2, se necesitan 0,22 M de NaOH, y para obtener 0,1066 M de 2 se necesitan 0,11 M de NaOH.

ANEXO C

CLCULO DEL TIEMPO DE FERMENTACIN

Frmula

X = X0 exp( t )

Dnde:

X = Concentracin de biomasa al tiempo t (g/L).

X0 = Concentracin de biomasa al inicio (g/L)

= Velocidad especfica de crecimiento (h-1)

t = Tiempo (h).

Ejemplo de clculo para Reactor Biolafitte

10 = 0,1 exp(0,4 t)

t = 11,5 h

Consideraciones,

La velocidad especfica de crecimiento es de 0,4 h-1.

X0 = 0.1 g/L

X = 10 g/L

ANEXO D

C.1 FICHAS DE SEGURIDAD DE SUSTANCIAS

1. Sustancia: CIDO 3,5-DINITROSALICLICO (DNS)

2. Identificacin de Peligros

- Descripcin del riesgo: Xn Nocivo

- Sobre los riesgos para el hombre y el medio ambiente: R 22 Nocivo por ingestin. R 36/37/38 Irrita de los ojos, sistema respiratorio y la piel.

- Sistema de clasificacin (Clasificaciones HMIS escala 0-4):

- Salud (efectos agudos) = 1

- Inflamabilidad = 1

- Reactividad = 1

- Peligros: Txico por ingestin. Provoca irritacin de la piel. Causa irritacin ocular grave. Puede causar irritacin respiratoria.

- Prevencin:

- Evite respirar el polvo / el humo / el gas / la niebla / los vapores / aerosoles.

- Lavar a fondo despus de manipular.

- No comer, beber o fumar mientras se manipula este producto.

- Usar slo al aire libre o en un rea bien ventilada.

- Usar guantes / ropa de proteccin / proteccin para los ojos / la cara.

Respuesta:

- En caso de ingestin: Llame inmediatamente a un CENTRO DE TOXICOLOGA o a un mdico.

- Contacto con la piel: Lavar con abundante agua y jabn.

- En caso de inhalacin: Trasladar al aire libre y mantenerla en reposo en una posicin confortable para respirar.

- Si en los ojos: Lavar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Qutese los lentes de contacto, si presente y fcil de hacer. Proseguir con el lavado.

Llame a un CENTRO DE TOXICOLOGA o a un mdico si se encuentra mal.

El tratamiento especfico (vase etiqueta).

Enjuagar la boca.

- Si la irritacin cutnea contina: Consulte a un mdico.

- Si persiste la irritacin ocular: Consulte a un mdico.

- Qutese la ropa contaminada y lavar antes de usar.

3. Primeros auxilios

En caso de inhalacin: Suministro de aire fresco. Si es necesario, proporcionar respiracin artificial, si los trastornos persisten. Consultar inmediatamente al mdico.

Contacto con la piel: Lave inmediatamente con agua y jabn y enjuagar bien. Consultar inmediatamente al mdico.

Contacto con los ojos: Limpiar los ojos abiertos durante varios minutos con agua corriente. Y consultar un mdico.

Ingestin: Consultar inmediatamente al mdico.

4. Lucha contra Incendios

- Medios de extincin adecuados: El dixido de carbono, polvo extintor o agua pulverizada. Combatir incendios mayores con chorro de agua espuma resistente al alcohol.

- Peligro particular provocado por la sustancia, sus productos de combustin o gases generados:

En caso de incendio, el siguiente gas puede ser liberado:

- Monxido de carbono y dixido de carbono

- Los xidos de nitrgeno (NOX)

Equipos de proteccin:

- Use aparatos respiratorios autnomos.

- Use traje de proteccin completa.

5. Proteccin Individual

- Persona relacionada con las medidas de seguridad: Llevar equipo de proteccin. Mantenga las personas sin proteccin alejadas. Asegurar una adecuada ventilacin

- Medidas para la proteccin del medio ambiente: No permita que el material sea liberado al medio ambiente sin los correspondientes permisos gubernamentales.

- Procedimiento de limpieza / recepcin: Desechar el material contaminado segn norma del laboratorio. Asegurar una ventilacin adecuada.

6. Almacenamiento y Manipulacin

Manipulacin:

- Sobre la manipulacin segura: Mantenga el recipiente cerrado hermticamente.

Almacenar en lugar fresco y seco en recipientes hermticamente cerrados. Asegurar una buena ventilacin en el lugar de trabajo.

- Informacin sobre proteccin contra incendios y explosiones: Mantener alejadas fuentes de ignicin.

Almacenamiento:

- Requisitos que deben cumplir los almacenes y recipientes: No requiere medidas especiales.

- Informacin sobre el almacenamiento: en caso de un almacenamiento conjunto: No almacenar junto con agentes oxidantes.

- Mantenga el recipiente cerrado hermticamente.

- Conservar en un lugar fresco y seco, en envases bien cerrados.

7. Informacin Toxicolgica

Toxicidad aguda:

- En la piel: irrita la piel y las mucosas.

- En el ojo: Produce irritaciones.

Sensibilizacin: No se conocen efectos sensibilizadores.

Toxicidad subaguda hasta crnica: El Registro de Efectos Txicos de Sustancias Qumicas (RTECS) informa de los siguientes efectos en animales de laboratorio: Conducta - somnolencia (actividad deprimida en general).

1. Sustancia: ALCOHOL ISO-AMLICO

2. Apariencia: lquido incoloro con olor caracterstico


- Inflamable.

- Nocivo por inhalacin. Irrita las vas respiratorias.

- La exposicin repetida puede provocar sequedad o formacin de grietas en la piel.

4. Primeros Auxilios

- Tras inhalacin: aire fresco.

- En caso de parada respiratoria: Respiracin asistida o por medias instrumentales. Suministracin de oxigeno en caso necesario. Llamar inmediatamente al mdico.

- Tras contacto con la piel: aclarar con abundante agua. Eliminar ropa contaminada.

- Tras contacto con los ojos: aclarar con abundante agua, manteniendo abiertos los parpados. En caso necesario llamar al oftalmlogo.

- Tras ingestin: cuidado con los vmitos. Peligro de aspiracin. Mantener libres las vas respiratorias. Llamar inmediatamente al mdico.

5. Lucha Contra Incendios

- Medias de extincin adecuados: CO2, espuma, polvo

- Riesgos especiales: Combustible. Vapores ms pesados que el aire.

En caso de calentamiento pueden producirse mezclas explosivas con el aire.

En caso de incendio posible formacin de gases de combustin o vapores peligrosos.

- Equipo de proteccin especial para el personal de lucha contra incendios: Permanencia en la lnea de riesgo solo con sistemas de respiracin artificial e independiente del ambiente. Proteccin de la piel mediante observacin de una distancia de seguridad y uso de ropa protectora adecuada.

- Referencias adicionales: Refrigerar los recipientes con rociado de agua desde una distancia segura. Evitar la penetracin del agua de extincin en acuferos superficiales o subterrneos.


- Proteccin respiratoria: necesaria en presencia de vapores/aerosoles. Filtro A

- Gafas de seguridad

- Proteccin de las manos:

- Para contacto pleno:

- Guantes: Caucho nitrile

- Espesor: 0,40 [mm]

- Tiempo de penetracin: >480 [min]

- En caso de salpicaduras:

- Guantes: Policloropreno

- Espesor: 0,65 [mm]

- Tiempo de penetracin: > 240 [min]

7. Manipulacin y Almacenamiento

- Manipulacin:

Observaciones sobre la proteccin de incendios y explosiones:

Mantener alejado de fuentes de ignicin. Evitar la carga electroesttica.

- - Almacenamiento:

Bien cerrado, en lugar bien ventilado, alejado de fuentes de ignicin y de calor. Temperatura de almacenamiento: sin limitaciones.

8. Estabilidad y Reactividad

- Condiciones a evitar: Calentamiento.

- Materias a evitar: formacin de gas con: metales alcalinos, metales alcalinoterreos (liberacin de hidrgeno).

-Peligro de ignicin o de formacin de gases o vapores combustibles con: flor, oxidantes fuertes, oxgeno.

-Informacin complementaria:

- Materiales inadecuados: plsticos diversos, goma capaz de explotar por calor en estado de gas/vapor con aire.


- Toxicidad aguda

- Informaciones adicionales sobre toxicidad

- Tras inhalacin de vapores: Irritaciones en !as vas respiratorias, absorcin, edema pulmonar.

- Tras contacto con la piel: leves irritaciones, absorcin, efecto desengrasante sobre la piel con posible infeccin secundaria.

- Tras contacto con los ojos: leves irritaciones.

- Tras ingestin: absorcin por: estmago, intestinos.

- Tras absorcin de grandes cantidades: cefaleas, sueo, falta de apetito, nauseas, vmito, descomposicin, vrtigo, debilidad muscular, confusin, prdida de conocimiento, coma.

- Consecuencias posibles: perjudicial para: hgado, riones.

- Se potencia su efecto por: etanol

- Otras indicaciones:

-Existe riesgo de aspiracin al vomitar.

-Informacin complementaria

-El producto debe manejarse con las precauciones apropiadas para los productos qumicos.

1. Sustancia: 2-MERCAPTOETANOL


- Nocivo por ingestin. Txico en contacto con la piel. Provoca quemaduras. Txico para los organismos acuticos, puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico.


- Tras inhalacin: Tomar aire fresco. Si fuera preciso, respiracin boca a boca o por medios instrumentales.

- Tras contacto con la piel: aclarar con abundante agua. Cambiar enseguida la ropa contaminada. Llamar al

mdico.

- Tras ingestin: beber abundante agua, provocar vmitos. Avisar al mdico.

- Tras contacto con los ojos: aclarar con abundante agua, con los prpados bien abiertos. Llamar al oftalmlogo.


- Medios de extincin adecuados: espuma, CO2, polvo.

- Riesgos especiales particulares: Inflamable. Vapores ms densos que el aire.

- En caso de incendio: posible formacin de vapores txicos.

- En caso de incendio puede formarse: sulfxidos

- Equipo de proteccin especial para el personal de lucha contra incendios: No permanecer en la zona de peligro sin ropa protectora adecuada y sin sistemas de respiracin artificiales e independientes del ambiente.

- Informacin adicional: Procurar que el agua de extincin no penetre en acuferos superficiales o subterrneos.



- Delantal

- Guantes

- En caso de ser necesario, equipo de respiracin.


- Manipulacin: Sin ms exigencias.

- Almacenamiento: Almacenar bien cerrado, en lugar bien ventilado. Slo accesible a personas autorizadas, expertas. Almacenar entre +15C y +25C.


- Efectos sistmicos: afecciones sobre el sistema nervioso central (nuseas, vmito).

- Tras inhalacin: irritacin de las mucosas.

- Tras contacto con la piel: quemaduras

- Tras contacto con los ojos: quemaduras. Peligro de que se produzca turbidez en la crnea.

- Tras ingestin: (grandes cantidades): espasmos, colapso, narcosis.

- Tras absorber cantidades importantes: Efectos sistmicos: afecciones sobre el sistema nervioso central (nuseas, vmito).

1. Sustancia: EXTRACTO DE LEVADURA


Efectos potenciales agudos sobre la salud: Ligeramente peligroso en caso de contacto cutneo (irritante), del contacto con los ojos (irritante), de la ingestin y de la inhalacin.


- Contacto con los ojos: Lavar los ojos con agua corriente durante al menos 15 minutos, manteniendo los prpados abiertos. Puede utilizarse agua fra.

- Contacto con la piel: En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente con abundante agua y jabn no abrasivo. Tenga especial cuidado de limpiar los pliegues, grietas y la ingle. Puede utilizarse agua fra.

- Cubra la piel irritada con un emoliente. Si la irritacin persiste, busque atencin mdica. Lavar la ropa contaminada antes de reutilizacin.

- Inhalacin: Permitir que la vctima descansar en un rea bien ventilada. Busque atencin mdica inmediata.

- Ingestin: No induzca el vmito. Aflojar las ropas apretadas tales como collares, corbatas, cinturones o cintos. Si la vctima no respira, realice boca a boca. Busque atencin mdica inmediata.


Inflamabilidad del producto: Puede ser combustible a altas temperaturas.

Medios de extincin de incendios e instrucciones:

Incendio Pequeo: Usar polvo qumico seco.

Gran Incendio: Utilizar agua pulverizada, niebla o espuma. No usar chorro de agua.

5. Proteccin individual


- Delantal de laboratorio

- Guantes


- Si la operacin genera polvo, niebla o algo smil, use un sistema de ventilacin.


Precauciones: Mantener alejado del calor. Mantener alejado de fuentes de ignicin. Los recipientes vacos representan un riesgo de incendio, evaporar los residuos bajo una campana extractora de humos. No respirar el polvo.

Almacenamiento: Mantener el recipiente seco. Mantenga en un lugar fresco. Mantenga el recipiente bien cerrado. Mantener en un fresco y bien ventilado. Los materiales combustibles deben almacenarse lejos del calor extremo y lejos de agentes oxidantes fuertes.

7. Controles de Exposicin / Proteccin Personal

Controles de ingeniera:

Use recintos de proceso, ventilacin local, o de otros controles de ingeniera para mantener los niveles en el aire por debajo de los lmites de exposicin. Si la operacin genera polvo use ventilacin de humo o niebla, para mantener la exposicin a los contaminantes en el aire por debajo del lmite de exposicin.

Proteccin personal: gafas de seguridad. Bata de laboratorio. Mascarilla. Asegrese de utilizar un respirador certificado / aprobado o equivalente. Guantes.

Proteccin personal en caso de un derrame grande:

Gafas de seguridad. Traje completo. Respirador de polvo. Botas. Guantes. Un equipo de respiracin autnomo debera ser utilizado para evitar la inhalacin del producto. Ropa de proteccin sugerida podran no ser suficiente; consultar a un especialista antes de tocar el producto.

1. Sustancia: CIDO CLORHDRICO


Efecto en la salud humana:

- Inhalacin: tos, inflamacin de la nariz, garganta y vas respiratorias. Puede producir dao al pulmn

- Contacto: quemaduras de piel y ojos

- Ingestin: quemaduras de boca, garganta y tracto gastrointestinal. Puede producir nauseas, vmito y diarrea.

- Altamente corrosivo

Efecto en el medio ambiente:

- Corrosivo

- Txico


- Inhalacin: dirigirse a una zona ventilada. Si no respira proporcionar respiracin artificial y solicitar ayuda mdica.

- Contacto: En caso de contacto con los ojos lavar con abundante agua manteniendo los ojos abiertos durante al menos 15 [min]. En caso de irritacin, consultar un mdico. En caso de contacto con la piel, remover ropa contaminada y lavar con abundante agua durante al menos 15 [min].

- Ingestin: beber abundante agua o leche. No inducir el vmito.


- No inflamable


6- Delantal, guantes, antiparras

- Equipo respiratorio en caso necesario

- De preferencia manipular en campana de extraccin de gases

6. Almacenamiento

- En un lugar fresco y seco, en un rea ventilada

1. Sustancia: LACTOSA


Efectos potenciales agudos sobre la salud: Ligeramente peligroso en caso de contacto cutneo (irritante), contacto con los ojos (irritante), e inhalacin.

La exposicin repetida o prolongada no debera agravar el estado de salud.

3. Primeros auxilios

Contacto con los ojos:

Revise y quite los lentes de contacto. En caso de contacto, inmediatamente lave los ojos con abundante agua durante al menos 15 minutos. El agua fra puede ser utilizada. Busque atencin mdica si se produce irritacin.

Contacto con la piel: Lavar con agua y jabn. Cubra la piel irritada con un emoliente. Busque atencin mdica si se desarrolla irritacin.

Inhalacin: Si es inhalado, trasladar al aire libre. Si no respira, dar respiracin artificial. Si la respiracin es difcil, dar oxgeno. Si es necesario, conseguir atencin mdica.

Ingestin: No provocar el vmito a menos que lo indique expresamente el personal mdico. No dar nada por boca a una persona. Aflojar las ropas apretadas tales como collares, corbatas, cinturones o cintos. Obtener atencin mdica si aparecen los sntomas.


Inflamabilidad del producto: Puede ser combustible a altas temperaturas.

Temperatura de autoignicin: 470C (878F)

Productos de combustin: Estos productos son xidos de carbono (CO, CO2).

Riesgos de incendio en presencia de varias sustancias: Ligeramente inflamable en presencia de calor.

Medios de extincin de incendios e instrucciones:

- Incendio pequeo: Usar polvo qumico seco.

- Gran incendio: Utilizar agua pulverizada, niebla o espuma. No usar chorro de agua.


Derrames pequeos:

Utilice las herramientas adecuadas para poner el slido derramado en un contenedor de recuperacin apropiado. Terminar la limpieza vertiendo agua en la superficie contaminada y eliminar segn las exigencias locales y regionales.

Grandes derrames:

Use una pala para poner el material en un contenedor de recuperacin apropiado. Terminar la limpieza vertiendo agua en la superficie contaminada y permitir la evacuacin a travs del sistema sanitario.


Precauciones: Mantener alejado del calor. Mantener alejado de fuentes de ignicin. Los recipientes vacos representan un riesgo de incendio, evaporar los residuos bajo una campana extractora de humos. No ingerir. No respire el polvo. Si se ingiere, buscar atencin mdica inmediatamente y mustrele el envase o la etiqueta. Mantener alejado de incompatibles tales como agentes oxidantes.

Almacenamiento: Mantenga el recipiente bien cerrado. Mantenga el recipiente en lugar fresco y bien ventilado. No conservar a temperatura superior a 23C (73,4F).


Controles de ingeniera: Use recintos de proceso, ventilacin local, o de otros controles de ingeniera para mantener los niveles en el aire por debajo los lmites de exposicin. Si la operacin genera polvo, utilice un ventilador, para mantener la exposicin a los contaminantes en el aire por debajo del lmite de exposicin.

Proteccin personal: gafas de seguridad. Bata de laboratorio. Respirador de polvo. Asegrese de utilizar un respirador certificado / aprobado o equivalente. Guantes.

Proteccin personal en caso de un derrame grande:

Gafas de seguridad. Traje completo. Respirador de polvo. Botas. Guantes. Un equipo de respiracin autnomo debera ser utilizado para evitar la inhalacin del producto. Ropa de proteccin sugerida podran no ser suficiente; consultar a un especialista antes de tocar este del producto.

1. Sustancia: ORTO-NITROFENIL--GALACTOSIDO (ONPG)

2. Apariencia

- Aspecto: Polvo blanco o negro.

- Olor: Inodoro.

3. Identificacin de los Riesgos

- Inhalacin: La inhalacin de polvo puede causar irritacin de las vas respiratorias.

- Ingestin: Puede ser nocivo si se ingiere.

- Contacto con la piel: Puede causar irritacin.

- Contacto con los ojos: Puede causar irritacin. Exposicin crnica: No se encontr

informacin.

4. Medidas de Primeros Auxilios

- Inhalacin: Salga al aire libre. Obtener atencin mdica para cualquier dificultad para respirar.

- Ingestin: Inducir el vmito inmediatamente como lo indique el personal mdico. No dar nada por la boca a una persona inconsciente. Obtener atencin mdica.

- Contacto con la piel: Quitar la ropa contaminada. Lavar la piel con jabn o detergente suave y agua durante al menos 15 minutos. Obtener atencin mdica si la irritacin aumenta o persiste.

- Contacto con los ojos: Lave cuidadosamente con agua corriente. Consulte a un mdico si se desarrolla irritacin.

5. Medidas para Combatir Incendios

- Fuego: Como con la mayora de los slidos orgnicos, el fuego es posible a elevadas temperaturas o por contacto con una fuente de ignicin.

- Explosin: Polvo fino disperso en el aire en concentraciones suficientes, y en presencia de una fuente de ignicin es un riesgo potencial de explosin de polvo.

- Medios de extincin de incendios: Agua pulverizada, polvo qumico seco, espuma de alcohol o dixido de carbono.

- Informacin especial: En el caso de un fuego, vestidos protectores completos y el NIOSH, aprobado por el aparatos de respiracin con mascarilla completa operando en la demanda de presin u otro modo de presin positiva.

6. Medidas de Liberacin Accidental

Eliminar todas las fuentes de ignicin. Ventilar el rea de la fuga o derrame. Use equipo protector personal adecuado como se especifica en la Seccin 8.

- Derrames: Limpie los derrames de manera que no disperse polvo en el aire.

- Utilice herramientas que no produzcan chispas y equipo. Reduzca el polvo en el aire y prevenga esparcimiento humedeciendo con agua. Levante el derrame para recuperacin o disposicin y coloque en un recipiente cerrado.

7. Manipulacin y Almacenamiento

- Mantenga alejado de sustancias incompatibles. Congelar.


- Lmites de exposicin: no se han establecido.

- Sistema de ventilacin: un sistema de extraccin local y/o general es recomendado para mantener las exposiciones del empleado tan bajas como sea posible. Extraccin local es generalmente preferida porque esta puede controlar las emisiones de los contaminantes desde su fuente, impidiendo dispersin del mismo al lugar general de trabajo. Por favor, consulte el documento de la ACGIH, Industrial Ventilation, manual de prcticas recomendadas, la edicin ms reciente, para ms detalles.

- Respiradores Personales (Aprobados por NIOSH): para emergencias o casos donde los niveles de exposicin no son conocidos, use un rostro completo de presin positiva, respirador con suministro de aire. ADVERTENCIA: Los respiradores purificadores de aire no protegen a los trabajadores en atmsferas deficientes de oxgeno.

- Proteccin de la piel: use guantes protectores y ropa limpia que cubra el cuerpo.

- Proteccin de los ojos: utilice gafas de seguridad qumica. Mantenga los lava ojos y regaderas de emergencia en el rea de trabajo.

1. Sustancia: REACTIVO DE BRADFORD

2. Apariencia

- Forma: Solucin

- Color: Azul oscuro

- Olor: Parecido al alcohol


- Descripcin del riesgo: Corrosivos

- Informacin sobre los riesgos para el hombre y el medio ambiente: El producto tiene que ser etiquetados por el procedimiento de clculo de las directrices internacionales. Provoca quemaduras.

- Sistema de clasificacin: La clasificacin se hizo de acuerdo a las ltimas ediciones de las listas de sustancias internacional, y ampliado a partir de datos de la empresa y la literatura.


- Instrucciones generales: Quitarse de inmediato toda prenda ensuciada con el producto.

- En caso de inhalacin: En caso de personas desmayadas deben depositarse en posicin lateral para el transporte.

- En caso de contacto con la piel: Lavar inmediatamente con agua y jabn y enjuagar bien.

- En caso de contacto con los ojos: Limpiar los ojos abiertos durante varios minutos con agua corriente, consultar un mdico.

- En caso de ingestin: Beber mucha agua y respirar aire fresco. Llame inmediatamente a un mdico.


- Sustancias extintoras apropiadas: CO2, polvo extintor o agua pulverizada. Combatir incendios mayores con chorro de agua o espuma resistente al alcohol.

- Equipo de proteccin: No requiere medidas especiales.


- Medidas personales relacionadas con la seguridad: Use equipo de proteccin. Mantenga las personas sin proteccin lejos.

- Medidas para la proteccin del medio ambiente: Diluir con abundante agua. No permita que penetre en la canalizacin / aguas superficiales o subterrneas.

- Procedimiento de limpieza / recepcin: Quitar con material absorbente (arena, tierra de diatomeas, aglutinante de cidos, aglutinante universal, serrn). Utilizar un neutralizador. Desechar el material contaminado segn normas del laboratorio. Asegurar una ventilacin adecuada.


Manipulacin:

Instrucciones sobre la manipulacin segura:

- Asegurar una buena ventilacin / aspiracin en el lugar de trabajo.

- Evitar la formacin de aerosoles.

Prevencin de incendios y explosiones: No requiere medidas especiales.

Almacenamiento:

- Exigencias con respecto al almacn y los recipientes: No requiere medidas especiales.

- Informacin sobre el almacenamiento en caso de un almacenamiento conjunto: No es necesario.

- Instrucciones adicionales sobre las condiciones de almacenamiento: Mantener el recipiente cerrado hermticamente.


Toxicidad aguda:

- Efecto estimulante primario:

- En la piel: Efecto custico en la piel y las mucosas.

- En el ojo: Fuerte efecto custico.

- Sensibilizacin: No se conocen efectos sensibilizadores.

- Indicaciones toxicolgicas adicionales:

El producto tiene los siguientes riesgos de acuerdo a los mtodos de clculo de la CE para Preparados: Corrosivo.

La ingestin produce un fuerte efecto custico en la boca y la garganta con peligro de perforacin del esfago y del estmago.

1. Sustancia: SULFATO DE AMONIO


- Riesgo a la Salud: Peligroso en caso de contacto con la piel (irritante), contacto con el ojo (irritante), inhalacin e ingestin.

- Puede ser combustible a altas temperaturas.


- En caso de inhalacin: Si inhal, exhalar al aire libre. Si no respira, dar respiracin artificial. Si respira dificultosamente, dar oxgeno. Conseguir atencin mdica.

- En caso de contacto con la piel: Lavar con abundante agua. Cubrir la piel con un emoliente. Retirar la ropa y calzado contaminados. Conseguir atencin mdica.

- En caso de contacto con los ojos: Retirar lentes de contacto. Si hay contacto, lavar

con abundante agua durante 15 minutos. Conseguir atencin mdica.

- En caso de ingestin: No induzca el vomito, a menos que sea supervisado por personal mdico. No administre nada por va oral a alguien inconsciente. Afloje la ropa apretada, cinturones, relojes y pulseras. Si aparecen sntomas, consiga atencin mdica


- Sustancias extintoras apropiadas: Polvo qumico seco, en caso de mayor incendio, rociar con agua como spray, no como chorro.



- Delantal de laboratorio

- Guantes



- Instrucciones sobre la manipulacin segura: Mantener lejos del calor y fuentes de ignicin, no ingerir, trabajar en un ambiente ventilado o con un equipo de respiracin.

- Informacin sobre el almacenamiento: Mantener cerrado, en un rea fra y ventilada.


- Puede ser un mutgeno. Se han realizado pruebas, pero de momento no se ha llegado a nada concluyente.

- Al ser ingerido, puede actuar como laxante. Al ser ingerido de forma sistemtica, puede causar envenenamiento por amonio, causando vmito, hipermotilidad y diarrea. Al consumirse en grandes dosis, puede causar diuresis.

1. Sustancia: SULFATO DE MAGNESIO


- Descripcin del riesgo: Peligroso en caso de ingestin. Ligeramente peligroso en caso

de contacto con la piel (irritante), contacto con el ojo (irritante), inhalacin.


- En caso de inhalacin: permita a la vctima descansar en un rea ventilada, Consiga atencin mdica.

- En caso de contacto con la piel: Lavar con abundante agua. Gentilmente y a fondo lave la piel contaminada haciendo correr agua utilizando un jabn no abrasivo. Poner especial nfasis en las arrugas, pliegues y otras irregularidades en la piel. Cubrir la piel irritada con un emoliente. Conseguir atencin mdica.

- En caso de contacto con los ojos: Lave los ojos con agua por lo menos durante 15 minutos, manteniendo los prpados abiertos.

- En caso de ingestin: No induzca vmito. Afloje ropa apretada, cinturn, reloj y pulseras. Si la vctima no respira, realice respiracin boca a boca. Consiga atencin mdica.


- No inflamable



- Delantal

- Guantes



- Instrucciones sobre la manipulacin segura: no se han encontrado precauciones especficas.

- Informacin sobre el almacenamiento: no es necesario un almacenamiento especfico.


- Efectos crnicos en humanos: al ser ingerido, en caso de mujeres embarazadas, pasa a travs de la placenta y es excretado en la leche humana

1. Sustancia: FOSFATO DE POTASIO

2. Identificacin de peligros

- Descripcin del riesgo: Peligroso en caso de ingestin y contacto con ojos (irritante) .Ligeramente peligroso en caso de contacto con la piel (irritante) e inhalacin.


- En caso de inhalacin: exhalar al aire fresco. Si no respira, dar respiracin artificial. Si respira dificultosamente, dar oxgeno. Conseguir atencin medica.

- En caso de contacto con la piel: Lavar con agua y jabn, cubrir la piel irritada con un emoliente. Conseguir atencin medica si aparece irritacin.

- En caso de contacto con los ojos: Revise y remueva lentes de contacto. Lave los ojos con agua por lo menos durante 15 minutos, manteniendo los prpados abiertos.

- En caso de ingestin: No induzca vmito. Afloje ropa apretada, cinturn, reloj y pulseras. Si la vctima no respira, realice respiracin boca a boca. Consiga atencin mdica.


- No inflamable



- Delantal

- Guantes



- Instrucciones sobre la manipulacin segura: no respirar el polvillo, evitar contacto con los ojos. Si no se siente bien, conseguir atencin mdica y mostrar la etiqueta en lo posible.

- Informacin sobre el almacenamiento: Higroscpico, mantener cerrado, en un ambiente fro y ventilado, no por sobre 23C.


- El envenenamiento por potasio es raro debido a que se requiere de gran cantidad, las cuales normalmente causan vmito, y es rpidamente excretado. De no ser as (al

sumarse son algn problema anterior), los sntomas pueden incluir gastroenteritis, nauseas, vmito, dolor estomacal, diarrea; puede afectar el sistema nervioso central, el metabolismo, el sistema cardiovascular y riones.

C.2 FICHAS DE SEGURIDAD DE EQUIPOS Y PROCEDIMIENTOS

1. Equipo: CALDERA Procedimiento: Manejo y limpieza de la caldera

2. Componentes del Procedimiento

- Caldera

- Sistema de caera

- Cmara de almacenamiento de vapor

- Bomba


- Tropiezo con cables, partes del equipo u otros instrumentos que se encuentren en el suelo.

- Quemadura por contacto con la caldera, caeras con vapor o fuga de vapor.

- Explosin de la cmara de almacenamiento por aumento de la presin.

- Peligro de incendio por sobrecalentamiento de la caldera por falta de agua.


- Golpe: Reposo, aplicar hielo en caso de inflamacin.

- Dolores de cabeza por ruido: Reposo, en caso de que el alumno lo requiera administrar un analgsico.

- Cada: No levantar a la persona inmediatamente; asegurar antes de que no haya fracturas ni aturdimiento. En caso de prdida de conciencia llamar una ambulancia.

- Quemadura: Enfriar la quemadura con agua e ir inmediatamente a un centro mdico.

- Luxacin y contractura: Reposo aplicar hielo en caso de inflamacin. En caso de luxacin inmovilizar en posicin que se encuentra la articulacin. No intentar hacer masajes o aplicar pomadas. Llevar a un centro de salud inmediatamente

- Caso de incendio: Avisar a la autoridad pertinente y tratar de controlar el incendio.

- Informar al ayudante/profesor.


- Zapatos cerrados con suela de goma.

- Guantes gruesos.

- Delantal de laboratorio.

- Al movilizar equipos de alto peso: Flexionar piernas, no hacer trabajo que dae la espalda.

- Mantener el suelo seco para evitar cadas y electrocucin.

- Verificar que todas las mangueras estn bien conectadas para evitar fugas.

1. Equipo: CENTRFUGA GRAVITATORIA SORVALL RC5B Procedimiento: Manejo y limpieza de la centrfuga


- Tapa principal

- Sujetador de capachos

- Palanca de desganche mecnico

- Sistema de refrigeracin


- Apriete de dedos al manejar el equipo.

- Quemadura por electricidad al momento de utilizar el panel de control con las manos mojadas.

- Luxacin y contractura al mover equipos o material pesado.

- Tropiezo con cables, partes del equipo u otros instrumentos que se encuentren en el suelo.

- Golpe en las manos por manejo del equipo en funcionamiento.




- Cortaduras: Cubrir el rea afectada con una gasa estril y aplicar presin para evitar salida de sangre. Si el vidrio est enterrado, no remover y llevar a un centro de salud lo antes posible.

- Cada: No levantar a la persona inmediatamente; asegurarse antes de que no haya fracturas ni aturdimiento. En caso de prdida de conciencia llamar una ambulancia.

- En caso de corte menor, limpiar la herida, desinfectar y cubrir con vendaje.


- Luxacin y contractura: Reposo, aplicar hielo en caso de inflamacin. En caso de luxacin inmovilizar en posicin que se encuentra la articulacin. No intentar hacer masajes o aplicar pomadas. Llevar a un centro de salud inmediatamente.





- Al movilizar equipos de alto peso. Flexionar piernas, no hacer trabajo que dae la espalda.


- Manejo de equipos elctricos con manos y suelos seco.

- Esperar que el equipo est completamente detenido para su apertura.

1. Equipo: CENTRIFUGA SEPARADORA DE DOBLE RODETE WESTFALIA SEPARATOR, SA 1- 01-175

Procedimiento: Manejo y limpieza de la centrifuga


- Tambor

- Parte superior del bastidor

- Crter


- Cada debido a suelo mojado.



- Dolores de cabeza por ruido.


- Tropiezo con mangueras u otros instrumentos o equipos que se encuentren en el suelo.








- Luxacin y contractura: Reposo aplicar hielo en caso de inflamacin. En caso de luxacin inmovilizar en posicin que se encuentra la articulacin. No intentar hacer masajes o aplicar pomadas. Llevar a un centro de salud inmediatamente.




- Antiparras.

- Guantes.

- Proteccin auditiva.





1. Equipo: FERMENTADORES, BIOLAFITTE Y FERMENTADOR PILOTO Procedimiento: Manejo, limpieza y esterilizacin del equipo


- Rotor

- Tapa con entradas para mangueras y medidores

- Estanque de fermentacin

- Mangueras


- Cada debido al suelo mojado.

- Golpes en la cabeza por mal manejo de la tapa.

- Apriete de dedos al manejar el equipo, especialmente la tapa.

- Explosin del equipo por alza de la presin.

- Quemadura por electricidad al momento de utilizar el rotor con las manos mojadas.




- Fugas de vapor.

- Quemaduras con vapor al momento de esterilizar.

- No abrir el fermentador durante la fermentacin y esterilizacin.








-Informar al ayudante/profesor.



- Antiparras.

- Casco, en el momento de mover la tapa con el rotor.

- Guantes gruesos al momento de esterilizar.



- Pantalones largos.



- Manejo de equipos elctricos con manos y suelos secos.

1. Procedimiento: LIMPIEZA Y MANIPULACIN DE MATERIAL DE VIDRIO


- Corte debido a mala manipulacin, como lavado con excesiva fuerza, golpearlo o cada de ste.







- Pantaln largo.

5. Otros

- Descartar material trisado.

- En caso de rompimiento, descartar y limpiar con cuidado.

1. Equipo: MOLINO DE BOLAS DYNO MILL TYP KDL Procedimiento: Manejo y limpieza equipo


- Contenedor de molienda

- Material de molienda

- Discos agitadores

- Espaciadores

- Sistema de refrigeracin


- Cada debido al suelo mojado o por material de molienda.






- Quemadura por calentamiento del equipo por mala refrigeracin.








-Informar al ayudante/profesor.



- Antiparras.

- Guantes.






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