Praktikum 5 07
Transcript of Praktikum 5 07
![Page 1: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/1.jpg)
Praktikum 4 - dokončení
![Page 2: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/2.jpg)
karyotyp
Str. 22 – 5.8 Úkol 5: Využití buněčných kultur při mapování genomu
fúze buněk
myší myelomová buňka
lidská buňka
![Page 3: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/3.jpg)
Úkol 5: Využití buněčných kultur při mapování genomu
• Klon I: 4, 7, 8, 10, 20, X• Klon II: 1, 3, 7, 21, X• Klon III: 9, 13, 19, 21, X• Klon IV: 1, 4, 10, 19, X• Klon V: 2, 3, 13, 20, X.
– a) Enzym A je přítomný v klonu V, ale v ostatních klonech chybí.– b) Enzym B se naopak vyskytuje ve všech pěti klonech.– c) Enzym C je přítomen pouze v klonech III a IV.– d) Enzym D není obsažen ani v jednom z hodnocených klonů.
Gen pro enzym A leží na chromozomu 2.
Gen pro enzym B leží na chromozomu X.
Gen pro enzym C leží na chromozomu 19.
Gen pro enzym D neleží ani na jednom z uvedených
chromozomů.
Praktická cvičení
str. 22 – 5.8 Úkol 5
![Page 4: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/4.jpg)
Význam buněčných kultur• studium regulace buněčného cyklu a diferenciace
buněk• studium procesů vedoucích ke vzniku a progresi
nádorových chorob. • produkce monoklonálních protilátek, které jsou
nezbytné při diagnostice mnoha onemocnění. • testování účinků léčiv a jiných chemických látek,
které by mohly ohrozit zdraví člověka, stanovení genotoxicity
• klinická genetika – prenatální a postnatální vyšetření
• mapování lidského genomu• klonování savců• virologie – kultivace a izolace virů
![Page 5: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/5.jpg)
Praktikum 5
Chromozomová analýza
Karyotyp
![Page 6: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/6.jpg)
Vyšetření geneticky podmíněných onemocnění
rodinagenealogické
vyšetření
chromozomy
cytogenetické vyšetření
DNAmolekulárně-
biologické vyšetření
pacient
![Page 7: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/7.jpg)
Test
• 10 otázek (po 1 bodu)
• 15 minut
• Nezapomeňte uvést své jméno, kruh a
verzi, kterou píšete.
• Nepsat „romány“.
![Page 8: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/8.jpg)
Cytogenetické vyšetření• Vyšetření karyotypu
• Stanovení chromozomových aberací– Numerických
• Změny počtu chromozomů
– Strukturních • Změny struktury chromozomů
• Význam – Diagnostika poruch způsobených chromozomovými
aberacemi
– Stanovení rizika pro potomstvo
![Page 9: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/9.jpg)
Cytogenetická vyšetření
• Prenatální
– Vyšetření plodu
• Postnatální
– Vyšetření již narozeného jedince
![Page 10: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/10.jpg)
plo
d
chorion
amnion
pupečník
Biopsie choriových klků
(CVS)
Amniocentéza
Kordocentéza
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.Závěr prenatálních
vyšetření
Týdny těhotenstvíPrenatální vyšetření
![Page 11: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/11.jpg)
Choriové klky
![Page 12: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/12.jpg)
Biopsie choriových klků
od 11. týdne těhotenství
Transabdominální odběr Transvaginální (transcervikální) odběr
![Page 13: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/13.jpg)
Biopsie choriových klků
tkáň choriových klků
prohlídka pod stereomikroskopem
![Page 14: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/14.jpg)
Prenatální vyšetření
Biopsie choriových klků
Amniocentéza
Kordocentéza
11. 16. 20. Těhotenství (týdny)
12.-20. týdenUltrazvuk
Biochemický test v 16.týdnuAFP, hCG, E3, PAPP
24.
ZÁVĚR PRENATÁLNÍCH
VYŠETŘENÍ
![Page 15: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/15.jpg)
Ultrazvukové vyšetření
Provádíme plošně všem těhotným ženám.
![Page 16: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/16.jpg)
Ultrazvukový záznam
![Page 17: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/17.jpg)
Nuchální translucence
normální zvýšená
Možnost postižení plodu Downovým syndromem
![Page 18: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/18.jpg)
Biochemický test
• Vyšetření tzv. biochemických „markerů“
• AFP – alfa-fetoprotein
• hCG – choriogonadotropin
• uE3 – nekonjugovaný estriol
• PAPP – pregnancy associated plasmatic protein
• V současnosti se používají různé kombinace markerů.
• Odchylky koncentrace upozorňují na možné (ne však
jisté) postižení plodu.
![Page 19: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/19.jpg)
Amniocentéza
zpravidla od 15 - 16. týdne těhotenství
![Page 20: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/20.jpg)
Amniocentéza
Odebíráme cca 20 ml plodové vody – po centrifugaci buňky kultivujeme a plodovou vodu použijeme k
biochemické analýze.
![Page 21: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/21.jpg)
Kordocentéza
• Percutaneous umbilical blood sampling.
• Odběr fetální krve z placentálního úponu vena umbilicalis
provádíme od 20. týdne těhotenství
![Page 22: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/22.jpg)
Kordocentéza
![Page 23: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/23.jpg)
Ke všem prenatálním odběrům
musí těhotná žena podepsat
informovaný souhlas (pozitivní
revers), resp. negativní revers.
![Page 24: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/24.jpg)
plo
d
chorion
amnion
pupečník
Biopsie choriových klků
(CVS)
Amniocentéza
Kordocentéza
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.Závěr prenatálních
vyšetření
Týdny těhotenstvíPrenatální vyšetření
![Page 25: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/25.jpg)
Cytogenetická vyšetření
• Prenatální
– Vyšetření plodu
• Postnatální
– Vyšetření již narozeného jedince
![Page 26: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/26.jpg)
Indikace pro postnatální chromozomová vyšetření
• Viz Klinická cytogenetika I.
• str. 54 – 57 subkapitola 9.2
– str. 56 – 9.2.3
![Page 27: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/27.jpg)
Vzorky tkání pro postnatální vyšetření
• Periferní krev
• Fibroblasty z kožní
biopsie
• Kostní dřeň
(hemoblastózy)
• Nádor
• Sekční materiál (v
případě úmrtí pacienta)
![Page 28: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/28.jpg)
Jak odebrat periferní krev pro chromozomové vyšetření?
• Desinfikovat místo
vpichu alkoholem
• Krev do zkumavky s
heparinem, resp.
Lithium-heparinem
• (Do EDTA odebíráme
krev pouze pro izolaci
DNA.)
![Page 29: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/29.jpg)
Kultivace periferní krve
• Viz skripta klinická cytogenetika I., str.57 – 9.2.4
• Fytohemaglutinin – vysoce imunogenní látka – působí proliferaci lymfocytů
![Page 30: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/30.jpg)
Klasické barvení chromozomů
Používáme pouze roztok Giemsa-Romanowski
6 – 12
13 – 15
19 – 20 21 – 22
4 – 5
![Page 31: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/31.jpg)
G-pruhování (GTG)Trypsin + Giemsa
Viz Praktická cvičení – str. 25/obr. 6.1, str. 27/obr.6.3
![Page 32: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/32.jpg)
Každý G-pruh má své číslo
Xq27.3
Chromozom X s očíslovanými G-pruhy
Syndrom fragilního X
![Page 33: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/33.jpg)
Další metody barvení chromozomů
• R-pruhování
• Q-pruhování
• C-pruhování
• Ag-NOR
Viz skripta Klinická cytogenetika I., kapitola 9 (str. 58 – 59)
![Page 34: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/34.jpg)
Metoda HRT
• Speciální kultivační technika
• Umožňuje získání prometafázních chromozomů
• Vhodná pro zjištění strukturních přestaveb malého rozsahu
![Page 35: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/35.jpg)
Úkoly• viz Praktická cvičení• Str. 25
– 6.3 Úkol 1 Pozorování lidských chromozomů (preparát – postup při pozorování stejný jako v předchozích praktikách)
• Str. 26– 6.4 Úkol 2 Určení konstituce pohlavních chromozomů
(fotografie – počítáme akrocentry)
• Str. 27– 6.5 Úkol 3 Sestavení karyotypu (krabička s obrázky
chromozomů – sestavte karyotyp podle předlohy)
Výsledky zkontroluje vedoucí praktika nebo paní Tůmová.
![Page 36: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/36.jpg)
Úkol 2: Určení konstituce pohlavních chromozomů
• Na předložené fotografii lidských chromozomů obarvených metodou G-pruhování zjistěte, zda se jedná o buňku muže nebo ženy.
• Chromozomy lze určit srovnáním s přiloženou předlohou.
• Jednodušší je však spočítat všechny malé akrocentrické chromozomy
![Page 37: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/37.jpg)
Úkol 2
21 22 Y
muž
žena
![Page 38: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/38.jpg)
Úkol 3
• Viz krabička a předloha
![Page 39: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/39.jpg)
Výsledky
![Page 40: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/40.jpg)
Zápis karyotypu podle ISCN 2005
• Normální nález– Muž … 46,XY– Žena … 46,XX
V zápisu uvádíme:
Celkový počet všech chromozomů, konstituci gonozomů
46,XY
![Page 41: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/41.jpg)
Prosíme, vraťte preparáty do krabiček.
![Page 42: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/42.jpg)
Příští praktikum
• Téma: Numerické chromozomové aberace
• Skripta
– Praktická cvičení – str. 28 – 33
– Klinická cytogenetika I. – kapitoly 10, 11
• Test nebude!
![Page 43: Praktikum 5 07](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062312/5560e18dd8b42a016e8b4b53/html5/thumbnails/43.jpg)
Na shledanou!
Obrázek převzat z publikace J. Šmardy: Člověk v proudu dědičnosti, ilustrace Dr. P. Ondrovčíka