Practica II de Equipos e Instrumentos Microscopia

INSTITUTO DE EDUCACIN SUPERIOR TECNOLGICO PBLICO TRUJILLO

EQUIPOS E INSTRUMENTOS DE MICROSCOPA PROFESOR: BLGO. MBLGO. FREDDY VALLEJO LEN ALUMNO (A):

TEMA: RECONOCIMIENTO DE LOS COMPONENTES DEL MICROSCOPIO PTICO Y ACCESORIOS DEL MICROSCOPIO DE CAMPO LUMINOSO, CONTRASTE DE FASES Y CAMPO OSCURO LABORATORIO CLNICO III TRUJILLO PER 2011

I.

INTRODUCCIN El microscopio compuesto es un instrumento ptico formado por dos sistemas de lentes convergentes, que posibilitan la observacin y examen de objetos imperceptibles a simple vista a travs de una imagen aumentada, invertida y virtual (Tortora y cols, 1993). El poder de resolucin de un microscopio es la capacidad que tiene ste para separar des puntos que se encuentran muy prximos entre s. Por ejemplo, si dos puntos estn separados por una distancia de 0,2 mm, a ms, la vista si los distingue por separado; pero si dos puntos presentan una separacin de 0,1 mm o menos, la vista los observar como uno solo pero el microscopio compuesto si los diferenciar separadamente (UNT, 1982). Un microscopio compuesto, que es el ms empleado en un Laboratorio Microbiolgico, consta de las siguientes partes (Jaime y Santos, 1994): 1. Parte ptica: A) Sistema de Lentes: a) Ocular (es): Va o van cerca del eje ojo del observador. Es un sistema de dos lentes planos convexos con un diafragma intermedio. En su parte superior lleva una numeracin (5X, 10X, 12X) que indica el nmero de aumentos propios del ocular. Da una imagen virtual y derecha y, por supuesto, ms grande de la imagen. b) Objetivos: Denominados as porque van cerca del objeto a observar. Est constituido por un tubo cilndrico cnico, que lleva en su interior un sistema de lentes destinados a dar una imagen real e invertida del objeto. La lente de la parte inferior se denomina lente frontal. En la parte lateral del tubo metlico lleva inscrita una numeracin (10X, 40X, 100X), que indica el nmero de aumentos propios del objetivo. Los objetivos pueden ser: Objetivos a seco: Son aquellos que, entre la lente frontal y el objeto a observar, no existe sustancia alguna, excepto el aire. Se usa para observaciones de preparados en fresco. Se clasifican a su vez: Objetivo de pequeo aumento: Hasta 10X. Objetivo de mediano aumento: Ms de 10X hasta 45X. Objetivo de gran aumento: Mayores de 45X y menores de 100X. Objetivos de inmersin: Aquellos que entre la lente frontal y el preparado a observar se interpone una sustancia lquida (comnmente aceite de cedro) cuyo ndice de refraccin es parecido a la del vidrio (1,50). Se utiliza para observaciones para preparados en seco. Son caractersticas del objetivo de inmersin: Ser el de mayor aumento. La lente frontal es ms pequea. Lleva inscrita una fraccin: , o una dcima; 1,20. De acuerdo a su procedencia lleva una franja o raya negra para facilitar su identificacin. La distancia focal es la distancia media entre la parte inferior de la lente frontal y el objeto por observar cuando se tiene un enfoque perfecto. Para objetivo de pequeo aumento (menor o igual a 10X): entre 0,5 cm. y 3 cm.; para objetivo de mediano aumento (mayor a 10X y menor a 30X): entre 3 mm. y 0,5 cm.; para objetivo de gran aumento (mayor a 30X y menor a 90X): entre 1 mm. a 3 mm.;

para objetivo de inmersin (100X): de 0,8 mm a 1,20 mm. Como podemos notar, a menor aumento de los objetivos, mayor distancia focal y viceversa. B) Sistema de Iluminacin: Se encuentran ubicados en la parte inferior de la platina y son: a) Espejo: de forma circular; presenta una cara plana y otra cncava, sujeto por medio de un eje giratorio. Se utiliza para enviar los rayos luminosos hacia el preparado. Los microscopios que funcionan con corriente elctrica carecen de espejo. b) Diafragma: Es un dispositivo constituido por un sistema de laminillas concntricas, metlicas, dispuestas de tal forma que permita abrir y cerrar regulando de esta manera la entrada de luz emitida por el espejo. c) Condensador: Es un dispositivo constituido por un sistema de dos o ms lentes montados dentro de un cilindro cnico truncado, de metal; est situado debajo de la platina. Este sistema permite concentrar o condensar los rayos luminosos emitidos por el espejo; es accionado por un tornillo. d) Portafiltro: Es un dispositivo que permite colocar filtros de diferentes colores a fin facilitar la observacin. 2. Parte Mecnica: Tiene por funcin dar soporte y ubicacin a los elementos del sistema ptico y el sistema de iluminacin, permitiendo los desplazamientos que favorecen el correcto enfoque del instrumento. Est constituido por: a) Pie (Base): es la parte que sostiene el microscopio, asegurando su estabilidad en posicin vertical, inclinada u horizontal. Presenta diferentes formas. b) Brazo (Columna): es la parte articulada al pie por una bisagra llamada charnela (es comn en los microscopios antiguos), sostiene a la platina, al tubo ocular y los tornillos macro y micromtrico. Es de donde se toma para su traslado y manejo. c) Platina: Es una plancha metlica colocada e posicin horizontal, en forma perpendicular al brazo; al centro presenta un orificio que permite el paso de la luz proveniente del sistema de iluminacin. En los modelos modernos la platina es accionada por los tornillos macro y micromtricos. Lleva adherida pinzas que sirven para sujetar la lmina portaobjetos, as mismo un carro mvil (charriot) para el desplazamiento del preparado durante la observacin. d) Tubo ptico: Es metlico y de forma cilndrica, oscurecida interiormente para evitar la reflexin de la luz, en su extremo superior da cabida al ocular e inferiormente ya sea directamente o por medio del revlver da ubicacin a los objetivos. e) Revlver: Es un dispositivo metlico, de forma circular, atornillado en la parte inferior del tubo ptico, gira sobre su eje central, presenta tres o cuatro orificios, a los que se van atornillados los objetivos. Este dispositivo sirve para cambiar la disposicin de los objetivos durante las observaciones. f) Tornillo Macromtrico: Se encuentra situado en la parte media de la columna, permiten grandes desplazamientos de la platina o del tubo ptico. g) Tornillo Micromtrico: Se encuentra situado en la parte media de la columna (en el interior del tornillo macromtrico), permiten pequeos desplazamientos de la platina o del tubo ptico. El microscopio de contraste de fases proporciona una imagen clara y detallada de clulas vivas sin teir. En un microscopio ptico ordinario, el contraste se debe a que los materiales distintos absorben diferentes cantidades de luz. Sin embargo, en el

microscopio de contraste de fases se debe a los distintos ndices de refraccin entre las partes de los microorganismos y el fondo. Las nicas diferencias estructurales entre un microscopio ptico ordinario y uno de contraste de fases son los sistemas de las lentes del objetivo y del condensador, que en el segundo estn dotados de unos anillos opacos especiales. Se fundamenta en el hecho conocido de que las ondas de luz viajan a distintas velocidades en los materiales que poseen ndices de refraccin diferentes. Por tanto, los rayos de luz que pasan a travs del espcimen no se encuentran en la misma fase que los que pasan a su alrededor. Imaginemos las olas del ocano viniendo haca la playa desde diferentes direcciones. Las olas se suman o anulan unas a otras, dependiendo de que sus crestas lleguen al mismo tiempo o no. De forma similar, el microscopio de contraste de fases combina los rayos de luz procedentes del espcimen y los que llegan de sus alrededores. Los rayos se suman o se anulan unos a otros produciendo diferentes intensidades de luz y aumentando, en consecuencia, el contraste. Se denomina interferencia al resultado de la combinacin de rayos de luz de distinta fase. La mayor ventaja que ofrece la microscopa de contraste de fases consiste en poder estudiar el movimiento y las estructuras celulares internas, que mediante esta tcnica no son distorsionadas por la fijacin y tincin. El contraste de fases proporciona considerable detalle interno. Su inconveniente es que la imagen aparece rodeada por un halo de luz, que es una consecuencia inevitable del fenmeno de interferencia, que genera el contraste. El microscopio de campo oscuro tambin permite visualizar clulas vivas sin teir. Este microscopio se basa en el principio de dispersin (esparcimiento), lo que significa que un rayo de luz cambiar de direccin, se dispersar, cuando choque contra un objeto pequeo. El microscopio de campo oscuro posee un condensador especial con un disco que desva los rayos de luz para que no penetren en el objetivo: los nicos rayos que llegarn al objetivo son aquellos que hayan sido dispersados al incidir en el espcimen. El resultado es una imagen brillante contra un fondo oscuro. La microscopa de campo oscuro es la mejor para la observacin de estructuras externas, especialmente los flagelos, pero deja ver menos detalles internos que la microscopia de contraste de fases. La tcnica de campo oscuro se utiliza para Treponema pallidum, una bacteria muy mvil, agente causante de la sfilis. Un tipo especial de microscopios que permiten la manipulacin de especmenes es el estereomicroscopio o lupa binocular que en los modelos ms actuales consta de dos microscopios cada uno con su objetivo y ocular en los que al no coincidir sus ejes pticos, las imgenes formadas en los oculares son distintas, lo mismo que ocurre con la visin ocular, por lo que vemos es una imagen en tres dimensiones. Existen otros tipos de microscopa como la de fluorescencia, microscopa confocal, microscopa electrnica, etc. 1. Reconocer, describir y comprender la importancia de algunos modelos de microscopio ptico compuesto y estereomicroscopio. 2. Realizar observaciones microscpicas de microorganismos o tejidos. 3. Reconocer, describir y comprender la importancia de algunos accesorios de un microscopio trinocular utilizado en microscopia de haz luminoso, contraste de fases y campo oscuro. 4. Evaluar el estado de los equipos de microscopa y habilitar algunos de sus componentes o instrumentos de microscopa.

II.2.1.

MATERIAL Y MTODOS: Materiales: 2.1.1. Material biolgico: Sangre Agua estancada Heces Mucosa labial 2.1.2. Material de laboratorio: Vaso de precipitacin Gradilla de coloracin Pinzas Lminas portaobjetos y cubreobjetos. Palillos o bajalengua Mechero de alcohol o de gas Bistur o tijeras de punta fina Pinzas y/o palillos estriles 2.1.3. Reactivos: Aceite de inmersin Azul de metileno Colorante Wrigth Alcohol etlico Agua del grifo Set de coloracin Ziehl Neelsen 2.1.4. Equipos de laboratorio: Microscopios ptico compuesto Estereomicroscopios Accesorios de microscopio como: Oculares Objetivos Condensadores Espejos Fusibles Filtros, etc. 2.2. Procedimiento:2.2.1.

Cebolla Insecto Hoja de vegetales

Frascos para reactivos Picetas Goteros Envases Cuchillas Tijeras Asa de kolle Estiletes Placa de Petri Marcador Fsforos Algodn, etc.

Xilol Detergente EDTA Set de Gram Solucin fisiolgica, etc.

salina

Experimento N 01: Reconocimiento de algunos modelos y componentes del microscopio ptico compuesto:

2.2.2.

2.2.3.

2.2.4.

Verificar los componentes de los microscopios y las diferencias que existen entre sus modelos. Anotar dichas observaciones. Para probar el estado de funcionamiento del microscopio realizar preparados en fresco. Experimento N 02: Reconocimiento de algunos modelos de estreo microscopios y componentes: Verificar los componentes de los estereomicroscopios (estereoscopios) y las diferencias que existen entre sus modelos. Anotar dichas observaciones. Para probar el estado de funcionamiento del microscopio realizar observaciones de algunos seres vivos. Experimento N 03: Reconocimiento de accesorios del microscopio trinocular utilizado en microscopia de haz luminoso, contraste de fases y campo oscuro: Verificar los componentes de los microscopios trinocular y los diferentes accesorios que posee dicho equipo y la utilidad de cada uno de ellos. Anotar dichas observaciones. Para probar el estado de funcionamiento del microscopio realizar preparados en fresco que sern observados en microscopa de campo luminoso, contraste de fases y campo oscuro. Experimento N 04: Evaluacin y habilitacin de algunos instrumentos y accesorios de microscopa: Verificar el estado operativo de los microscopios y que componentes o accesorios les faltan. Elaborar un plan de mantenimiento de dichos microscopios y de reparacin de algunos de sus componentes. Verificar que instrumentos de microscopa estn en mal estado y elaborar un plan de mantenimiento y reparacin de algunos de esos instrumentos.

III.

RESULTADOS:

IV.

DISCUSIN:

V.

CONCLUSIONES:

VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS: 1. Burgos, Gilmer; Guerrero, Marlene y Burgos, Guillermo. 1996. Manual de Prcticas de Biologa General. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Ciencias Biolgicas. Trujillo. Per. 2. Daz, R., Gamazo, C, y Lpez-Goi, I. 1999. Manual prctico de Microbiologa. 2 edicin. Masson, S.A.. Barcelona. Espaa. 3. Jaime, Miguel y Santos, Edwin. 1994. Manual de Prcticas de Biologa General. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Ciencias Biolgicas. Trujillo. Per. 4. Jawetz, E. y cols. 1996. Microbiologa Mdica. 15 edicin. Edit. El Ateneo. Buenos Aires. Argentina. 5. Mendo, Manuel. 2002. Instrumentacin de Laboratorio. Ediciones Laborales. S.R.L. Lima. Per. 6. Prieto, Santiago; Amich, Silvia, Salve, Mara. 1993. Laboratorio Clnico: Principios Generales. Edit. McGraw-Hill-Interamericana. Madrid. Espaa. 7. Universidad Nacional de Trujillo. Departamento de Microbiologa y Parasitologa. 1982. Gua de prcticas. UNT. Trujillo. Per. 8. Tortora, G. y cols. 1993. Introduccin a la Microbiologa. 3 edicin. Edit. Acribia. Zaragoza. Espaa.

VII. 1. 2. 3. 4. 5. 6.

CUESTIONARIO: Qu es un microscopio simple y cmo est constituido? Qu es in microscopio compuesto y cmo est constituido? Cules son las partes del sistema mecnico del microscopio compuesto? Cmo se logra en enfoque en un microscopio compuesto? Cmo est constituido el sistema ptico del microscopio compuesto? Cules son las propiedades de la lente objetivo del microscopio compuesto y su rol en la formacin de imgenes? 7. En base a cules criterios se clasifican los diferentes tipos de lentes objetivos? 8. Cmo se identifican las propiedades y caractersticas de las lentes objetivos? 9. Cules son las propiedades de la lente ocular del microscopio compuesto y su rol en la formacin de imgenes? 10. Cules son los componentes del sistema de iluminacin del microscopio compuesto? 11. Enumere las diversas fuentes de luz que se pueden emplear en un microscopio fotnico para obtener imgenes microscpicas. 12. Cules son las propiedades del condensador en el microscopio compuesto? 13. Realice un dibujo esquemtico que explique el principio de la formacin de las imgenes en el microscopio compuesto. 14. Cul es el poder de resolucin del microscopio compuesto? 15. Cules accesorios se consideran de utilidad para ampliar las posibilidades de un microscopio compuesto? 16. Qu es un microscopio estereoscpico y cules son sus aplicaciones? 17. Enumere varios tipos de microscopios especiales ms resaltantes y sus aplicaciones 18. Cul ha sido el aporte de la informtica a la microscopa, tomando en cuenta, desde la observacin del espcimen hasta el proceso de obtencin y digitalizacin de imgenes microscpicas? 19. En qu consiste la microscopa Raman o CARS (Coherent Anti-Stokes Raman Scatterig) y cules son las aplicaciones del microscopio CARS? 20. En qu consiste la microscopa virtual? Cite ejemplos.

ANEXOS: Algunos accesorios de los microscopios trinoculares

Ocular WF10x/20mm de alto punto de enfoque

Objetivo plano acromtico 20x IOS

Filtro cristal esmerilado, 32 mm diametro

Objetivo acromtico 10x



Filtro amarillo, 32 mm diametro

Objetivo plano acromtico 10x

Adaptador CCD

Condensador campo oscuro para objetivo en seco


Filtro azul, 32 mm diametro

Equipo completo de contraste de fases con obj. PLANO 10x, 40x, 100x y condensador de campo oscuro






Filtro verde, 32 mm diametro


Objetico plano acromtico 60x


Adaptador foto para cmaras reflex SRL


Equipo completo de contraste de fases con obj. IOS E-PLAN 10x, Objetivo acromtico 4x 20x, 40x, 100x


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