PPT Fusi Protoplasma

Inspiration RainAdieba
Studi Regenerasi dan Produksi Protoplas Mesofil Daun Beberapa Klon Tanaman Kentang (Solanum tuberosum L.)
Powerpoint Templates
Fusi protoplasma
Penggabungan protoplas dari dua macam tanaman yang berbeda sehingga terbentuk suatu tanaman baru dengan sifat baru yang stabil
Dua sel soma yang saling berdekatan dapat berfusi
Sel memiliki sifat totipotensi
Prinsip dasar
Menghilangkan dinding sel dari kedua sel kemudian menggabungkan kedua isi sel tersebut dalam suatu medan listrik.
Dinding sel menghambat hibridisasi
Pada sel hewan atau manusia bermanfaat untuk menghasilkann hibridoma(sel hibrid)
menggabungkan seluruh genom dari
Metode yang menginduksi munculnya variasi dari dalam tanaman itu sendiri, dengan memacu terekspresinya sifat-sifat genetik yang biasanya tertutupi/ tidak muncul pada fenotipenya
Untuk mengintroduksi gen-gen tertentu daru suatu tanaman ke tanaman lainnya dapat dilakukan Metode Fusi Protoplas
Fusi protoplas memiliki kemampuan tinggi untuk merakit kultivar-kultivar baru karena dapat mengatasi ketidakmampuan dari hibrididasi seksual maupun transformasi genetik tanaman (Purwito, 1999)
Sumber protoplas : mesofil daun tanaman in vitro
Kondisi fisiologis daun tanaman dari kultur in vitro lebih konstan dibanding daun tanaman dari rumah kaca
keseragaman daun in vitro lebih tinggi dan dapat tersedia setiap saat, tidak perlu melakukan sterilisasi
Kelemahan daun in vitro : ukuran yang kecil, menyulitkan proses isolasi, produksi protoplas rendah, bahkan sering tidak ada (Purwito, 1999)
Regenerasi merupakan salah satu komponen dalam manipulasi genetik secara in vitro
Tahap Media (pada kentang) :
1. Tahap induksi kalus menggunakan auksin dan zeatin / zeatin ribosida
II. Regenerasi Tunas menggunakan sitokinin selain zeatin
(Deb Block, 1998, Yadaf dan Sticklen, 1995)
Page *
I. Percoban melakukan maipulasi media tumbuh untuk memperbaiki pertumbuhan tanaman in vitro beberapa klon kentang terutama dalam hal ukuran daun. Mengambil model species liarSolanum chacoense
II. Meregenerasikan mesofil daun yang akan digunakan sebagai material sumber protoplas pada beberapa media regenerasi
Menggunakan 3 jenis sitokinin
Zeatin, 2ip (isopentenyl), BAP (Benzyl Amino Purine) dikombinasi dengan auksin IAA (Indol Acetid Acid), dan NAA (Naphthalene Acetid Acid) serta Giberelin dan GA3
Page *
III. Perhitungan produksi protoplas dari klon-klon yang diisolasi dalam larutan enzim 0.5 % sellulase RS dan 0.05% pektoliase Y-23 yang dilengkapi dengan M manitol, 0.005 % buffer MES pada ph 5.5
Bahan dan Metode Penelitian
Sumber Tanaman adalah 7 klon kentang koleksi Prof. Dr. G. A Wattimena (lab. BioMol dan seluler tanaman Puslut Bioteknologi IPB)
Laboratorie Morphogense Vegetable Experimentale, Univ. Paris Sud XI, Perancis dan bank plasma nutfah kentang, Madison, USA
yang berasal dari:
Media
M4
M5
M7
M8
M9
0,1 IAA + 0,5 ZEATIN + 0,5 GA
Media dasar = MS + Vitamin Morel + 20 g/l glukosa + 200 mg/l kasein hydrolisat + 8 g/l bacto agar
pH = 5,6-5,8
Kultur dilakukan 3-4 minggu sekali
Peubah yang diamati adalah persentase eksplan : (a) berkalus (b) bertunas (c) berakar
Apabila dianalisis ragam berbeda nyata maka dilanjutkaan uji duncan
Page *
Pengaruh Komposisi Media terhadap Pertumbuhan Tanaman in vitro Kentang Umur 4 Minggu
Media Tumbuh In Vitro Kentang
Page *
Pengaruh Komposisi Media terhadap Pertumbuhan Tanaman in vitro Kentang Umur 4 Minggu
Mengapa Sukrosa Lebih berpengaruh terhadap pertumbuhan diameter daun dan jumlah daun?
Kerena adanya perbedaan tingkat kemurnian antara gula pasir biasa dengan sukrosa dari Pb, SO4, So2 dan zat-zat lainnya tidak lebih dari 0,0001%.
Penelitian Gautheret (1959) dalam George dan Sherrington (1984) membandingkan berbagai jenis gula pada kultur jaringan wortel, menemukan bahwa sukrosa merupakan karbohidrat yang paling baik kemudian glukosa, maltosa cdan rafinosa. Fruktosa dan galaktosa kurang efektif, sedangkan manosa dan laktosa merupakan karbohidrat yang paling efektif.
Page *
Persentase Tunas yang Terbentuk dari Mesofil daun Kentang pada 12 MST
Diindikasikan bahwa
Hanya media M10 (0,1 mg/l IAA + 0,5 mg/l zeatin + 0,5 mg/l GA3) yang mampu meregenerasikan tunas yang vigor pada semua klon yang digunakan. Media M10 rata-rata mampu meregenerasikan 5,6 tunas per eksplan, sedangkan media M3 (0.5 mg/l IAA + 3 mg/l BAP + 1 mg/l GA3)juga mampu meregenerasikan tunas pada semua klon (4,8 tunas), namun tunas yang dihasilkan kurang vigor pada sebagian klon
Produksi Protoplas
Atlantic merupakan klon yang pertumbuhannya vigor, berwarna hijau tua dan daunnya relatif tebal.
Klon ini banyak fenolik mengandung, sehingga produksi protoplasnya relatif sedikit.
Cardinal daunnya berwarna hijau muda
Klon ini cukup banyak mengandung fenolik sehingga produksi protoplasnya relatif sedikit.
Page *
kondisi – kondisi yang terkait dengan tanaman asal sumber protoplass inilah yng diduga menyebabkan bervariasinya produksi protoplas yang dihasilkan.
Page *
Purwito(1999)) mengatakan bahwa tanaman yang daya tumbuh cepat dan diameter daun lebar pada media perbanyakan akan menghasilkan protoplas yang lebih banyak dibandingkan tanaman yang daya tumbuh lemah.
Page *
Kesimpulan
Media MS dengan dua kali konsentrasi unsur makro yang dikombinasikan dengan sukrosa menghasilkan tanaman in vitro yang vigor dan diameter daun terlebar (1,44 cm)
Kemampuan eksplan mesofil daun dalam menginisiasi tunas tergantung dari interaksi anatara jenis dan konsentrasi ZPT yang digunakan. Namun secara umum M10 (0,1 mg/l IAA + 0,5 mg/l zeatin + 0,5 mg/l GA3) menunjukkan hasil yang paling bagus.
Larutan enzim dengan konsentrasi 0,5% selulase onozuka RS dan 0,05% pektoliase, 0,05% MES, 9,1% Manitol, pada pH 5,5-5,6 dapat mengisolasi dengan jumlah banyak dan bervariasi antar klon yang tertinggi 46,58 x 105 protoplas/g daun BF15 dan paling sedikit 10,50 x 105 protoplas/g daun Atlantic.
Page *
Fusi protoplas merupakan teknik penggabungan inti dan atau sitoplasma antara dua genotipe yang berbeda secara in vitro untuk mendapatkan hibrida dengan sifat sifat yang diinginkan.
Faktor faktor penting yang berpengaruh dalam hibridisasi somatik adalah sumber protoplas yang dipergunakan, metode isolasi protoplas, jenis dan konsentrasi enzim yang dipergunakan, parameter listrik pada saat fusi, dan media yang dipergunakan pada awal kultur protoplas pasca fusi serta media regenerasi protoplas (Purwito, 1999).
Menurut hasil penelitian Purwito (1999) ternyata bahwa pada isolasi protoplas tanaman kentang, jenis dan konsentrasi enzim sangat menentukan banyaknya protoplas yang dihasilkan, bahkan pada komposisi enzim yang sama menghasilkan protoplas dalam jumlah yang berbeda akibat perbedaan genotipe tanaman. Umumnya tanaman yang tumbuh vigor menghasilkan protoplas lebih banyak dibandingkan tanaman yang tumbuh kurus (Purwito,1999).
2. Devi A
optimalisasi?

PPT Fusi Protoplasma

Documents

Transcript of PPT Fusi Protoplasma