PENGARUH pH PADA AKTIVITAS ENZIMPRAKTIKUM NO 1

PENGARUH pH PADA AKTIVITAS ENZIM Tiap kelompok mengerjakan satu pHPercobaan yang dilakukan sama hanya pH nya yang berbedaAda 5 kelompok pH:pH 4pH 5 pH 6,5pH 8pH 10

CARA KERJA

TAHAP PRAKTIKUM

Langkah 1Isi erlenmeyer15 ml larutan penyangga pH 6.56 ml larutan NaCl 0.9%3 ml larutan substrat 1 %Campur Letakkan pada suhu kamarLangkah 2Isi tabung reaksi 1 s/d 5 masing-masing 10 ml HCl 0,05 N

Langkah 3 : masukkan 1 ml dari erlenmeyer ke tabung 0 (nol menit)Langkah 4: Masukkan 1 ml larutan enzim pada erlenmeyer , campur cepat dan catat waktunya Langkah 5: Masukkan 1 ml dari erlenmeyer ke tabung 2 dst tiap 5 menit (tepat waktunya)Langkah 6 : masukkan 1 ml larutan KI-KIO3 ke masing-masing tabung campur tunggu 10-15 baca pada spektrofotometer 620 nm

PERHITUNGANBaca absorbance substrat yang ada pada panjang gelombang 620 nmKadar substrat sisa = Abs t/ abs to X 100%Kadar substrat yang telah dicerna ( S )= 100% - kadar substrat sisaBuat grafik hubungan S dengan t (waktu)

SHitung besar SBuat grafik hubungan S dengan tS sebagai ordinat dan t (waktu) sebagai abscisBandingkan grafik yang didapat pada pH yang berbeda-beda

pH optimum suatu enzim adalah pH yang memberikan aktivitas enzim paling tinggi pH IPada pH optimum harga S /t selalu lebih besar dibanding pada pH lainnya

S = PS pH IpH II

pH IIIpH IV

pH OPTIMUM UMUMNYA BERKISAR ANTARA pH 5 9 (BERBENTUK GENTA)PERKECUALIAN: MISALNYA PEPSIN pH OPTIMUMNYA 1-2

Akrivitas E (%)100pH < pH opt pH>

Hubungan antara aktivitas enzim dengan pH berbentuk genta karena:Denaturasi protein pada pH terlalu tinggi atau terlalu rendahPengaruh pH pada muatan enzim ataupun substrat, misalnya E- dan SH+ ESHBila pH > maka SH+ S + H+ S tak dapat berikatan dengan E-Bila pH < maka E- bereaksi dengan H+ EH EH tak dapat berikatan dengan SH+pH mempengaruhi konformasi (susunan atom dalam ruang)

Substrat : amilum (dengan iodium berwarna biru)Enzim : - amilaseAmilase adalah suatu endopolisakaridase, jadi tidak dapat memotong glukosa yang terletak diujung, selain itu juga tak dapat memotong ikatan -(14) pada glukosa yang terletak sebelum titik cabangKinetika enzim amilase

Amilum terdiri dari amilosa dan amilopektinAMILOSA : Rangkaian glukosa rantai lurus dengan ikatan -1,4-glukosidikProduk : Maltosa sedikit glukosa

AMILUM

AMILOPEKTIN

1 416

Cara kerja enzim amilase

Amilopektin : Rangkaian glukosa rantai lurus dengan ikatan -1,4-glukosidik dengan sedikit rantai cabang dengan ikatan -1,6-glukosidik Produk:oligosakarida dengan berat molekul kecil: maltosa maltotriosaIsomaltosa limit dekstrin (atom C 4-10)glukosa (sedikit)

Amilopektin

Dekstrin dengan BM medium(Violet, purple, red iodine colour)

Limit dextrins

Oligosakarida dengan BM rendah

Berdasar tingatan reaksi serta warnanya dengan IodiumAMILUM ( Biru)

AMILODEKSTRIN (ungu)

ERITRODEKSTRIN (merah)

AKRODEKSTRIN (tak mengubah warna Iodium)

MALTOSA ( tak mengubah warna Iodium)

PROGRESS CURVE DIUKUR DENGAN SPEKTROFOTOMETER LARUTAN PENYANGGA DLL[So] pH TERTENTU SUHU TERTENTU TERTENTU

LARUTAN ENZIMDIIKUTI SECARA KONTINU Abs P (PRODUK) DAPAT DIKONVERSI MENJADI P P = S ( JUMLAH SUBSTRAT YANG TELAH DIUBAH]

PROGRESS CURVE Hubungan antara P dengan t Hubungan antara S dengan t Hubungan antara abs P dengan t vo = tangens = RR / OR

PROGRESS CURVE MULA-MULA BERBENTUK LURUS, LALU BERBELOK Sebab:Jumlah substrat makin lama makin sedikitAdanya mekanisme hambatan oleh produk (product inhibition) A P E

-

O O t (waktu)BBCCC*PKECEPATAN SESAAT vsesaat di suatu titik merupakan tangens sudut yang dibentuk oleh grafik di titik itu dengan sumbu Xvsesaat = - dS/dt = dP/dtvsesaat di titik o disebut vo atau kecepatan awal = tg MACAM-MACAM KECEPATAN

KECEPATAN RATA-RATAvrata-rata di titik B = BB/OBvrata-rata di titik C = CC/OC Po o

PKECEPATAN SESAAT PADA tovo = tg = CC/OCPADA TITIK Bvsesaat = CC*/BC*= tg PADA TITIK Cvsesaat = tg < tg

vrata-rata PADA B = BB/OB = tg PADA C = CC/OC < tg

JADI PADA AWAL PROGRESS CURVE WAKTU GRAFIK MASIH LURUS KECEPATAN RATA-RATA PADA TIAP TITIK = KECEPATAN SESAAT = vo = tg vo ATAU KECEPATAN AWAL (INITIAL VELOCITY) ADALAH KECEPATAN SESAAT DI TITIK OPADA to KADAR SUBSTRAT = [So] MASIH 100% vo DIUKUR DENGAN CARA MENGUKUR TANGENS SUDUT YANG DIBENTUK GRAFIK DGN SUMBU X DI TITIK O vo MERUPAKAN TANGENS BAGIAN AWAL PROGRESS CURVE YANG MASIH LURUS

Faktor yg mempengaruhi aktivitas reaksi enzimatikpHSuhuKadar substratKadar enzimModifier : Inhibitor Aktivator

Praktikum kinetika enzim amilaseSubstrat : amilum ( dengan Iodium berwarna biru)Enzim : -amilaseApabila pencernaan sempurna hasil utamanya adalah maltosa (tidak berwarna dengan Iodium, sehingga warna larutan adalah warna Iodium yaitu kuning)

Fungsi larutan HCl : Melepas I2 dari KI-KIO3 5 KI + KIO3 + 6 HCl -> 3 I2 + 6 KCl + 3 H2OMenghentikan kerja enzim

Fungsi Larutan bufferMemberikan pH untuk percobaanMempertahankan pH selama percobaan

Fungsi larutan Na Cl 0.9%Sebagai aktivator enzim amilase ( Cl-)

SPEKTROFOTOMETERSUMBER FILTER/ SLIT KUVET FOTOSEL GALVANO-CAHAYA MONO- METER CHROMATOR

SUMBER CAHAYA : PUNYA BANYAK SPEKTRUMFILTER/MONOCHROMATOR UNTUK MENDAPATKAN BERKAS SINAR/ SPEKTRUM YANG DIINGINKANSLIT: MENINGKATKAN KEMURNIAN KROMATIK ( = PANJANG GELOMBANG) KUVET : BERISI LARUTAN YANG DIPERIKSASINAR YANG DITERUSKAN DARI KUVET AKAN MENUJU KE FOTOSEL

FOTOSEL MENGUBAH ENERGI SINAR MENJADI ENERGI LISTRIKGALVANOMETER : MENGUBAH ENERGI LISTRIK MENJADI ENERGI MEKANIK MENGGERAKKAN JARUM

TRANSMITTANCE : 0 -100% ABSORBANCE = OD (OPTICAL DENSITY = EXTINCTION = 2 - LOG T

TRANSMITTANCE : SESUAI SINAR YANG DITERUSKANABSORBANCE SESUAI SINAR YANG DISERAPMisalkan T = 100% maka Abs = 2 L0G 100 = 0 T = 10% Abs = 2 LOG 10 = 1

ABSORBANCE TERGANTUNG SIFAT KADAR BAHAN/ LARUTAN YANG DIPERIKSA