Enzygnost HBsAg 6.0

Revizyon ubuu, nceki versiyonda yaplan gncellemeleri gstermektedir.

Kullanm AmacEnzygnost HBsAg 6.0 insan serum veya plazmasndaki hepatit B (yzey) antijeninin kalitatiftespiti iin kullanlan bir enzim immn testidir.Enzim immn testi ELISA ilemcileri, BEP III Sistemi, BEP 2000 Sistemi ya daBEP 2000 Advance Sistemi ve ayrca Quadriga ve Quadriga BeFree Sistemleri kullanlarakilenebilir. Testin otomatik olmayan ekilde allmas da mmkndr.

zet ve AklamaTip B viral hepatit genellikle serumda hepatit B yzey antijeni (HBsAg) grnmesine elikeder1,2. Normal olarak HBsAg serumda hastalk balangcndan nce 2 veya 3 hafta erkensaptanabilir ve karakteristik semptomlar grndnde tepe titresini yakalar (sarlk,karaciere spesifik enzimlerin konsantrasyonlarnda deiiklikler)3. Bunu normal olarakantijenin derece derece eliminasyonu izler. Baz durumlarda ve subklinik hepatit Benfeksiyonlarnn bilinmeyen bir yzdesinde, antijen serumda yaam boyu veya yllarcasaptanabilir4.HBsAg ieren kan transfzyonu5, sklkla transfzyonu alan kiinin hepatit B enfeksiyonu ilesonulandndan, HBsAg testinin zel nemi, post-transfyon hepatit B skln azaltmayntemi olarak zellikle kan balarnn taranmasyla ilgilidir6. Hepatit B virsnn ncedenbilinen sekiz genotipinin (A - H)7,8 saptanmasna ek olarak, transfzyon yoluyla tansal olarakgzden kaan mutantlarn tanmasn engellemek iin HBsAgnin deien formlarnnsaptanmas son yllarda9 gittike nem kazanmaktadr.Buna ek olarak HBsAg testi ayrca akut ve kronik hepatit B enfeksiyonu tans iin kullanlr5.HBsAg testlerinin yksek duyarllna ramen, hepatit Bnin HBsAg-negatif rnek yoluylatanma riski tamamen yok edilemez.

Yntem PrensibiEnzygnost HBsAg 6.0, iki adml bir ynteme dayal bir enzim immun testidir. lk admdarnekteki HBsAg e zamanl olarak mikrotitrasyon pla haznelerine bal poliklonal anti-HBsantikorlar ve Konjgat 1 ile reaksiyona girer (Anti-HBs/Biotin, mavi renkli). kinci admda, balolmayan reaktantlarn karlmasndan sonra, Konjgat 2 (Streptavidin/POD, sar renkli)Konjgat 1 ile reaksiyona girer.Bal olmayan reaktantlarn karlmasndan sonra, bal Konjgat 2nin enzim aktivitesibelirlenir (mavi renkli reaksiyon). Kromojenin enzimatik dnm Durdurma SolsyonuPODun eklenmesiyle tamamlanr (sar renkli reaksiyon). Renk younluu rnekteki antijenkonsantrasyonuyla orantldr.

ReaktiflerSimgeler Salanan Materyaller Enzygnost HBsAg 6.0 2 x 96 10 x 96 10 x 96 (Q)MTP Enzygnost HBsAg 6.0 test pla 2 pr 10 pr 10 prCONJUGATE 1 Konjgat 1 (Anti-HBs/Biotin) 2 x 5 mL 10 x 5 mL 3 x 15 mL

OPFMG03C48 Rev. 11 TR 2014-05 1/13

Simgeler Salanan Materyaller CONJUGATE 2 Konjgat 2 (Streptavidin/POD) 2 x 12.5 mL 10 x 12.5 mL 2 x 75 mLCONTROL HBsAg Kontrol Serum, negatif 2 x 2.5 mL 4 x 2.5 mL 3 x 2.5 mLCONTROL + HBsAg Kontrol Serumu, pozitif 2 x 1.5 mL 3 x 1.5 mL 3 x 1.5 mL Etiket Konjgat 1 iin bo ie --- 1 pr --- Etiket Konjgat 2 iin bo ie --- 1 pr --- Kullanm Talimatlar 1 pr 1 pr 1 pr Deerler barkod tablosu 1 pr 1 pr 1 pr Polietilen torba 1 pr 1 pr 1 prTest pla, Konjugat 1, Konjugat 2 ve bunlarn yan sra HBsAg Kontrol Serumu, negatif veHBsAg Kontrol Serumu, pozitif, ambalaj zerinde yazl olarak temin edilmi ve barkod deerlertablosunda belirtilmi 6 haneli lot numaras kombinasyonunda kullanlmaldr.

Gerekli olan ancak salanmayan materyallerEnzygnost/TMB iin Ek Reaktifler ( REF OUVP)Kromojen TMB ve Tampon/Substrat TMB reaktifleri ancak Yardmc Reaktifler Kiti OUVPdebelirtilen lot kombinasyonunda kullanlabilir. Geerli lot numaralar ambalaj zerinde verilen6 haneli numaralardr.

BileimEnzygnost HBsAg 6.0 test pla: HBsAg koyun antikorlaryla kaplanm mikrotitrasyon pla.Konjgat 1 (Anti-HBs/Biotin): Monoklonal anti-HBs (fare), konjge edilmi biotin, mavi renkli.Koruyucu: fenol ( 1 g/L)Konjgat 2 (Streptavidin/POD): Streptavidin, konjge edilmi peroksidaz (POD), sar renkli.Koruyucu: fenol ( 1 g/L)HBsAg Kontrol Serum, negatif: Stabilize insan serumu, yeil renkli, nominal absorbans: 0.150.Koruyucu: fenol ( 1 g/L)HBsAg Kontrol Serum, pozitif: Stabilize insan serumu: 0.15 ile 0.32 U/mL, hedef deer:0.25 U/mL (Paul Ehrlich Enstitsnn referans materyali HBsAg Adye gre izlenebilirdurumdadr), krmz renkli, nominal absorbans 0.7.Koruyucu: fenol ( 1 g/L)

Uyarlar ve nlemlerIn vitro tan amal kullanm iindir.Test, toplu rnekler iin deil ayr rneklerin test edilmesi iin gelitirilmitir.DKKAT! POTANSYEL BYOLOJK TEHLKEHBsAg Kontrol Serumunun (negatif) retiminde kullanlan her bir donr ya da donrbirimi, In Vitro Tan Amal Tbbi Cihazlara likin AB Direktifi ile uyumlu veya ABD Gdave la Dairesi (FDA) tarafndan onaylanm testler kullanlarak insan immn yetmezlikvirs (HIV) 1 ve 2, hepatit B virs (HBV) ve hepatit C virs (HCV) bakmndan testedilmi ve negatif olduu bulunmutur. Bilinen hibir test bulac etkenlerin varolmad konusunda tam gvence sunamayaca iin, insanlardan elde edilen tmrneklerin gerekli dikkat ve zen gsterilerek kullanlmas gerekmektedir.Test prosedrnn tamam boyunca koruyucu gzlk taklmas tavsiye edilir.Kullanlan eldivenlerin maruz kalnan materyallere kar koruma salama yeterliliibilgisi iin ltfen retici talimatlarna uyun.

Enzygnost HBsAg 6.0

2/13 2014-05 OPFMG03C48 Rev. 11 TR

Atklar asndan, kat infeksiyz materyalin en az 1 saat sreyle 121 Cdeotoklavlanmas nerilir. Tm emilen svlar, birbirlerine seri olarak balantl iki kaptatoplanmaldr Haznelerin her ikisi de, insan patojenlerini inaktive etmek asndanuygun bir dezenfektan iermelidir. retici tarafndan belirtilmi olankonsantrasyonlara ve reaksiyon srelerine uyulmaldr.Tampon/Substrat TMB, Kullanma Hazr Kromojen Solsyonu ve Durdurma SolsyonuPODun ar metal iyonlar ya da okside edici maddeler ile temasndan kanlmaldr(sv ile dorudan temasa geen metal paralar bulunan pipetler kullanmayn).Substrat reaksiyon aamalar, hipoklorit ieren dezenfektanlarn yaknndagerekletirilmemelidir. Kromojen alma Kromojen Solsyonu test planaaktarlmadan nce bir anda mavi renge dnerse solsyon kontamine olmu demektir;bu durumda temiz bir kap ierisinde yeni solsyon hazrlanmaldr. Yukardabahsedilen solsyonlarn ciltle temas etmesinden kanlmaldr.

Reaktiflerin HazrlanmasTeste balamadan nce tm reaktifleri ve test rneklerini 15 ile 25 C aras sya getirin. Buadmda test plandan folyo torbay kartmayn. Testi ilemeye balamadan ncegerekmeyen stripleri yuvadan kartn ve bunlar daha sonra kullanmak zere ambalajdakipolietilen torbaya koyun. Reaktifler ile reaktif alma solsyonlarnn kartrlmas gerekiyorsa,ilem srasnda kpk olumasn engelleyin.BEP III Sistem zerinde ok sayda rnek dizisiyle alrken sklkla rnga deitirmemek iin10 x 96 (Q) kiti tavsiye edilir. 10 x 96 kitinin varyantn kullanrken, birka flakon konjugat dahabyk ielere aktarlabilir (rnein Ek Reaktifler REF OUVP 17 kitindeki Kromojen almaSolsyonu iin temin edilen kullanlmam bo ielere) ve Konjugat 1 (Anti-HBs/Biotin) veyaKonjugat 2 (Streptavidin/POD) iin, reaktif kapana zerlerine BO E KONJUGAT etiketikoyulmu olarak yerletirilebilir.Her test pla iin, Enzygnost/TMB iin Yardmc Reaktifler Kitinde bulunan 20 mL YkamaSolsyonu PODu saf su veya deiyonize su ile 400 mLye seyreltin.Her test pla iin, 1 mL Kromojen TMByi 10 mL Tampon/Substrat TMByi, Enzygnost TMBiin Yardmc Reaktifler Kitiyle birlikte verilen bo plastik iede seyreltin (Kromojen almaSolsyonu). Iktan koruyarak saklayn. Kullanlmasnn ardndan ieyi distile ya da deiyonizesu ile iyice durulayn.Ayrca, Kromojen TMB iesinin ve Tampon/Substrat TMB iesinin tm ieriinin bo ieyebirlikte doldurulmasna izin verilir.Enzygnost/TMB, REF OUVP 27 iin Ek reaktifleri kullanlrken, Kromojen TMB flakonuierisindeki miktarn tamam Buffer/Substrate TMB barkod etiketli flakonun ierisineaktarlmaldr.

Saklama ve StabiliteEnzygnost HBsAg 6.0 kitinin tm bileenleri, almam halde sakland takdirde, etiketlerdeverilmi olan son kullanma tarihlerine kadar kullanlabilir. Ak reaktiflerin tam stabilitesi vesaklama verileri iin Tablo 1e bakn. Tablo 2, reaktiflerin eitli analizr sistemlerinde cihazzerindeki stabilitesi hakknda bilgi ierir.

Gerekli Olan DonanmBEP III: rneklerin datlmasndan sonra testin otomatik olarak

gerekletirilmesinin yan sra deerlendirilmesi iin.BEP 2000/BEP 2000 Advance: Testin tam otomatik olarak gerekletirilmesi ve

deerlendirilmesi iin.Quadriga: BEP III ile birlikte testin tam otomatik gereklemesi ve

deerlendirilmesi iin.Pipetler: Sabit veya deiken hacimli piston tipi pipetler veya hacmi

ayarlanabilir hacimli tek ve ok kanall pipetler.Testin otomatik olarak gereklememesi durumunda ek olarak aadakiler de gereklidir:

Enzygnost HBsAg 6.0

OPFMG03C48 Rev. 11 TR 2014-05 3/13

nkbatr: Kapakl termostatik su banyosu (37 1 C) veya benzer birinkbasyon yntemi.

Ykama cihaz: Miktotitrasyon plak ykayc.Fotometre: Mikrotitrasyon plaklar iin uygun fotometre, lm dalga

boyu 450 nm, referans dalga boyu 650 nm (uygunolduunda 615 nm ile 690 nm aras). SURE lmleri iindalga boyunun 405 nm olmas da gereklidir.

Testte kullanlan tm ekipman onaylanm olmaldr.

rneklerUygun olan rnekler standart laboratuvar teknikleriyle elde edilmi olan ayr ayr rneklerdir(insan serumlar veya CPDA'l/EDTA'l/heparinize edilmi/sitratl plazma).CPDA, heparinize edilmi ve sitratl plazma rnekleri, 3 gnden fazla olmamak kaydyla2 ile 8 C'de saklanmaldr, serum ve EDTA plazmas ise bu saklama koullarnda 8 gne kadarkullanlabilir. Numuneler bu sre iinde dondurulmusa, tekrarlanan dondurma zdrmednglerinden kanld takdirde -20 C'nin altnda en az 2 yl 8 ay saklanabilir.

ProsedrOtomatik allmayan Test Prosedr

1. Test emas: Gereken test pla hazne says rnek says alnarak ve buna HBsAg KontrolSerumu negatif ve pozitif iin determinasyon says (n = 5) eklenerek belirlenir.

2. rneklerin datlmas:100 L of HBsAg Kontrol Serumu, negatifi 3 haznenin (A1-C1) herbirine datn, 100 L HBsAg Kontrol Serumu, pozitifi bir hazneye datn (D1) ve sonrakihaznelere 100 L seyreltilmemi rnek datn. Serinin sonunda test pla srasyla bir adethazneyi daha 100 L HBsAg Kontrol Serumu, pozitif ile doldurun.nemli:HBsAg Kontrol Serumu, pozitifin ilk olarak rnek serilerinin banda ve sonundakuyucuklara pipetlenmesine ve sonra rneklerin araya koyulmasna izin verilmez.Alternatif pipetleme emas:100 L of HBsAg Kontrol Serumu, negatifi 3 haznenin (A1-C1) her birine datn, 100 L HBsAg Kontrol Serumu, pozitifi 2 haznenin her birine datn(D1-E1) ve sonraki haznelerin her birine 100 L seyreltilmemi rnek datn.Her rnek, kendi pipet ucuyla pipetlenmelidir. Pipetleme admlar test pla bana30 dakika iinde gerekletirilmelidir.

Pipetleme Kontrol (istee bal):Kontrollerin ve rneklerin doru pipetlenmesi kolaylkla gzle kontrol edilebilir. HBsAg KontrolSerumu, negatif (yeil), HBsAg Kontrol Serumu, pozitif (krmz), rnek ve bo kuyucuk arasndakifark net biimde ayrt edilebilir. Kontrollerin ve rneklerin pipetlemesi, 650 nm'ye kar 405 nm'defotometrik lmle kalitatif olarak (SURE adl fonksiyon) kolayca kontrol edilebilir.SURE lmnde, 405 nm ve 650 nm'de fotometrik lm, kontrollerle ve rneklerle ykl testpla kullanlarak gerekletirilir. SURE deeri (ASURE) aadaki gibi hesaplanr:ASURE = A405 nm - A650 nmASURE 0.100 ise, sz konusu kuyucuk bo deildir. ASURE < 0.100 ise, rnek veya kontroln szkonusu kuyucua doru pipetlenip pipetlenmedii sorgulanabilir.

rnekleri dattktan ve ardndan SURE lm tamamlandktan hemen sonra, Konjgat 1idatarak devam edin.

3. Konjugat 1 datlmas: Her bir hazneye 25 L Konjgat 1 (Anti-HBs/Biotin) pipetleyin.Ardndan folyo ile kapatn ve konjgat datm admn tamamladktan hemen sonra plahemen inkbatre yerletirin.

4. nkbasyon: nkbasyonu 37 1 C sda 60 2 dakika sreyle yapn, ardndan derhalykama admna gein.

Enzygnost HBsAg 6.0

4/13 2014-05 OPFMG03C48 Rev. 11 TR

5. Ykama: Folyoyu kartn; tm hazneleri emdirin ve her hazneyi 10 sn tutarak hazne banayaklak 0.3 mL ykama solsyonu ile 4 kez ykayn. Ykama dnglerini tamamladktansonra, haznelerin kurumasn engellemek iin derhal Konjgat 2nin datlmas admnagein.

6. Konjugat 2 datlmas: Her bir hazneye 100 L Konjgat 2 (Streptavidin/POD) datn.Ardndan folyo ile kapatn ve konjgat datm admn tamamladktan hemen sonra plahemen inkbatre yerletirin.

7. nkbasyon: nkbasyonu 37 1 C sda 30 2 dakika sreyle yapn, ardndan derhalykama admna gein.

8. Ykama: Folyoyu kartn; tm hazneleri emdirin ve her hazneyi 10 sn tutarak hazne banayaklak 0.3 mL ykama solsyonu ile 4 kez ykayn. Ykama ilemini tamamladktan sonra,kuyucuklarn kurumasn nlemek iin vakit kaybetmeden substrat datm admnageiniz.

9. Sbstratn datlmas: Her hazneye 75 L of Kromojen alma Solysonu pipetleyin vemikrotitrasyon plan yeni folyo ile kapatn.

10. Sbstratn inkbasyonu: Iktan korunacak ekilde 30 2 dakika boyunca 15 ile 25 Cdeinkbe ediniz.

11. Reaksiyonun durdurulmas: Folyoyu kartn. Sbstratn datlmas basamandaki aynzamanlamayla kuyucuklarn her birine 75 L Durdurma Solsyonu POD ilave edin.

12. lm: Test plan bir saat ierisinde 450 nmde okuyun. nerilen referans dalga boyu650 nm, veya gerekli durumlarda 615 ile 690 nm arasdr.

Fotometrenin sfrlanmas gerekiyorsa bunun iin Durdurma Solsyonu POD kullanlmaldr.reticinin talimatlarna uyun.

BEP III SystemBEP III Sistemi kullanlrken test plaklar rnek datma admna kadar hazrlanmaldr(Otomatik allmayan Test Prosedr blmnde adm 1 ve 2). Ksmen ykl testplaklarnn en az yar plaa kadar suyla doldurulmu stripler (6 test stripi) ile desteklenmesinisalayn. Hemen ardndan ak test plaklarn, yani folyo ile kapatlmam olanlar BEP III iineyerletirin.Takip eden tm ilem admlar analiz cihaz tarafndan otomatik olarak gerekletirilir (bkz.BEP III Kullanm Klavuzu). BEP III yazlmndaki inkbasyon sresi ayarlar, tekniknedenlerden (sistem hz) dolay Otomatik allmayan Test Prosedrnde tarif edilensrelerden farkl olabilir, ancak bunlar BEP III zerinde Enzygnost iin dorulanmtr.

Tam otomatik sistemler iin prosedr (BEP 2000 ve Quadriga)rnek datma admlar ve bunu takip eden ilemler analiz cihaz tarafndan tamamenotomatik olarak yaplr (ilgili kullanm klavuzuna bakn). Ksmen ykl test plaklarnn en azyar plaa kadar suyla doldurulmu stripler (6 test stripi) ile desteklenmesini salayn.Teknik nedenlerle (sistem hz), bu analizrlerin yazlmndaki inkbasyon sresi ayarlar,Otomatik allmayan Test Prosedrnde belirtilen srelerden farkl olabilir, ancak bunlaranalizr ve kit iin dorulanmtr.

Kalite KontrolDorulama Kriterleri

Dorulamalar BEP III, BEP 2000 ve Quadriga Sistemleri ile otomatik olarak yaplr. Ltfenilgili kullanm klavuzlarna bavurun. Aadaki iki kriterin birlikte karlanmas durumundaortalama deeri hesaplamak iin HBsAg Kontrol Serumuna (negatif) ait tekil absorbansdeerleri kullanlr:Kriter A: -0.010 Aneg. 0.150Kriter B: Aneg. < eik deeri

Enzygnost HBsAg 6.0

OPFMG03C48 Rev. 11 TR 2014-05 5/13

Analizrleri kullanrken, HBsAg Kontrol Serumu, negatif iin absorbans deerinden maksimum biri, her ikikriteri de karlamyorsa elenebilir. Alternatif olarak, tam otomatik BEP 2000 Sistemi kullanlyorsa, B kriteridnda kalan deer, aadaki durumda elenebilir:Kesme-deeri < Aneg. 0.150Kontrollerin ve rneklerin manuel datm srasnda gerekli pipetleme gvenlik nedenleri yznden sonseenek BEP III Sistem iin geerli deildir; test almas geersizdir.

HBsAg Kontrol Serumu, positifin her iki abzorbans deeri de aadaki spesifikasyonlarkarlamaldr:Apos. 0.700Bu spesifikasyon karlanmazsa test tekrar edilmelidir.

SonularDeerlendirmeler BEP III, BEP 2000 ve Quadriga Sistemleri ile otomatik olarak yaplr.Ltfen ilgili kullanm klavuzlarna bavurun. Yazlm destei olmadan deerlendirme ilemiyaplmaktaysa, aada belirtilen noktalar dikkate alnmaldr.Cut off deerini hesaplamak iin, HBsAg Kontrol Serumunun (negatif) geerli absorbansdeerlerinin ortalamasn kullann ve 0.050 deerini ekleyin.neg. + 0.050 = eik deeriTest kriterlerine dayanarak rnekler aada belirtildii gibi snflandrlmtr:HBsAg negatif: Arnek < eik deeriHBsAg reaktif: Arnek eik deeriTest sonularnn bir yorumu Arnek katsays ve kesme deer oluturularak da yaplr (Oran):

Oran = Arnek eik deeri

BEP III, BEP 2000 ve Quadriga Sistemleri kullanldnda, oran analizr yazlm tarafndanotomatik olarak hesaplanr. Bu yntemde, farkl ilemlerden alnan sonularstandartlatrlabilir ve birbirine daha yaknlatrlabilir. Test sonucu u ekilde yorumlanmaldr:HBsAg negatif: Oran < 1HBsAg reaktif: Oran 1Kesme deerine srasyla eit veya daha yksek absorbans deerleri salayan rnekler 1.0e eitveya daha yksek olan bir oranda iki kopya halinde tekrar test edilmelidir. ki kopya testininsonular kesme deerinin altnda absorbans deerleri veya 1.0dan kk kesme deeriveriyorsa, rnek, test kriterlerine gre antijen-negatif olarak dikkate alnr.Tekrar test edilen abzorbans deerlerinden en az ikisi kesme deerine eitse veya zerindeyseveya oran 1.0'a eitse veya zerindeyse, rnek srekli olarak reaktif kabul edilmelidir. Tmreaktif rnekler tannan dorulama yntemine gre aklanmaldr.

Prosedrn Snrlamalar1. Heparin, EDTA, sitrat ve CPDA gibi antikoaglanlar test sonularn etkilemez.2. Lipemik rneklerim testte hibir yan etkileri yoktur.3. kterik rnekler test edilirken (test edilen konsantrasyonlar: en fazla 600 mg/L bilirubin),

test ile etkileim gzlemlenmemitir.4. Gebe kadnlardan alnan rnekler ve aadaki potansiyel etkileim maddeleri ieren

rnekler incelenmitir: ANA, HAMA, bunun yan sra HIV, HCV, CMV, HAV, EBV, HSV'ye karantikorlarlar ve parvovirs. Bu rnekler test sonularn etkilememitir.

5. Is uygulanan rnekler (30 dakika, 56 C) Enzygnost HBsAg 6.0'da yksek spesifikolmayan reaktivite gsterebilir.

6. Artan hemoglobin konsantrasyonlar (6 g/L'ye kadar olan konsantrasyonlar) testsonularyla etkilememitir.

Enzygnost HBsAg 6.0

6/13 2014-05 OPFMG03C48 Rev. 11 TR

7. rneklerde biotin ieriinin ykselmesinin (2.6 g/Lye kadar kontrol edilen) test sonucuzerinde etkisi yoktur.

8. HIV, HCV, CMV, HDV, EBV, VZV, HAV, HSV, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum(sifilis) ve parvovirs enfeksiyonlar test sonularn etkilemez.

9. l kiilerden alnan kan rnekleri zerinde yaplan testler Enzygnost HBsAg 6.0'nkullanm amacnn bir paras deildir ve Siemens Healthcare Diagnostics tarafndandesteklenmez.

10. Yetersiz ekilde koagle olmu serumlar ve mikrobiyolojik olarak kontamine olmurnekler kullanlmamaldr. rnekteki her trl partikl ieren bileen (rnein fibrinphts, eritrositler) test ncesinde kartlmaldr.

11. Eritilmi rnekleri kullanrken, kullanmadan nce materyalin iyi ekilde homojenizeolmasn salayn.

12. nceden dondurulmu rnekler ve kan phts zerinde uzun dnem boyunca saklanmrnekler Enzygnost HBsAg 6.0da ykselen spesifik olmayan reaktivite sergileyebilir.

13. rnekteki romatoit faktrler Enzygnost HBsAg 6.0da ykselen spesifik olmayanreaktiviteye neden olabilir, ancak testin duyarll zerinde hibir negatif etkileri yoktur.

14. Manuel test yaplmas durumunda hatal reaktif sonularn engellemek iin konjugatdatlrken haznenin kenarna pipet ucuyla dokunmayn.

15. nkbasyon evresinde test pla titreimden korunmaldr (rnein salam bir yzdrmeyardmcs zerine ya da sirklasyon bulunmayan bir su banyosuna yerletirilmelidir);plan kuyucuklar, ss termostatla kontrol altnda tutulan suyla temas halinde olmaldr.Suyun mikrobiyal kontaminasyonunu nlemek iin stabilizrler kullanld takdirde, bugibi bir kontaminasyon spesifik olmayan reaksiyonlara neden olabileceinden, testplann yzeyinin ya da yuvalarn svnn temas etmemesi iin dikkat edilmelidir.

16. Reaksiyonun durdurulmas srasnda, yksek dzeyde reaktif rneklerde boya kelebilir.Bu durum fotometrik deerlendirmeyi etkilemez.

17. Kontrol serumlar, orijinal insan serumu kullanlarak hazrlanmtr. Bu nedenle bulanklkmeydana gelebilir, ancak bunun test sonucu zerinde hibir etkisi yoktur.

18. Testin analitik duyarlln belirlenmesi iin standartlarn seyreltilmesi gerekiyorsa, sadecekitte bulunan negatif HBsAg Kontrol Serumu seyreltme arac olarak kullanlmaldr.

19. Kan, hepatit Bye kar alamadan uzun sre sonra balanmadysa, testin tksekduyarll reaktif olaraka yorumlanabilecek sonulara neden olabilir. A koruyucuimmnojen olarak Enzygnost HBsAg 6.0 yksek duyarll karsnda alamadan sonrabir sre saptanabilir kalan HBsAg ierdiinden, Hepatit Bye kar yaplan nceki bir alamarnekte geici olarak HBsAg grnmesine neden olabilir.

20. rn performansn optimize etmek ve rn zelliklerini karlamak amacyla Siemenseitli analizrlerde bu reaktiflerin kullanmn onaylamtr. Kullanc tarafndan belirlenendeiiklikler sistem performansn ve test sonularn etkileyebilecei iin Siemenstarafndan desteklenmemektedir. Reaktiflerin Siemens Uygulama Kitapklarnda veyaprospektslerde belirtilenler dndaki analizrlerde kullanm veya kullanm talimatlarndayaplan deiikliklerin geerlilii kullanc tarafndan onaylanmaldr.

21. Bu testin sonucu her zaman hastann tbbi gemii, klinik durumu ve dier bulgularlabirlikte yorumlanmaldr.

Spesifik Performans zellikleriDuyarllk ve Spesifiklik

Duyarllk ve spesifikasyon almalarnn sonular Tablo 3 ve 4te (Ek) gsterilmektedir.Tansal kesinlik 607 pozitif rnek kullanlarak belirlenmitir. Tm rnekler pozitif olarak testedilmitir.PEI referans materyalleri HBsAgye, alt tip Adye ve HBsAgye, alt tip Ayye referans testinanalitik hassasiyeti, her bir standart iin 0.020 U/mLnin altndadr. HBsAg iin kinciUluslararas Standart kullanldnda (HBsAg alt tip adw2, genotip A; NIBSC kod numaras:00/588) WHO10, Enzygnost HBsAg 6.0 analitik duyarll 0.032 IU/mL altnda olmutur.

Enzygnost HBsAg 6.0

OPFMG03C48 Rev. 11 TR 2014-05 7/13

Serokonversiyon rneklerle ilgili test reaktivitesi 39 serokonversiyon kullanlarak incelenmitir.Serokonversiyon saptanrken, Enzygnost HBsAg 6.0nn dier testlerle karlatrlabilir veyaonlardan daha iyi bir duyarllk derecesi gsterdii bulunmutur. Bununla birlikte, geni birlekte kullanldnda izole rneklerin saptanmaktan kurtulabilecei olaslk dndabraklmamaldr.Kesinlik tayini iin, 2 degerlendirme test merkezinde 28,253 HBsAg negatif serumincelenmitir ve %99.89 (balang testi) ve %99.91 tekrar testten sonra kesinlik elde edilmitir(bkz. Tablo 4). Plazmada kesinlik tayini iin, 3 test merkezinde 11,369 EDTA plazma serumincelenmitir ve tekrar testten sonra %99,79 (balang testi) ve %99,84 balang kesinliielde edilmitir (bkz. Tablo 4). eitli test merkezlerinde kullanlan santrifj koullar referansamacyla Tablo 4de listelenmitir. rnek poplasyonu, test prosedr ve dier faktrlere grefarkl deerler elde edilebilir, ancak bunlar Ortak Teknik Spesifikasyonlara (CTS) uygunolmaldr.Gncel bilgilere gre, pozitif bir sonu kanda bulac HBsAg olduunu kesin olarakbelirleyemez ve negatif bir test sonucu HBsAgnin varln kesin olarak dlayamaz. Tm reaktifrnekler bu nedenle tannan dorulama yntemine gre aklanmaldr11,12.

HBsAg Mutantlarnn lmDorulama almalar srasnda 272 HBsAg mutant farkl merkezlerde Enzygnost HBsAg 6.0ile test edilmitir. rnek grubu yerel hastalardan alnan rneklerden (n = 184) ve rekombinantHBsAg rneklerinden (n = 124) olumaktayd. HbsAgnin mutasyona uram varyantlar hemyaban tipi sekansna kar tekli amino asit deiimi (r. G145R veya T123 N) hem de kkHBsAgnin (sHBsAg) amino asit pozisyonlar 100 ile 160 arasndaki oklu deiimi (en fazla 25)iermekteydi.zerinde allan tm HBsAg varyantlar Enzygnost HBsAg 6.0 tarafndan llmtr.

PrecisionTest ii/aras hassasiyet sonular Tablo 5'te listelenmitir (Ek'te). Sonular sadece rnekamaldr. Test prosedrne bal olarak farkl deerler de elde edilebilir.

Bibliyografya1. Blumberg BS, Alter HJ, Visnich S. A new antigen in leukemia sera. JAMA 1965;191:541-6.2. Dane DS, Cameron CH, Briggs M. Virus-like particles in serum of patients with Australia-

antigenassociated Hepatitis. Lancet 1970;295:695-8.3. Koff RS. Hepatitis B today: clinical and diagnostic overview. Pediatr Infect Dis J

1993;12:428-32.4. Hoofnagle JH, Shafritz DA, Popper H. Chronic type B hepatitis and the healthy HBsAg

carrier state. Hepatology 1987;7:758-63.5. Frsner G. Viral hepatitis. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt:

THBooks Verlagsgesellschaft, 1998;1260-87.6. Purcell RH. Hepatitis viruses: Changing patterns of human disease. Proc Natl Acad Sci USA

1994;91:2401-6.7. Norder H, Courouc AM, Coursaget P, et al. Genetic diversity of hepatitis B virus strains

derived worldwide: genotypes, subgenotypes, and HBsAg subtypes. Intervirology2004;47:289-309.

8. Bartholomeusz A, Schaefer S. Hepatitis B virus genotypes: comparison of genotypingmethods. Rev Med Virol 2004;14:3-16.

9. Levicnik-Stezinar S. Hepatitis B surface antigen escape mutant in a first time blood donorpotentially missed by a routine screening assay. Clin Lab 2004;50:49-51.

10. WHO Expert Committee on Biological Standardization. Fifty-forth Report. Geneva: WorldHealth Organization. Tech Rep Ser 927 (ISBN 9241209275):27-9.

Enzygnost HBsAg 6.0

8/13 2014-05 OPFMG03C48 Rev. 11 TR

11. Mitteilungen des Arbeitskreises Blut des Bundesministeriums fr Gesundheit. Verfahrenzur Rckverfolgung (Look Back) (gem 19 Transfusionsgesetz). Bei der 62. Sitzung desArbeitskreises Blut am 14.6.2006 wurde folgendes Votum (V 34) verabschiedet.Bundesgesundheitsbl - Gesundheitsforsch - Gesundheitsschutz 2006;49:940957.

12. Mitteilungen des Arbeitskreises Blut des Bundesministeriums fr Gesundheit. Ergnzungzum Votum 34 Verfahren zur Rckverfolgung (Look Back) (gem 19Transfusionsgesetz) vom 14. 6. 2006. Bei der 63. Sitzung des Arbeitskreises Blut am11.10.2006 wurde folgendes Votum (V35) verabschiedet. Bundesgesundheitsbl -Gesundheitsforsch - Gesundheitsschutz 2007;50:246247.

Simgelerin Tanm

Tekrar kullanmaynz Son kullanma tarihi

LOT Lot Numaras REF Katalog Numaras

Dikkat, ekteki dokmanlara bavurunuz retici

EC REP Avrupa Birlii Yetkili Temsilcisi sayda test iin yeterlidir

Biyolojik Tehlikeler IVD In Vitro Diyagnostik Tbbi Cihaz

Saklama derecesi Kullanm talimatlarna bavurunuz

Steril deil CE areti

CONTENTS indekiler Sulandrma hacmi

LEVEL Seviye Is ve gne ndan uzak tutun

BEP, BEP 2000 Advance, Enzygnost ve Quadriga, Siemens Healthcare Diagnosticsfirmasnn ticari markalardr.

2010 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH.

Tm haklar sakldr.

2014-05

Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbHEmil-von-Behring-Str. 7635041 Marburg/Germanywww.siemens.com/diagnostics

Enzygnost HBsAg 6.0

OPFMG03C48 Rev. 11 TR 2014-05 9/13

Tab. 1Saklama ve StabiliteMateryal/Reaktif Durum Saklama Stabilitea

Enzygnost HBsAg 6.0 testpla kalan stripler

aldktan sonra 28 C1525 Ckurutucu madde ierentorbada

4 hafta6 x 6 8 saatb

Konjugat 1(Anti-HBs/Biotin)

aldktan sonra 28 C1525 C

4 hafta6 x 6 8 saatb

Konjgat 2(Streptavidin/POD

aldktan sonra 28 C1525 C

4 hafta6 x 6 8 saatb

HBsAg Kontrol Serum,negatif

aldktan sonra 28 C1525 C -15 C

4 hafta6 x 6 8 saatb3 ay

HBsAg Kontrol Serum,pozitif

aldktan sonra 28 C1525 C -15 C

4 hafta6 x 6 8 saatb3 ay

Kromojen TMB aldktan sonra 28 C son kullanma tarihi

Tampon/Sbstrat TMB aldktan sonra 28 C son kullanma tarihi

Kromojen almaSolsyonu

seyreltilme 1+10 28 C1525 Ckapal kap iinde, ktankorunarak

5 gn8 saat

Ykama Solsyonu POD aldktansonraeeyreltme 1+19

28 C225 C1825 C

Son kullanma tarihi1 hafta1 gn

Durdurma Solsyonu POD aldktan sonra 28 C son kullanma tarihia her komponenti en ge son kullanma tarihine kadar kullann.b Laboratuvarda ak bekleme sresinin dng says (4 hafta iinde), 28 C arasnda kapatlm olarak.

Tab. 2Cihaz Stabilitesine ilikin ayrntlarMateryal/Reaktif Saklama Stabilitea

Konjugat 1(Anti-HBs/Biotin)

BEP III, Quadriga 48 saat ak (plastik iede veyaorijinal kapta toplanm)

BEP 2000 24 saat orijinal kabnda

BEP III, BEP 2000, Quadriga 6 x 6 8 saatc

Konjgat 2(Streptavidin/POD)

BEP III, Quadriga 48 saat ak (plastik iede veyaorijinal kapta toplanm)

BEP 2000 24 saat orijinal kabnda

BEP III, BEP 2000, Quadriga 6 x 6 8 saatc

Enzygnost HBsAg 6.0

10/13 2014-05 OPFMG03C48 Rev. 11 TR

Materyal/Reaktif Saklama Stabilitea

HBsAg Kontrol Serum, negatif BEP 2000, Quadriga 6 x 6 8 saatd

HBsAg Kontrol Serum, pozitif BEP 2000, Quadriga 6 x 6 8 saatd

c BEP III, BEP 2000 Sistemlerinde veya Quadriga Sistemlerinde (ilk aldktan sonraki 4 hafta iinde) akbekleme sresi dng says, 28 C arasnda kapal halde.

d BEP 2000 Sistemlerinde veya Quadriga Sistemlerinin pipetr alannda (ilk aldktan sonraki 4 hafta iinde)ak bekleme sresi dng says, 28 C arasnda kapal halde.

Tab. 3DuyarllkDuyarllk deerlendirilirken, 607 HBsAg pozitif rnekler test edilmi ve aadaki sonular alnmtr:

rnek poplasyonu rnek says Reaktif rnekler

HBsAg pozitif rnekler, genotip A 31 31

HBsAg pozitif rnekler, genotip B 8 8

HBsAg pozitif rnekler, genotip C 12 12

HBsAg pozitif rnekler, genotip D 74 74

HBsAg pozitif rnekler, genotip E 14 14

HBsAg pozitif rnekler, genotip F 12 12

HBsAg pozitif rnekler, genotip G 4 4

HBsAg pozitif rnekler, genotip H 1 1

Tab. 4SpesifiklikAadaki veriler HBsAg negatif rnekler spesifikliklerinin belirlenmesi amacyla test edilirken eldeedilmitir:

Yer rnek tipi rnek says Santrifj koullar Balang reaktifrnekleri (%

olarakspesifiklik)

Reaktif rnektekrar testi (%

olarak spesifiklik)

1 serum 22,802 4 dakika3,500 x g

27(%99.88)

22(%99.90)

2 serum 5,451 10 dakika3,000 x g

3(%99.94)

3(%99.94)

3 EDTA plazma 5,188 4 dakika3,500 x g

13(%99.75)

11(%99.79)

4 EDTA plazma 5,101 4 dakika3,200 rpm

11(%99.78)

7(%99.86)

5 EDTA plazma 1,080 10 dakika2,500 x g

0(%100)

0(%100)

Tab. 5HassasiyetFarkl HBsAg konsantrasyonlarna sahip be test numunesi, test ii ve testler aras varyasyonkatsaylarn (CV) tespit etmek iin test edilmitir (5 almada 8 kat eleme). Hesaplamalar varyansanalizi kullanlarak gerekletirilmitir. BEP III'te iki almadan elde edilen rnek sonular aadazetlenmitir:

Enzygnost HBsAg 6.0

OPFMG03C48 Rev. 11 TR 2014-05 11/13

alma 1rnek Durum Ortalama absorbans

deeri (A)Test ii CV (%) Testler aras CV (%)

FP1 Negatif 0,017 10,9 39,8

FP3 Snrpozitif

0,139 6,1 13,0

FP4 Pozitif(dk aralk)

0,614 4,7 10,2

FP5 Pozitif(orta aralk)

1,308 5,0 9,9

FP6 Pozitif(st aralk)

1,992 2,9 6,3

alma 2rnek Durum Ortalama absorbans

deeri (A)Test ii CV (%) Testler aras CV (%)

FP1 Negatif 0,019 16,9 2,3

FP3 Snrpozitif

0,186 3,0 6,7

FP4 Pozitif(dk aralk)

0,697 3,7 6,3

FP5 Pozitif(orta aralk)

1,411 4,1 6,7

FP6 Pozitif(st aralk)

2,121 2,7 5,5

Enzygnost HBsAg 6.0

12/13 2014-05 OPFMG03C48 Rev. 11 TR

Tab. 6Test Prosedr

Reaktifleri hazrlayn

lm:

450 nm vs. 650 nm

Test sonucu

75 L Durdurma Solsyonu

nkbasyon (ktan korunmu):

30 2 dakika(15 ila 25 C)

75 L Kromojen almaSolsyonu

4 x ykayn, durma sresi:en az 10 saniye

4 x ykayn, durma sresi: en az 10 saniye

nkbasyon:60 2 dakika (37 1 C)

BEP IIIotomatik test

ileme

nkbasyon:30 2 dakika (37 1 C)

3 x 100 L HBsAg Kontrol Serum, negatif1 x 100 L HBsAg Kontrol Serum, pozitif100 L seyreltilmemi rnek1 x 100 L HBsAg Kontrol Serum, pozitif

Ksmen doldurulmu plak olduunda:Plaklar yarm doldurmak iin suyladoldurulan stripler den ekleyin

stee bal SURE lm:405 nm vs. 650 nm

SURE sonucu 0.1 A: Hazne bo deil

BEP 2000- /Quadriga Systems

tam otomatik test ileme

25 L Konjgat 1

100 L Konjgat 2

(maks. 60 dakika sonra)

Enzygnost HBsAg 6.0

OPFMG03C48 Rev. 11 TR 2014-05 13/13

TRKullanm Amaczet ve AklamaYntem PrensibiReaktiflerGerekli olan ancak salanmayan materyallerBileimUyarlar ve nlemlerReaktiflerin HazrlanmasSaklama ve StabiliteGerekli Olan Donanm

rneklerProsedrOtomatik allmayan Test ProsedrBEP III SystemTam otomatik sistemler iin prosedr (BEP 2000 ve Quadriga) Kalite KontrolDorulama Kriterleri

SonularProsedrn SnrlamalarSpesifik Performans zellikleriDuyarllk ve SpesifiklikHBsAg Mutantlarnn lmPrecision

BibliyografyaSimgelerin TanmSaklama ve Stabilite Cihaz Stabilitesine ilikin ayrntlar DuyarllkSpesifiklikHassasiyetTest Prosedr