ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA
description
Transcript of ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA
![Page 1: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/1.jpg)
ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE
I ICH DIAGNOSTYKA
![Page 2: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/2.jpg)
Antygeny komórkowe
![Page 3: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/3.jpg)
![Page 4: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/4.jpg)
Normy podstawowych subpopulacji limfocytów w krwi obwodowej osób dorosłych
Średnio Zakres
LEUKOCYTY (WBC) x103/mm3 5,9 4,6-7,1
Limfocyty (%) 32 28-39
Limfocyty T CD3+ 72 67-76
Limfocyty B CD19+ 13 11-16
Komórki NK 14 10-19
Limfocyty T CD4+ 42 38-46
Limfocyty T CD8+ 35 31-40
CD4/CD8 1,2 1,0-1,5
![Page 5: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/5.jpg)
CD Reactivity
CD 45 LCA
TdT terminal transferase, progenitors of T and B lymphocytes
CD10, CALLA
acute B-cell leukaemias
CD34 Progenitor cells, acute lymphoblastic and myeloblasic leukaemias
CD5 T cells
CD19
B lymphocytesCD20
CD21
CD22
CD23 Differentiation of B-cell neoplasms
CD7 Limfocyty T
CD103 HCL
CD56NK cells
CD57
CD13
Myelo-monocytic markers
CD15
CD33
CD11c
CD14
CD25, 71,69Ki-67 Markers of proliferating cells
Antygeny różnicowania leukocytów
![Page 6: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/6.jpg)
T CD3FITC
PE
Bezpośrednia reakcja immunofluorescencyjna
![Page 7: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/7.jpg)
Zasada cytometrii przepływowej
Injector Tip
FluorescenceFluorescencesignalssignals
Focused laserFocused laserbeambeam
Sheath fluid
![Page 8: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/8.jpg)
FSC – forward scetter (cell size)
![Page 9: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/9.jpg)
Side scatter – cell granularity
![Page 10: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/10.jpg)
Fluorescence detection
![Page 11: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/11.jpg)
Normalny obraz krwi obwodowej
![Page 12: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/12.jpg)
B-CLL
![Page 13: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/13.jpg)
Badania czynnościowe limfocytów in vivo
Testy skórneŚródskórne podanie antygenu jest stosowane do badania czynnościowej wydolności limfocytów
Reakcja na ś. podanie tuberkuliny
• Pozytywna reakcja pojawia się 24-48 h jako rumień i stwardnienie
• Jest charakterystyczna dla uczulonych T limfocytów gromadzących się w miejscu podania antygenu
• Umiakowana odpowiedź (rumień o śr. 5-6 mm) – osoby , które miały kontakt z prątkami, ale nie zachorowały
• Silna reakcja (15-20 mm) sugeruje aktywną infekcję
• Brak reakcji – brak kontaktu z prątkami lub anergia
Podnaskórkowe podanie antygenu (alergenu)
• Badania nadwrażliwości (uczulenia) na określone antygeny
• Lokalna skórna reakcja zapalna świadczy o wrażliwości na dany alergen
![Page 14: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/14.jpg)
IS = Cpm w hodowli stymulowanejCpm w hodowli niestymulowanej
![Page 15: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/15.jpg)
cpmT – średnia arytmetyczna z liczby rozpadów na jednostkę czasu w próbie badanej
cpmS – w próbie z uwalnianiem spontanicznym
cpmM – w próbie z uwalnianiem maksymalnym
% cytotoksyczności = cpmT - cpmS
cpmM - cpmS
![Page 16: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/16.jpg)
Mechanizmy zabijania drobnoustrojów przez komórki żerne
Tlenowe: H2O2, rodniki hydroksylowe, tlen singletowy, kwas podchlorawy, chloraminy
Pozatlenowe: BPI (cz. b-bójczy zwiększaający przepuszczalność), defensyny, lizozym
![Page 17: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/19.jpg)
PHAGOTEST
Diagnostyczny test do badania zdolności do fagocytozy granulocytów i monocytów w pełnej, heparynizowanej krwi.
Test zawiera znakowane fluoresceiną opsonizowane (Ig, C) bakterie (E. coli-FITC) i niezbędne odczynniki
Przy pomocy testu ocenia się odsetek granulocytów i monocytów wykazujących zdolność do fagocytozy na podstawie liczby bakterii sfagocytowanych przez komórkę.
Ocena wyników: cytometria lub m. fluorescencyjny
![Page 20: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/21.jpg)
The test kit contains:1. 1 bottle (2 ml) of stabilized and opsonized FITC-labelled E.coli suspension (E.COLI FITC OPSONIZED), 1 x solution, ready to use, 1 x 109 bacteria per ml.2. 1 bottle (10 ml) of QUENCHING SOLUTION for suppressing fluorescence of the bacteria attached to the outside of the cell, blue reagent solution, 1 x solution.3. 1 bottle (20 ml) of DNA STAINING SOLUTION for cytometric discrimination of bacteria during leukocyte analysis, pink reagent solution, 1 x solution.4. 1 bottle (20 ml) of LYSING SOLUTION (10 x stock solution for storage), provides 200 ml of 1 x solution after 1 : 10 dilution with double distilled water for lysing erythrocytes and simultaneous fixing of leukocytes.5. 1 bottle of Instamed-Salts as a WASHING SOLUTION (SALTS f. WASHING SOLUTION) to be reconstituted in 1000 ml aqua bidest, provides 1000 ml ready-to-use WASHING SOLUTION.
![Page 22: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/23.jpg)
![Page 24: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/24.jpg)
BURSTTEST (PHAGOBURST™)
Allows the quantitative determination of leukocyte oxidative burst in heparinized whole blood.
It contains unlabeled:• opsonized bacteria (E.coli), phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and the chemotactic peptide N-formyl-Met-Leu-Phe (fMLP) as stimulants, •Dihydrorhodamine (DHR) 123 as a fluorogenic substrate •necessary reagents.
It determines the percentage of phagocytic cells which produce reactive oxidants (conversion of DHR 123 to R 123)
The evaluation of these bioactivities should be performed by flow cytometry.
![Page 25: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/25.jpg)
Heparinized whole blood is incubated with the various stimuli at 37°C, a sample without stimulus serves as negative background control.
Upon stimulation, granulocytes and monocytes produce reactive oxygen metabolites (superoxide anion, hydrogen peroxide, hypochlorous acid) which destroy bacteria inside the phagosome.
Formation of the reactive oxidants during the oxidative burst can be monitored by the addition and oxidation of DHR 123.
The reaction is stopped by addition of LYSING SOLUTION, which removes erythrocytes and results in a partial fixation of leukocytes.
After one washing step with WASHING SOLUTION, DNA STAINING SOLUTION is added to exclude aggregation artifacts of bacteria or cells.
The percentage of cells having produced reactive oxygen radicals are then analyzed as well as their mean fluorescence intensity
![Page 26: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/26.jpg)
aktywacja oksydacja Liza i utrwalanie płukanie
![Page 27: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE I ICH DIAGNOSTYKA](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062816/56814d48550346895dba6e0b/html5/thumbnails/28.jpg)
Test chemiluminescencyjny
Po pochłonięciu mikroorganizmów, komórki fagocytujące emitują niewielkie ilości promieniowania elektromagnetycznego,
którego wielkość można zmierzyć przy pomocy odpowiednich mierników.
Źródłem tej energii jest reaktywny i bardzo niestabilny tlen singletowy.