Nested PCR
5
Nested PCR
description
Nested PCR. Nested PCR to metoda, w której stosuje si ę dwie pary starterów - zewn ę trzn e i wewn ę trz ne. Reakcja amplifikacji odbywa si ę w dw óch etapach. - PowerPoint PPT Presentation
Transcript of Nested PCR
![Page 1: Nested PCR](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022082712/56814675550346895db39aab/html5/thumbnails/1.jpg)
Nested PCR
![Page 2: Nested PCR](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022082712/56814675550346895db39aab/html5/thumbnails/2.jpg)
Nested PCR to metoda, w której stosuje się dwie pary starterów - zewnętrzne i wewnętrzne.
Reakcja amplifikacji odbywa się w dwóch etapach.
Produkty powstałe w fazie pierwszej (preegzystujące produkty amplifikacji ), stają się następnie matrycą dla wewnętrznej pary primerów.
![Page 3: Nested PCR](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022082712/56814675550346895db39aab/html5/thumbnails/3.jpg)
SCHEMAT METODY :
* Wyizolowanie DNA
* Pierwsza amplifikacja z zastosowaniem pierwszej pary primerów (położonych bardziej zewnętrznie) - ok. 40 cykli
* Druga amplifikacja z zastosowaniem drugiej (położonej bardziej wewnętrznie – internal primers ) pary primerów – 15- 20 cykli
![Page 4: Nested PCR](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022082712/56814675550346895db39aab/html5/thumbnails/4.jpg)
![Page 5: Nested PCR](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022082712/56814675550346895db39aab/html5/thumbnails/5.jpg)
Zalety metody Nested PCR:
* Mniejsza możliwość amplifikacji niepożądanych sekwencji
* Podwyższona specyficzność
* Podwyższona czułość