Nachweis von prostataspezifischen Transkripten in regionären Lymphknoten von Patienten mit...
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Nachweis von prostataspezifischen
Transkripten in regionären Lymphknoten
von Patienten mit Prostatakarzinom
U. Fiedler, A. Manseck, R. Kranz, M. Wirth
Klinik und Poliklinik für Urologie
Universitätsklinikum der TU-Dresden
Metastasierung beim PCa
Lymphknoten 69 %
Knochen 68%
Lunge 48%
Leber 33%
Eble 1993
Diagnose der Lymphknoten-Metastasierung
Serum-PSA, cT, Gleason Score
Bildgebende Verfahren(CT, MRT, PET)
Histopathologie
Partin-Tabelle zur Beurteilung des Lymphknotenbefalls, PSA >20 ng/ml
Wahrschein-lichkeit %
cT1a cT1b cT1c cT2a cT2b cT2c cT3a0
10
20
30
40
50
60
2-45
67
8-10
Gleason-Score
klinisches Tumorstadium Partin 1997
Sensitivität des Lymphknoten-Stagings
CT: 22% (Beer et al., 1992)
MRT: 26% (Beer et al., 1992)
OP+SS: 80% (Beer et al., 1992)
Immunszintigraphie: 52-62% (Lamb et al., 1998)
Molekularbiologischer Nachweis von PCa-Zellen
Nachweis von prostataspezifischer mRNA
DNA prostata-spez. mRNA
ProteinRibosom
ZytoplasmaZellkern
mRNA
Nachweis prostataspezifischerTranskripte mittels RT-PCR
Aufschluß des Lymphknoten- Gewebes
Isolierung der Gesamt-RNA
DNase-Behandlung
Umschreibung in cDNA
Transkript-spezifische PCR
AAA
mRNA
cDNA
PCR
AAA
AAA
AAATTT
Prostataspezifische Genprodukte
PSM (Prostata SpezifischesMembranantigen)
PSA (Prostata Spezifisches Antigen)
Serinprotease
Lokalisation: Serum
Größe: 34 kDa
Transkripte: PSA mRNA
Folathydrolase
Lokalisation: Plasmamembran
Größe: 94 kDa
Transkripte: PSM mRNA PSM’ mRNA PSM’’ mRNA
PSM-Gen und PSM-Transkripte
19 Exons, 20 Introns
Genstruktur
PSM’ 2387 bp (Su et al., 1995)
X
PSM - 2653 bp (Israeli et al., 1993)
PSM-Variante (Bzdega et al., 1997)
XDeletion von Exon 18 (657-688)
Deletion im Exon 1 (114-380)
RNA-Isolierung aus Lymphkno-tengewebe und Kontroll-PCR’s
Universitätsklinikum Dresden
1µg RNA verschiedener Lymphknoten
1 2 3 4 5 6 7 8 9
1: 123 bp DNA-Standard2-5, 6-9: Lymphknoten
Gesamt-RNA GAPDH-RT-PCR
RT-PCR zum Nachweis von PSM-Transkripten in Lymphknoten
Universitätsklinikum Dresden
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1-3, 5-7: Lymphknoten RNA
8: pos. Kontrolle (LNCaP RNA)
9: neg. Kontrolle
10: 123 bp DNA-Standard
Nachweis von PSA-Transkripten in regionären Lymphknoten
Universitätsklinikum Dresden
n RT-PCR-PSA + RT-PCR-PSA -
* 2 histologisch neg. LK, 2 vorbehandelte Patienten Sensitivität: 70,5 %, Spezifität 100 %
PCa 54 12 42
RCC 3 0 0
kein Ca 2 0 0
PCa/N+ 17 12 5*
PCa/N- 37 0 37
Nachweis von PSM-Transkripten in regionären Lymphknoten
Universitätsklinikum Dresden
n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM -
* histologisch neg. LK, Sensitivität: 94,1%, Spezifität: 5,4%
PCa 54 51 3
RCC 3 3 0
kein Ca 2 0 0
PCa/N+ 17 16 1*
PCa/N- 37 35 2
Nachweis von PSM’-Transkripten in regionären Lymphknoten
Universitätsklinikum Dresden
n RT-PCR-PSM’ + RT-PCR-PSM’-
PCa 54 32 22
RCC 3 2 1
kein Ca 2 0 0
PCa/N+ 17 15 2 *
PCa/N- 37 17 20
* histologisch neg. LK, Sensitivität: 88,2%, Spezifität: 54%
PSA-Werte nach RPE
Universitätsklinikum Dresden
RT-PCR PSA p. O. +
PSA + /12
PSM - /3
PSM’ + /32
PSA - /42
PSM + /51
p. O. : 1-3 Wochen nach RPE
PSM’ - /22
Zusammenfassung I
Nachweis von Transkripten
in metastasierten Lymphknoten:
PSA - abhängig von Vorbehandlung
PSM - nicht spezifisch für PCa
PSM’ - besser als Histopathologie?
Zusammenfassung II
Verbesserung der Aussagekraft:
Quantifizierung der Transkripte
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