Mycoplasmes Dr Gonsu

LES MYCOPLASMES

Dr H. GONSU KAMGAMédecin biologiste

FMSB / CHU Yaoundé

OBJECTIFS

OBJECTIF GENERAL

Etablir le diagnostic biologique des mycoplasmesOBJECTIFS SPECIFIQUES

• Identifier les mycoplasmes les plus rencontrés en pathologie

humaine

• Apprécier la pathogénicité des mycoplasmes

• Maîtriser l’identification morphologique et biochimique des

mycoplasmes

PLAN

INTRODUCTION

I. PROPRIETES GENERALES

II. HABITAT – POUVOIR PATHOGENE

III. CIRCONSTANCES DIAGNOSTQUES

IV. DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE

V. SENSIBILITE AUX ATB

CONCLUSION

INTRODUCTION

Plus petites bactéries capables de réplication autonome

Développement intra et extra-cellulaire

Structure unique : absence de paroi

Nombreux génomes séquencés

Ubiquitaires : homme,animal,insectes,plantes

INTRODUCTION

16 espèces chez l’homme : colonisation des muqueuses respiratoires et génitales- Présence à l’état commensal- Infections aigües ,maladies chroniques- Immunodéprimés:bactéries opportunistes

Contaminants de cultures cellulaires

I. PROPPRIETES GENERALES

A. QUELQUES DATES 1898 Nocard et Roux:agent de la

pleuropneumonie bovine(M.mycoides) 1937 Dienes et Edsall: pleuropneumoniae like

organisms PPLO chez l’homme(M.hominis) 1954 Shepard : souche T(U.urealyticum)


B. TAXONOMIE

- Ordre des Procaryotes

- Classe des Mollicutes

- Mollicutes pathogènes pour l’homme

- Ordre des Mycoplasmatales

- Famille des Mycoplasmataceae

- 2 genres: Mycoplasma et Ureaplasma


C. MORPHOLOGIE

- Pas de formes définies

- Visible en fond noir ou contraste de phase:

non colorable au Gram

- Parfois mobiles(spiroplasme ou par glissement sur support solide)


D. STRUCTURE Absence de paroi (ni peptidoglycane,ni PLP)

uniquement une membrane plasmique

- caractère flexible et petite taille(passage à travers les filtres antibactériens de

0,45µm)

- résistances aux antibiotiques agissant à ce niveau (bétalactamines)

Membrane cytoplasmique

Riche en protéines 50 à 60% et en lipides 30 à 40%

I. PROPRIETES E. CULTURE ET METABOLISME

1. Caractères culturaux● Mycoplasmes cultivables en milieu acellulaire ;mais exigences nutritionnelles complexes en facteurs de

croissance, en cholestérol: sérum,extrait de levure, tween 80…

● Aéro-anaérobies (certains anaérobies strictes)● Croissance lente 18h - 2 à 3 mois● Colonies en œuf sur le plat ou en tête d’épingle● Inhibition de croissance et du métabolisme par Ac

spécifiques

I. PROPRIETES

2. Propriétés métaboliques

● Espèces fermentantes par fermentation du glucose:

M.pneunoniae,M.genitalium

● Espèces non fermentantes par hydrolyse de

L’arginine : M.hominis

L’urée : Ureaplasma sp.

● Propriétés d’hémadsorption et d’hémolyse: M.pneumoniae

II. HABITAT-POUVOIR PATHOGENE

A. 16 ESPECES RETROUVEES CHEZ L’HOMME

● Le plus souvent extracellulaires

● Certaines commensales de l’oropharynx : PP certain de

M.pneumoniae

● Certaines commensales des voies génitales

PP certain mais occasionel de MH et de UU

PP certain de M.genitalium

HABITAT-PP

B. MECANISMES DU PP

2 types: action directe

action indirecte : mec.immunopathogène Adhérence Production de métabolites toxiques Pénétration intracellulaire Interaction avec le système immunitaire

III. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC

A. Infections du tractus respiratoire M.pneumoniae+++

Trachéobronchites Pneumonies atypiques Infections ORL(rares) Formes asymptomatiques 20,formes graves

III. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC

B. INFECTIONS URO-GENITALES

1. Espèces rencontrées ●3 espèces pathogènes : Ureaplasma spp.,M.hominis,M.genitalium

● M.hominis et Ureaplasma spp.présents à l’état commensal

- Colonisation variale avec: l’âge, l’état hormonal,la race, le niveau socio-économique, le nombre de partenaires

- Plus fréquente chez l’homme que chez la femme Chez femme Mh < 10% , Uu >ou= 50%

III. CIRC.DE DIAGNOSTIC B. INFECTIONS UROGENITALES (2)

1. Espèces rencontrées(2)

● Pb d’interprétation du pouvoir pathogène:

seuil de pathogénicité(appréciation quantitative)

● M.genitalium non documenté chez le sujet sain

(pousse très mal, dg uniquement moléculaire)

2. Infections chez l’homme Mg,U

● UNG

● Epidydimites, rares(U) prostatite

III.CIRCONSTANCES DE Dg B. INFECTIONS UROGENITALES

3. Infections gynécologiques Mh,U,Mg

Cervicite Mg

Bartholinite Mh

Vaginose bactérienne = déséquilibre de la flore

bactérienne(X GV,anaérobies , Mh)

Endométrites( Mh, U, Mg), salpyngite Mh,Mg)

III. CIRCONSTANCES DE Dg

B. INFECTIONS UG

4. Mycoplasmes et stérilité U • Retentissement qualitatif sur la mobilité des

spermatozoïdes

5. Infections au cours de la grossesse Mh, U • Chorioamniotites

• Fièvres post-partum, post-abortum

III.CIRCONSTANCES DE Dg

B. INFECTIONS UG

4. Mycoplasmes et stérilité U

Retentissement qualitatif sur la mobilité des spermatozoïdes

5. Infections au cours de la grossesse Mh, U.

- chorioamniotites

- fièvres post-partum, post-abortum Mh+++

- avortements à répétition? Prématurité? hypotrophie?

III.CIRCONSTANCES DE DgC. INFECTIONS EXTRAGENITALES ET

EXTRARESPIRATOIRES ● Souvent méconnues

● arthrites ● infections invasives chez ID Mp,Mh, U

● surinfections de plaies sternales Mh

IV. Dg BIOLOGIQUE DES INFECTIONS A MYCOPLASMES

A. INFECTIONS RESPIRATOIRES Mp 1. Dg direct Prélèvements- Respiratoires (écouvillons gorge,aspiration

nasopharyngées,LBA)- Exta-respiratoires (bulles cutanées…) Conditions de prélèvement et de transport- écouvillons: éviter écouvillons en bois- Milieu de transport nécessaire : car bactéries fragiles- Si temps de stockage long ; congeler à -20°C

IV. Dg BIOLOGIQUE

A. INFECTIONS RESPIRATOIRES

1. Dg direct(2)

Recherche directe- Détection des antigènes: peu sensible ,peu

spécfique- Recherche par PCR: cible gène de l’adhésine P1

IV.Dg BIOLOGIQUE A. INFECTIONS RESPIRATOIRES

Culture (idem MUG)

Milieux de culture complexes- Base de peptone ou tryptone (protéine, aa)

- Extrait de levure(vitamines et facteurs de croissance)

- Substrat métabolique source d’énergie(glucose,arginine,urée)

- Sérum (stérols et cholestérol)

VI. Dg BIOLOGIQUEA. INFECTIONS RESPIRATOIRESCulture (2)- Milieux rendus sélectifs par ajout

d’ATB(P,Amp)- Aucun milieu ne convient à toutes les espèces- Croissance +ou- lente en 02j à +++sem.;

T° 30°c et 37°c- Atmosphère aérobie ou anaérobie enrichie en

CO2.

VI. Dg BIOLOGIQUEA. INFECTIONS PULMONAIRESCulture 3- Milieux de culture liquides ou gélosés- Milieux liquides: avec indicateur coloré(rouge

de phénol) ph adapté 7,4-7,6 Mycoplasmes; 6-6,5Uréaplasmes

- Milieux solides: sans substrat métabolique,ni rouge de phénol.

Typage PCR-RFLP m.e.e de 2 types :1+2

VI. Dg BIOLOGIQUE

A.INFECTIONS RESPIRATOIRES

2. Diagnostic sérologique Ac non spécifiques: agglutinines froides

Ac spécifiques

. FC

. IFA

. Agglutination de particules de latex

. ELISA

Diagnostic de certitude: PCR + présence d’IgM

VI. Dg BIOLOGIQUE

B. INFECTIONS UROGENITALES Ureaplasma spp.

M.hominis

M.Genitalium

Uniquement un diagnostic direct

Ureaplasma spp.et M.hominis- Culture sur milieux adaptés ou kits de Dg- Pas de sérologie- PCR rarement

VI. Dg BIOLOGIQUE

B. INFECTIONS UROGENITALES

M.genitalium:

Culture très fastidieuse

Pas de sérologie

Diagnostic par PCR

VI. Dg BIOLOGIQUE


1. Prélèvements

Prélèvements urogénitaux

Chez m: écouvillonage urétral, urine 1er jet, sperme, sécrétions prostatiques

Chez f: PCV,endomètre, trompe,liq.Douglas, liq.amniotique,placenta

VI. Dg BIOLOGIQUE

1. Prélèvements(2)

Nouveaux-nés

Prélèvement nasopharyngé, gorge, endotrachéal

Autres : en fonction du site de l’infection

Liquide synovial, biopsie articulaire , sang, LCR…

VI. Dg BIOLOGIQUE

B. INFECTIONS UG

2. Culture: U.spp et M.h Milieux cf M.p Culture U.spp. M.hMilieu Shepard Hayflick

Ph milieu 5,5 – 6 7,0 – 7,2

Temps 16 – 20h 24 – 48h

Substrat urée arginine

VI. Dg BIOLOGIQUE


2. Culture (2)

Identification- Propriétés métaboliques en milieu liquide :

Changement de couleur de l’indicateur de pHUreaplasma spp. Jaune à orangé

M.Hominis orangé à framboise

VI. Dg BIOLOGIQUE


2. Culture(3) Identification- Aspect des colonies sur géloseUreaplama spp. Petites colonies ponctiformes noires

(MnSO4) en 24h

M.hominis : aspect en « œuf sur le plat »en 2 – 4j

VI. Dg BIOLOGIQUE

2. Culture (4)Interprétation

Prélèvements seuil- Pvts normalement stériles aucun

isolement = infection

- Homme

Urètre et sperme U > 104 UCC /ml

Urine 1er jet U > 103 UCC /ml

VI. Dg BIOLOGIQUE


2. Culture (5)

Interprétation

- Femme Cervico-vaginal U aucun,non significatif

Mh >104UCC / ml

- NNé Endotrachéal U > 103UCC / ml

VI. Dg BIOLOGIQUEB. INFECTIONS URO-GENITALES2. Culture U et Mh Kits commercialisés pour:- Identification- Numération- Sensibilité aux ATBbioMérieux, International Microbio, Bio-Rad, PBS Orgenics

Typage de Ureaplasma spp.2 espèces ; 2biovars U.parvum plus fréq..que U.urealyticum


A. METHODES D’ETUDE

Pas de méthode standardisée

Pas de diffusion en gélose

1. Diffusion en milieu liquide• CMI• Microméthode en plaque+++• Kits commercialisés pour les mycoplasmes

génitaux

V. SENSIBILITE AUX ATBA. METHODE D’ETUDEKits commercialisés- 2 rangées de puits à 2 concentrations d’ATB lyophilisés- Inoculum standardisé- Après une culture primaire

2. Dilution en milieu gélosé- CMI- Méthode classique sur milieu adapté CMI,CMB- Etest (M.hominis) : diffusion en gelose;pas possible pour U


A. RESISTANCE INTRINSEQUE OU NATURELLE

Commune à tous Absence de paroi R.aux β

lactamines,glycopeptides,fosfomycine

Sous-unité β de l’ARN polymérase R à la rifampicine

R. à : polymyxines,acide nalidixique , sulfamides


B. RESISTANCE ACQUISE

Pas de plasmide de Résistance décrit

Mutations chromosomiques ou transposons

Absence de systèmes de réparation de l’ADN:

fréquence de mutation élevée

TRAITEMENT DES INFECTIONS à M.

A. Infections respiratoires- Macrolides et apparentés- Tétracyclines- Fluoroquinolones

B. Infections génitales- Attention à l’ interprétation pour Mh et Uu- UNG doxycycline- Azythromycine

V. TRAITEMENT

C. Infections néonatales

Macrolides

D. Infections extragénitales, chez l’immunodéprimé

Association de plusieurs ATB : CC +D +FQ

Traitement de l’immuno suppression

CONCLUSION Pb de standardisation des méthodes de diagnostic

et d’étude à la sensibilité aux ATB Résistances acquises peu connues et peu étudiées Durée du traitement : fonction de la localisation et

de la gravité Pb majeur: traiter ou pas les infections à

M.génitaux? sites stériles : ok sites non stériles (pcv,pvts respiratoiresNNés ) ???

JE N’AI PAS DE PAROI MAIS JE SUIS AUSSI UNE

BACTERIEFAITES ATTENTION A

MOI!!!

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