Método de isolamento e detecção de Micro-organismos
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IsolamentodeMicro-organismos O isolamento de micro-organismos permite quanti>icar e identi>icar
membrosdeumacomunidademicrobiana Otipodeambienteaseravaliado interferenaestratégiaparaobterasuspensãodecélulasv Osolodeveseragitadaemsoluçãotampãov Para remoção da comunidade microbiana de super>ícies, asamostras devem ser agitadas em solução contendo pérolas(bolinhas)devidro.
v Compostossurfactantes(p.e.Tween80)podemserutilizadosparafacilitaradispersão
Diluiçõesouconcentraçãodeamostraspodemsernecessárias.v Paraamostrasdesolo,diluiçõesapropriadassãonecessárias.v Para amostras de água e ar, podem ser utilizados >iltros paraconcentrarascélulasdasamostras
IsolamentodeMicro-organismos
Seletividadedosmeiosdecultivopermiteavaliareisolargruposmicrobianosespecí>icos–substratosespecí>icosecorantes Onúmerodecolôniasdeveestarentre30e300UFC.gdeamostra-1.oupermitiraobservaçãodecolôniasisoladas
IsolamentodeMicro-organismos
MétododaSobrecamadaMeiodeculturasobreascélulas
Métododeespalhamentosobreomeiodecultura
MétododesemeaduraemPlacadePetri
IsolamentodeMicro-organismosMétododesemeaduraemPlacadePetri
MétododaSobrecamada-CélulasnoMeiodecultura
Métododeespalhamento-sobreomeiodecultura
IsolamentodeMicro-organismos
Estratégiasdeenriquecimento:• Fontesdecarbono• Temperatura• Resistênciaafatores>ísico-químicoseetc
Métododeenriquecimento
Puri>icaçãodemicro-organismosemmeiodecultura
DetecçãodeMicro-organismosMétododecoloraçãoporDAPIouAcridinaLaranja(AO)
Estratégias:• DAPI(diamidino-2-phenylindole)coraascélulasdeazul>luorescente• AOcoradelaranjaoularanjaesverdeado• FluorescênciaéobservadasobreLuzU.V.• Permitem a quanti>icação de micro-organismos ao microscópio de>luorescência.
• Sãoinespecí>icospoiscoramosácidosnucleicos• Nãopermitediferenciarcélulasvivasdecélulasmortas
AcridinaLaranjaDAPI
DetecçãodeMicro-organismosHibridizaçãocomsondas
Estratégias:• Utiliza sondas deDNA especí>icasparaosgruposquesequerdetectar
DetecçãodeMicro-organismos
Hibridizaçãocomsondas
DetecçãodeMicro-organismos
Métodoimunológico-anticorpos
Amostraambiental
Meiodecultura1 Meiodecultura2
Inconsistênciaentreoobservadoeoisolado
CulturabilidadedosMicro-organismos
InconsistênciaentreaDiversidadeobservadaeaisolada
Baixaculturabilidademicrobiana
Seletividadedosmeiosdecultivo
Seletividadedascondiçõesdecultivo:CO2,O2,temperatura,fontedeC,Neetc.
Pequenarepresentatividadedacomunidadeinvivo(coleçõesdeculturas)
CulturabilidadedosMicro-organismos
Presenteemtodasasespécies
Regiõesvariáveiseconservadas
Permiteousodeprimers“universais”
AnálisedacomunidademicrobiananãoCultiváveis
GenesConservados(ribossomais,girase,RNApolimerase)
MétodosIndependentesdeCultivo
BibliotecasdeClones
ExtraçãodeDNAdeamostraambiental
PCR(16SrRNA) LigaçãoaoVetor
ConstruçãodeBibliotecaseanálise
MétodosIndependentesdeCultivo
BibliotecadeclonesfuncionaisMétodosIndependentesdeCultivo
MétodosIndependentesdeCultivo-Metagenoma
MétodosIndependentesdeCultivoDiversidade
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