Molecular RT PCR (1)

download Molecular RT PCR (1)

of 24

Transcript of Molecular RT PCR (1)

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    1/24

    PCR EN TIEMPO REALINTEGRANTES:

    ABIGAIL BENAVIDES

    JOSSELYN BRICEOBRYAN IBAEZ

    SEBASTIAN CHILE

    ANA NOBOA

    FECHA: 05/02/2016

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    2/24

    RT- PCRF!"#$%!&'(P)'*%('( "%

    #$+,.*#*! "%&%**!

    S% +)'"*%! "%$#!%)#

    ($,&!%# %! %,$($' #,

    *%))#"'3

    N' !%*%( "%!!4!# #**!

    +'(&%)'))%*'!'*% ,#

    *!&*# "% ,# R7

    D%&%**!+')

    8')%(*%!*#

    P%"% $%")")#!&% ,#

    #$+,.*#*! ,#*#!&"#" "% ADN

    (!&%&9#"' %!*#"# $'$%!&'

    F,')%(*%!*#+)'"*"# ADN

    ')$#"'

    T%)$'**,#"')%(

    D(%;#"'( +#)#+'"%) $%") ,#8')%(*%!*#

    %$&"# %! *#"#!' "% ,'( #,%("'!"% (% )%#,*%,# #$+,.*#*!

    A4%!&%(!&%)*#,#!&%(

    ('!"#(%(+%*

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    3/24

    C,#(.*#*!

    A4%!&%(!&%)*#,#!&%(

    S'! 8')'*)'$'( %

    #$%!!!'=,%$%!&% ,#%$(! "%

    8')%(*%!*# *#!"'(% !%! # ADN "%

    "'=,% ,*%!*)%$%! %! *#"#

    **,'

    M( =#)#&' % ,#(('!"#( %(+%*

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    4/24

    S'!"#( "%=)"#*!%(+%*

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    5/24

    S'!"#( T#M#!:

    O,4'!*,%&"'( $#)*#"'( *'! ! 8')'*)'$'"'!#"') 5 #*%+&')

    E, %(+%*&)' "% %$(! "% ,# +)$%)# (% # "% (',#+#)*'! %, %(+%*&)' "% #=(')*! "% ,# (%4!"#3

    D)#!&% ,# #$+,.*#*! "% ADN "#!# ,# ('!"# (%=)"# *'! ( *#"%!# *'$+,%$%!)# L#8')%(*%!*# %$&"# +') %, +)$%)' %( *#+"# +') %,

    ,%*&')3

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    6/24

    S'!"#( M',%*,#) =%#*'!(

    T%!%! !# $',*,# "'!#"')# %! %, %7&)%$' 5K !##*%+&')# %! %, %7&)%$' 3

    P)%(%!! !# %(&)*&)# (%*!"#)# %! ')$# "% #(#%! ,# % )%("% ,# (%*%!*# "% !! %(+%*

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    7/24

    S'!"#( F)%&

    E, ((&%$# (% *'$+'!% "% "'( ('!"#( % (% !%! #(%*%!*#( #"#*%!&%( "%, ADN "#!#3

    !# "% ,#( ('!"#( ,,%# ! "'!#"') %! %, %7&)%$' K ,# '&)# ! #*%+&') %! %, %7&)%$' 5K3

    A, =)"#)(% ,'( "'( 8')'*)'$'( %(&! +)7$'(3

    A, (%) %7*"' %, "'!#"') &)#!(.%)% ( %!%)4

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    8/24

    V

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    9/24

    A!,((

    P%)$&% ,# "%!&.*#*! "% ,'( +)'"*&'( "% ,##$+,.*#*!

    -PCR (#SYBR G)%%!

    +#)#"%!&.*#))#4$%!&'(

    S'!"%!&.*#"'( # +#)&) "%

    ,#&%$+%)#&)# "% (!

    T$

    R%(,"'('=&%!"'( #

    +#)&) "%

    !# *)#"%

    "('*#*!

    O=&%!*!$( )+"#

    "%)%(,"'(3

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    10/24

    PCR "+,%7 %! &%$+' )%#, +#)# ,# "%&%**!"% S&)%+&'*'**( +!%$'!#% N%((%)#$%!!4&"( %! %, ,

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    11/24

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    12/24

    INTRODCCINL# $%!!4&( =#*&%)#!# #4"# %( !# "%,#( %!%)$%"#"%( !%**'(#( $(4)#%( 3 E, "#4!(&*' )+"' +)%*(' "% =#' *'(&' "% =#*&%)#( L# $%!!4&(%( *)*#, +#)# %, $#!%' "%, +#*%!&% 3

    E, !%$'*'*' Streptococcuspneumoniae %( ! $*)'')4#!($'+#&4%!' *#+#9 "% *#(#) %! $#!'("%)(#( !%**'!%( +)'*%('( !#('((%%)'(3 S% &)# "% !# =#*&%)# G)#$

    +'( "% 12-1 $ "% ,'!4&" %+)%(%! !# ')$# '#, %, %7&)%$'"(, ,#!*%',#"'3 E( !$, !' ')$#%!"'(+')#( %( ! $%$=)' #,#-%$',

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    13/24

    E(&% %(&"' "%(*)=% !%!(#' RT PCR "+,%7&%$+' )%#, +#)# ,#"%&%**! "% N%((%)#$%!!4&"(

    S&)%+&'*'**( +!%$'!#%%! %, ,

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    14/24

    METODOLOGWA

    E(&% %(&"' (% )%#,9 # +#)&) "% %!%)' "% 201 D%%=)%)' "% 201> # ,# C,

    IDENTIFICACIN

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    15/24

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

    "% S3 +!%$'!#% ! 22 4 *'))%(+'!"%!&%( "% ADN (% *#,*,# (% "%&%)$! 2 4 "% ADN "%N3 $%!!4&"( =#(#"' %! ! 4%!'$# "% 22 M= 3 T%!%!"' %! *%! ! $#;' "% 4%!'$# "% 231M= *'$' "%&%)$!#"' +#)# S3 +!%$'!#% %, !$%)' "% 4%!$*# *'+#( "% ,'( %7&)#*&'( "%*"'( !*,%*'( "% *#"# *%+# % E, "#4!(&*' )+"' C!*' )+,*#( "% *#"# ",*! %! (%)% (%%!(##)'! %! %, $($# +)%=# +#)# %#,#) ,# )%+)'"*=,"#" !&)#-%!(#'3

    (% '=&' &,9#!"' >0 $%(&)#( "% LCR *'! *,&' +'(&': 1 N3 $%!!4&"( 22 S +!%$'!#%3 L#

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

    +)%#$%!&%3 L# (%;#, 8')%(*%!&% (% )%4(&) ")#!&% %, %+# "% %7&%!(! ,'( "#&'((% #!#,9#)'! (#!"' %, CF[ M#!#4%)(')% %)(! 1363 3

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    16/24

    E, (')% 4%!%)# %, )%(,"' "%(+( "% )%() ,# 8')%(*%!*# "% '!"' "% ! *'!!&' "%+%9#( %! =)&' "% #4# +#)*%,#( ,# "%)#"# !%4# "% "% 8')%(*%!*# *'! )%(+%*&' # ,#&%$+%)#&)# -"F"T-1 %! !*! "% &3 E, #,') T$ (% "%.!% *'$' %, +*' "% L# *)#3 ! )%(,"'

    +'(&' (% "%.! *'$' ! **,' #,') $=)#, C& +') "%=#' "% ? **,'( +%)%*&'(+%)+'(*! "%, +*' "% ,# *)# "% (! *'! %, T$ "%, *'!&)', +'(&'3 ! )%(,"' !%4#&' (%"%.! *'$' ! #,') C& "% *%)' !' # (+%)+'(*! "% ,# +!&' "% (! +*' "% *)# *'! ,#T$ "% ,'( &%)$!#,%( +'(&' *'!&)',#)3

    D%(+( "% %(=,%*%) ,# %(+%*.*"#" (%!(=,"#" %, !%' "+,%7 RT-PCR (% &,9 +#)#%#,#) ,# !*"%!*# "% ,#( "'( *#(#( +)!*+#,%( "% =#*&%)#( $%!!4&(3 ! &', "% 12$%(&)#( "% LCR '=&%!"# "% 12 +#*%!&%( *'! ('(+%*# "% $%!!4&( =#*&%)#!# % %)'!#"$&"'( %! ,# !%)("#" I=! R'*" C%!&)' H'(+,#)' "% C#(#=,#!*# ")#!&% %, +%)

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    17/24

    RESLTADOS

    F4)# 13 8')'4)#$#()%+)%(%!&'(A *)#( "%(! B '=&%!"'( # +#)&)"% $%(&)#(+'(( *'! !#($,&!%#"%&%**! "% S3+!%$'!#% %)"% N3

    $%!!4&"( )''3L# *)# #9,)%+)%(%! %,*'!&)', !%4#&'3L# ,

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    18/24

    T#=,# 13 L#( (%!(=,"#"%( %(+%*.*"#"%( "%, $,&+,%7 %!(#' "% RT- PCR %! !(',' *'$+,%' +#)# ,# "%&%**! "% N3 $%!!4&"( S3 +!%$'!#% %! %, ,

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    19/24

    F4)# 3 8')'4)#$#(

    )%+)%(%!&'( A *)#("% (! B "% S3+!%$'!#% %)"% N3$%!!4&"( )'' %$%(&)# ,# ')$#*! "%"

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    20/24

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    21/24

    DISCSIN YCONCLSIONES

    L# "%!&.*#*! "% ,#( =#*&%)#( *#(#!&%( "% ,# $%!!4&(*'!((&% %! ,# &!*! "% G)#$ ,# *,&)# *#!"' %(&"(+'!=,% PCR3 A!% ,# &!*! "% G)#$ +)'+')*'!#)%(,"'( )+"'( (%!(=,"#" %( +'=)%3 L'( )%(,"'(#,('( !%4#&'( +%"% '*))) ( %, LCR !' (% *%!&)4# '( # ,'( %))')%( "% $%(&)%' "%="' # ,# !(.*%!*# "%,# $%(&)# )%((+%!(! 3 %))')%( &*!*'( #"*'!#,%(+%"%! '*))) ")#!&% %, +)'*%(' "% &!*! +#)&*,#)$%!&% "%*',')#*! ' $#,# !&%)+)%*! "% ,#$')','4

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    22/24

    A"%$( !%(&)' %!(#' "% RT -PCR +)'+')*'!# !# &%$+' "%"%&%**! "% )%*'4"# "% $%(&)#( +#)# "#) *'$' )%(,"' "%&)%( ')#( ,' *#, %( (4!.*#$%!&% $( )+"' % %, # &)%("

    "%&%**! "% N3 $%!!4&"( S3 +!%$'!#% U > 3 L# (%!(=,"#" %(+%*.*"#" "% ,# RT -PCR % "%, 100X IC "%, ?5 X ` ?5>5 #100 *'$+#)#=,% # #)'( %!(#'( "% RT -PCR $,&+,%7 "%(#))',,#"')%*%!&%$%!&% U 262? 3 E(&% %(&"' "%$'(&) % ,# RT- PCR=#(#"# %! ,# SG - (',' &=' "%(*)= +)'+')*'!#"' !# $#')(%!(=,"#" %! *'$+#)#*! *'! %, #!&%)')$%!&% )%+')"'(%!(#'( "% PCR %! ! (',' &=' *'!%!*'!#,%( +#)# ,# "%&%**!($,&!%# "% N3 $%!!4&"( S3 +!%$'!#%3

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    23/24

    E! *#!&' # ,#( ,$*'!%( "% %(&% %(&"' %, 4%!%)#,(%!(=,"#" "% !%(&)' !%' RT-PCR !' %( ,'(.*%!&%$%!&% #, +#)# )%%$+,#9#) ,'( $&'"'( "%*,&'3 S! %$=#)4' $',%*,#) %!(#'( "% "#4!(&*' %!%(&'( $'$%!&'( !' +#)# )%%$+,#9#) *,&)# "%="' # ((,$*'!%( %! ,# $,&+,%7#*! *#+#*"#"%( +#)# ,#"%!&.*#*! "% +#&4%!'( "%&%**! "% )%((&%!*# #

    ,'( #!&$*)'=#!'(3 E, '=%&' "% !%(&)# %(&"' %"(%;#) ! %!(#' % +'")

  • 7/26/2019 Molecular RT PCR (1)

    24/24

    BIBLIOGRAFWA 13 Q$ QS 2010 A*&% =#*&%)#, $%!!4&( ! !#!&( #!" *,")%!3 L#!*%& I!%*& D( 10: 2->23 23 H#))('! LH 2010

    E+"%$','4*#, +)'.,% ' $%!!4'*'**#, "(%#(% ! &% !&%" S&%(3 C,! I!%*& D( 50: S-S>>3 3 OKB)%! QL\',('! LJ \#&& JP H%!,% E D%,')#-Q!',, M M*C#,, N L%% E M,',,#!" Q L%!% OS C%)#! T 200? H= #!"P!%$'*'**#, G,'=#, B)"%! ' D(%#(% S&" T%#$3 B)"%! ' "(%#(% *#(%" = S&)%+&'*'**( +!%$'!#% !*,")%! '!4%) ! 5 %#)(: 4,'=#, %(&$#&%(3 L#!*%&

    >: ?-?023 >3 P%,&',# H 2000 \'),""% H#%$'+,( !8%!9#% &+% = "(%#(% #& &% =%4!!!4 ' &% 21(&*%!&): 4,'=#, #!#,(( ' &% "(%#(% =)"%! 25 %#)( #&%) &% (% ' &% +',(#**#)"% #**!% #!" # "%*#"% #&%)&% #"%!& ' *'!4#&%(3 C,! M*)'=', R% 1: 02-13 53 M*I!&'( ED R%!%)& RR 2011 G,'=#, +)%#,!4 #!"%$%)4!4 +%"#&)* +!%$'*'**#, (%)'&+%(3 E7+%)& R% V#**!%( 1

    0: 10?-12?3 63 Q#$ A P',,#)" AJ 2010 T% %+"%$','4 ' $%!!4'*'**#, "(%#(% #!" &% $+#*& ' #**!%(3E7+%)& R% V#**!%( ?: 25-2?3 3 L%!% OS Q!',, MD J'!%( A \#,%) DG R(' N G,#! Z 2010 G,'=#, (&( 'H#%$'+,( !8%!9#% &+% = #!" +!%$'*'**#, *'!4#&% #**!%(: %"%!*% +',*%( #!" !&)'"*&'!(3 C))O+! I!%*& D( 2: 26-2>13 3 P#+##(,%' Q P#+##(,%' E T9#!## G V'#&9 A Q)%$#(&!' J

    C#&9+#!#4'&' S 2011 A*&% =#*&%)#, $%!!4&( *#(%( "#4!'(%" = *,&)% #!" PCR ! # *,")%!K( '(+,&)'4'& # ?-Y%#) +%)'" 2000-200 ! A&%!( G)%%*%3 M', D#4! T%) 15: 10?-113

    ?3 D#,&'! HP A,,('! MJ 1?6 M'".*#&'! ' ,#=')#&') )%(,&( = +#), &)%#&$%!& ' =#*&%)#, $%!!4&(3 A$ J C,!P#&', >?: >10->13

    103 M'#$$#" SF P#&, AB N#"#4) SD N#!"#, N L#($!#)##!# SA 201 D#4!'(&* #,% ' ,#&%7#44,&!#&'! &%(& ! "#4!'(( ' #*&% =#*&%)#, $%!!4&(3 A!! I!"#! A*#" N%)', 16: 6>5-6>?3

    113 Q#! M A Q#! QM P#)"#! Q A$%" MA 201 I"%!&.*#&'! ' %&','4*#, #4%!&( = LPA #!" PCR ! *,"''"$%!!4&(3 P# J M%" S* 2?: 1162-11663

    123 B'!4 MQ P%"%)(%! LN M',,%) JQ 200? E4&-+,%7 PCR #!" ,"-#))# "%&%*&'! ' =#*&%)#, #!" )#,+#&'4%!( ! *%)%=)'(+!#, 8" )'$ +#&%!&( & ((+%*&%" $%!!4&(3 J C,! M*)'=', >: ?0-?13 13 C=# NM)##$# SY M')'9$ M 200? R#+" "%&%*&'! ' %4& *#(#&% +#&'4%!( ') &% "#4!'(( ' =#*&%)#,$%!!4&( = )%#, &$% PCR3 J I!%*& C%$'&%) 15: ?2-?3

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