Microbiologia y Antibioticos

73
MICROBIOLOGIA CLINICA Temas 4.4 al 4.8 Microbiología I Profesor Juan Ramón Cota

Transcript of Microbiologia y Antibioticos

1. Temas 4.4 al 4.8 Microbiologa I Profesor Juan Ramn Cota 2. INDICE Exmenes Bacteriolgicos: Urogenital Erica Rosales Ballin Cavidad Bucal Kathya Urea Castillo Ojos Izamar Ziga Acosta Piel y anexos - Oscar Velasco Barrios Antibiticos Uriel Tranquilino Aquino Anlisis Clnicos Grupo 505 2007-2011 3. Examen Bacteriolgico 4. Examen bacteriolgico de tracto genital Un numero considerable de microorganismos, tanto del tipo aerobio como del anaerobio, se encuentran normalmente en los genitales externos de ambos sexos. En las mujeres se presenta una flora de: Difteroides aerobios Estafilococos Sarcinas Levaduras Bacilos del colon con sus afines y espiroquetas Bacilos fusiformes Protozoarios del genero Trichomona El inocuo bacilo acido resistente, Mycobacterium smegmatis, se encuentra frecuentemente en la regin genital. 5. Continuacin Un bacilo grande, aerobio, acidofilo y grampositivo llamando bacilo de Doderlein, es el organismo mas importante que se ve en los cultivos vaginales. Ayuda a mantener la elevada acidez que sirve para impedir el libre crecimiento de otros grmenes posiblemente dainos. 6. Las bacterias de los genitales externos son generalmente inocuas, se pueden presentar los bacilos fusiformes y las espiroquetas, que son patgenas y pueden ser responsables de ulceraciones u otras inflamaciones locales. La infeccin del tero despus del parto (fiebre puerperal) es producida en algunas casos por bacterias que se encuentran normalmente en la vagina y en la vulva. 7. Toma de muestra: Las muestras obtenidas en los casos de uretritis suelen ser sospechosos de Neisseria gonorrheae. Para preparar el frotis se deber tomar la secrecin directamente sobre el portaobjetos, fijarla por calor, teirla por el metodo gram. La presencia de diplococos gramnegativos intracelulares de forma caracterstica es un dato sugestivo de gonorrea. Debe sembrarse en agar chocolate. 8. Continuacin A temperatura corporal y en un medio de CO2 al 10%. Puede confirmarse el diagnostico mediante reacciones caractersticas de azucares, utilizando los del suero. Puede haber uretritis por microorganismos diferentes a los de la gonorrea, por ejemplo: Estreptococo pyogenes, Escherichia coli y Estreptococos anaerobios. 9. En estos casos la tcnica es la misma que para el material de vagina y cuello uterino. Si es posible, debe examinarse gota suspendida un poco de secrecin uretral reciente, para excluir la presencia de las tricomonas. 10. Examen Bacteriolgico 11. Generalidades Bucales La boca contiene flora bacteriana natural. Es un medio perfecto para la proliferacin de bacterias debido a sus superficies distintas, a la temperatura ideal corporal que mantiene y por la humedad y alimento que puede proporcionar al microorganismo extrao. La principal formacin microbiana ajena a la local es conocida como placa dental bacteriana. 12. Placa bacteriana La placa bacteriana es un sistema ecolgico formado por una comunidad bacteriana, rica en microorganismo anaerobios y aerobios, que se desarrolla sobre las superficies dentales con nula o escasa limpieza. Placa bacteriana 80% agua 20% fase slida 70% bacterias 30% matriz orgnica o acelular 13. Estructura de la placa dental: La placa subgingival Si la placa esta encontacto con el margen gingival debajo del margen de la enca, entre el diente y el tejido del surco gingival. La supragingival por arriba del margen de la enca placa marginal gingivitis 14. CRITERIOS PARA IDENTIFICAR ODONTOPATOGENOS 1. Ser de manera sistmica de individuos enfermos. 2. Crecer en cultivos puros en el laboratorio, 3. Producir una enfermedad similar cuando se inocula en animales de laboratorio. 4. Ser recuperado de lesiones en un animal de laboratorio enfermo. 15. Toma de muestra : Cavidad Bucal Ir precedida de un enjuague con agua o solucin salina. Las lesiones pseudomembranosas y las secreciones se recogen con una torunda o hisopo de algodn estril. 16. Medios de cultivo recomendados Medio de transporte de Amies : para la mayor parte de bacterias de la boca. Agar Dextrosa Sabouraud Agar Harina de Maz Incubar a 37C durante 3 semanas. Un error habitual es tirar los medios una vez que se ha conseguido el aislamiento de algn hongo, ya que puede haber otros de crecimiento ms lento. 17. Medios de cultivo recomendados La incubacin total comprende un periodo de una semana, pero se prolongar hasta cuatro semanas en caso de sospecha de un hongo filamentoso. En la mayora de los casos, las colonias se pueden observar a las 24-48 h de incubacin. En los medios cromognicos electivos el color de las colonias de levaduras es ms ntido a las 48-72 h. 18. DIAGNOSTICO CLINICO Principales microorganismos causantes de enfermedades bucales 19. Micosis de la Cavidad oral Las micosis de la cavidad oral son frecuentes y habitualmente de carcter leve o moderado. La mayora estn producidas por Candida albicans y, en menor medida, por otras especies de Candida Se observan especialmente en paciente portadores de prtesis o con inmunodeficiencias, considerndose que cuatro de cada mil pacientes que acuden a una consulta dental general presentan sntomas de infeccin oral candidisica 20. Caries La placa bacteriana produce cidos a partir del azcar ingerido que atacan el esmalte del diente produciendo cavidades: As, se forma una caries dental. Los que con mayor frecuencia se relacionan con el inicio y desarrollo de la caries son: estreptococos del grupo mutans, Lactobacillus sp. , y Actinomyces sp. , estos pueden ser aislados a partir de placa dental supra y subgingival y en saliva. 21. Sarro Cuando la placa no se remueve, sta se cristaliza y se forma el sarro. El sarro produce enfermedades de las encas, como reabsorcin del hueso, lo que causa movilidad en los dientes y hasta perdida de los mismos. Suelen abundar bacterias saprfitas, pudindose observar gran variedad de morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos. 22. Mal aliento o Halitosis Frecuentemente es causado por la acumulacin de placa bacteriana y sarro entre los dientes y encas .En una investigacin llevada a cabo ltimamente por bilogos de la Universidad de Bffalo y financiada por Colgate se identific la bacteria causante de la alitosis: Solobacterium moorei. 23. Examen Bacteriolgico 24. Ojos Las infecciones oculares se localizan Generalmente en parpados, conjuntiva que es una membrana mucosa que reviste la cara posterior de los dos prpados y la parte anterior o libre del globo del ojo, en el saco lagrimal. Loa microorganismos que con mas frecuencia se aslan son: Bacilos difteroides. Estafilococo aureus. Neisseria catarralis. Gonorrae. Estreptococco alfa y beta hemolitico. Klebsiella. Neumococo. 25. Continuacin Cualquier organismo gram negativo tiene significancia clinica, organismos cosiderados de menos importancia en otras localizaciones son causantes de enfermedades del ojo y puede dar por resultado una enfermedad ocular progresiva. Se debern realizar de preferencia en los estados agudos de la enfermedad antes de la administracin de antibiticos como tratamiento de la enfermedad. Si hubo aplicacin de gotas oftlmicas que puedan contener algn antisptico es preferible esperar de 12 a 24 hrs. antes de tomar la muestra 26. Toma de muestra. La muestra se deber tomar con isopos estriles, se recomienda la aplicacin de un colirio anestsico (tetracaina). Se tomara del parpado o conjuntiva. Deber sembrarse de inmediato en agar chocolate. Preparar un frotis para tincin De inmediato 27. Examen Bacteriolgico 28. Generalidades La piel representa una barrera notablemente eficaz contra las infecciones bacterianas. En su superficie viven varias especies de bacterias que llegan a ser patgenas ocasionando infecciones en forma de granos o manchas rojizas. 29. Personas propensas a infecciones. Los diabticos, que poseen una irrigacin cutnea disminuida, en especial la de las manos y de los pies. Los enfermos de SIDA, que presentan un sistema inmunolgico deprimido. Personas con piel daada por :los rayos del sol, las rascaduras u otra irritacin tambin tiene ms posibilidades de infectarse. 30. Infecciones mas comunes. Imptigo Ectima Sndrome de la piel escaldada estafiloccica Erisipela Celulitis Funiculitis Furnculos La lepra 31. Imptigo El imptigo es una infeccin cutnea causada por Staphylococcus o Streptococcus, que se caracteriza por la formacin de pequeas ampollas llenas de pus (pstulas). Esta enfermedad afecta principalmente a los nios y puede aparecer en cualquier parte del cuerpo, aunque frecuentemente lo hace en la cara, los brazos y las piernas. 32. Ectima Es una lesin ms profunda de Imptigo, recibe tambin el nombre de Imptigo ulcerado Ocacinado por: Estreptococo B- hemoltico Grupo A Estafilococo aureus (colonizador secundario) Manifestaciones clnicas: Ulceraciones redondeadas, aspecto en "sacabocado" nicas escasas en numero, de 1 a 3cm de dimetro, cubiertas por una costra amarillenta. Localizacin usual en las piernas. Suelen aparecen en personas con edema crnico enfermedades graves. 33. Sndrome de la piel escaldada estafiloccica Es un cuadro eritrodermico agudo, que evoluciona a despegamientos epidrmicos superficiales amplios. Ocasionado por: cepas dermatopticas de Estafilococo aureus que elaboran toxinas epidermolticas. Manifestaciones clnicas La piel es muy sensible y al movimiento se produce dolor. La piel tiene aspecto escaldado a quemadura por agua caliente. 34. Erisipela La erisipela es una infeccin cutnea causada por estreptococos B hemoltico del Grupo A. Habitualmente, la infeccin aparece en la cara, en el brazo o en la pierna, y a veces comienza en una zona de piel lesionada. Los ganglios linfaticos comienzan a Incharse y suele ser doloroso. 35. Celulitis La celulitis es una infeccion en las capas profundas de la piel ocacionada por varios tipos de bacterias en especial por estreptococos. Afectando las piernas y los dedos principalmente. 36. Foliculitis Es una inflamacin de los folculos pilosos causada por una infeccin por Staphylococcus. En los folculos pilosos se forma una pequea cantidad de pus, que hace que se irriten y enrojezcan. La infeccin daa los pelos, los cuales se pueden arrancar fcilmente. 37. Furnculos Los furnculos son reas grandes, dolorosas, inflamadas y sobreelevadas originadas por una infeccin por estafilococos alrededor de los folculos pilosos. Los furnculos a menudo tienen pus en el centro. 38. La lepra La lepra es una enfermedad infecciosa, de nula transmisibilidad cuando est debidamente tratada, aunque los pacientes que no reciben tratamiento, o este es inadecuado, si constituyen una fuente de contagio. Puede estar producida por la bacteria Mycobacterium leprae 39. Bacterias causantes de infecciones. Mycobacterium Leprae Streptococcus B- Hemolitico grupo A Staphylococcus Aureus Staphylococcus Epidermis Bacillus anthracis 40. Obtencin de muestras Biopsias de tejido Aspirados con jeringa Muestra tomada con torunda. 41. Medios de cultivo y prubas bioquimicas Estafilococo 110 Agr Sal y Manitol Agr Middelbrook 7H10//7H11 Agr 42. Estafiloco 110 agar Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciacin presuntiva de estafilococos, en base a la produccin de pigmentos, la fermentacin de manitol y la hidrlisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras. Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicacin alimentaria. En el medio de cultivo,el extracto de levadura y la triptena aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos decarbono fermentables. 43. Resultados : Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio. Positiva: halo transparente alrededor de las colonias. Prueba negativa :no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la zona sin inocular. Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias. 44. M.O Pigmento Fermentacin de manitol Hidrlisis de la gelatina Prueba de la coagulasa Staphylococcu s aureus + + + + Staphylococcu s epidermis - - + - Caractersticas del medio preparado: mbar claro, opalescente con precipitado. 45. Sal y Manitol Agr Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria. Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. 46. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificandoe lmedio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. 47. M.O. Crecimiento Caracteristicas de la colonia Staphylococcus aureas ATCC 25923 Bueno Amarillo Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Excelente Rojo 48. Agr Middelbrook 7H10//7H11 Middlebrook 7H10 agar es un medio de cultivo slido se utilicen especialmente para el cultivo de Mycobacterium, especialmente Mycobacterium tuberculosis. Se ha informado de que el medio 7H10 tiende a crecer menos contaminantes que los medios de comunicacin a base de huevos utilizados para el cultivo de micobacterias. 49. Los antibiticos Un antibitico ha sido definido como una sustancia qumica producida por un microorganismo capaz de inhibir el desarrollo de otros microorganismos. Los antibiticos modificados por manipulaciones qumicas aun se consideran como tales. Un agente antimicrobiano es activo contra los microorganismos y puede ser producido en forma natural por microorganismos o sintticamente en el laboratorio. El trmino agente quimioterpico ha sido empleado para referirse a agentes antimicrobianos sintticos o no y tambin se refiere a agentes que actan contra clulas humanas como inmunomoduladores y drogas antitumorales. Los trminos agente antiviral y agente antimictico son trminos ms especificos, incluidos dentro de la categora ms general de agentes antimicrobianos. 50. Sintticos. Todos los tipos de penicilina poseen un ncleo qumico idntico llamado anillo. La cadena qumica que est adjunta al anillo es diferente en cada tipo. Cambiando las molculas de la cadena, los cientficos disean drogas con efectos potencialmente diferentes sobre organismos diferentes. Algunas de estas drogas son tiles para tratar infecciones, algunas no lo son. Los fabricantes farmacuticos ahora utilizan imgenes generadas por computadora de los anillos y experimentan con una variedad interminable de cadenas posibles. Los investigadores han desarrollado antibiticos con vida media larga (el perodo de eficacia), que permite tomar la medicacin una vez en 24 horas en vez de cada pocas horas. Los antibiticos ms nuevos son tambin ms efectivos contra una gama ms amplia de infecciones de lo que eran las drogas anteriores. 51. Las tcnicas de un antibiograma requieren experiencia en el laboratorio y conocimientos bacteriolgicos adecuados, de lo contrario se cometen errores importantes de repercusin clnica. Factores a tener en cuenta que podran causar problemas a la hora de la teraputica. Consistencia del medio de cultivo; Cantidad de antibitico contenida en cada disco ensayado; Material infeccioso fresco; Tiempo de incubacin y espera para efectuar la lectura; Medicin correcta (en milmetros) del halo inhibitorio; Calidad de la inhibicin; Prever contaminacin (posible) del antibiograma por empleo de tcnicas defectuosas. 52. Variedades Hay docenas de antibiticos. Los siguientes son de uso comn: Las penicilinas. Los diversos tipos de penicilinas constituyen un gran grupo de antibiticos antibacteriales de los cuales los deribados de la benzil penicilina son los nicos de que se produce naturalmente a partir de cepas. La Penicilina G y ampicillin estn en esta clase. Otra penicilina, llamada piperacillin, ha mostrado ser efectiva contra 92 por ciento de las infecciones sin ocasionar efectos colaterales serios. Las penicilinas se administran frecuentemente en combinacin con algunas otras drogas de las siguientes categoras. Cefalosporinas. Parecidas a las penicilinas, las cefalosporinas se utilizan frecuentemente cuando una sensibilidad (reaccin alrgica) a las penicilina se conoce o es sospechada en un paciente. Ceftriaxona sdica es un tipo de Cefalosporina que es muy efectiva para combatir infecciones profundas tales como las que ocurren en los huesos y como resultado de una ciruga. Aminoglicsidos. Los aminoglicsidos incluyen la streptomicina y la neomicina. Estas drogas se usan para tratar tuberculosis, la peste bubnica, y otras infecciones. A causa de los efectos colaterales potencialmente serios que genera, tal como interferencia a la audicin y sensibilidad a la luz del sol, estas drogas se administran con cuidado. (Todos los antibiticos se administran con cuidado; el cuidado especial se toma por las posibles consecuencias negativas superiores a las usuales de administracin de una droga.) 53. Sulfo Drogas Tetraciclinas. Las tetraciclinas son efectivas contra la neumona, el tifo, y otras bacterias que ocasionan la enfermedad pero puede daar la funcin del hgado y riones. La tetraciclina en un gel base especial se usa para tratar muchas infecciones de ojo. Macrolidas. Las macrolidas se usan frecuentemente en pacientes que resultan ser sensibles a la penicilina. La eritromicina es la mejor medicina conocida en este grupo. Polipptidos. La clase de antibiticos llamado polipptidos es bastante txica (venenosa) y se usa mayormente sobre el superficie de la piel (tpicamente). La Bacitracina est en esta categora. La Sulfonamida fue la primer droga antimicrobial que fue usada. Las Sulfo drogas, que se hicieron a partir de qumicos, tienen en su mayor parte los mismos efectos que las penicilinas posteriormente desarrolladas. Aunque las sulfo drogas pueden tener efectos nocivos sobre los riones a la vez son efectivas contra infecciones de rin por ello se toman siempre con grandes cantidades de agua para impedir la formacin de cristales de la droga. Gantrisin es todava la ms til entre estas sulfa drogas. 54. Otros Antimicrobiales Otros antimicrobiales incluyen furazolidone y tritethoprim. El primero se usa primariamente en infecciones gastrointestinales; el posterior, cuando se combina con una de las sulfonamidas, es efectivo en infecciones urinarias y respiratorias Antifungales. Los Antifungales combaten la enfermedad ocasionada por hongos tal como candida. El hongo que ocasiona la infeccin requiere tratamiento a largo plazo. Las drogas tales como griseofulvin se toman frecuentemente por seis meses. La mayora de la infeccin funginales ocurren sobre la piel o la membrana mucosa. Antivirales. Muy pocas se conocer sobre tratar infecciones virosas (el fro comn es un ejemplo). Un virus es el pensamiento para ser el agente infeccioso ms pequeo con la capacidad para duplicarse (reproducirse) a s mismo. Adems, posee capazidades de mutante, o cambio, con gran rapidez. Las pocas drogas que son efectivas contra infecciones virosas inmiscuidas con la formacin de nuevas, clulas normales y se usan por lo tanto con extremo cuidado. Otras drogas micrbicas tienen poco efecto sobre un virus y se dan nicamente para tratar infecciones bacteriolgicas que acompaan o resultan desde la infeccin virosa primaria. 55. Sensibilidad bacteriana a los antibiticos La determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima (CIM) es la base de la medida de la sensiblidad de una bacteria a un determinado antibitico. La CIM se define como la menor concentracin de una gama de diluciones de antibitico que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una escala de actividad del antibitico frente a diferentes especies bacterianas. Hay diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina, y de manera semicuantitativa, las CIM (mtodos manuales y mtodos automatizados o semiautomatizados). Estos diferentes mtodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en funcin de su sensibilidad frente al antibitico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia (I) o Resistente (R) al antibitco. Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es, segn la NCCLS: 56. Sensible, si existe una buena probabilidad de xito teraputico en el caso de un tratamiento a la doss habitual. Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida. No es de esperar ningn efecto teraputico sea cual fuere el tipo de tratamiento. Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se puede conseguir efecto teraputico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la posologa). Ciertas molculas son representativas de un grupo de antibiticos. Los resultados (S, I, R) obtenidos con estas molculas pueden ser ampliados a los antibiticos del grupo, que en ese caso no es necesario ensayar (Ejemplo: Equivalencia entre la cefalotina que se ensaya y las restantes cefalosporinas de 1 generacin que no es necesario probar, ya que el resultado puede deducirse del obtenido en la cefalotina). Este hecho permite ensayar un nmero reducido de antibiticos, sin limitar por ello las posibilidades teraputicas. 57. Administracin de Antibiticos Para actuar contra organismos infecciosos, un antibitico puede aplicarse externamente, como en el caso de una cortadura sobre la superficie de la piel, o internamente, alcanzando la corriente sangunea dentro del cuerpo. Los antibiticos se producen de varias formas y en diferentes maneras. Las formas de administrar antibiticos son: Local. La aplicacin local significa "a un rea local" tal como sobre la piel, en los ojos, o sobre la membrana mucosa. Los antibiticos para el uso local estn disponibles en forma de polvos, ungentos, o cremas. 58. Oral. Hay dos formas de accin para la aplicacin por va oral. Las tabletas, lquidos, y cpsulas que se tragan. En este caso el antibitico se libera en el intestino delgado para ser absorbido en la corriente sangunea. Caramelos o pastillas, que se disuelvan en la boca, donde el antibitico se absorbe a travs de la membrana mucosa. 59. Parenteral. Las aplicaciones fuera del intestino se llaman parenterales. Una forma de aplicacin es mediante una inyeccin, que puede ser subcutnea (debajo la piel), intramuscular (en un msculo), o intravenosa (en una vena). La administracin Parenteral de un antibitico se usa cuando un mdico requiere una concentracin fuerte y rpida del antibitico en la corriente sangunea. 60. Antibiosis La relacin general entre un antibitico y un organismo infeccioso es de antibiosis. Esta palabra refiere a una asociacin de dos de organismos en la que uno es daado o es matado por el otro. La relacin entre seres humanos y la enfermedad que ocasionan los grmenes es de antibiosis. Si una persona es afectada por grmenes, sta es el organismo lastimado; si el ataque de germen es repelido por las defensas del cuerpo, los grmenes son los organismos lastimados. Cuando el sistema de defensa de una persona no puede controlar la antibiosis a su propio favor, se usan los antibiticos para desequilibrar la balanza hacia la salud. 61. La accin de Antibiticos Los antibiticos pueden ser bacteriostticos (bloquean el crecimiento y multiplicacin celular) o bactericidas (producen la muerte de las bacterias). Para desempear estas funciones, los antibiticos deben ponerse en el contacto con las bacterias. Se cree que los antibiticos se inmiscuyen con la superficie de clulas de bacterias, ocasionando un cambio en su capacidad de reproducirse. La prueba de la accin de un antibitico en el laboratorio muestra cuanta exposicin a la droga es necesaria para frenar la reproduccin o para matar las bacterias. Aunque a una gran cantidad de un antibitico le tomara un tiempo menor para matar las bacterias que ocasionan una enfermedad, tal dosis comnmente hara que la persona sufra de una enfermedad ocasionada por la droga. Por lo tanto, los antibiticos se dan en una serie de cantidades pequeas. 62. Antibiograma. El antibiograma es un test de resistencia o sensibilidad de las bacterias bajo la accin de diversos antibiticos. Si un microorganismo est en contactado con la droga y an as persiste su capacidad vital, se deduce la inoperancia farmacolgica del producto para tal germen. Hay resistencia al antibitico. Inversamente si la zona que rodea al antibitico est totalmente libre, o sea, que no hay desarrollo de la bacteria: esta es sensible a la droga. Esta zona circundante al antibitico, llamada halo de inhibicin, es de gran valor clnico para iniciar, continuar o modificar una terapia. Tcnica: El laboratorista realiza comnmente la tcnica de difusin en placa de petri, porque es ms sencillo y menos costoso que la tcnica de dilucin en tubo. Este mtodo fue descrito inicialmente por Vincent y Vincent en 1944 y modificado parcialmente por otros investigadores. Al medio de cultivo para las bacterias colocado en cpsulas de petri, se le adicionan discos o comprimidos de antibiticos, separados entre s convenientemente, se incuban durante 12 horas a 18 horas a 37C , al cabo de las cuales se efecta la lectura. 63. Interpretacin de un Antibiograma Certos mecanismos de resistencia se expresan dbilmente in vitro, cuando se inscriben en el DNA bacteriano. Su expresin en el organsmo, en donde las condicones en cuanto a medios son diferentes, expondra al riesgo de fracaso teraputico. Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera global a fin de descubrir, a travs de la comparacin de las respuestas para cada antibitico, un mecanismo de resistencia incluso dbilmente expresado. As, gracias a la interpretacin, una cepa que aparece como falsamente sensible ser categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiella pneumoniae productora de BLSE puede aparecer sensible in vitro a las cefalospornas de 3" generacin. El resultado de Sensible debe ser corregido a Intermedio o Resistente, ya que la utilizacin de estos antibiticos correra el riesgo de provocar un fracaso teraputico). 64. Mtodos automatizados La mayora de estos novedosos mtodos utilizan sistemas de microdilucin en medio lquido sobre microplacas con pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano en los diferentes pocillos por medio de un autoanalizador (mediciones por turbidez o fluorescencia) o, en el caso de los sistemas ms sencillos, por simple lectura ptica del tcnico a travs de un visor invertido de espejo. Su manipulacin suele ser fcil y rpida, generalmente automatizada o semiautomatizada, lo que los convierte en mtodos ideales para grandes volmenes de trabajo. Una de sus grandes limitaciones es que slo ofrecen garanta para investigar microorganismos de crecimiento rpido y que no tengan requerimientos especiales. 65. Antibiograma realizado por mtodo automtico Antibiograma realizado por mtodo automtico En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una microplaca para autoanalizador que incluye fase de identificacin y fase de antibiograma (panel microScan). Las tres filas superiores de la microplaca son la zona de "identificacin" del microorganismo, las cinco filas inferiores son el apartado "antibiograma". La foto de la derecha, un plano ms cercano de la mitad inferior izquierda de la microplaca, permite observar con ms detalle algunas filas de pocillos con diluciones seriadas de algunos antibiticos. La dosificacin de cada antibitico aumenta, en cada fila, de izquierda a derecha (obsrvese los rtulos bajo cada pocillo: 8-16 ... 1-2-8-16 ... 2-8- 32). Los pocillos que en la imagen muestran un color verde intenso tienen crecimiento bacteriano, o sea, el antibitico en cuestin no impide el desarrollo del microorganismo a estudio. Los pocillos transparentes marcaran los puntos de inhibicin de cada antibitico. 66. Mtodo de E-test Es uno de los mtodos ms recientes que se han presentado en el mercado y resulta de una curiosa combinacin de caractersticas de los mtodos anteriores. Se trata de una tcnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura directa de CMI en g/ml, ya que se emplean tiras plsticas impregnadas en concentraciones crecientes de antibitico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira. Una de sus grandes ventajas, dadas sus caractersticas, es que resulta un mtodo ideal para estudiar cualquier tipo de microorganismo, aerobio o anaerobio, incluyendo aquellos llamados "fastidiosos" o los que tengan requerimientos especiales para crecer. El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira del antibitico (o antibiticos) a ensayar. Tras la incubacin de 16-24 horas a 35C se observan las placas y se valora la zona de inhibicin, de forma elptica, alrededor de cada tira. La CMI se lee directamente observando el punto ms bajo de la elipse que presente crecimiento. 67. Antibiograma realizado por el mtodo de E-test En la fotografa de la izquierda se muestra una vista general de una placa con crecimiento bacteriano y con dos tiras de E-test. La zona de color ms claro que ocupa la mayor parte de la placa es el crecimiento bacteriano en las zonas no inhibidas. Las elipses ms oscuras que rodean la parte superior de las tiras E-test marcan las zonas en que los respectivos antibiticos han inhibido, con mayor o menor eficacia, el crecimiento del microorganismo a estudio. La foto de la derecha, un plano ms cercano de la mitad inferior de la placa, permite observar con ms detalle lo sealado en el prrafo anterior. Se aprecia perfectamente como el pico de la zona ms estrecha de la elipse en la tira de MZ coincide, en la escala graduada, con la franja entre las marcas de 1.5 y 2, lo que nos indicara que la CMI de este antibitico (MZ) para este microorganismo sera de 2 g/ml 68. Mtodo de difusin en agar Este mtodo fue modifcado en 1947 por Bondi y col. incorporando el agente antimicrobiano a discos de papel de filtro. Fue un paso adelante gigantesco ya que el uso de los discos de papel permita preparar un gran nmero de pruebas idnticas y almacenarlas para uso futuro. En 1966, despus de los estudios realizados por Bauer, Kirby, Sherris y Turk, ensayando diferentes cepas bacterianas, el empleo de los discos de papel de filtro para las pruebas de sensibilidad fue estandarizado y correlacionado definitivamente con las CMI correspondientes. Durante muchos aos, y a pesar de ser una tcnica puramente cualitativa, el mtodo de difusin por disco (o mtodo Kirby-Bauer), en funcin sobre todo de su comodidad, economa y fiabilidad, ha sido, y aun es, uno de los ms utilizados en los laboratorios de todo el mundo. El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar y sobre su superficie se disponen los discos correspondientes a varios antibiticos. Se incuban las placas durante 16-24 horas a 35C y al cabo de este tiempo se estudia el crecimiento en ellas. Se valora el dimetro de la zona de inhibicin que se forma alrededor de cada disco y se compara con las referencias oportunas publicadas por el NCCLS. Con esta referencia podemos informar si el microorganismo es Sensible, Intermedio o Resistente (S, I, R) a cada uno de los antibiticos ensayados en las placas. 69. Antibiograma realizado por el mtodo de difusin en agar En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una placa con crecimiento bacteriano y con seis discos de antibiticos. La zona de color claro que ocupa la mayor parte de la placa es el crecimiento bacteriano en las zonas no inhibidas . Los crculos negros que rodean a cinco de los seis discos marcan las zonas en que los respectivos antibiticos han inhibido, con mayor o menor eficacia, el crecimiento del microorganismo a estudio. El sexto disco (AM-10) no tiene a su alrededor halo de inhibicin lo que indica la resistencia del microorganismo a ese antibitico. La foto de la derecha, un plano ms cercano de la mitad superior de la placa, permite observar con ms detalle lo sealado en el prrafo anterior. Puede verse adems, con gran claridad, la especial disminucin de la intensidad de crecimiento del microorganismo en la zona interior del halo de inhibicin del disco de CTX-30, debido probablemente a la aparicin de mutantes resistentes de dicho microorganismo capaces de soportar en mayor medida que el resto el efecto inhibitorio del antibitico.