ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA Nº 06Recuento de Enterobacterias

Totales

ASIGNATURA :

Microbiología de los Alimentos I

DOCENTE :

Dra. Graciela Albino Cornejo

ALUMNO :

Rómulo Aycachi Inga

CICLO :

2007 - II

Lambayeque, 21 de febrero de 2008.

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PRÁCTICA Nº 06RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS TOTALES

I. Introducción:

La familia Enterobactereacea comprende un número muy variado de géneros y especies bacterianos cuyo hábitat natural es el tubo digestivo del hombre y los animales. No todos los bacilos Gram negativos que tienen este hábitat forman parte de la familia Enterobacteriaceae. Se los encuentra en el suelo, agua, frutas, vegetales y otras plantas y en los animales desde los insectos al hombre.

La familia está definida por un conjunto de características fenotípicas (bioquímicas, fisiológicas e inmunológicas) a las que se han agregado posteriormente otros elementos establecidos por técnicas de hibridización de ácidos nucleicos que miden distancias evolutivas y han definido mejor la interrelación de todos los microorganismos integrantes de la familia.

Son bacilos Gram negativos rectos, con un diámetro de 0.3 a 1.5 micras. Si son móviles, presentan flagelos perítricos. No forman esporas. Desarrollan en presencia o en ausencia de Oxígeno (aerobios-anaerobios facultativos). Desarrollan rápidamente en medios simples, no siendo exigentes desde el punto de vista nutricional. Algunos desarrollan en glucosa como única fuente de carbono, mientras otros requieren el agregado de vitaminas y/o minerales en el medio de cultivo. Son quimioorganótrofos, poseen metabolismo fermentativo y respiratorio. Son catalasa positivos y oxidasa negativos; reducen los nitratos a nitritos.

El contenido de Guanina + Citosina del DNA total es de 38 a 60 moles %. En los medios de cultivo forman colonias lisas, convexas y circulares de bordes definidos. Algunas especies desarrollan colonias más mucoides que otras (por ejemplo Klebsiella).

II. Objetivos:

- Realizar el recuento de Enterobacterias totales por la técnica del NMP, usando diferentes alícuotas (10, 1 y 0.1 mL).

- Identificar los géneros de enterobacterias presentes en los alimentos.

III. Materiales:

- Caldo de enriquecimiento para Enterobacterias (sales biliares).- Medio agar Endo, Eosina Azul de Metileno o MacConkey.- Medios para pruebas Bioquímicas.- Frascos y tubos de diluciones estériles.- Placas Petri- Tubos para pruebas bioquímicas.- Pipetas - Gradillas

IV. Procedimiento:

- Homogenizar la muestra en caso de ser sólida, de ser muestra líquida no se homogenizará.

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- El grupo trabajó con muestra líquida. En este caso se siembra directamente las alícuotas de 10 mL, 1 mL o 0.1 mL en los tubos (y frascos) respectivos conteniendo caldo de enriquecimiento para enterobacterias.

- Luego se incuban a 35 ó 37 ºC por 24 a 48 h.- Pasado el tiempo se leerán los tubos, la turbidez indicará si la muestra es

positiva.- De los tubos positivos, pasar a placa (1 ó 2), se pueden sembrar uno o dos juegos

en el agar selectivo (este puede ser EMB, Endo o MacConkey).- Incubar a 37 ºC por 24 h.- Luego, de las colonias lactosa positivas, se escogen algunas para realizarles las

pruebas bioquímicas correspondientes.- Los resultados se darán usando la tabla para NMP de 5 tubos para alícuotas de

10, 1 y 0.1 mL. Se pueden expresar en mL o gr.

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Muestra: Agua de mar

10 mL

1 mL

0.1 mL

Caldo de enriquecimiento

para enterobacterias

Caldo de enriquecimiento

para enterobacterias

V. Resultados:

- Se sembró en 5 frascos (10 mL) y 10 tubos de dilución (1 y 0.1 mL).- Pasado el tiempo de incubación solo se observó turbidez en 4 de los frascos y en

ninguno de los tubos, por lo que diríamos que nuestros números fueron: 4–0–0.

- Luego, pasamos a sembrar en agar MK, se incubó a 37 ºC por 24 h, obteniéndose colonias lactosa positivas y lactosa negativas.

- Se realizó la bioquímica a una de las colonias lactosa positiva y nos dio por resultado Enterobacter aerogenes.

PRUEBA RESULTADOIndol Negativo

Rojo de metilo Negativo Catalasa Positivo Citrato Positivo

LIA PositivoLactosa Negativo

- Entonces, como el microorganismo aislado es una enterobacteria, se pueden usar

los números dados en los tubos; estos fueron 4-0-0.

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- Entonces, el índice del NMP para la muestra de agua de mar traída de la playa de Ciudad Éten es de 13 bacterias/100 mL.

NMP de enterobacterias totales = 13 bacterias/100 mL.

VI. Preguntas:

- ¿Cuál es la composición de los medios de cultivo (agar) utilizados para el aislamiento de enterobacterias?

Agar EMB Agar MacConkey Agar Endo

Peptona 10 gPeptona de caseína

17 g Peptona de carne 10 g

Lactosa 10 g Lactosa 10 gDi-potasio hidrógenofosfato

3.5 g

Fosfato dipotásico

2 g Peptona de carne 3 g Lactosa 10 g

Eosina 0.40 g Sales biliares 1.5 gSodio sulfito anhidro

2.5 g

Azul de metileno

0.065 g Cloruro de sodio 5 g Fucsina 0.4 g

Agar 15 g Rojo neutro 0.03 g Agar 12.5 gAgua destilada 1 000 mL Cristal violeta 0.001 g (Se disuelve 39 g/L del

preparado, se esteriliza y se sirve en placas)

Agar 12.5 gAgua destilada 1 000 mL

VII. Referencias:

- ALGORTA, G. (2005). Bacilos Gram Negativos No Exigentes:

Enterobacteriaceae, Vibrionaceae, Pseudomonas. Obtenido el 15 de febrero de

2008 en http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2022.pdf

- FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS (1989). Medios de Cultivo en

Microbiología: Manual de Laboratorio. Editora Tricelm S.A. 3º Edic. Lima.

- L. ORTIZ, M. (2003) Material didactico de Microbiologia de Alimentos:

Recuento de enterobacterias. Obtenido el 01 de febrero de 2008 en

http://www2.uah.es/farmacia/programas/microbiologia/material_didactico_de_m

icrolimentos.htm

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