MTODOS INMUNOLGICOS1. CONCEPTOS

ANTIGENOUn antgeno es una molcula que al contactar con el organismo es capaz de producir una respuesta del sistema inmune especifica.

CARACTERISTICAS Son exgenas, extraas al organismo. Capaces de inducir la formacin de Ac en el hospedador. Son de naturaleza qumica muy variada (protenas, polisacridos, lipoprotenas, etc) y de gran peso molecular. Se localizan en la superficie de un agente patgeno o bien son sustancias producidas y liberadas por ste.

ANTICUERPOProtena producida como consecuencia de la introduccin de un antgeno, y que tiene la capacidad de combinarse con el antgeno que estimul su produccin.

Estos anticuerpos pueden ser de dos tipos:naturales o adquiridos.

Losanticuerpos naturaleslos trae el individuo al nacer, es decir que no requieren ningn tipo de estimulacin con el Atg. para encontrarlos en sangre. Son de isotipo Ig-M y no pueden atravesar placenta por su alto peso molecular. Quiere decir que el receptor de sangre ya tiene los anticuerpos para los antgenos y ya en el primer contacto con la sangre incompatible genera el rechazo.

Losanticuerpos adquiridoslos producen el organismo en respuesta al contacto con antgenos que no son propios. Son de tipo Ig-G que atraviesan placenta. Quiere decir que para generar una respuesta inmune contra los antgenos necesito al menos dos contactos (el primero de "sensibilizacin" y el segundo de respuesta especfica).

Dos ejemplos importantes de sistema de antgenos humanos son el sistema ABO y el sistema RH.

Para que sirve estudiar el sistema de Atg humanos?

Es importantsimo para las transfusiones sanguneas, eldesarrollonormal de unfetoincompatible con su madre, el transplante de rganos y como evidencia mdico legal.

2. REACCIN ANTGENO ANTICUERPOS

La interaccin entre antgenos-anticuerpos se estabiliza mediante enlaces dbiles como puntos de hidrogeno, fuerzas de vander wals e interacciones electroestaticas e hifrofobicas. la suma de todos estos enlaces genera una interacion estable entre el lugar de union del anticuerpo (paratopo) y el lugar de union del antigeno (epitopo). La suma de estas fuerzas de atraccion y de repulsion se conoce como afinidad del anticuerpo.

Las molculas de inmunoglobulina presentan un mximo de 10 (IgM) y un mnimo de 2 brazos de unin con el antgeno. En el caso de que este ultimo tambin sea multivalente, presentara un mnimo de dos puntos de anclaje para el anticuerpo correspondiente. Esta interaccin multivalente entre antgeno y anticuerpo permita introducir el concepto de avidez o afinidad funcional.

TIPOS DE REACCIONES ENTRE ANTGENO Y ANTICUERPOS

PRIMARIAEste tipo de reaccin se realiza de una manera directa, en el cual puede reconocer el Ag-Ac, de una manera libre o unido a un carrier.

SECUNDARIAEste tipo de reaccin para visualizar la reaccin Ag-Ac es necesario la presencia de un revelador.Ej.: Pruebas como Elisas, donde se usa una enzima para ver la reaccin Ag-Ac. Inmunofluorescencia donde se usa el Flurocromo para ver la reaccin Ag-Ac.

TERCIARIAEste tipo de reaccin, se produce una segunda reaccin para ver la reaccin Ag-Ac.Ej.: las alergias donde se ve la desgranulacin, donde la reaccin Ag-Ac produce la lisis de los Glbulos rojos.

CUATERNARIAEste tipo de reaccin produce una reaccin en vivo.Ej. VSG La prueba de Montenegro para para el diagnstico de Leishmania.

2.1. CARACTERISTICAS DE LA REACCION ANTIGENO-ANTICUERPO

Especificidad:es la capacidad de los anticuerpos para distinguir entre dos ligandos de estructura similar. La unin dada por la especificidad es muy precisa y permite distinguir entre grupos qumicos con diferencias mnimas.

Rapidez:es la velocidad con la que ocurre la primera etapa de la reaccin y est limitada nicamente por la difusin. La segunda etapa que es ms larga incluye todas las manifestaciones que se presentan como consecuencia de la interaccin tales como precipitacin, aglutinacin, neutralizacin etc.

Espontaneidad:la reaccin Ag-Ac no requiere energa adicional para poder efectuarse.

Reversibilidad:dado que la reaccin se debe a fuerzas no covalentes es reversible y por lo tanto se ve afectada por factores como la temperatura, la proporcin Ag-Ac, el pH y la fuerza inica.

2.2. TIPOS DE REACCIONES ANTIGENO ANTICUERPO

2.2.1. REACCIN DE AGLUTINACIN Se basan en la unin de antgenos particulados a los anticuerpos, preferentemente de clase IgM. Suele tratarse de pruebas muy sensibles pero con poca especificidad.

Cuando el antgeno libre o unido a un soporte se enfrenta al anticuerpo, el complejo antgeno-anticuerpo resultante se observa como una aglutinacinEl proceso tiene dos fases: unin reversible y aglutinacin por formacin de puentes entre los anticuerpos IgG divalentes o IgM multivalentes y los antgenosLos anticuerpos IgM son ms eficaces para aglutinar (Anticuerpos completos). Los anticuerpos IgG a veces producen entrecruzamientos (Anticuerpos Incompletos)

Se da cuando la reaccin antgeno-anticuerpo es corpuscular; es decir, La reaccin se produce sobre la superficie de una clula o partcula inerte que tiene adherida a su superficie el antgeno o el anticuerpo, de esto depende que se puedan identificar anticuerpos o antgenos respectivamente. Solamente proporciona resultados semicuantitativos; su procesamiento es mas complejo que las tcnicas de precipitacin, pero tiene la ventaja de que los puntos finales se pueden valorar visualmente y que es una prueba muy sensible.

Se emplean tanto para la deteccin de antgenos como de anticuerpos.Se pueden hacer de dos maneras: directas o indirectas

2.2.1.1. Aglutinacin directa

Una clula o antgeno insoluble aglutina directamente con el anticuerpo especifico.

Deteccin de anticuerpos frente a Brucella (Reaccin de Huddleson) o Salmonella (Reaccin de Widal).

WIDALLa reaccin de widal es un test basado en el principio de aglutinacin antgeno-anticuerpo, donde se determina O y H de la Salmonella typhy para el serodiagnstico de fiebre tifoidea. La determinacin de A Y B paratificos para salmonelosis.

HEMOAGLUTINACIN

Esta prueba detecta anticuerpos contra antgenos eritrocitarios. Se trata de una respuesta biologa comn frente determinados miroorganismos, se emplea rutinariamente en tenicas de tipado de grupos sanguneos.

LAPRUEBA DE COOMBS (tambin conocida comoprueba de antiglobulina) es unexamen de sangreque se usa eninmunologayhematologa. Este anlisis puede detectar la presencia deanticuerposensueroque reaccionan con antgenos en la superficie de losglbulos rojos. Hay dos tipos distintos de la prueba de Coombs: el directo y el indirecto. Laprueba de Coombs directadetecta anticuerpos ya unidos a la superficie de los glbulos rojos, y laprueba de Coombs indirectadetecta anticuerpos libres que pueden reaccionarin vitrocon glbulos rojos que tienen antgenos especficos.

2.2.1.2. AGLUTINACIN INDIRECTA (PASIVA)

Una clula o partcula inerte es recubierta con un antgeno determinado, el cual de otra manera seria soluble. Es decir necesitan de un carrier para producir una reaccin.

ASTO ANTIESTREPTOLISINA OLa estreptolisina son anticuerpos contra una toxina la estreptolisina O, que producen las bacterias estreptococo hemolitico del grupo A.Estos anticuerpos se elevan a la semana y alcanzan el pico mximo a las 3 o 4 semanas, para descender gradualmente. Puede permanecer a ttulos altos hasta los 6 meses posteriores a la infeccin bacteriana.

FR FACTOR REUMATOIDEEl factor reumatoide es una prueba serolgica inmunologa. Esta prueba a menudo es positiva en personas con artritis reumatoide.

PCR PROTEINA C REACTIVA

Esta prueba tambin mide la cantidad de inflamacin presente.Los niveles de PCR responden mas rpidamente a los cambios en la actividad inflamantoria que la velocidad de eritrosedimentacion.

AGLUTINACION EN CARBON

Las partculas de carbn tienen absorbidas a sus partculas sustancias como el colesterol, leticina y cardiolipina o conocidas como reagininas plasmticas en la prueba de RPR.

2.2.2. REACCIN DE PRECIPITACIN

En este caso se utilizacin antgenos solubles que se difunden frente a los anticuerpos. La unin Ag-Ac forman unos macrocomplejos moleculares, formndose como una red tridimensional que debido a su tamao precipita y permite establecer la presencia de anticuerpos especficos.

2.2.3. REACCIN DE NEUTRALIZACIN

Si el antgeno es una sustancia txica, la unin con el anticuerpo provoca su neutralizacin, de modo que no puede ejercer su efecto txico.

2.2.4. REACCIN DE OPSONIZACIN

El anticuerpo puede recubrir al antgeno para que sea reconocido por los fagocitos, esta reaccin se llama opsonizacin , y es como si los antgenos fueran ms "sabrosos" para ser fagocitados.