MÉTODOS DE EXAMEN DE CÉLULAS Y...
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MÉTODOS DE EXAMEN MÉTODOS DE EXAMEN DE CÉLULAS Y TEJIDOSDE CÉLULAS Y TEJIDOS
Anatomía FuncionalAnatomía Funcional-- tema 2tema 2
EsquemaEsquema
Tipos de estudiosTipos de estudios
Procedencia del Procedencia del materialmaterial
Método de biopsiaMétodo de biopsia–– FijaciónFijación
–– InclusiónInclusión
–– CorteCorte
–– TinciónTinción
TIPOS DE ESTUDIOTIPOS DE ESTUDIO
Estudios vitalesEstudios vitales–– Ej.: circulación sanguínea capilarEj.: circulación sanguínea capilar
Estudios Estudios supravitalessupravitales–– Ej.: Cultivos celulares, tomas en fresco (vaginal, ...)Ej.: Cultivos celulares, tomas en fresco (vaginal, ...)
Estudios Estudios postvitalespostvitales–– Ej.: biopsias, necropsias, …Ej.: biopsias, necropsias, …
PROCEDENCIA DEL MATERIALPROCEDENCIA DEL MATERIAL
NecropsiaNecropsia (autopsia):(autopsia):–– MedicolegalMedicolegal–– ClínicaClínica
Biopsia:Biopsia:–– Biopsia diagnóstica: Biopsia diagnóstica: endoscópicaendoscópica, con aguja, , con aguja, punchpunch, …, …–– QuirúrgicaQuirúrgica
Citología:Citología:CitologCitologíía exfoliativa:a exfoliativa:
Cepillado/raspado: Ej. Triple toma ginecolCepillado/raspado: Ej. Triple toma ginecolóógica, gica, cepillado bronquial, cepillado tubo digestivo,etc.cepillado bronquial, cepillado tubo digestivo,etc.LLííquidos orgquidos orgáánicos: Ej. Orina, lnicos: Ej. Orina, lííquidos pleural, quidos pleural, ascascíítico, sinovial, L.C.R., esputo, etc. tico, sinovial, L.C.R., esputo, etc.
PunciPuncióón aspiracin aspiracióón con aguja fina (n con aguja fina (P.A.A.FP.A.A.F.).)
Método de biopsiaMétodo de biopsia procedimiento al que se somete la muestraprocedimiento al que se somete la muestra
1.1. FijaciónFijación2.2. InclusiónInclusión3.3. CorteCorte4.4. TinciónTinción
Fijación Fijación
Procedimiento que detiene los procesos de Procedimiento que detiene los procesos de autolisisautolisisy putrefaccióny putrefacción
Precipita las proteínasPrecipita las proteínas (desnaturalización, puentes (desnaturalización, puentes
intermolecularesintermoleculares--polimerización, etc)polimerización, etc), , inactiva las enzimas inactiva las enzimas autolíticasautolíticas y destruye las bacterias.y destruye las bacterias.
Tipos según mecanismos:Tipos según mecanismos:Por deshidrataciónPor deshidratación
Por cambios del estado coloidalPor cambios del estado coloidal
Formando sales (Formando sales (proteinatosproteinatos metálicos o picratos)metálicos o picratos)
Por polimerizaciónPor polimerización
Fijadores por deshidrataciónFijadores por deshidratación
Eliminan el agua ligada a las proteínasEliminan el agua ligada a las proteínas ⇒⇒
desnaturalizacidesnaturalizacióón (floculacin (floculacióón)n)
Ventajas:Ventajas: AcciAccióón rn ráápidapida
Inconvenientes:Inconvenientes: Endurece y retrae los tejidosEndurece y retrae los tejidos
Ejemplos:Ejemplos: Alcohol y acetonaAlcohol y acetona
Fijadores por cambio del estado Fijadores por cambio del estado coloidal de las proteínascoloidal de las proteínas
Las proteínas son moléculas anfóteras, a Las proteínas son moléculas anfóteras, a pHpH inferior inferior
al punto al punto isoeléctricoisoeléctrico ⇒⇒ precipitanprecipitan
Ventajas:Ventajas: Rapidez de penetración y poder Rapidez de penetración y poder
decalcificantedecalcificante
Inconvenientes:Inconvenientes: Sólo en mezclas fijadorasSólo en mezclas fijadoras
Ejemplos:Ejemplos: Acido acético, ácido Acido acético, ácido tricloroacéticotricloroacético
y ácido crómicoy ácido crómico
Fijadores que forman salesFijadores que forman sales con los tejidoscon los tejidosForman sales con cationes metálicos (Forman sales con cationes metálicos (CrCr, , HgHg) o con ) o con
ácidos (ácidos (ácác. Pícrico) . Pícrico) ⇒⇒ Proteinatos metProteinatos metáálicos o licos o
picratospicratos
Ventajas:Ventajas: Velocidad de fijaciVelocidad de fijacióónn
Inconvenientes:Inconvenientes: Escaso poder de penetraciEscaso poder de penetracióón, n,
precipitado negruzco, sprecipitado negruzco, sóólo en mezclas fijadoraslo en mezclas fijadoras
Ejemplos:Ejemplos: Cloruro de mercurio, Cloruro de mercurio, dicromatodicromato
potpotáásico, sico, áácido pcido píícricocrico
Fijadores por Fijadores por reticularizaciónreticularización de las proteínasde las proteínas
Establece puentes de metilo entre las proteínas Establece puentes de metilo entre las proteínas formando una malla reticular polipeptídicaformando una malla reticular polipeptídica
Ventajas:Ventajas: Buen fijador, escasa retracción, Buen fijador, escasa retracción, económico y buen desinfectanteeconómico y buen desinfectante
Inconvenientes:Inconvenientes: Irritantes de mucosas, Irritantes de mucosas, cancerígenos, pigmento formólicocancerígenos, pigmento formólico
Tipos:Tipos: Formaldehído al 10% (formol), Formaldehído al 10% (formol), glutaraldehídoglutaraldehído
InclusiónInclusión
Sustitución del agua de los tejidos por una cera Sustitución del agua de los tejidos por una cera (parafina) que lo endurece(parafina) que lo endurece
Etapas: Etapas: –– 1º Deshidratación con alcoholes1º Deshidratación con alcoholes
–– 2º “Aclaramiento”: Exposición a agentes solubles en 2º “Aclaramiento”: Exposición a agentes solubles en
alcohol y parafina (xilol, tolueno,...)alcohol y parafina (xilol, tolueno,...)
–– 3º Parafina fundida (tª fusión de 563º Parafina fundida (tª fusión de 56--58ºC)58ºC)
CorteCorte
MicrotomoMicrotomo ⇒⇒ 2 a 4 2 a 4 µµ
TinciónTinción
Tratamiento de los tejidos con colorantes que Tratamiento de los tejidos con colorantes que contrastan diferentes componentes celulares y contrastan diferentes componentes celulares y tisularestisulares..Tipos de reacción: ácidoTipos de reacción: ácido--básebáse, , oxirreducciónoxirreducción, , afinidad, afinidad, liposolubilidadliposolubilidad......
Técnicas de tinción más utilizadasTécnicas de tinción más utilizadas
HematoxilinaHematoxilina (básico)(básico) y eosinay eosina (ácido)(ácido)Carbohidratos Carbohidratos ⇒⇒ P.A.S. (ácido peryódico de Schiff):P.A.S. (ácido peryódico de Schiff):El ácido peryódico oxida el glucógeno y MPS El ácido peryódico oxida el glucógeno y MPS neutros, dando grupos aldehidos (neutros, dando grupos aldehidos (--CHO), que CHO), que reaccionan con la fucsina básica y adquieren color reaccionan con la fucsina básica y adquieren color magentamagentaGrasas Grasas ⇒⇒ Escarlata R y Sudan IIIEscarlata R y Sudan IIITejido conjuntivo Tejido conjuntivo ⇒⇒ TricrTricróómico de Masson, van mico de Masson, van Gieson, reticulina de GomoriGieson, reticulina de Gomori……Cationes pesados metCationes pesados metáálicos:licos: nitrato de plata y nitrato de plata y cloruro de orocloruro de oroOtras tinciones:Otras tinciones: PapanicolaouPapanicolaou, , GiemsaGiemsa, , GramGram, , ZiehlZiehl--NielsenNielsen,...,...
• Hematoxilina: tono violáceo de estructuras ácidas (núcleos, ribosomas, retículo rugoso).
• Eosina: tono rosado – rojizo de estructuras básicas (citoplasma, fibras de colágeno, …)
Hematoxilina - Eosina
• Glucógeno y mucinas neutras.
•Membranas basales.
• Borde en cepillo de mucosa intestinal y respiratoria.
P.A.S.
Otras técnicasOtras técnicas
InmunohistoquímicaInmunohistoquímica
Hibridación in situ:Hibridación in situ:–– FISH (con fluorescencia)FISH (con fluorescencia)–– CISH (con cromógeno)CISH (con cromógeno)–– SISH (con plata)SISH (con plata)
PCRPCR
CitogenCitogenééticatica
……