MARCADORES MOLECULARES

MARCADORES MOLECULARES

Los marcadores moleculares o marcadores genticos son una serie de tcnicas que nos permiten conocer la informacin gentica que poseen los organismos. Funcionan como sealadores de diferentes regiones del genoma.. Los marcadores moleculares permiten evidenciar variaciones (polimorfismos) en la secuencia del ADN entre dos individuos, modifiquen estas o no su fenotipo. Esto se debe a que los marcadores moleculares sealan tanto regiones codificantes como no-codificantes del genoma. Un marcador gentico es un segmento de ADN con una ubicacin fsica identificable en un cromosoma y cuya herencia se puede rastrear

Un marcador ideal debe ser: altamente polimrfico o variable dentro y entre especies, de herencia mendeliana no episttica (sin interaccin entre genes),insensible a los efectos ambientales,de rpida identificacin y simple anlisisde posible deteccin en los estadios tempranos del desarrollo

Su utlizacion

Tipos de marcadores genticosEn los anlisis genmicos, se han utilizado varios tipos de marcadores: morfolgicos, isoenzimas, protenas y marcadores basados en ADN.

Marcadores morfolgicosSon caractersticas fenotpicas de fcil identificacin se pueden visual tales como forma, color, tamao o altura. Este es el mtodo mas sencillo y abajo costo pero sin embargo presentan algunas limitaciones.

IsoenzimasSe definen como diferentes formas moleculares de un tipo de enzima, que poseen una actividad cataltica (La catlisis es el proceso por el cual se aumenta la velocidad de una reaccin qumica)comn, es decir actan sobre el mismo sustrato.Las isoenzimas han tenido un rol prominente en estudios de poblaciones vegetales para determinar variabilidad y estructura gentica, sistemtica y biologa evolutiva as como en descripcin de germoplasma e identificacin de variedades.

ADN y marcadores molecularesUn marcador de ADN es simplemente un punto de referencia en un cromosoma, que puede o no corresponder a un gen. Existen diversas tcnicas de biologa molecular disponibles para detectar variabilidad en la secuencia de ADN

Marcadores basados en la hibrididacin del ADNEstos tipos de marcadores involucran la deteccin de un segmento especfico (marcador) en el ADN de estudio por hibridacin con un fragmento marcado radiactivamente de secuencia complementaria al marcador (sonda) Dentro de este grupo de marcadores se encuentran:los RFLP los VNTR o microsatlitesRFLP (Polimorfismo en el tamao de los fragmentos de restriccin)

. La tcnica est basada en la digestin del ADN total de un individuo con diferentes enzimas de restriccinLos fragmentos resultantes son separados por electroforesis en geles de agarosa y transferidos por capilaridad a una membrana de nylon (Southern Blot)es visualizado por medio de una autoradiografa de rayos-X, de acuerdo al peso molecular de la banda

VNTRVNTR son secuencias repetidas en tndem que se presentan en eucariontes.Existen dos formas de detectar los VNTR ya sea por hibridacin o por tcnicas de PCR

Marcadores basados en la amplificacin del ADNEn este grupo se incluyen aquellos marcadores moleculares en los que se utiliza la reaccin de PCR o reaccin en cadena de la polimerasa de ADNSon los microsatlites o SSR, los RAPDs CAPs

Los microsatlites o SSR Los microsatlites o SSR son los ms ampliamente utilizados en estudios con marcadores moleculares, por ser una tcnica relativamente sencilla y altamente reproducible.Se trata de regiones constituidas por repeticiones en tandem de unos pocos pares de bases (1 a 6).

La amplificacin aleatoria de ADN polimrfico, RAPDsLos fragmentos deADNobtenidos por medio de esta tcnica se amplifican en regiones aleatorias del genoma ya que los iniciadores ocebadoresde la reaccin son secuencias arbitrarias de ADN sinttico Sus inconvenientes son que los fragmentos amplificados no suelen corresponder a ADN ligado a algn carcter, sino redundante, y que no da informacin sobre el nmero de copias que el ADN genmico contiene de la secuencia amplificada

CAPS (Secuencia polimrfica amplificada y cortada) Los fragmentos amplificados se someten a una restriccin enzimtica y se migra en un gel de agarosa. Las variaciones se detectan por presencia o ausencia de sitios de restriccin. Se pueden as localizar cambios finos en una zona especfica.Marcadores mixtos

Son aquellos que resultan de la combinacin de otros tipos de marcadores molecularesAFLP consiste en amplificar utilizando cebadores o primers de una forma selectiva fragmentos de ADN cortados con dos distintas enzimas de restriccinLa separacin de estos fragmentos por electroforesis en geles de poliacrilamida genera entre 50 y 100 fragmentos