Manual para el manejo del software Empower Temas:1. Crear Proyecto

2. Desarrollo de Mtodos

3. Creacin de un Conjunto de Mtodos 4. Configuracin del Equipo y el Software Empower5. Creacin de Mtodos de Proceso

5.1 Comprobacin Manual del Mtodo de Proceso6. Elaboracin del informe1) Crear Proyecto Abrir el Software Empower, ingresar usuario (System) y la contrasea (manager), luego se debe presionar OK.

A continuacin aparecer la siguiente ventana:Nota: desde aqu en el icono Configure System se crea el proyecto y se realizan las configuraciones pertinentes. Ingresar a: Configure System File New Project hacer clic en Next se debe seleccionar el tamao del proyecto (250 MB) y el enunciado Full Audit Trail Support no debe estar seleccionado hacer clic en Next Photo Diode Array (seleccionar) Owner Only (debe estar seleccionada) hacer clic en Next hacer clic en Next Project Name (escribir el nombre del proyecto) Finish (finalizar). Nota: de esta forma el proyecto ya esta creado. Una vez creado el proyecto, se debe crear el mtodo.2) Desarrollo de Mtodos

Iniciar nuevamente sesin en el software Empower (escribiendo el usuario y la clave correspondiente)

Luego se debe hacer clic donde dice Advanced y selecciono la interface Quick Start y presiono OK.

Se abrir un cuadro de dialogo (Select Project System), a partir del cual se debe seleccionar el nombre del proyecto que fue creado anteriormente y el sistema cromatogrfico que es Defaul y seleccionar OK.

A continuacin se abrir la ventana de anlisis de la interfaz Quick Start.

Se debe presionar la pestaa View Method y la opcin que dice Instrument y se abrir la ventana View Method Instrument.

Nota: en esta ventana programo todas las condiciones del proyecto, tanto del mtodo instrumental (dibujo uno encerrado en el crculo) como del detector (dibujo dos encerrado en el crculo). Las condiciones se modifican por separado (se debe hacer clic en cada uno).Condiciones modificadas en:

Mtodo Instrumental:

General: en esta pestaa se debe establecer el rango de la longitud de onda con la cual deseo trabajar de comienzo a fin (start wavelength end wavelength) Degas

Eventos

Flujo: establezco el flujo con el cual va ir pasando la fas mvil a travs de la columna (ml/min) Temperatura: modifico la temperatura a la cual quiero que se mantenga la columna. Solvente: hay cuatro recuadros (solvente A, solvente B, solvente C, solvente D) en los cuales debo escribir la composicin de la fase mvil y la proporcin en la que se encuentra, dependiendo de por cual canal este pasando mi fase mvil. CanalDetector:

General

Eventos

Canal 1

Canal 2

Nota: las condiciones indicadas, aparecen en la parte superior del software (pestaas) al momento de hacer clic sobre cada uno de estos (mtodo instrumental o detector).

Finalmente se debe presionar donde dice File Save as se abrir un cuadro para guardar el mtodo instrumental (colocar el nombre), el cual estar dentro del proyecto que se creo anteriormente. Una vez realizado esto, en la barra de estado (parte inferior de la pantalla) debern aparecer los nombres asignados con el cual se guardo el mtodo (Method Set) y el proyecto (Instrumental Method).

Nota: en el caso que el mtodo instrumental ya haya sido creado (se hayan establecido todas las condiciones), se debe presionar el icono (carpeta de color amarillo), para abrir el mtodo instrumental que ya fue creado.

3) Creacin de un conjunto de mtodos Para crear un conjunto de mtodos se debe hacer clic en la pestaa View Method Method Set (para poder abrir el conjunto de mtodos).

En donde dice Instrument Method (encerrado en el circulo rojo) debo seleccionar el nombre del mtodo (el cual fue creado anteriormente). Luego se debe guardar el mtodo con el nombre seleccionado (presionando el disquete que aparece en la parte superior izquierda).

En la pestaa donde dice Run Sample Sample Queue (se deben escribir, todos los parmetros de las muestras que sern inyectadas).

Parmetros que se deben tener en consideracin:

Lista de modos: Run Only Vial: se completa de acuerdo a la posicin que ocupa la muestra.

Sample Name: se completa con el nombre de las muestras que se van a ainyectar.

Inj Vol: se completa con el volumen de inyeccin correspondiente a la muestra.

Function: Se debe seleccionar dependiendo si es un estndar (Standards), se asume que la concentracin es conocida, o si es muestra (se debe seleccionar la opcin desconocido ya que no se en que concentracin se encuentra). Method Set: selecciono el nombre con el cual se creo el mtodo.

Run Time: tiempo de corrida total que dura la muestra.

Para realizar la adquisicin de datos se debe comprobar de que la pestaa View Acquisition este seleccionada (de color naranjo)4) Configuracin del Equipo y el Software Empower Se debe encender, el detector y la pantalla del mtodo instrumental y presionar en la pantalla, donde dice Menu/Status (todos los parmetros aparecen en cero). Esta es la ventana de anlisis de muestra. Una vez encendido el equipo, y el software ubicado en la pestaa Run Sample se debe presionar el icono de Equilibrado del sistema/monitorizacin de la lnea base, para abrir el cuadro de dialogo de configuracin del equilibrado del sistema/monitorizacin de la lnea de base (Setup Equilibrate/System Monitor).

Donde dice Instrument Method debo seleccionar de la lista el mtodo que se ha creado al comienzo y a continuacin hacer clic en Setup Equilibrate/Monitor. Cuando comienza el equilibrado, aparecer la lnea base en el panel de visualizacin en tiempo real. Al equilibrar el monitor, los datos que fueron guardados en el Mtodo Instrumental (flujo, temperatura de la columna, solvente) debern aparecer en la pantalla del equipo.

Nota: La temperatura de la columna ira aumentando poco a poco, hasta alcanzar la programada y cuando esta aun no es alcanzada, en la pantalla del equipo aparecer un mensaje de alerta, se debe presionar clear cada vez que aparezca para eliminar el mensaje.

Nota: Para poder observar la lnea base, se debe hacer clic en la pestaa Run Sample Control Panel (se podr observar la corrida de la lnea base). Mientras se esta estabilizando la linea base, ubico el mouse sobre el cromatograma y presiono con el botn derecho, en donde aparecern varias opciones entre ellas: Fullview (volver al tamao original una vez que hago zoom al cromatograma), Customize Channels (en la cual debo escribir las tres longitudes de onda especificas a la cual quiero medir y estas deben estar ticadas), tambin se puede configurar si deseo ver los cromatogramas juntos (overlay in single plot) o por separado (separate plots). Cuando la lnea base ya se haya estabilizado, se debe hacer clic en la herramienta (detener monitorizacin).

Nota: Debido a que el software ajusta automticamente la escala del grafico en tiempo real, la lnea de base puede aparecer con ruido. Una vez que se detiene el proceso de monitorizacin, se debe hacer clic en el icono que dice Corrida de la muestra, es decir, se le dar partida a las inyecciones. Una vez que doy la partida aparece un cuadro en el cual debo especificar el nombre de la muestra (la que comenzara a correr) y luego se presiona Run.

Al hacer clic en el icono Inyeccin de muestra se abrir el cuadro de dialogo de configuracin de los parmetros de inyeccin nica (Specify Single Inject Parameters).

NOTA: UNA VEZ QUE LAS INYECCIONES HAN SIDO GRABADAS Y COMIENZA LA CORRIDA EL TIEMPO DE CORRIDA DE LA MUESTRA NO SE PUEDE CAMBIAR.

Nota: se debe completar con el nombre de la muestra, la funcin (en el caso que sea estndar o muestra lo que se este inyectando), nombre del mtodo, ubicacin de la muestra en el vial, volumen de inyeccin, tiempo de corrida de la muestra y finalmente presionar Inject.EL ICONO LO PRESIONO SOLO CUANDO QUIERO IR INYECTANDO LAS MUESTRAS UNA A UNA Y ASI EVITO COMPLETAR LA TABLA QUE APARECE AL PRESIONAR LA PESTAA RUN SAMPLE (VENTANA DE ANALISIS DE MUESTRA) YA QUE LA COMPLETO SOLO CUANDO QUIERO INYECTAR VARIAS MUESTRAS Y LAS ESCRIBO TODAS DE UNA SOLA VEZ.

Nota: Es aqu donde se realiza la adquisicin de los datos, para luego poder procesarlos.

5) Creacin de Mtodos de Proceso ( Integrar los datos Calibrar los patrones Cuantificar las muestras)

Hacer clic en la pestaa Browse Project (en donde estarn todas las inyecciones realizadas). En la parte superior de esta pestaa, existen subpestaas (Sample Sets - Injections Channels Methods Result Sets Results Sign Offs Curves).

En la subpestaa simple set aparece el nombre con que guarde las muestras inyectadas y en la pestaa Injections aparecern cada una de las inyecciones que fueron guardadas con el nombre de la muestra.

Una vez ubicada en la pestaa Sample Set ubico el mouse sobre el nombre de las muestras inyectadas (quedara de color negro), luego se debe presionar el icono que dice Review Data Process Extraer cromatograma (aqu se debe cambiar la longitud de onda (presionar enter) a la cual quiero medir el compuesto de inters (cromatograma en la parte superior), para ver con mayor claridad el compuesto en la muestra inyectada (cromatograma en la parte inferior) Hacer clic en el icono que dice Processing Parameters Wizard OK (cuadro de procesamiento de mtodo wizard) OK (cuadro de dialogo: nuevo mtodo de proceso).

Luego se deba hacer clic en Next (cuadro de dialogo: Integration peak deteccin 1) Next Seleccionar donde dice mnima rea y hacer clic en el pic de inters (una vez que el rea mnima haya sido seleccionada, se le debe borrar el ultimo decimal y hacer clic en Test Next Next (aparecer un cuadro con el nombre del pic que ha sido seleccionado junto con el tiempo de retencin de este).Nota: Hacer clic con el botn derecho del ratn en el grfico para tener acceso a las opciones de zoom (Full View/Unzoom) del men contextual. Luego presiono donde dice: (cuadro de dialogo: Integration Peak detection 2) Next Aparecer un cuadro de dialogo: regin de integracin: se debe definir el rea del pic del compuesto de inters desde donde comienza (start) hasta donde termina (end) Next

Nota: en este cuadro de dialogo, las reas de los pic ya estn seleccionadas (lneas de color rojo, observadas en la lnea base).

En esta pantalla de rechazo de picos (Integration - Peak Rejection) contiene los resultados de la integracin de la pantalla precedente. Si se han integrado adecuadamente los picos de inters, continuar con el paso siguiente. De lo contrario, utilizar las opciones Minimum Area (rea mnima) y Minimum Height (altura mnima) para continuar definiendo la integracin.

Nota: Hacer clic sobre un pico para el que se desee definir el rea mnima o la altura mnima. El pico aparecer marcado de color rojo. Hacer clic en Minimum Area o Minimum Height. El campo o campos se rellenan automticamente con un nmero que representa el 95% de la altura o rea real del pico. Las opciones Minimum Area y Minimum Height inhiben la integracin de los picos con reas y alturas iguales o inferiores a los valores introducidos. Como alternativa, introducir los valores en estos campos de forma manual.

Nota: Cuando se introducen los valores en estos campos de forma manual, se activa el botn Test y se puede hacer clic en l para visualizar los resultados obtenidos con los valores introducidos. Si el software determina los valores, el botn Test se desactiva y la prueba se realiza automticamente.Cuando se obtenga una integracin satisfactoria, hacer clic en Next.

Se abrir la pantalla general de calibrado (Calibration General)

Nota: se debe aceptar lo que ya esta predeterminado y hacer clic en Next. Aparecer un cuadro de dialogo de Quick Start y se debe presionar Yes. Se abrir la pantalla de nombres y tiempos de retencin (Calibration Names and Retention Times).

Nota: donde dice Name se puede escribir el nombre especfico correspondiente a cada pic (compuesto de inters). Hacer clic en Next. Se abrir la pantalla de cantidades predeterminadas (Calibration Default Amounts) con los nombres de los nuevos componentes introducidos en la tabla. Habr una fila para cada uno de los picos integrados visualizados en el cromatograma

Nota: las cantidades (Amount) y las unidades (Units) se deben escribir de forma manual.

Hacer clic en Next y se abrir la pantalla de patrones internos de calibrado (Calibration Internal Standards).

Nota: Aceptar la seleccin predeterminada de External Standard Calibration (calibrado con patrones externos). A continuacin, hacer clic en Next. Se abrir la pantalla del nombre del mtodo de proceso (Processing Method Name).

Nota: Se debe escribir el nombre del mtodo correspondiente y luego hacer clic en Finish. El software Empower integrar el cromatograma aplicando los parmetros configurados, calibrar el patrn y archivar el nuevo mtodo de proceso. Volver a aparecer la ventana de visualizacin de datos (View Data) con la pantalla principal de revisin activa (Review Main) y con el nombre del mtodo de proceso en la barra de estado.

Nota: Hacer clic en la pestaa Peaks para visualizar los resultados de la integracin, como nombres de los picos, tiempos de retencin, cantidades, etc.6.1 Comprobacin Manual del Mtodo de Proceso Una vez que se realizaron todas las inyecciones, se deben de integran y cuantificar los cromatogramas, en donde se especifican las reas, tiempo de retencin y concentracin de cada pick.

Se debe pinchar el icono que dice View Data, en esta ventana aparecern todas las inyecciones realizadas. Hacer clic en (integrar) para integrar el cromatograma.

Hacer clic en (calibrar) para calibrar el cromatograma.

Hacer clic en (cuantificar) para cuantificar el cromatograma.

Nota: Para visualizar los resultados del proceso de datos manual, hacer clic en el icono (icono de proceso) de la barra de herramientas. Se abrir la ventana de revisin de datos (Review). En la ventana View Data, al hacer clic, me aparecern todas las inyecciones realizadas al lado izquierdo y al lado derecho me aparecern los cromatogramas.

En la parte inferior en la ventana 2D Channels, y selecciono la lnea, voy a File Save Calibration (voy guardando cada uno de mis puntos para luego poder hacer la curva de calibracin). Una vez que tengo los puntos guardados, presiono donde dice Caliration Curve, que es donde voy viendo mi curva de calibracin (concentracin conocida) con los puntos que fueron guardados anteriormente. Aqu se va creando la curva de cada uno de los componentes de inters. Nota: A cada una de las concentraciones que voy guardando le voy colocando un nombre.

Luego presiono el icono donde dice Review Main Window, para regresar al cuadro inicial en donde tengo el cromatograma (cada uno de los compuestos identificados con sus nombres). En el caso que se este inyectando muestra (no se conoce la concentracin), en la parte inferior en la ventana 2D Channels, y selecciono la lnea, voy a File Save Result (voy guardando cada uno de los compuestos que ya estn integrados).6) Elaboracin del Informe Para generar un informe una vez que se han adquirido y procesado los datos (integracin):

Hacer clic en Browse Project, en la barra de navegacin. Aparecer la ventana del examinador de proyectos (Browse Project). En la pare superior aparecen varias pestaas (Inyections, Results, Samples Sets, Channels, etc.) En la pestaa Injections, aparece el listado de todas las inyecciones realizadas.

Hacer clic en la pestaa Results y, a continuacin, en el botn Update para actualizar la visualizacin en pantalla. Seleccionar el resultado que se quiere visualizar (quedara seleccionado de color negro) y hacer clic en el icono para visualizar el cromatograma (se abrir una pestaa, se debe presionar OK), luego se debe ir guardando cada uno de los cromatogramas, presionando el icono