Manejo de muestras líquidas
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Manejo de muestras líquidasProcesamiento de líquidos
corporales y cavidadesSeminario 5, Segundo semestre 2014
Citopatología
Mayarling Troncoso M
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Citología de Muestras Líquidas
• Tiene como objetivo detectar cualquier anormalidad citológicamediante la coloración Papanicolau.
• Para un diagnóstico seguro y óptimo:
-Muestra fresca
-Historia clínica adecuada
-Preparación de la muestra inmediata
-Fijación correcta
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Problemas muestras líquidas
• Densidad
-Muestras baja densidad protéica sensibles a cambios osmóticos
-Muestras de alta densidad protéica sensibles a coagulación
• Autólisis
- Células fuera de su medio natural sensibles a necrosis
**FUNDAMENTAL BUENA FIJACIÓN
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Manejo de muestras líquidas
Muestra alta densidad protéica
-Líquido pleural
-Líquido ascítico
-Líquido sinovial
-Líquido pericárdico
** Recolectados en tubo con anticoagulante, tratados con Liquofix o solución Formol-Ringer-Alcohol.
Muestra baja densidad protéica
-Lavado bronquial
-Lavado peritoneal
-Quistes de mama
**Tratados con alcohol 70 en partes iguales con la muestra y ser procesado antes de las dos horas.
• Muestra líquida: muestra donde las células están suspendidas en un Líquido: exudado, transudado, suero fisiológico, etc.
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Norma y manejo de biopsias y citología Hospital Padre Hurtado
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Manejo de muestras líquidas
DIFERENTE FIJACIÓN
DIFERENTES MUESTRAS
COMPLICADO(PROCESOS)
(IMPLEMENTACIÓN)
IGUAL FIJACIÓN
SIMPLE(PROCESOS)
(IMPLEMENTACIÓN)
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Liquofix
• Medio conservador, fijador y anticoagulante de muestraslíquidas.
• Mantiene ambiente isotónico de muestras.
• Permite manejo y traslado de muestras al laboratorio sinapremio de tiempo y temperatura (recomendación:procesamiento antes de 24hrs).
• No interfiere en reacciones de coloración o ICQ.
• Buenos detalles nucleares tanto de estructura y cromatina,permiten una fiel imagen de rastros benignos y malignos.
• Citoplasmas, diferenciaciones estructurales y afinidadestintoriales intactos.
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Liquofix
• Consideraciones:
-Solución transportadora que no produce coagulación
-Tiempos prolongados causan sobrefijación con alteración de la tinción (cariopicnosis) y mala adhesividad de la muestra
-Importante dejar secar los bordes de la muestra en porta (semiseco) para evitar desprendimiento o derrame de la muestra al fijar en alcohol.
-Muestra apta para realizar block celular
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Procesamiento
• Centrifugación*
• Block celular*
• Citocentrifugación
• Filtración por membrana de nitrocelulosa
• Impronta de coágulos
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ProcesamientoCitología
Muestra
Centrifugar1000 rpm 10’
Soltar peletPoner en placa
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ProcesamientoBlock celular
Centrifugar1000 rpm 10’
Gotitas albúmina
Formalinaneutra
ResuspenderCentrifugar(inversión)
Obtenerpelet
Cassetteinclusión
ProcesamientoObtención cortes
Muestra
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• Estudios muestran que la citología puede ser mas resolutiva (96,7% vs. 47,0% ) y es más sensible para diagnosticar malignidad (87,5% frente al 56,2%). Pero un 3,2% de diagnósticos de malignidad con el BC que escapaba al diagnóstico de la citología. Se recomienda en el realizar primero la citología y luego como examen complementario el block celular, que permite añadir especificidad al observar la arquitectura de la lesión, realizar técnicas complementarias al PAP como la H/E, IHQ, etc
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BC de PAAF de ganglio linfático con metástasis de carcinoma de células escamosas (H&E, 400x)
Citología de PAAF de ganglio linfático con metástasis de carcinoma de células escamosas (PAP, 400x)
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Citología líquido ascítico con carcinoma papilar seroso psamomatoso (PAS 400x)
Bock celular líquido ascítico con carcinoma papilarseroso psamomatoso (PAS 400x)
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• El procesamiento del BC es un método simple y de confianza después de revisar los extendidos citológicos. La citología es un procedimiento diagnóstico más sensible que el BC para el diagnóstico de malignidad (87,5% frente al 56,2%). Sin embargo, el 3,2% de los BC permite hacer un diagnóstico de malignidad que se escapa al diagnóstico citológico
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• Bloques celulares aumenta de forma significativa la capacidad para realizar con más facilidad técnicas de inmunohistoquímica que ayudan a la mejor tipificación de las neoplasias, y además aporta un diagnóstico morfológico exclusivo en algunos casos.
• En cuanto a su utilidad en patología benigna, de forma general parece aumentar su rentabilidad, aunque en la única entidad en la que se ha estudiado de forma concreta ha sido en la sarcoidosis19-22. Los primeros estudios se realizaron a partir de punciones realizadas con ultrasonografía esofágica (EUS-FNA)20,21. Von Bartheld et al.20 observaron que en pacientes con el diagnóstico final de sarcoidosis, en el 33% de las citologías negativas pudieron verse granulomas en el bloque celular.
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ProcesamientoCitocentrífuga
https://www.youtube.com/watch?v=5f78t0AH5js
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ProcesamientoFiltros de nitrocelulosa• El filtro de membrana estándar para la mayoría de las aplicaciones en
laboratorio para partículas y células en el rango de 0,1 µm hasta 5,0 µm. Los residuos de la filtración se encuentran habitualmente en la superficie del filtro lo que permite su recuperación física y estudios microscópicos
PROCESADOR THINPREPRecolección de la muestraSolución PreservCyt®
https://www.youtube.com/watch?v=d_CvtSfZ2Hc
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ProcesamientoImpronta de coágulos• El material obtenido por punciones o lavados pueden contener restos
hemáticos y microfragmentos de tejido formando coágulos, los cuales pueden ser procesados:
- IMPRONTA
- BLOCK CELULAR
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Caso• Paciente masculino
• 88 años
• Macroscopía: se recibe líquido pleural : 20 ml. De líquido de aspecto citrino.
• Procesamiento: se centrifuga a 1.000 rpm por 10 minutos. Se realiza extendido celular para tinción PAP y realización de Block celular con coágulo.
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Marcado pleomorfismo y tamaño nuclear, binucleación, hipercromasia y macronucléolo. Importante destacar la Alta relación núcleo citoplasma.
https://citotecs.wordpress.com/2013/07/11/derrame-de-cavidades-citopreparacion/
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Discusión
• Es importante cumplir con los parámetros establecidos para realizar un diagnóstico óptimo y seguro de cada muestra
• Tener en cuenta la técnica a utilizar para el procesamiento de las muestras líquidas, sus ventajas, desventajas, costos, etc.
• Uso de block celular complementario a citología. Beneficios
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Bibliografía
• JUAN DÍAZ et al. Utilidad de la citocentrifugación en el diagnóstico
bacteriológico microscópico de fluidos corporales.
• Francisco Javier Torres Gómez, A. UTILIDAD DEL MÉTODO DE FILTRACIÓN-ADHESIÓN EN CITOLOGÍA URINARIA
• http://www.thermoscientific.com/en/product/cytospin-4-cytocentrifuge.html
• http://www.cytologystuff.com/es/study/section1.htm
• http://www.lablinsan.cl/imagenes_ficha_7/fichasWeb7_4.pdf
• https://citotecs.wordpress.com/2013/07/11/derrame-de-cavidades-citopreparacion/