Grupo:Ana Paula MirandaFernanda AzevedoLívia Villela Renata Toledo

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Introdução

A família de genes MADS-box codifica fatores transcricionais que controlam vários processos em angiospermas, da raiz até o desenvolvimento de flores e frutos. Em Arabidopsis, o gene AG (AGAMOUS) codifica fatores transcricionais responsáveis pelo desenvolvimento do 3º e 4º vertilos florais.

Objetivos

• Demonstração que a Microesporogênese é induzida por AG através da ativação do gene SPL, um regulador da Esporogênese.

• SPL pode induzir a Microesporogênese na ausência da função de AG.

ag-1 35S::AG-GR

• ag-1-null / 35S::AG-GR• Sem tratamento / DEX contínuo / DEX único

Fenótipo mutante Sépatala- pétala –pétala

Estames e Carpelos funcionais – flores

35S::AG

Pétalas com estruturas

estaminóides

ag-1 35S::AG-GR • ag-1-null / 35S::AG-GR• A maior parte das pétalas produzidas no 3º verticilo

possuem lóculos nas laterais contendo grãos de pólen aparentemente normais.

Microarranjo

• Identificação de SPL, que codifica um fator transcricional putativo. Sua atividade implica no padrão de formação de óvulos e nos primórdios da microesporogênese.

• Em mutantes de spl, a diferenciação primária de células esporogênicas, assim como a formação das paredes das anteras, são bloqueadas.

RT-PCR

• Confirmação da indução de SPL pela atividade de AG.

D - DEXM - MockC - Ciclohexamida

Indução Direta• O domínio MADS reconhece a sequência especifica

[CC(A/T)6GG], denominada CArG-box, na região regulatória dos seus genes alvo.

• EMSA

Gene Repórter GUS• Avaliar se o sítio de ligação de AG (detectado na

região 3´) é necessário para indução AG-dependente de SPL.

• Plantas selvagens com SPL-GUS.

Comparação do padrão de expressão de AG e SPL

Expressão de SPL em ag-mutants

SPL e Microesporogênese• Ag-1 mutant / 35S::SPL-GR• Sem tratamento / DEX contínuo

Mesmo padrão de Single DEX ag-1 35S::AG-GR

Fenótipo AG-mutant *

* SPL pode induzir a microesporogênese na ausência da atividade de AG, supondo que SPL age como um mediador central para o funcionamento de AG na esporogênese.

SPL e Microesporogênese• Com a expressão ectópica de SPL-GR, a formação de

lóculos foi observada em ag1-mutants apenas nas laterais dos orgãos do 3º vertilo. Nunca no 2º das flores tratadas com DEX.

• Outro fator verticilo-específico deve estar envolvido na indução da microesporogênese.

Conclusões

• Proteínas homeóticas florais controlam genes alvo com diversas funções no desenvolvimento dos órgãos;

• A interação de AG com SPL mostra uma probabilidade de que AG ative outros reguladores que realizam parte de suas funções;

• Evidências diretas de que genes homeóticos de plantas controlam a organogênese como parte de sua hierarquia regulatória.