Lp Diagnostic de Laborator
-
Upload
diana-alexandra-chiriac -
Category
Documents
-
view
24 -
download
0
description
Transcript of Lp Diagnostic de Laborator
Reacţia de
imunofluorescenţă
directă
reacţia se bazează pe folosirea anticorpilor
specifici marcaţi cu diferite substanţe
fluorescente şi permite depistarea precoce a
virusurilor.
aplicaţii: pentru diagnosticul:
rabiei
bolii lui Carré
pestei porcine clasice.
Secțiune de țesut
Atg
Anticorp marcat
fluorescent
Microscop pentru imunofluorescenţă
Preparatele se acoperă cu o picătură de glicerină
neutră, picătura fiind apoi acoperită de o lamelă.
Citirea frotiurilor se realizează prin examinarea la
microscopul cu flourescenţă.
Prezenţa flourescenţei specifice în citoplasma unor
celule indică existenţa virusului, deci un diagnostic pozitiv.
Reacție de imunofluorescență pozitivă pentru virusul
West Nile (familia Flaviviridae)
în cultura celulară linia Vero
Metoda
imunohistochimică
Marcajul anticorpilor folosiți în reacția
imunohistochimică, este realizat cu o
enzimă, mai exact o peroxidază.
Metoda permite observarea distribuției
virusului și localizarea sa intracelulară în
secțiunile de țesut, pentru a putea
determina dacă distribuția antigenului viral
coincide sau nu cu leziunile prezente
Metoda imunohistiochimică: țesut infectat cu
circovirusul porcin tip 2; s-au folosit anticorpii specifici
monoclonali. Aceasta metodă permite localizarea
antigenului în secțiunile din țesuturi.
Metoda
imunocromatografică
Imunocromatografia se refera migrațiacomplexelor antigen-anticorp printr-un filtru sauprin migrație laterală – de exemplu, folosindmembrana de nitroceluloză.
In cele mai multe situații, un anticorp cunoscut seleagă de antigenul țintă.
Complexele antigen-anticorp sunt apoi imobilizatepe matricea suport (membrana de nitroceluloză)de către un anticorp nemarcat, atașat de matrice.
Verificarea testului include utilizarea martorilornegativ și pozitiv de asemenea atașați la nivelulmembranei.
Rezultatele sunt observate sub forma unor benzisau puncte colorate, deoarece unul dintre anticorpieste marcat cu aur coloidal sau o altă substanțăcromogenă.
Reprezentarea schematică a metodei
imunocromatografice
C-linia control, T-linia probei de testat
Imunodifuzia în
gel de agar
principiul metodei se bazează pe
realizarea reacţiilor antigen-anticorp în
urma difuzării acestor doi reagenţi şi
formării, la locul întâlnirii lor, de precipitate
vizibile.
Metoda utilizată este dubla difuziune: în care antigenul şi anticorpul (serul) plasate în 2
godeuri decupate în gel, difuzează unul către
celălalt şi precipită la locul de întâlnire, sub forma
unei linii de precipitare.
Realizarea godeurilor în placa cu gel de agar
Depunerea antigenului şi serurilor
AG – antigen standard
PS – ser pozitiv martor
1,2,3 – seruri de cercetat
Testul imunoenzimatic
ELISAEnzyme-Linked Immunosorbent asSAy
reacţia constă în determinarea anticorpilor
sau a antigenelor prin intermediul
enzimelor, folosind reacţia clasică antigen-
anticorp.
au fost realizate mai multe variante: Metoda indirectă pentru decelarea anticorpilor;
Metoda directă pentru decelarea antigenelor;
Metoda dublu-anticorp sau “sandwich”.
Reprezentarea schematică a metodei
imunoenzimatice directe
Metoda
radioimunoenzimatică
Metoda radioimunoenzimatică folosește
analiza imunoenzimatică, dar este
înlocuită de aceasta din ce în ce mai des.
Singura diferență semnificativă este aceea
că agentul folosit pentru marcarea
anticorpilor nu este o enzimă ci un izotop
radioactiv, cum ar fi I125 și cantitatea de
complexe antigen-anticorp se măsoară
într-un scală de măsurare a radiațiilor
gama.
Reprezentarea schematică a metodei
radioimunoenzimatice