LE MILIEU DE HUGH ET LEIFSON Peptone pancréatique de caséine2 g Extrait de levure1 g Chlorure de...
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![Page 1: LE MILIEU DE HUGH ET LEIFSON Peptone pancréatique de caséine2 g Extrait de levure1 g Chlorure de sodium5 g Phosphate monopotassique0,3 g Glucose10 g Bleu.](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022081602/551d9d8d497959293b8c2a92/html5/thumbnails/1.jpg)
LE MILIEU DE HUGH ET LEIFSON
Peptone pancréatique de caséine 2 gExtrait de levure 1 g Chlorure de sodium 5 gPhosphate monopotassique 0,3 gGlucose 10 g Bleu de Bromothymol 0,03 gAgar (gélose) 3 g ED qsp 1 L
Composition
Source de C et N
Source de C à rajouter
solidification du milieu gélose semi solide
Indicateur de pHVert pH basique ou neutre, jaune pH acide
Milieu aqueux
pH = 7,2
Source de C, N, minéraux et vitamines
Source de PÉquilibre ionique
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Technique d’ ensemencement
1- Régénérer le tube 20 minutes au bain marie bouillant
2- Ajouter le volume de solution de glucose stérile dans le milieu en surfusion: à 45°C
3- A jouter trois gouttes de suspension bactérienne et refroidir immédiatement le tube sous l’eau froide.4- Ne pas visser le tube à fond
5- Incuber 24 heures à 37°C
lectureVirage de l’indicateur de pH au jaune dans tout le tube. Le milieu est devenu acide.Il y a eu production d’acides lors de l’utilisation du glucose par les bactéries en présence et en absence d’O2.Les bactéries sont fermentatives vis-à-vis du glucose.
Virage de l’indicateur de pH au jaune dans la partie supérieure du tube. Le milieu est devenu acide.Il y a utilisation du glucose par les bactéries en présence d’ O2.
Les bactéries sont oxydatives vis-à-vis du glucose.
Le milieu reste tel qu’il était avant ensemencement. Il n’y a pas de culture.Les bactéries sont inertes vis-à-vis du glucose
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Le milieu Citrate de Simmons
Sulfate de magnésium 0,2 g
Phosphate monopotassique 1 g Phosphate bipotassique 1 gCitrate de sodium 2 gNaCl 5 g Bleu de Bromothymol 0,08 gAgar (gélose) 15 g ED qsp 1 L
Composition
Equilibre osmotique
Indicateur de pHVert pH basique ou neutre, jaune pH acide
pH = 6,8
Sources minérales
Seule source de C
6 7,6
Ensemencement
Faire une strie centrale avec une suspension en eau physiologique ou directement à partir d’une colonieNe pas visser le bouchon à fondIncuber 24 h à 37°C
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Milieu de Clark et Lubs
Peptone trypsique ou polypeptone 5 à 7 gGlucose 5 gPhosphate bipotassique 5 gED qsp 1 L
Composition
Source de C
pH = 7
Sources minérales
Source minérale
Ensemencement
Ensemencer avec 5 à 10 gouttes de suspension bactérienne.Ne pas visser le bouchon à fondIncuber 24 h à 37°C
Test RM
Après incubation, prélever 2 mL du milieu et les déposer dans un tube à hémolyse.Ajouter 1 à 2 gouttes de rouge de méthyle.Observer. 4,5 6,8
Test VP
Après incubation, prélever 1 mL du milieu et les déposer dans un tube à hémolyse.Ajouter 0,5 mL d’-naphtol et 0,5 mL de soude. Mélanger et incliner le tube.Faire la lecture après 10 à 15 min de contact.
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Milieu de Kligler Hajna
Extrait de viande de boeuf 3 gExtrait de levure 3 g Peptone 20 gChlorure de sodium 5 gCitrate ferrique 0,3 gThiosulfate de sodium 0,3 gLactose 10 gGlucose 1 g Rouge de phénol 0,05 gAgar (gélose) 12 g ED qsp 1 L
Source de C et N
Composition
Equilibre osmotiqueMise en évidence de la formation H1 SSource de soufre, témoin d’oxydo-rédcution
Source glucidique majoritaire
Source glucidique minoritaire
Indicateur de pH
6,5 8,2
pH = 7,4
Ensemencement
2) Piqûre centrale dans le culotFil droit ou pipette boutonnée
1) Stries serrées sur la penteÖse ou pipette boutonnée
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Milieu mannitol mobilité nitraté
peptone 20 gNitrate de potassium 2 gMannitol 2 gRouge de phénol à 1 % 4 mLgélose 4 gED qsp 1 L
Composition
Source de C
pH = 8
Sources de C et N
Indicateur de pH
Ensemencement
Apport de nitrates
Piqûre centrale avec le fil droit
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Lecture des milieux
Citrate de Simmons
1ère lecture possible
Le milieu ne présente aucune culture.Les bactéries n’utilisent pas le citrate comme source de carbone : CITRATE -
2nde lecture possible
Le milieu présente une culture, l’indicateur de pH a viré au bleu le milieu est devenu basique.Les bactéries ont utilisé le citrate comme source de carbone en produisant des composés alcalinisant le milieu: CITRATE +
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Clarck et Lubs
1ère lecture possible
Le milieu est devenu rouge le pH est acide . Il y a eu formation de composés acides par les bactéries au cours de la fermentation du glucose.Les bactéries utilisent la voie des acides mixtes : RM +.
2nde lecture possible
1- Test RM
Le milieu est devenu jaune le pH est basique .Les bactéries n’utilisent pas la voie des acides mixtes lors de la fermentation du glucose : RM -.
2- Test VP
1ère lecture possible
2nde lecture possible
Formation d’une coloration rouge en surface . Il y a formation d’acétoïne et de butanediol dans le milieu lors de la fermentation du glucose. Les bactéries utilisent la voie du butanediol : VP +.
Pas de modification du milieu .Les bactéries n’utilisent pas la voie du butanediol lors de la fermentation du glucose : VP -.
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Mannitol mobilité
1ère lecture possible
Le milieu est resté rouge le pH est neutre ou basique .Les bactéries ne fermentent pas le mannitol : MANNITOL -.
2nde lecture possible
1- Utilisation du mannitol
Le milieu est devenu jaune le pH est acide .Les bactéries fermentent le mannitol et produisent des acides qui acidifient le milieu : MANNITOL +.
2- Mobilité
1ère lecture possible
Observation d’une culture dans tout le tube.Les bactéries ont diffusé dans tout le milieu : elles sont MOBILES.
Culture uniquement au niveau de la piqûre centrale.Les bactéries sont IMMOBILES.
2nde lecture possible
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Kligler Hajna
1- lecture de la production d’H2 S
Précipité noir de sulfure ferrique
Production d’H2S par les bactéries ! H2S+
Pas de précipité noirbactéries ! H2S-
2- lecture de la production de gaz
Présence de bulles dans la géloseLes bactéries produisent du gaz (H2 ou CO2) au cours de leur fermentation : GAZ +
Pas de bulle dans la gélosebactéries ! GAZ -
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3- Lecture de l’utilisation du lactose
Alcalinisation de la pente, les bactéries ne fermentent pas le lactose: LACTOSE -
Acidification du culot lors de la fermentation du glucose : GLUCOSE +
Acidification de tout le milieu lors de la fermentation des glucides : GLUCOSE + et LACTOSE +
Le milieu reste orangé. Les bactéries n’utilisent pas le glucose et le lactose.GLC - et LAC -
Pente jaune
Culot rouge
Acidification du milieu en aérobiose lors de l’utilisation des glucides : LAC + et GLC + oxydatif
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Recherche de la -galactosidase
Elle s’effectue sur un tube de Kligler LAC -
1) Faire une suspension épaisse à partir de colonies prélevées sur la pente
2) Ajouter stérilement un disque ONPG
3) Incuber à 37°C pendant 30 minutes
1) Le tube reste incolore. absence de la -galactosidase : ONPG -
2) La suspension est colorée en jaune présence de la -galactosidase : ONPG +, mais absence de la perméase.
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Kligler Hajna
1- lecture de la production d’H2 S
Précipité noir de sulfure ferrique
Production d’H2S par les bactéries ! H2S+
Pas de précipité noirbactéries ! H2S-
2- lecture de la production de gaz
Présence de bulles dans la géloseLes bactéries produisent du gaz (H2 ou CO2 a)u cours de leur fermentation : GAZ +
Pas de bulle dans la gélosebactéries ! GAZ -
3- Lecture de l’utilisation du lactose
Pente rouge
Culot jaune
Alcalinisation de la pente, les bactéries ne fermentent pas le lactose: LACTOSE -
Acidification du culot lors de la fermentation du glucose : GLUCOSE +
Tube jaune
Acidification de tout le milieu lors de la fermentation des glucides : GLUCOSE + et LACTOSE +
Tube orange
GLC - et LAC -
Pente jaune
Acidification du milieu en aérobiose lors de l’utilisation des glucides : LAC + et GLC + oxydatif
Culot rouge