Le 19 octobre 2007 au Palais des Congrès à Vittel 1 Forum...

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ChampagneArdenne

Bourgogne Franche-Comté

AlsaceLorraine

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Luxembourg

Heidelberg

Freiburg

Basel

Lausanne

1er Forum du Cancéropôle du Grand-EstPar-delà les frontières territoriales et de la rechercheMobilisation inter-régionale et transfrontalière

Le 19 octobre 2007au Palais des Congrès à Vittel

http://www.canceropole-ge.org/forum

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AlsAce - Bourgogne-FrAnche-comté chAmpAgne-Ardenne - lorrAine

Sponsors

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Plan du 1er étageClub Med

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Posters(A3, A4, A5, PF)

Cocktaildéjeunatoire

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Plan du rez-de-chaussée

Plan de la manifestation

Les halls et salles du Palais des Congrès sont équipés du système WIFI

Contacts

Dominique MARILLEY

Tél. : +�� (0)6 77 �7 65 48

Marie-Paule DIDELOT

Tél. : +�� (0)� �9 08 �8 �0

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EditorialPierre OUDET - Coordonnateur scientifiqueChef de service du Laboratoire de Biochimie et de Biologie Moléculaire du CHU de Strasbourg et Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire à Illkirch

Chaque cancer a sa propre histoire qu’il s’agit de décrypter. Afin de faire évoluer les pratiques de soins vers des thérapies individualisées, il s’agit de mieux appréhender les facteurs de risque qui permettent d’orienter les politiques de prévention et de dépistage. Il faut s’attacher à progresser dans la recherche des causes génétiques et des dysfonctionnements cellulaires afin d’aller vers des diagnostics et thérapies efficaces respectueuses de la qualité de vie. Les objectifs et leurs avancées

se doivent d’être visibles, expliqués et suivis par tous les acteurs de la recherche contre le cancer (chercheurs, cliniciens, industriels, patients).

Ceci s’est concrétisé par le lancement du Plan Cancer national en �00� et l’engagement des institutions et collectivités territoriales dans la démarche des Cancéropôles. Le Cancéropôle du Grand-Est, ce sont 5 régions qui se mobilisent, l’Alsace, la Bourgogne, la Champagne-Ardenne, la Franche-Comté et la Lorraine. La dynamique engage chercheurs, enseignants et cliniciens travaillant dans les Centres Hospitaliers Universitaires, les Centres de Lutte contre le Cancer, les Centres de Recherche du CNRS, de l’INSERM, les Universités et les entreprises. Tous les domaines de la recherche fondamentale, clinique ou appliquée sont concernés. Une attention particulière est portée sur le développement, la mise en commun et l’ouverture à la communauté scientifique et clinique des plateformes hospitalières et de recherche. Nos missions visent ainsi à favoriser l’émergence et le soutien de projets de recherche transversaux, c-à-d. allant du laboratoire au lit du patient, auxquels adhèrent des chercheurs de multiples disciplines (épidémiologistes, biologistes, physiciens, chimistes, informaticiens, mathématiciens, développeurs d’équipements, …). Nos projets de recherche peuvent voir le jour grâce à des soutiens financiers de l’Etat, via l’Institut National du Cancer, des collectivités territoriales, des associations caritatives et européens.

Les années �004 (date de création du Cancéropôle du Grand-Est) à �006 ont été marquées notamment par le démarrage de trois programmes de recherche phares :

1. Le premier s’attache à identifier de nouveaux marqueurs, cibles potentielles de l’invasion tumorale en étudiant les protéines de surface ou provenant de tumeurs solides. Après criblage, les molécules d’intérêt sont testées sur des modèles animaux tels les greffes de tumeurs humaines chez la souris. Le financement de ce projet vient d’être renouvelé par l’Institut National du Cancer ; il devrait ainsi ouvrir à terme de nouvelles voies thérapeutiques pour bloquer le processus métastatique. � régions sont impliquées, l’Alsace, la Champagne-Ardenne et la Lorraine ;

2. Le deuxième concerne la recherche de marqueurs sanguins pour la détection précoce des cancers colorectaux. Des équipes d’Alsace, de Bourgogne et de Lorraine sont impliquées, incluant deux entreprises. Il a permis la découverte d’un phénomène d’infidélité de la transcription non aléatoire amplifié dans les cancers;

3. Le troisième concrétise notre démarche d’ouverture vers les voisins transfrontaliers : il s’agit d’un programme de recherche en virologie tumorale appliquée avec le centre allemand de recherche contre le cancer ou DKFZ basé à Heidelberg. 6 équipes du CGE en Alsace, Champagne-Ardenne et Franche-Comté, et 7 équipes du DKFZ collaborent pour mieux comprendre le rôle des papillomavirus humains dans le cancer du col de l’utérus, améliorer son diagnostic et développer de nouvelles perspectives thérapeutiques.

S’engager dans la recherche, c’est également s’attacher à la formation et à l’intégration de nouvelles compétences. Nous avons ainsi créé un collège doctoral européen labellisé par l’Université Franco-Allemande.

�007 est une année charnière pour le Plan Cancer. Il nous revient de capitaliser sur nos réalisations pour engager une nouvelle dynamique inscrite dans un contrat de projet de quatre années avec en point de mire une structuration et un soutien de la recherche clinique sur le Grand-Est.

Notre �er Forum est ainsi l’occasion de promouvoir les réalisations et le potentiel du Grand-Est en terme de recherche contre le cancer, mais surtout il représente une opportunité de conforter les synergies, susciter des collaborations et mutualiser les efforts …. En un mot se connaître, échanger, travailler ensemble.

Sommaire

Programme du �er Forum du Cancéropôle du Grand-Est .......................................................... 6

Résumés des communications affichées ......................................................................................... 8

Axe �Epidémiologie - Indicateurs de santé et évaluation des pratiques (5 résumés) .................. 8

Axe �Agents Infectieux et Carcinogenèse (5 résumés) ........................................................................�0

Axe �Contrôle local des cancers – Imagerie, outils de diagnostic, sensibilité aux t raitements, nouvelles thérapeutiques (�6 résumés) ..................................................................��

Axe 4Contrôle de la dissémination tumorale - Plasticité cellulaire, hétérogénéité tumorale et réaction stromale (�� résumés) ................................................................................�8

Axe 5Compréhension et maîtrise des échecs thérapeutiques (�5 résumés) ..................................��

Axe 6Thérapeutiques immunomoléculaires et cellulaires des cancers (� résumés) ....................�0

Plateformes technologiques et hospitalières(6 résumés) ............................................................................................................................................��

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Programme du 1er Forum du Cancéropôle du Grand-Est7h45-8h30 : Accueil des participants / affichage des posters

8h30-8h40 : Allocution de bienvenue par Jean-Yves LE DEAUT, 1er Vice Président du Conseil Régional de Lorraine

8h40-9h10 : Le Plan Cancer : bilan et perspectivesPierre OUDET, Coordonnateur scientifique du Cancéropôle du Grand-Est (CGE)Laurent Borella, Directeur-Relations Institutionnelles, Direction de la Recherche de l’Institut National du Cancer (INCa)Discussion : 10 min.

9h10-10h10 :

Session I - On savait les cellules tumorales mutées, migrantes, infectées… les voici infidèlesg Modérateur : Michèle KEDINGER, INSERM U68�, Strasbourg• Nature et fonction des acteurs moléculaires impliqués dans l’invasion tumorale localeMarie-Pierre GAUB, INSERM U68�, Strasbourg

• La sélectivité tumorale de TRAIL: mécanismes moléculaires et applications cliniquesOlivier MICHEAU, Groupe Mort Cellulaire et Cancer, Université de Bourgogne, Dijon

• Mise en évidence d’un concept novateur non aléatoire d’infidélité de transcription amplifiée dans les cancers Bernard BIHAIN, GenClis, NancyDiscussion : 15 min.

10h10-10h40 : Pause

10h40-12h00 :

Session II - Biologie, chimie, physique et instrumentation : du concept à la preuveg Modérateur : Philippe GENNE, OncoDesign, Dijon

• Activation de la réponse immunitaire par des mimes synthétiques de CD40L : des outils prometteurs en immunothérapie des cancers Sylvie FOURNEL et Gilles GUICHARD, Institut de Biologie Moléculaire et Cellulaire, CNRS / Université de Strasbourg

• Identification des ganglions sentinelles dans le cas du cancer du sein : évaluation clinique d’une sonde et d’une gamma caméra opératoiresSamuel SALVADOR, Institut de Recherches Subatomiques, CNRS / Université de Strasbourg

• Imagerie biomoléculaire par spectrométrie de massePatrick DUCOROY, CHU Dijon • Le projet CARMeN : recherche de marqueurs métaboliques de malignité et de pronosticIzzie NAMER, Service de Biophysique et Médecine Nucléaire, CHU Strasbourg Discussion : 20 min.

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12h00-12h20 :Pôle Innovations Thérapeutiques et Cancéropôle du Grand-Est : synergies pour une meilleure compétitivité de la recherche contre le cancer Mathieu VERMEL, Pôle Innovations Thérapeutiques - StrasbourgDiscussion : 5 min.

12h20-14h00 : cocktail déjeunatoireSession de posters – Espace Biopharma (Pfizer, Sanofi-Pasteur MSD, Transgene)

14h00-15h50 :

Session III - Recherche clinique dans le Grand-Est – De l’épidémiologie aux thérapiesg Modérateur : Francis GUILLEMIN, Centre d’Epidémiologie Clinique, CIC-EC INSERM, CHU Nancy

• Recherche clinique, épidémiologie et sciences humaines et socialesFrancis GUILLEMIN, Centre d’Epidémiologie Clinique, CIC-EC INSERM, CHU Nancy

• Etiologie de l’évolution cirrhose – carcinome hépatocellulairePatrick HILLON, Service d’Hépatogastroentérologie, CHU Dijon

• Radiothérapie : risque vs. bénéfice ?Tan Dat NGUYEN, Institut Jean Godinot, Reims

• Les challenges de l’ingénierie cellulaire et géniquePierre TIBERGHIEN, Etablissement Français du Sang de Besançon / UMR U645

• Vers de nouvelles stratégies thérapeutiquesPierre FUMOLEAU, Centre Georges-François Leclerc, Dijon

• L’organisation de la prise en charge des patients au niveau régional : impacts pour la recherche clinique Patrick DUFOUR, Centre Paul Strauss Strasbourg et Réseau CarolDiscussion : 20 min.

15h50-16h20 : Pause

16h20-18h10 :

Session IV - Quand la recherche deviendra médicament : vision des acteursg Modérateur : Pierre FUMOLEAU, Centre Georges-François Leclerc Dijon

• La recherche fondamentale : Jean-Luc GALZI, Faculté de Pharmacie - Strasbourg• La recherche de transfert : Jean-Marc LIMACHER, Transgene - Strasbourg• Les études cliniques : Xavier PIVOT, CHU - Besançon Hervé CURE, Institut Jean Godinot - Reims• Les développements : Martine BERG-CANDOLFI et Karim BELALOUI, Pfizer France Loïc FREREJOUAND, Sanofi-Pasteur MSDTable ronde : 20 min.

18h10 : ClôturePierre OUDET – Coordonnateur scientifique du CGE

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A1.1Le thoracoscore appliqué à la chirurgie du cancer bronchique primitif : résultats de la base de données EPITHOR

P.E. Falcoz1, J.P. Etievent1, M. Dahan2

1 Service de Chirurgie Thoracique, Hôpital Jean Minjoz, Besançon2 Service de Chirurgie Thoracique, Hôpital Larrey, ToulouseContact : [email protected]

Objectifs : Identifier les variables associées à la mortalité hospi-talière chez des patients adultes opérés d’un cancer bronchique primitif (stade I-IIIA) et construire un score prédictif de mortalité.Méthodes : Les patients (n=4892) proviennent d’une base de données nationale de chirurgie thoracique (registre EPITHOR). Ils ont été inclus prospectivement dans 59 hôpitaux entre juin 2002 et juillet 2005. Une régression logistique a été utilisée pour prédire le risque et établir un score de mortalité hospitalière. L’aire sous la courbe ROC a été utilisée pour mesurer la validité du modèle.Résultats : Parmi les patients, 171 (3.5%) sont décédés durant l’hospitalisation. Les variables significativement associées à la survenue d’une mortalité hospitalière étaient : âge, sexe, classe de performance status, présence de comorbidités, présence d’une chirurgie itérative, geste (lobectomie ou wedge versus pneumonectomie) et la classification TNM (stade I-II versus IIIA). L’aire sous la courbe ROC était de 0.79. La corrélation entre le nombre de décès observés et attendus était de 0.99.Conclusion : Le score de risque de mortalité hospitalière après chirurgie du cancer bronchique primitif (stade I-IIIA) présenté dans cette étude provient des données nationales (registre EPITHOR). Il permet une très bonne prédiction du risque en utilisant seulement 7 variables faciles à obtenir par le clinicien.

A1.2Population-based study of breast cancer survival in Cote d’Or (France): prognostic factors and relative survival

T.S. Dabakuyo1, F. Bonnetain1, P. Roignot2, M.L. Poillot1, G. Chaplain1, T. Altwegg3, G. Hedelin4, P. Arveux1

1 Breast and Gynaecologic Cancer Registry of Cote d’Or – Centre Georges François Leclerc - Dijon2 Centre de Pathologie – Dijon3 Centre Echographie Du Parc - Dijon4 Department of Epidemiology and Public Health - Faculty of Me-dicine - Louis Pasteur University - StrasbourgContact : [email protected]

Background: Few population-based studies have reported jointly analyses of relative survival according to the following prognostic factors: TNM stage, age, number of examined and positive nodes, hormonal status, histologic Scarff Bloom and Richardson grade, tumour extension, hormone receptor status and tumour multifocal status.Patients and methods: Data on female breast cancer were pro-vided by the Cote d’Or breast cancer registry. The Kaplan Meier method and log rank test were used to estimate and compare the overall survival probability at 1, 5, 10 and 15 years. The effect of prognostic factors on survival was assessed with crude and relative multivariate survival analyses.Results: Crude survival seems to be worse in patients aged of more than 60 years compared with those aged 45-60 (p>0.0001), whereas relative survival did not differ. TNM stage, histologic SBR grade, hormone receptor status, tumour multifocal status, loco-regional extension and the period of diagnosis were independent prognostic factors of crude and relative survival.Conclusion: Breast cancer is influenced by many factors. Des-pite, the absence of any association between the number of exa-mined nodes and overall survival in this study, the number of no-des removed, in conjunction with other prognostic factors, may be useful in selecting node-negative patients for systemic therapy.

A1.3Les hommes atteints d’un cancer du sein ont la même survie spécifique que les femmes

M. Salou, E. Desandes, F. MarchalCentre Régional de Lutte contre le Cancer Alexis Vautrin, Van-doeuvre-les-NancyContact : [email protected]

Introduction: Le cancer du sein chez l’homme est une maladie rare puisqu’il représente 1% des néoplasies masculines et 0.7% des cancers mammaires. L’étude de son pronostic est difficile. Dans notre étude, nous avons comparé les survies globales et spécifiques du cancer du sein entre deux groupes appariés de femmes et d’hommes.Matériel et Méthodes: Il s’agit d’une étude rétrospective in-cluant tous les cas de cancers du sein masculins traités au centre Alexis Vautrin entre 1980 et 2002. Chaque cas masculin a été apparié avec deux cas féminins selon les critères suivants: année de prise en charge (+/- 1 an), âge lors du diagnostic (+/- 5 ans), et stade. Les données ont été comparées par un test du chi2 (variables qualitatives), un test de Student (variables quantitatives) et le modèle de Cox (taux de survie).Résultats: 58 cas masculins ont été appariés avec 116 cas fé-minins. L’âge médian chez les hommes était de 66.6 ans (31.1-

Axe 1Epidémiologie - Indicateurs de santé et évaluation des pratiques

Résumés des communications affichées

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86.6) et de 65.7 ans pour les femmes (32.6-87.4), p= 0.72. Le suivi médian était de 9.7 ans (3.6-17.8) pour les hommes et 10.7 ans (2.56-17.8) pour les femmes, p=0.39. Les modalités de traitement (chirurgie, radiothérapie, chimiothérapie, hormono-thé-rapie) sont comparables sauf un taux significativement plus élevé de mastectomies totales versus mastectomies partielles chez les hommes. Les survies globales à 5 et à 10 ans pour les hommes étaient de 58.9% (IC 95% [45.9-71.9]) et de 33.3% [20.2-47.6]. Les survies globales chez la femme étaient à 5 et 10 ans de 68.2% [59.6-76.8] et de 52.1% [42.4-61.8]. La sur-vie globale était significativement plus péjorative chez l’homme (risque relatif= 1.59, IC 95% [51.5-70.9]). Les survies spécifi-ques à 5 et à 10 ans chez l’homme étaient de 73% [60.8-85.2] et de 55.1% [39.4-70.8], chez la femme, elles étaient de 72.8% [64.5-81.2] et de 61.2% [51.5-70.9]. Le taux de survie spécifi-que était comparable entre les deux groupes p=0.91.Conclusion: la survie globale est significativement plus élevée chez la femme grâce à sa meilleure espérance de vie générale. Il n’y a pas de différence significative entre les deux sexes pour la survie spécifique du cancer du sein. Le pronostic du cancer du sein est identique chez l’homme et chez la femme après apparie-ment par stade, âge et année de prise en charge.

A1.4Validation des critères de substitution de la survie globale dans les essais cliniques de cancérologie digestive : constats et perspectives

N. Methy, F. Bonnetain, L. BedenneFédération Francophone de Cancérologie DigestiveInserm U866Faculté de Médecine – DijonContact : [email protected]

La survie globale est le critère de référence dans les essais cliniques de cancérologie car les perceptions de l’efficacité par le patient, le clinicien et le système de santé convergent. Se-lon la localisation et le stade considérés, de longues années de suivi sont nécessaires afin d’observer les décès requis par la puissance statistique. Les études nécessitent alors un nombre important de patients, sont coûteuses et peuvent compromettre la mise en place rapide d’une stratégie thérapeutique efficace. Recourir à des critères mesurables plus rapidement que la sur-vie, permettant de prédire l’effet du traitement sur la survie glo-bale, est l’alternative optimale. Ces critères, dits de substitution, sont alors retenus comme critère de jugement principal dans les essais de phase III. Ces dernières années, de nombreux traite-ments en oncologie digestive ont été acceptés dans la pratique quotidienne sur la base de la démonstration d’un effet sur un critère de substitution comme le taux de réponse, la survie sans récidive ou sans progression. Toutefois, très peu de ces critères ont fait l’objet d’une validation méthodologique préalable pour la localisation et/ou le stade. De plus, leurs définitions et mesures méritent d’être standardisées, comme par exemple la survie sans progression dans le cancer du colon (quels événements et cen-sures, quand et comment mesurer la progression). La validation statistique d’un critère de substitution requiert de larges données issues des essais cliniques. Deux principales approches sont

proposées : l’analyse sur un seul essai et l’approche méta-ana-lytique. En outre, la généralisation des résultats, par exemple à d’autres classes pharmaceutiques ou à d’autres localisations, est aléatoire car la relation critère de substitution–survie peut être différente. En cancérologie digestive, seuls le taux de réponse et le temps jusqu’à progression dans le traitement du cancer colorectal avancé, et la survie sans maladie pour le traitement adjuvant, ont fait l’objet d’une évaluation statistique. Récemment, une échelle détaillée permettant de classer un critère de substi-tution en fonction de son niveau de preuve a été établie (Lassere et al. 2007).

A1.5Critères de substitution de la survie globale dans les essais cliniques de cancérologie digestive : quels candidats ? Protocole d’une méthode de consensus (Delphi) auprès des membres du conseil scientifique de la Fédération Francophone de Cancérologie Digestive et de méthodologistes.

N. Methy, F. Bonnetain, L. BedenneFédération Francophone de Cancérologie Digestive - DijonInserm U866 - DijonFaculté de Médecine – DijonContact : [email protected]

Un critère de substitution («surrogate endpoint») est une variable utilisée à la place d’un critère clinique ultime pour juger de l’ef-ficacité d’un traitement. Il permet de prédire l’effet du traitement sur le critère clinique substitué. En cancérologie digestive, le critère de référence est la survie globale. Selon les localisations (colon notamment) et les stades, son évaluation demande une longue période de suivi. Recourir à des critères de substitution mesurés plus rapidement que la survie, permet de réduire la durée des essais, leur coût et parfois le nombre de sujets néces-saires. L’identification de tels critères repose sur des arguments épidémiologiques, thérapeutiques et/ou physiopathologiques. Une évaluation statistique sur les données des essais complète le processus de validation. L’utilisation de critères autres que la survie globale est répandue en oncologie digestive, mais très peu ont été validés. L’objectif de notre étude est d’identifier, sur la base d’un consensus, des critères de substitution éligibles pour ensuite évaluer leur validité. Une enquête par questionnaires, sur le modèle de la méthode Delphi, a été mise en place auprès des membres du conseil scientifique de la Fédération Francophone de Cancérologie Digestive et de méthodologistes (80 question-naires ont été envoyés le 1er juin 2007). L’expérience clinique et/ou méthodologique de notre panel d’experts sera sollicitée lors de deux tours. Le premier, dans lequel les experts ont libre cours pour proposer des critères, aboutira à une liste de propositions par localisation (œsophage, estomac, foie, pancréas, voies biliai-res, lymphomes, colon, rectum, anus) et par stade de la maladie. Durant le second tour, les participants devront se prononcer sur la pertinence de chacun des critères suggérés au premier tour en les classant. Les résultats de l’enquête orienteront de futurs travaux visant à évaluer statistiquement la validité des critères retenus en appliquant les diverses méthodes proposées dans la littérature.

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A2.1Les proteines E6 et E7 des HPV de genre bêta n’interfèrent pas dans l’apoptose induite par les rayonnements ultraviolets de cellules HaCaT

J.S. Guerrini1, V. Bouvard2, E. Oswald3, M. Tommasino2, A. Alonso3, F. Aubin1

1 Université de Franche-Comté - Besançon2 IARC - Lyon3 DKFZ – Heidelberg - AllemagneContact : franç[email protected]

Les rayonnements ultraviolets (UV) sont le principal agent envi-ronnemental responsable de l’apparition de cancers cutanés non mélaniques et l’apoptose des cellules épithéliales lésées par ces rayonnements est l’étape prépondérante pour l’élimination des cellules à potentiel carcinogène. Cependant, les UV ne sont pas seuls impliqués dans la carcinogenèse cutanée et parmi les cofac-teurs identifiés figure l’infection par des papillomavirus humains (HPV) de genre bêta dont le mode d’action reste à identifier. Dans ce travail, nous avons étudié le rôle des protéines E6 et E7 des HPV 10 (HPV à bas risque de genre α), 14, 24, 36, 38 et 49 (HPV à haut risque de genre α) sur l’apoptose induite par les UVB dans des cellules HaCaT. Les cellules ont été transduites à l’aide de rétrovirus défectifs codant pour les oncoprotéines E6 et E7. Après irradiation aux UVB (0 à 80 mJ/cm2), deux événements majeurs du processus apoptotique ont été étudiés : la dépolarisation de la membrane mitochondriale et la fragmentation de l’ADN. Quelque soit le temps après irradiation (0 à 48h) ou la dose d’UVB, nous n’avons observé aucune différence de dépolarisation de la mem-brane mitochondriale ni de fragmentation d’ADN entre les cellules transduites par E6 et E7 et les cellules contrôles (non transdui-tes ou transduites par un vecteur vide). Ces résultats suggèrent que les protéines E6 et E7 des HPV étudiés n’ont aucun effet sur l’apoptose induite par les UVB dans le modèle cellulaire HaCaT.

A2.2Antiproliferative and apoptotic effects of PPARg agonists on uterine cervical cancer cells in vitro

M.L. Plissonnier1,2, S. Fauconnet1, C. Mougin1, J. Rommelaere2 and I. Lascombe1

1 IFR 133 / EA 3181 « Carcinogenèse épithéliale : marqueurs prédictifs et pronostiques », UFR SMP - Besançon.2 DKFZ – Heidelberg - AllemagneContact : [email protected]

Introduction: Persistent infection by high-risk Human Papilloma-virus (HPV) such as HPV16 and 18 are etiologically associated with the development of cervical cancer. The expression of E6 and E7 viral oncoproteins short-circuits apoptosis by disrupting the function of p53 and pRb respectively. These alterations confer a survival benefit to the cells and a resistance to anticancer treat-ment. Recent evidence indicates that a new class of drugs, the

thiazolidinediones (TZD) such as ciglitazone, troglitazone, rosigli-tazone and pioglitazone, which activate the peroxisome prolifera-tor-activated receptor γ (PPARγ), exhibit antiproliferative, differen-tiation and apoptotic activities on different cancer cells in addition to their antidiabetic properties.Methods: Our study aims to evaluate by flow cytometry and wes-tern-blotting the effect of TZD on cell proliferation and apoptosis in HeLa (HPV18+, p53wt), CaSki (HPV16+, p53wt) and C33-A (HPV-, mutated p53) cell lines. Results: Here, we report that only ciglitazone and troglitazone in-duce apoptosis in the three cancer cell lines whereas rosiglitazone induces a G0/G1 cell cycle arrest in C33-A cells. Contrary to the other ligands, pioglitazone has no effect.Discussion: Our results suggest that TZD can induce apoptosis or inhibit cell proliferation of cervical cancer-derived cell lines ac-cording to the p53 status. These antineoplastic effects of PPARγ agonists may provide an exciting novel therapeutic approach for the treatment of cervical cancer.

A2.3Restoration of apoptotic pathways in uterine cervix-derived cancer cell lines by staurosporine is potentiated by histone deacetylase inhibitors

A.Z. Decrion-Barthod, M. Nicolier, J.L. Prétet and C. MouginEA 3181 - IFR133 – Université de Franche-Comté - BesançonContact : [email protected]

Cervical cancer represents a major health problem worldwide, especially since the treatment of advanced and recurrent cervical tumors remains largely ineffective. High risk human papillomavi-ruses (HPV), especially HPV16 and 18, have been recognized as the major cause of cervical dysplasia and carcinoma, and infec-ted cells expressing E6 and E7 viral oncoproteins are resistant to apoptosis. Staurosporine (ST), a protein kinase inhibitor, is able to inhibit E6 and E7 viral oncogene expression in HeLa and CaSki cells, and to restore p53-dependent apoptosis of these cells via intrinsic pathway. On the other hand, histone deacetylase inhibi-tors (HDis) are able to arrest growth of cervical carcinoma cells in the G1 phase of the cell cycle, and prolonged incubation of Hela cells with HDis induced apoptosis via the E2F/p73 pathway, and in particular the pro-apoptotic isoforms p73alpha and p73beta. The-refore the combined use of ST and HDI was tested to highlight a synergistic apoptotic effect in HeLa and CaSki cells. Time-courses and dose-responses were performed with different combinations of drugs. Our results show that co-treatment of HeLa and CaSki cells by ST and HDIs (sodium butyrate or Trichostatine A) clearly blocks cell cycle progression in the G1 phase whatever the stau-rosporine concentration and increases in a synergistic manner the proportion of cells with depolarized outer mitochondria membrane and subsequently the number of apoptotic cells. Different proteins depending on the apoptotic stimulus and intracellular pathways utilized are currently studied: p53, p73, Bax, and Bcl-2.

Axe 2Agents Infectieux et Carcinogenèse

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A2.4Apoptosis of cervical carcinoma-derived cell lines: involvement of cytochrome c and AIF-dependent pathways

M. Nicolier, A.Z. Decrion-Barthod, S. Launay, J.L. Prétet and C. MouginEA 3181 « Carcinogenèse épithéliale » - IFR 133 - UFR Médecine et Pharmacie - Université de Franche-Comté, Besançon

Contact : [email protected]

Staurosporine (ST), a protein kinase inhibitor, has been reported to have anticancer activity. We demonstrated that cervical cancer cells treated with ST exhibited typical apoptotic features, such as cell shrinkage, membrane blebbing, chromatin condensa-tion. However, the mechanisms of ST-induced apoptosis remain unclear. We previously showed a time-dependent decrease of mitochondrial transmembrane potential, a decisive event of the intrinsic pathway of apoptosis. Here, mitochondrial pro-apoptotic proteins, cytochrome c and Apoptosis-Inducing Factor (AIF), were studied by confocal microscopy and by western blots in subcel-lular fractions. Immunoreactivity for cytochrome c oxydase and HDAC-3 was performed to monitor the purity of mitochondrial and nuclear fractions respectively. ST caused the mitochondrial release of cytochrome c in HeLa, CaSki and C33A cells, which was followed by the cleavage of caspases-9, -3 and of nuclear poly(ADP-ribose) polymerase (PARP). Moreover, in the three cell lines, ST caused a delayed release, from mitochondria into the cy-tosol, of the caspase-independent death effector AIF. Such factor was thereafter partly translocated into the nucleus. Interestingly, the AIF release was concomitant with the activation of mitochon-drial PARP. Thus ST kills cells at least by two partially overlapping molecular mechanisms, which converge on mitochondria, where Bcl-2, Bax and p53 control the cell death process. The z-VAD-fmk, a broad caspase inhibitor, and 3-Aminobenzamide, a PARP inhibitor, are currently evaluated to confirm our hypothesis.

A2.5HPV prevalence, viral load and physical state of HPV-16 in cervical smears of patients with different grades of CIN

J. Briolat1,2, V. Dalstein1,2,3, K. Joseph1, S. Caudroy1,2,3, P. Birem-baut1,2,3, C. Clavel1,2,3

1 Hôpital Maison Blanche - Laboratoire Pol Bouin – CHU Reims2 Inserm UMRS 514 - Reims3 Université de Reims Champagne-Ardenne - ReimsContact : [email protected]

Introduction. Human papillomavirus (HPV) infection is the most important event in malignant transformation of human cervical epithelium. We analysed HPV-16 presence, single / multiple HPV infections, viral load and physical state in cervical smears towards the grade of histological lesions. The purpose of this study was to know if one or some of these parameters could allow to differen-tiate histological diagnoses.

Methods. Total DNA was extracted from 363 cervical samples corresponding to 24 cases without any lesion, 96 CIN1, 92 CIN2, 144 CIN3 and 7 cancers at histological diagnosis. Results. Our results show that HPV-16 was predominant and its prevalence increased with the severity of histological lesions (CIN1: 27.1%; CIN3: 65.3%). In addition, we show that the fre-quency of single infections, as compared with multiple infections, increased with the severity of the lesion (CIN1: 25.0%; CIN3: 54.8%). Among HPV-16 positive samples (n=170), we found that viral load, determined on liquid-based cytology samples by real-time PCR, did not vary significantly according to the different CIN grades although it allowed to differentiate between samples with or without lesion. Concerning HPV-16 integration, the mixed and integrated forms of HPV-16 genome, already present in wo-men with normal histology (normal cervix: 28.6%), increase to the benefit of pure episomal forms with the severity of lesions (CIN3: 73.8%). Discussion. Thus, our data raise the question of the viral load as a valuable clinical parameter to discriminate between lesion grades. Moreover, we emphasize integration as an early event in cervical carcinogenesis, increasing with the severity of lesions. Finally, this study underline the importance of single versus multiple infec-tions in CIN progression.

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A3.1Mécanismes de mort cellulaire induits par la photosensibilisation de cellules d’adénocarcinome mammaire humain MCF-7 par le Foscan®

A. François1, S. Marchal1, D. Dumas2, F. Guillemin1, L. Bolotine-Bezdetnaya1

1 CRAN, Nancy Université, CNRS UMR 7039, Centre Alexis Vautrin Vandoeuvre-Lès-Nancy 2 Faculté de Médecine, LEMTA, Nancy Université, IFR 111 et CNRS UMR 7563 - Vandoeuvre-Lès-NancyContact : [email protected]

La thérapie photodynamique (PDT) est basée sur la combinaison d’un photosensibilisant (PS), d’oxygène et de lumière afin de pro-duire des espèces réactives de l’oxygène. Le faible rayon d’action de l’oxygène singulet, principale espèce cytotoxique produite, in-dique que le premier site de dommages induit par la PDT est lié à la localisation intracellulaire du PS.

Nos travaux montrent que le Foscan® est un PS qui s’accumule préférentiellement dans le réticulum endoplasmique (RE) des cel-lules d’adénocarcinome mammaire humain MCF-7. Le RE a été confirmé comme étant la principale cible de la Foscan®-PDT, par la mise en évidence de modifications d’expression de certaines protéines propres au RE. L’induction de la protéine de stress, GRP78 a été montrée, ainsi que la photodestruction de la protéine SERCA-ATPase impliquée dans l’homéostase calcique, et de Bcl2 non mitochondriale.

Nous avons ensuite démontré que le stress oxydatif du RE induit par Foscan®-PDT est fortement corrélé à l’activation de la cas-pase-7, par une voie indépendante de la signalisation apoptotique impliquant la mitochondrie. Cependant, le faible taux d’apoptose obtenu (10%) dans un contexte de mort cellulaire supérieure à 90%, nous a conduit à envisager un autre mécanisme de mort cellulaire programmée, l’autophagie. Une cinétique a permis de montrer que l’autophagie débute 5h après PDT, dès la première dose de lumière induisant 85% de mortalité (LD85), alors que le clivage de caspase-7 n’est révélé qu’à la LD95 avec une prédo-minance 24h après PDT. Ces résultats suggèrent que l’autopha-gie est plus précoce que l’apoptose dans les cellules MCF-7 pho-tosensibilisées par le Foscan®. La contribution des deux voies de mort cellulaire programmée dans la photoinactivation des cellules traitées par Foscan®-PDT reste à être précisée par l’utilisation d’inhibiteurs spécifiques d’autophagie et/ou d’apoptose.

A3.2Application des Quantum Dots dans la cartographie du ganglion sentinelle

E. Pic1, A. Robé1, T. Pons2, B. Dubertret2, L. Bolotine1, F. Guillemin1, F. Marchal1

1 Centre Alexis Vautrin, CRAN UMR 7039 CNRS Nancy-Université - Vandoeuvre-lès-Nancy2 ESPCI, Laboratoire d’Optique Physique, CNRS UPR A0005 - ParisContact : [email protected]

Le diagnostic de métastases ganglionnaires dans le cancer du sein est réalisé par la technique du ganglion sentinelle (GS) consistant à repérer et prélever le premier relais ganglionnaire axillaire potentiellement métastatique. Ce GS est repéré par in-jection d’un produit radioactif et d’un colorant bleu. Cependant, quelques inconvénients existent : risques de choc anaphylactique et exposition à la radioactivité. De nouveaux marqueurs ont ainsi été proposés, les Quantum Dots (QDs) qui sont des nanocristaux de semi-conducteurs fluorescents.La première étape de cette étude a été de déterminer le «coa-ting» idéal des QDs afin d’obtenir le meilleur lymphotropisme. Trois coatings ont été testés : PEG, PEG-NH2 et PEG-COOH par injection sous-cutané (s.c.) dans la patte chez la souris. Après visualisation du GS en microscopie de fluorescence, le meilleur coating a été identifié comme étant le PEG-COOH. Quatre pour-centages de COOH : 25, 50, 75 et 100% ont ensuite été tes-tés suivant le même modèle, la fluorescence étant suivie après extraction chimique du GS. Les résultats ont montré que, quel que soit le pourcentage de COOH, les QDs migrent dans le GS axillaire de façon identique. Une étude de biodistribution a ainsi été réalisée avec des QDs dotés d’un coating COOH (λex 655 nm). Après injection s.c. de 20 pmol chez la souris, les QDs ont été détectés dans le GS à différents temps (5, 15, 30, 60 min et 24 h) par spectrofluorimétrie fibrée, microscopie de fluorescence et extraction chimique. La quantité maximale de QDs dans le GS a été observée à 60 min et correspond à 2,4 % de la dose injectée. L’étude de biodistribution a aussi montré que les QDs étaient ab-sents de tout organe, du plasma ainsi que des urines et fécès.L’utilisation des QDs permet donc de localiser le GS de façon sé-lective et rapide. Cependant, l’emploi de QDs sans métaux lourds est nécessaire pour limiter tout risque de toxicité ainsi que l’utili-sation du proche infra-rouge pour une application clinique.

A3.3Multimodal imaging to study the diffusion of a photosensitizer into tumoral tissue

E. Werkmeister1, L. Marchal1l, JF. Stoltz1, Y. Virybabel, P.H. Lasalle, L. Bolotine2, D. Dumas1

1 Nancy - Université - UHP, CNRS - Groupe d’Ingénierie Cellulaire et Tissulaire UMR 7563 - Faculté de Médecine - VANDOEUVRE-lès-NANCY2 Centre Alexis Vautrin - VANDOEUVRE-LES-NANCYContact : [email protected]

Photodynamic therapy (PDT) used for photodiagnostic and cancer

Axe 3Contrôle local des cancers – Imagerie, outils de diagnostic, sensibilité aux traitements, nouvelles thérapeutiques

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treatment is based on interaction between a photosensitizer and light leading to tumoral tissue destruction. To perform the therapy, specific localisation and dose-ranging of photosensitive molecu-les should be optimised. The aim of this work was to follow the diffusion of a new photosensitizer according to time (30 min to 24 hours) into a tumor after an intratumoral injection. Multiphoton technology (infrared excitation) enables to image specimens in a non invasive mode with high resolution at deep penetration. The spectral imaging mode gives information about localization of fluorescent molecules and strongly depends on their concen-tration. Lifetime imaging mode gives access to their fluorescence decay which is independent on their concentration but sensible to their physicochemical environment. Second Harmonic Generation localizes the collagen content of specimens. Macrofluorescence imaging (visible excitation) enabled us to visualize the whole tu-mor and showed a progressive concentration of the photosensiti-zer in the tumoral tissue.Fluorescence detection methods (Spectral, FLIM, SHG) combined to a macroscopic observation represent major advanced in optical photodiagnostic. Based on these techniques, this work enabled us to determine the delay following injection for which the photosen-sitizer’s concentration in tumoral tissue was optimised.

A3.4Métabolomique des gliomes

G. Erb 1,2, K. Elbayed2, M. Piotto 2,3, J. Raya2, A. Neuville4, M. Mohr4, D. Maitrot5, P. Kehrli5, I.J. Namer1

1 Département de Biophysique et de Médecine Nucléaire, CHRU Strasbourg2 ULP/CNRS LC3-UMR 7177, Strasbourg 3 Bruker Biospin, Wissembourg4 Département d’Histologie Pathologique, CHRU Strasbourg5 Département de Neurochirurgie, CHRU StrasbourgContact : [email protected]

La classification des tumeurs cérébrales est principalement basée sur des critères anatomo-pathologiques et doit répondre à deux interrogations majeures : quel est le pronostique et quel est le traitement le plus adéquat pour le patient. Pour les gliomes, les réponses apportées à ces questions par différentes classifications (OMS, Ste Anne) restent insatisfaisantes. Ainsi des gliomes pos-sédant des critères histologiques communs peuvent présenter des évolutions cliniques divergentes. L’objet de notre étude réside dans l’intégration de données issues du métabolisme tumoral afin de vérifier leurs potentiels comme critère de classification et de gradation. Le métabolome de 70 tumeurs cérébrales (10 oligo-dendrogliomes de bas grade, 24 de haut grade, 6 en phase de transition, et 30 glioblastomes) a été analysé par spectroscopie de résonance magnétique nucléaire en rotation à l’angle magique (HRMAS). Les données ainsi acquises ont été analysées par une technique d’analyse discriminante et ont permis d’établir des mo-dèles métaboliques de classification.Les résultats ont montré le potentiel de la HRMAS couplée aux techniques d’analyses multivariées pour l’établissement de modè-les métaboliques de classification. La classification des oligoden-drogliomes de bas grade et de haut grade sur la base de critères métaboliques a permis de dégager un modèle lié principalement au degré d’hypoxie des tissus. L’application de ce modèle à l’en-

semble des données a révélé une meilleure concordance entre le devenir du patient et le degré d’hypoxie obtenu de l’HRMAS en comparaison avec la classification issu des données d’histopa-thologie. Ces résultats tendent à prouver qu’une redéfinition d’un phénotype tumoral basée sur des critères métaboliques pourrait s’avérer intéressant pour une meilleure compréhension de l’évo-lution clinique des gliomes.

A3.5Relation entre la distribution intratumorale du Foscan®‚, l’apoptose photoinduite et l’efficacité du traitement dans un modèle de tumeur d’adénocarcinome colique (HT29) xénogreffé chez la souris «nude»

J. Garrier1, S. Marchal1, A. Bressenot2, F. Plénat2, F. Guillemin1, L. Bolotine1

1 CRAN-UMR 7039, Nancy-Université, CNRS, Centre Alexis Vautrin, 54511 Vandœuvre-lès-Nancy cedex2 Laboratoire d’Anatomie et de Cytologie pathologiques, CHU de Brabois, 54500 Vandœuvre-lès-NancyContact : [email protected]

La thérapie photodynamique (PDT) repose sur l’action conjuguée d’un photosensibilisateur (PS), de la lumière et de l’oxygène. L’effet tumoricide de ce traitement résulte de la combinaison de dommages cytotoxiques directs sur les cellules tumorales et de dommages indirects caractérisés par l’altération de la vasculari-sation. L’effet phototoxique d’un PS est défini par sa localisation intratumorale. De la cinétique de répartition des PS dans les tis-sus dépend le site d’action de la PDT. Le but de ce travail est d’étudier l’apoptose photoinduite dans les cellules endothéliales et néoplasiques ainsi que l’efficacité du traitement par Foscan®-PDT en fonction de la distribution intratumorale du Foscan®. Cette dernière est déterminée par l’intervalle drogue-lumière appliqué (IDL) : un IDL court (3 heures) pour une localisation vasculaire du PS, un IDL intermédiaire de 6 heures et un IDL long (24 heures) pour une localisation néo-plasique du PS. Les dommages cellulaires apoptotiques induits par le traitement Foscan®‚-PDT en fonction de l’IDL ont été évalués sur des tu-meurs d’adénocarcinome colique humain (HT29) xénogreffées sur souris « nude ». Une technique immunohistochimique de dou-ble marquage utilisant l’anticorps anti-collagène IV murin spécifi-que des vaisseaux et l’anti-caspase 3 active pour l’apoptose a été développée. L’efficacité de la PDT a été déterminée par le suivi de la croissance tumorale après le traitement.Les résultats obtenus montrent que l’IDL de 3h est inefficace alors que les IDL de 6h et 24h entraînent un retard significatif de croissance par rapport au groupe « contrôle ». Cela s’accompa-gne d’une apoptose des cellules endothéliales à l’IDL 6h ou des cellules néoplasiques pour l’IDL 24h alors qu’aucun dommage cellulaire n’est observé à 3 heures. L’ensemble de ces résultats montre que l’apoptose des cellules néoplasiques contribue à l’efficacité du traitement par Foscan®-PDT.

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A3.6Metabolic profile and in vivo stability of a peptide-conjugated chlorine-type photosensitizer targeting neuropilin-1

N. Thomas1, L. Tirand1, D. Bechet1, R. Vanderesse2, F. Plenat3, C. Frochot4, F. Guillemin1, M. Barberi-Heyob1

1 CRAN-UMR 7039 CNRS, Nancy-Université, Centre Alexis Vautrin, Vandoeuvre-lès-Nancy2 LCPM-UMR 7568 CNRS, ENSIC, Nancy-Université3 Laboratoire d’Anatomie et Cytologie Pathologiques de Brabois, CHU Nancy, Vandoeuvre-lès-Nancy4 DCPR/GRAPP-UMR 7630 CNRS, ENSIC, Nancy-UniversitéContact : [email protected]

Photodynamic Therapy (PDT) is a new modality for cancer treat-ment, that involves a photosensitiser (PS), light and molecular oxygen, whose combined action results in the formation of highly cytotoxic species. Tumor eradication occurs not only through direct destruction of tumor cells, but also indirectly, following destruction of its neovasculature. This vascular effect is thought to play a ma-jor part in the eradication of some vascularized tumors by PDT. Since the over-expression of Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) receptors is correlated with tumour angiogenesis and growth, we conjugated a photosensitiser (5-4-carboxyphenyl)-10,15,20-triphenyl-chlorin, TPC) via a spacer (6-aminohexanoic acid, Ahx) to a neuropilin-1 (NRP-1) specific homing heptapeptide (ATWLPPR) targeting tumour vasculature (Tirand et al. 2006). The intratumoural localisation of the PS, its stability and its me-tabolic profile have been studied on a model of nude mice xe-nografted with U87 human malignant glioma cells (Tirand et al. 2007). By fluorescence microscopy, we evidenced a selective ac-cumulation of the conjugated PS in the endothelial cells bordering the tumour vessels compared with unconjugated PS. TPC-Ahx-ATWLPPR accumulated at high levels in the tumour and tissues of the reticuloendothelial system, particularly by liver and spleen. TPC-Ahx-ATWLPPR was stable in vitro in plasma for at least 24 h at 37°C. In vivo, the peptide moiety was progressively degraded from 2h post injection, resulting in the formation of a metabolic product, TPC-Ahx-A (Tirand, et al. 2007).In order to improve the heptapeptide stability towards proteases (Adessi and Soto 2002) and to avoid any non-selective accumu-lation of the metabolic product, this photosensitiser has been coupled to pseudopeptides on solid support.

ReferencesAdessi C.,Soto C. Curr Med Chem, 2002, 9(9):963-78Tirand L.et al. J Control Release, 2006, 111(1-2):153-64Tirand L.et al. Drug Metab Dispos, 2007, 35(5):806-13

A3.7Analyse des mécanismes impliqués dans la cytotoxicité induite dans un glioblastome humain par l’association d’un traitement par l’oxaliplatine et d’une irradiation par des neutrons rapides

S. Benzina1, J.M. Denis2, P. Dufour1, J. Gueulette2 et P. BischoffI1

1 Laboratoire de Cancérologie Expérimentale et de Radiobiologie (LCER/EA-3430), IRCAD, Hôpitaux Universitaires - Strasbourg2 IMRE-5469, Faculté de médecine, Université catholique de Louvain - BruxellesContact : [email protected]

La chimio-radiothérapie concomitante est d’une grande efficacité dans le traitement de certaines formes de cancers. Notre labora-toire étudie depuis plusieurs années déjà les conséquences de combinaisons entre des sels de platine utilisés en chimiothérapie, et des radiations à transfert linéique d’énergie (TLE) élevé. En ef-fet, l’utilisation de ces radiations offre de nouvelles perspectives thérapeutiques (hadronthérapie). Cependant, les conséquences de leur association à des drogues anticancéreuses ont fait l’objet de très peu d’études à ce jour. Nous avons associé l’oxaliplatine (OX), un composé du platine de troisième génération, à une irra-diation par des neutrons rapides (produits au Cyclotron de Lou-vain-la-Neuve, Belgique). La lignée U-87, issue d’un glioblastome humain connu pour sa grande radiorésistance vis-à-vis des ra-diations à TLE faible, est utilisée dans nos expériences. La combi-naison OX + neutrons est à l’origine d’une importante diminution de la prolifération et de la survie cellulaire. De façon inattendue et contrairement à ce que nous avions obtenu précédemment avec le cisplatine (CP), aucun renforcement de l’induction de l’apoptose n’est observé avec l’OX. En revanche, la sénescence prématurée et l’autophagie (encore appelée mort programmée de type II) sont fortement augmentée dans les cellules co-traitées. D’autre part, les cellules co-traitées par l’OX et les neutrons rapides présentent un cycle anormal, avec une quasi-disparition de la phase S. Ces modifications pourraient résulter de la surexpression de p21 et p53. Le nombre de cassures double brin (DSB) après chaque trai-tement a aussi été évalué, par immuno-histochimie de la protéine nucléaire phosphorylée γ-H2AX. Les résultats indiquent que ces coupures dans l’ADN sont plus abondantes après co-traitement, et donc que la cytotoxicité de l’association oxaliplatine + neutrons rapides pourrait être liée à un accroissement de ces dommages difficilement réparables.

A3.8Étude des mécanismes de l’efficacité photodynamique de l’hexyl-aminolevulinate (h-ALA)-protoporphyrine IX (PpIX) dans le traitement du cancer de la vessie chez le rat.

S. Berrahmoune, S. El Khatib, N. Fotinos, D. Brie, J.C. Guedenet, L. Bezdetnaya, N. Lange, F. Guillemin, M.A. D’HallewinCentre Alexis Vautrin, CRAN UMR 7039 CNRS, Nancy Université, Avenue de Bourgogne 54511 Vandoeuvre les NancyContact : [email protected]

Le but de ce travail a été d’évaluer l’efficacité de la thérapie pho-todynamique (PDT) dans le traitement du cancer de la vessie et d’expliquer les phénomènes la régissant. Des tumeurs vésicales orthotopiques sont implantées chez des rats Fischer 344 femelles. Une instillation intravésicale de Hexvix® ou hexylaminolevulinate (h-ALA), induit la formation du photosensibilisant protoporphyrine IX (PpIX) dans les tumeurs.

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Nous avons utilisé 2 concentrations d’ h-ALA (8 mM et 16 mM), suivi d’une irradiation (λ = 635 nm, 20 J/cm2, 100 mW/cm2). Une destruction complète de la tumeur est observée à 8 mM d’h-ALA alors que la tumeur reste intacte à 16 mM d’h-ALA. L’effet est inversé pour la paroi saine.Les cinétiques de photoblanchiment et de formation de photopro-duits, sont identiques, avec la formation d’un seul photoproduit, la protophoto porphyrine. Une étude par HPLC de quantification de PpIX montre la réduction d’un facteur 2 de PpIX dans les tumeurs instillées à 16 mM. La microscopie confocale révèle une loca-lisation intracellulaire différente dans les tumeurs: punctiforme à 8 mM et diffuse à 16 mM. Une analyse par immunofluores-cence indique une destruction des mitochondries des myocytes après instillation d’Hexvix® 16 mM ou des cellules tumorales après Hexvix® 8 mM. La microscopie électronique 4 h post PDT confirme le dommage mitochondrial et sa localisation (tumeur vs. muscle).La phototransformation du photosensibilisant, utilisée comme cri-tère prédictif de réponse dans d’autres organes, ne diffère pas en fonction de la concentration et ne peut donc être utilisée dans le cadre de la vessie. Augmenter la dose de Hexvix® provoque une réduction de la synthèse de PpIX, qui se localise moins dans les mitochondries des cellules tumorales et réduit donc l’efficacité de la PDT. Ces 2 facteurs, localisation intracellulaire et quantité de PpIX sont intimement liées à l’effet de la PDT.

A3.9Recherche en physique médicale et radioprotection - Etude d’une nouvelle méthode de lecture des gels dosimétriques 3D basée sur la diffusion lumineuse

R. Alwan1, F. Guermeur1, J. Svoboda1,3, L.Simonin1, Y.Bailly1, L. Makovicka1, C. David2

1 CREST- FEMTO-ST UMR 6174 CNRS, 2 CH Belfort-Montbéliard3 Czech Technical University, PragueContact : [email protected]

De nombreuses applications médicales nécessitent une mesure tridimensionnelle (3D) de la distribution de la dose dans un fan-tôme d’irradiation. L’une des solutions possibles est l’utilisation des gels dosimétriques 3D. Différents principes physico-chimi-ques (gels de Fricke, gels de polymère) et différentes composi-tions ont été et sont étudiés, élaborés et même commercialisés (gel polymère BANG). Notre travail est basé sur l’expérience pré acquise au sein du laboratoire en collaboration avec le CTU de Prague. Même si la composition du gel joue un rôle important et continue à être étudiée, notre objectif porte sur le développement de nouvelles techniques de lecture complémentaires à l’utilisation de l’imagerie par résonance magnétique nucléaire (IRM). En par-ticulier, nous nous intéressons aux techniques d’imagerie basées sur une lecture optique laser, plus souple et moins coûteuse que l’ IRM. Nous avons obtenu nos premiers résultats en utilisant une méthode optique basée sur les acquisitions de la lumière mo-nochromatique diffusée par les micro-domaines radio-formés dans le gel de polymère. La corrélation dose/luminosité a pu être établie grâce aux développements d’outils de traitement d’image spécifiques.

A3.10Impact dosimétrique du mouvement respiratoire simulé par une plateforme dynamique

H. Masset1,2, E. Gavignet1, R. Gschwind1, JL. Dumas2, L. Makovicka1, J.F. Bosset2

1 Institut FEMTO ST – Dpt CREST, UMR 6174 CNRS, Pôle Universi-taire des Portes du Jura -Montbéliard2 Service de radiothérapie, CHU Jean Minjo - BesançonContact : [email protected]

La conformation du volume cible en radiothérapie externe est de plus en plus importante. Elle se base souvent sur des scanners dosimétriques non asservis à la respiration. Le volume cible est alors dilaté pour tenir compte des incertitudes dues au mouve-ment de l’organe ; ce qui peut amener une dose additionnelle sur les tissus sains environnants et empêcher une escalade de dose au niveau de la tumeur. Il est alors fondamental de créer un outil permettant d’étudier l’impact dosimétrique lié au mou-vement respiratoire.Le prototype expérimental est un plateau de 20x20 cm2 motorisé, capable d’effectuer de 15 à 20 cycles respiratoires par minute. Cette plateforme prend en compte les contraintes liées à un trai-tement de radiothérapie, en particulier la limitation des parties en métal au sein du dispositif. Le plateau motorisé peut accueillir dif-férents types de fantôme (homogène ou hétérogène) avec divers dispositifs de mesure : films, dosimètres thermoluminescents, chambres d’ionisation. L’amplitude aussi bien que la fréquence du mouvement sont modulables grâce au moteur qui est contrôlé par un programme informatique.La flexibilité du prototype permet de simuler des mouvements cranio-caudaux de chacun des organes thoraciques. Ainsi, une amplitude et une fréquence données peuvent représenter le mouvement de l’organe. Les premiers résultats de l’influence du mouvement sur la distribution dosimétrique seront présentés. En perspective, la plateforme sera améliorée avec un mouvement antéro-postérieur additionnel pour effectuer un mouvement 2D.

A3.11Utilisation d’un code de calcul dosimétrique basé sur les Réseaux de Neurones Artificiels et la méthode de Monte-Carlo

A. Vasseur1, M. Sauget2, E. Martin1, S. Contassot-Vivier2, L. Makovicka1, J. Bahi21 Institut Femto-ST, Dpt CREST – UMR 6174 – Pôle Universitaire des Portes du Jura -Montbéliard2 Laboratoire LIFC – Équipe AND – FRE CNRS 2661 – Université de F. Comté - BelfortContact : [email protected]

Le code de calcul NeuRad2, basé sur les RNA (réseaux de neuro-nes artificiels) et des données de base calculées par la distribution BEAMnrc, est actuellement en cours de développement par les équipes AND du Laboratoire Informatique de Franche-Comté et l’équipe IRMA CREST/FEMTO-ST. Ce projet, s’inscrivant dans le cadre du Canceropôle du Grand-Est et du projet OPRAD, vise à dé-velopper un système de planification alliant la précision des calculs

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Monte Carlo (MC) et la rapidité d’exécution propre aux RNA.Le principal objectif de la radiothérapie externe est de pouvoir conformer au mieux l’irradiation aux volumes tumoraux tout en épargnant les tissus sains environnants. Pour déterminer une ir-radiation optimale, un plan de traitement dosimétrique doit être effectué. Cependant, les logiciels utilisés cliniquement résultent d’un compromis entre précision et temps de calcul.Les systèmes actuels, utilisant des modèles analytiques ou bien des bases de données, sont rapides mais manquent de précision. Il est possible d’améliorer cette précision en utilisant des codes basés sur la méthode MC. Cependant, leur emploi implique des temps de calcul bien souvent rédhibitoires quant à l’utilisation en routine clinique.Nous proposons alors une nouvelle approche consistant à em-ployer des RNA dont l’apprentissage aura été accompli en utili-sant des données de base calculées par un code MC. Le principal avantage de cette méthode est de pouvoir obtenir des résultats avec la rapidité d’exécution propre aux RNA, et une précision de l’ordre de celle du MC.NeuRad2 est actuellement capable de traiter un nombre de points équivalent à un plan de traitement clinique classique en moins d’une minute sur un PC d’entrée de gamme, avec une précision de 3% si l’on se réfère à un calcul MC complet de plusieurs heu-res sur une grille d’une dizaine de nœuds.Nous présenterons les résultats concernant les milieux homogè-nes, ainsi que les résultats obtenus sur des géométries comple-xes de milieux hétérogènes.

A3.12Détermination théorique des perturbations de dose causées par une prosthèse de hanche pendant une irradiation pelvienne

E. Buffard1, R. Gschwind1, L. Makovicka1, C. David2

1 CREST / FEMTO-ST, UMR-CNRS 6174, Pôle universitaire - Montbéliard2 Département d’Oncologie et de Radiothérapie du Centre Hospitalier de Belfort-MontbéliardContact : [email protected]

Pendant une irradiation pelvienne, la présence d’une prothèse de hanche n’est pas correctement prise en compte dans les sys-tèmes de planification de traitement et conduit aux calculs des distributions de dose avec quelques approximations. Dans cette étude, les simulations du Monte-Carlo ont été employées pour déterminer avec exactitude les modifications causées par ces dispositifs de métal sur la distribution de dose. Les paramètres comme la géométrie de la prosthèse, la composition de matériels différents employés dans la fabrication de ces implants et finale-ment l’influence de plusieurs couches ont été étudiés.Le code BEAMNRC04 a été employé pour construire un accé-lérateur virtuel médical linéaire. 25 MV l’espace de phase a été calculé et employé ensuite pour irradier quelques fantômes hé-térogènes avec Z élevé. Deux modèles ont été élaborés avec le code DOSXYZNRC : le modèle A qui permet de décrire les mo-difications de dose à l’interface métal tissu et le modèle B, qui représente une prothèse de hanche totale. L’étude a été effectuée pour un des rayons passant par la prothèse. Tous les résultats théoriques ont été validés avec des mesures expérimentales ef-

fectuées dans une chambre d’ionisation (PTW / M31002) autour d’une prothèse de hanche en alliage de Ti mise dans un fantôme d’eau (PTW / MP3). D’abord une dose augmente à l’inetrface des media est obser-vée; celle-ci peut être rduite par la nature des couches. Deuxiè-mement, une atténuation de rayon a été mise en évidence. Elle dépend de la densité et peut devenir très importante sous la tête fémorale.

A3.13NF-ΚB involvement in human glioma radioresponse in vivo – Implications for radiosensitization by Bortezomib (VELCADE®)

M. Labussière1, S. Pinel1, M. Vandamme1, V. Bernier2, F. Plénat1,P. Chastagner1.1 Laboratoire d’Histopathologie Expérimentale et Moléculaire, Fa-culté de Médecine - Nancy2 Département de Radiothérapie, Centre Alexis Vautrin, NancyContact : [email protected]

Purpose: NF-ΚB is one of the main transcription factors involved in biologic response to radiotherapy delivered at clinically relevant doses. NF-ΚB has been implicated in radioresistance of human neoplasms, mainly because its activation induced transcription of anti-apoptotic and pro-proliferative genes. In the present work, we investigated the implication of NF-ΚB in U87 glioma radio-response using clinically relevant schedule of irradiation and we studied the interest of bortezomib (Velcade®) as a radiosensitizer in this model.Methods: U87 malignant glioma was xenografted heterotopically onto nude mice. Biological radioresponse was investigated after 10 Gy delivered either as one fraction of 10 Gy, either as 5 daily fractions of 2 Gy. Activation of NF-ΚB and proteasome activity was measured by an ELISA assay and a fluorimetric method, respectively. Bortezomib (BTZ) was injected at the dose of 0.45 mg/kg 2 times per week. Antitumoral activity of the concomitant administration of BTZ and ionizing radiation during two weeks was investigated.Results: Our results showed a NF-ΚB constitutive activation in U87 tumors and this was enhanced in the 24h following ioni-zing radiation delivery. We observed an increased proteasome activity in both fractionated (5 x 2 Gy) and non-fractionated (1 x 10 Gy) irradiation groups. When concurrently administered with fractionated radiotherapy, BTZ both reduced radiation-induced proteasome activity and radiation-induced NF-ΚB activation. Considering overall antitumoral efficacy when treatments were given over two weeks, BTZ was unable to improve radiotherapy efficacy in U87 model.Conclusion: In spite of a marked short-term decrease in ra-diation induced-NF-ΚB activation, simultaneous administration of BTZ did not enhance radiotherapy antitumoral activity in U87 glioma model. Defining NF-ΚB position in malignant glioma radio-resistance needs further investigations and studies are ongoing on two others human malignant glioma models.

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A3.14Détermination de la corrélation entre deux mesures de la qualité des images en mammographie numérique

H. Perez-Ponce, A. Noel, C. Daul, D. WolfCentre de Recherche en Automatique de Nancy CRAN UMR-7039 – Nancy Université – CNRSCentre Alexis Vautrin, Unité de Radiophysique - Vandœuvre-lès-Nancy Contact: [email protected]

En mammographie numérique, il existe deux approches pour évaluer la qualité de l’image. Dans la première approche, une méthode visuelle basée sur un observateur humain permet la détectabilité des lésions en radiographies mammographiques. Malheureusement, cette approche de qualité est affectée par la variabilité inter-évaluateur. Dans une deuxième approche, des pa-ramètres objectifs et indépendants de l’observateur humain, qui ont une relation avec la résolution de l’image et le contraste (MTF et NPS), sont utilisés pour une évaluation de la qualité de l’image. Cependant, ces paramètres n’ont pas de relation directe avec la détectabilité de lésions. Une méthode qui nous permet d’avoir une approche de la qualité de l’image qui soit indépendante de l’humain et qu’ait une relation directe avec la détectabilité des lé-sions est important pour utiliser l’équipement mammographique de manière optimale. Ce travail présent la première étape vers le développement d’une telle méthode: La génération par ordinateur des images virtuelles à partir d’un modèle « Source de rayons X/détecteur » qui prend en compte les valeurs mesurées de la MTF et NPS des équipes mammographiques.

A3.15Caractérisation de protéines impliquées dans la Thérapie Photodynamique par spectrométrie de masse

D. da Silva, M. Dodeller, B. Maunit, J.F. MullerICPM, Laboratoire de Spectrométrie de Masse et de Chimie Laser (LSMCL) - Université Paul Verlaine- MetzContact : [email protected]

La Thérapie Photodynamique (PDT) utilisant une drogue photo-sensible (Foscan®), la lumière et l’oxygène induit la mort cellu-laire, en particulier par une voie apoptotique ou de nécrose1. Le but de notre étude est alors de comprendre le ou les mécanismes impliqués lors de la PDT. Pour cela, des cellules HT29 (adénocar-cinome de colon humain) incubées avec une drogue le Foscan® sont alors illuminées par un laser (λ=632 nm). Puis, nous réali-sons une étape séparative par gel 2D SDS-PAGE afin d’obtenir la distribution des protéines. L’identification de ces protéines se fait par spectrométrie de masse MALDI-FTICR (9.4 T, Ion Spec Varian, California). En effet, cette technique présente certains avantages, tels que la haute résolution et la haute précision en masse. Ce qui présente un intérêt pour l’étude de protéines «cibles» dans la voie apoptotique après la Thérapie Photodynamique. Nous comparerons alors la distribution des protéines provenant de cellules HT29 traitées ou non afin de mettre en évidence certai-nes protéines impliquées dans ce processus PDT. Ces protéines

sont sélectionnées d’après le rapport d’intensité de la tâche sur le gel 2D SDS-PAGE. Elles sont par la suite excisées du gel et subissent le séquençage peptidique par l’utilisation d’une enzyme protéolytique (Trypsine). Ces peptides sont alors identifiés par MALDI-FTICR (donnant l’empreinte de la distribution massique). Cette distribution massique est alors soumise à une banque de données NcBI-SwissProt Data Bank2 via un moteur de recherche MascotTM. Ainsi, cette étude a pu mettre en avant un premier résultat sur l’identification d’une protéine spécifique au réticulum endoplasmique et qui serait susceptible de jouer un rôle dans le processus PDT. Références(1) Almeida, R. D.; Manadas, B. J.; Carvalho, A. P.; Duarte, C. B. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Reviews on Cancer 2004, 1704, 59-86(2) Xu, C.; Garrett, W. M.; Sullivan, J.; Caperna, T. J.; Natarajan, S. Phytochemistry 2006, 67, 2431-2440.

A3.16Etude de la cinétique de nouveaux radiopharmaceutiques

F. Boisson, D. Brasse, J.L. GuyonnetInstitut Pluridisciplinaire Hubert Curien / CNRS - StrasbourgContact : [email protected]

Un des principaux axes de recherche actuels chez le petit ani-mal (souris / rat) concerne l’imagerie fonctionnelle cérébrale qui constitue un outil fondamental dans la compréhension des méca-nismes impliqués dans les maladies neurodégénératives.L’objectif recherché dans cette étude est de mesurer au cours du temps la distribution de la radioactivité au sein du cerveau d’un sujet avec une très bonne précision temporelle et spatiale afin de déterminer la cinétique de nouveaux radiopharmaceutiques. Le but de cette étude est de déterminer si le produit passe la Barrière Hémato-Encéphalique (BHE) afin de s’accumuler dans le cerveau ou non. Pour ce faire, un nouvel instrument est en cours de développement au sein du groupe ImaBio de l’IPHC. Ce compteur linéaire permettra d’étudier la cinétique de nouveaux radiopharmaceutiques comme le 99mTc-tertiobuthyle développé au sein de l’IPCMS, plus particulièrement dans le cerveau de la souris, et ce dans son intégralité. Un des enjeux majeurs de la prochaine décennie réside dans le développement de radiopharmaceutiques dont la spécificité per-mettra de déceler sans ambiguïté la présence de cellules can-céreuses. Ces études devant être nécessairement menées en amont sur le petit animal de laboratoire, ImaBio développe une gamma caméra pour l’imagerie préclinique répondant au cahier des charges suivant : - champ de vue corps entier de l’animal,- résolution spatiale intrinsèque millimétrique pour répondre à la petite taille des structures du modèle animal étudié,- efficacité de détection élevée pour permettre de suivre la cinéti-que du radiopharmaceutique injecté à l’animal.

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A4.1Impact of a mutation located in the androgen receptor DNA-Binding Domain on DNA interaction, cofactors recruitment and transcriptional activities

A. Monge1, M. Jagla

1, J.P. Bergerat

1, 2, and J. Céraline

1, 2.

1 Groupe Signalisation et Cancer de la Prostate, Université de Stras-bourg, EA 3430, Strasbourg2 Département d’Hématologie et d’Oncologie, CHRU Strasbourg


Mutations touching important functional domains of the androgen receptor (AR) are recurrent events during prostate cancer (PCa) progression on hormone therapy. New properties acquired by the mutant AR are supposed to allow PCa cells proliferation and sur-vival despite the low level of testosterone.Here we report new characteristics of the T575A mutation, identi-fied in a hormone-refractory metastatic PCa, located in the AR DNA-binding domain, more precisely in the first zinc finger just upstream of the DNA recognition box. We have previously shown in CV1 cells that the T575A substitution affects DNA recognition by the AR. Indeed, in CV-1 cells, the T575A mutant AR binds pref-erentially to and exhibits higher transcriptional activities from pro-moters containing AR non-specific hormone responsive elements (HRE) compared to the wild-type (wt) AR. Functional properties of the T575A mutant AR were further investigated in a PCa cell line. We showed by luciferase gene reporter assays performed in LNCaP cells, that the T575A mutant AR presents higher transcrip-tional activities whatever the HRE tested, on the contrary of what was observed in CV-1 cells. Moreover, chromatin immunoprecipi-tation assays performed on two endogenous AR target promoters indicate higher promoter occupancy by the mutant AR compared to the wt AR.All together, results obtained in CV-1 cells and in LNCaP cells suggest an impact of the T575A mutation on AR cofactors re-cruitment. This hypothesis was confirmed by confocal microscopy analyses showing a clear difference in the recruitment of the Ster-oid Receptor Co-activator-2 and the Nuclear Co-Repressor NCoR by the mutant AR compared to the wt AR.To conclude, our data suggest that the T575A mutation can affect both DNA recognition and cofactors recruitment, leading to the formation of distinctive and more active AR transcriptional com-plexes. These new characteristics may be worth taking into consi-deration for PCa progression on androgen ablation therapy.

A4.2Targeting the endocytic receptor LRP-1: a new strategy to control tumor invasion

B. Langlois 1, J. Devy 1, P. Henriet 2, H. Emonard 1, L. Martiny 1, S. Dedieu 1

1 CNRS UMR 6198, IFR 53 Biomolécules, Laboratoire de Biochimie, Moulin de la Housse - Reims2 Cell Biology Unit, Christian de Duve Institute of Cellular Pathology and Université catholique de Louvain - Brussels, Belgium

Contact: [email protected]

The scavenger receptor, low density lipoprotein receptor-related protein (LRP), mediates the uptake and the intracellular cata-bolism of a variety of biological molecules from the pericellular environment. LRP-mediated endocytosis of various proteinases has been reported to prevent the extensive extracellular matrix remodelling involved in human cancer progression. Although low LRP expression at the cell surface is commonly associated to highly aggressive phenotype of various tumor cells, the accu-rate function of LRP during cancer cell invasiveness remains to date poorly explored and highly controversial. Here we present a long-term vector-based short hairpin RNA approach against LRP in human malignant carcinomas and we show that LRP silencing resulted in a drastic inhibition of malignant cell invasion despite a strong stimulation of the pericellular MMP-2 and urokinase pro-teolytic activities. Both two- and three-dimensional cell migrations are decreased by LRP silencing. LRP-silenced carcinoma cells, which are characterized by major cytoskeleton rearrangements, display atypical overspread morphology with a lack of membrane extensions. LRP silencing accelerates cell attachment, inhibits cell-substrate deadhesion, and induces the accumulation of abundant talin-containing focal adhesion complexes at the cell periphery. We conclude that, in addition to its role in ligands bin-ding and endocytosis, LRP regulates the cytoskeleton organization and the adhesive complexes turnover in malignant carcinomas, leading to the most favourable cell attachment and spreading and to efficient cell invasion. Altogether, our data provide new insights about the function of LRP during tumor progression and support the concept that LRP-silencing strategies would be of interest to develop new therapeutic anti-cancer strategies.

Axe 4Contrôle de la dissémination tumorale - Plasticité cellulaire, hétérogénéité tumorale et réaction stromale

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A4.3Search of genomic markers for human colon tumour invasiveness

C. Nicolet1, J.P. Kerckaert2, A. Neuville3, M.P. Gaub1, D. Guenot1

1 Inserm U682 Strasbourg F-672002 Inserm U524 Lille3 Département de Pathologie, CHU Strasbourg


Colon cancers are classified in tumours of MIN phenotype which results from mismatch repair gene alterations and in tumours of CIN phenotype which present mostly aneuploidy. The genetic alte-rations found in CIN tumors are greatly heterogeneous suggesting that the signaling pathways required for colon carcinogenesis could be more complex than currently proposed. This could ac-count for the development of tumors resistant to chemotherapy and for the difficulty to find efficient anticancer agents. Also, the heterogeneity of the cohorts analyzed could explain why despite numerous published studies, no molecular prognostic markers for tumour progression and metastatic invasion nor for sensitivity to chemotherapy are available. In our laboratory, allelotyping 224 CIN colon tumors identified three genetic subtypes in which the overall alteration frequency was classified as either “high, low or very-low”. The well described genomic anomalies targeting chromoso-mes 8,17 and 18 did not discriminate between the subtypes. The presence of all Astler-Coller stages in the three subtypes argues in favour of the existence of several distinct genetic pathways leading to cancer. Tumours in the human colon have been postu-lated to initiate as an adenoma and gain of chromosome 20q arm has been associated to progression from adenoma to carcinoma. From allelotyping data, we observed a clear and gradual increase of 20q alteration with disease development as the frequency of a locus localized on 20q increased from 17% in adenomas to 68% in early stage carcinomas. To evaluate the potential prognostic value of the chromosome 20q status in association with other genomic alterations and possibly define a genomic profile of alterations linked to the tumour pro-gression, a pan-genome CGH array to detect genome deletions and amplifications at a high level of resolution has been perfor-med on 39 CIN left-sided colon tumours. Data showed that a) chromosome 20q is either fully gained or fully normal b) 20q gain already exists at very early stages for 69% of patients c) 20q gain proceeded from two distinct abnormalities: either aneuploidy or polyploidy as evidenced by FISH d) tumours with a 20q gain also have a high alteration frequency whereas normal 20q tumours rather have a very low alteration frequency e) 20q gain is associa-ted to a deletion in 1p36.12, including several genes and among them, E2F2. Real-time PCR and RT-PCR showed that deletion of the E2F2-targeting probes correlated with a decreased gene copy number and messenger expression.In conclusion, complementarity of allelotyping and CGH array showed that CIN colon cancer can result from both normal and altered 20q and that two distinct mechanisms lead to 20q gain. Also, the implication of E2F2 gene deletion in colon cancer will be demonstrated by functional approaches like Gain- and Loss-of-function, in vitro in human colon cell lines and in vivo in human

tumours xenografted into nude mice.

A4.4Tumor-derived membrane microvesicles induce phenotypic changes on fibroblast: implication in cancer progression

D. Castellana1,2, J.M. Freyssinet1, V. Mitolo2, C. Kunzelmann1,3

1 Université Louis Pasteur, Unité INSERM 770, Faculté de Médecine - Strasbourg2 University of Bari, Faculty of Medicine, Institute of Human Anatomy, Policlinico - Bari Italy3 Service d’Hématologie Biologique, CHRU Strasbourg


Interaction between cancer and normal cells are determinant in the establishment of tumor microenvironment favouring cancer progression. Tumor microenvironment is highly enriched in mi-crovesicles (MV) shed from cancer cells, platelets, monocytes and lymphocytes infiltrating the tumor tissue. MV are emerging as actors of cell communication mechanisms. MV are membrane vesicles shed from the plasma membrane of almost all cell types after activation, reflecting the antigenic profile of cells which they originate from. Fibroblasts are associated with tumor cells at all stages of cancer progression.Focusing on fibroblasts implication in cancer progression, we propose a model in which cancer and normal cells communicate each other via microvesicles leading cell activation. We have used tumor-derived microvesicles (TMV) obtained from two prostate cancer cell lines (PC3 and LnCaP) with high and weak metas-tatic potential, respectively, to show the effects of different TMV on normal dermal fibroblasts. These TMV bear several matrix-metalloproteinases (MMP). Interaction of TMV with fibroblasts resulted in an activation of extracellular regulated kinase (Erk1/2) and MMP-2 and MMP-9 expression in a dose-dependent manner. TMV enhance the ability of fibroblasts to expose phosphatidyl-serine at the surface of plasma membrane and increase tissue factor activity, better known as the major trigger of blood coa-gulation reactions. TMV originated from PC3 cells induce a 3-fold migratory efficiency of fibroblasts compared with TMV from LnCaP cells. In addition, TMV treatment decreased actinomycin D-induced apoptosis in fibroblast, implicating the activation of Erk 1/2. More important, MV released by fibroblasts after TMV treat-ment induce migration and invasion of cancer cells, due to factors associated with these MV.These results suggest that MV have the potential to alter normal cell function and increase tumorigenicity, and contribute to a bet-ter understanding of underlying pathogenic mechanisms.

A4.5Activités anti-tumorale et anti-angiogénique d’un cyclopeptide dérivé de la tumstatine

J. Thevenard1, J. Devy1, L. Ramont1, N. Floquet2, A.J.P. Alix2, J.M. Nuzillard3, L. Schneider4, M. Pluot4, F.X. Ma-quart1, S. Brassart-Pasco1, J.C. Monboisse1

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1 CNRS UMR 6198, IFR 53 Biomolécules, Université de Reims-Champagne-Ardenne2 LSSBM, IFR 53 Biomolécules, Université de Reims-Champagne-Ardenne3 CNRS FRE 2715, IFR 53 Biomolécules, Université de Reims-Cham-pagne-Ardenne4 EA 3798, IFR 53 Biomolécules, Université de Reims-Champagne-Ardenne


Certains peptides issus de la protéolyse partielle des macromo-lécules de la matrice extracellulaire, les matrikines, exercent une activité biologique et sont capables de contrôler la progression tumorale, comme les domaines NC1 du collagène de type IV. Nous avons précédemment démontré que le peptide CNYYSNS, correspondant au domaine NC1 [α3 (IV) 185-191] du collagène de type IV de la membrane basale, inhibe la progression tumorale in vivo. La structure 3D de ce peptide natif, particulièrement la séquence YSNS 188-191 formant un coude β, est essentielle à son activité biologique. Le but de cette étude est d’obtenir un pentapeptide, contraint dans sa conformation en coude au niveau des résidus YSNS, plus stable que le peptide natif. Par résonance magnétique nucléaire et simulations de dynamique moléculaire, nous avons démontré que le pentapeptide YSNSG adopte cette conformation. Il exerce des propriétés anti-tumorales in vitro identiques à celles du pepti-de natif CNYYSNS, en inhibant la prolifération et les propriétés in-vasives des cellules de mélanome.In vivo, il diminue la croissance tumorale chez la souris de manière beaucoup plus efficace que le peptide natif, démontrant une meilleure stabilité. Le cyclopeptide exerce également une forte activité anti-angiogénique in vivo. In vitro, il n’a aucun effet sur la prolifération des cellules endothé-liales, et n’induit pas de processus apoptotiques. En revanche, il inhibe la formation de pseudotubes sur Matrigel®, ainsi que la migration cellulaire, en bloquant l’activation de la MT1-MMP, et en modifiant la répartition des intégrines β1 et l’organisation du cytosquelette.

A4.6Le lumicanne recombinant humain promeut l’adhésion des cellules de mélanome humain A375 via la sous unité d’intégrine β1

M.F. D’Onofrio1, S. Brézillon1, T. Baranek2, C. Perreau 1, A. Radwanska3, B. Brassart4, P.J. Roughley5, M. Malicka-Blaszkiewicz3, F.X. Maquart1 et Y. Wegrowski11 Laboratoire de Biochimie Médicale, CNRS UMR 6198, Faculté de Médecine, Université de Reims-Champagne-Ardenne2 Laboratoire d’Immunologie, Virologie et Bactériologie, IPCM, EA 3796, Faculté de Pharmacie, Université de Reims-Champagne-Ar-denne3 Department of Cell Pathology, Institute of Biochemistry and Molecu-lar Biology, University of Wroclaw, Poland4 Laboratoire d’oncopharmacologie, JE 2428, Faculté de Pharmacie, Université de Reims-Champagne-Ardenne5 Genetics Unit, Shriners Hospital for Children and Department of Surgery, McGill University, Montreal, Quebec, Canada


Le lumicanne est une glycoprotéine, appartenant à la famille des SLRP, retrouvée dans la matrice extracellulaire dermique. Au cours de précédents travaux, nous avons montré que le lumi-canne présente des propriétés anti-tumorales (Vuillermoz et al., 2004). Dans la présente étude, nous montrons que le lumicanne diminue la migration des cellules de mélanome humain A375 ainsi que leur invasion au travers d’une membrane basale artifi-cielle de Matrigel®. Ce phénomène n’est pas dû à un effet apop-totique induit par le lumicanne mais à son habilité à augmenter l’adhésion cellulaire. Afin d’élucider les propriétés anti-invasives du lumicanne, nous avons orienté notre étude sur l’identification du récepteur du lumicanne exprimé par les cellules A375 ainsi que les mécanismes intracellulaires mis en jeu. L’adhésion des cellules A375 au lumicanne est dose-dépendante et requiert la présence des cations divalents Mg2+ et Mn2+. A l’aide d’un panel d’anticorps monoclonaux anti-intégrines, nous avons mon-tré que les cellules A375 se lient au lumicanne via la sous unité d’intégrine β1. L’utilisation de la rhodocétine, un inhibiteur sélectif dirigé contre la sous unité d’intégrine α2, suggère l’implication de celle-ci. Comparé à d’autres substrats de la matrice extracellu-laire, le lumicanne conduit à la formation de regroupements anor-maux de la sous unité d’intégrine β1 ainsi qu’à une diminution du nombre de complexes d’adhésion focale. Nous avons également observé, en présence de lumicanne, une organisation anormale du réseau d’actine du cytosquelette. Ces résultats suggèrent que le lumicanne est capable d’augmenter l’adhésion et de diminuer la migration des cellules A375 au travers d’intégrines contenant la sous unité β1 et pourrait de ce fait contribuer à l’inhibition du phénotype migratoire de ces cellules.

A4.7Expression du lumicanne, un petit protéoglycanne à activité anti-tumorale dans le mélanome malin

S. Brézillon1, L. Venteo2, L. Ramont1, M.F. D’Onofrio1, C. Perreau1, M. Pluot2, F.X. Maquart1, and Y Wegrowski11 Laboratoire de Biochimie et de Biologie Moléculaire, CNRS UMR 6198, IFR 53-Biomolécules, Faculté de Médecine, Université de Reims Champagne-Ardenne2 Laboratoire d’Anatomo-HistoPathologie, EA3306, IFR 53-Biomo-lécules, Faculté de Médecine, Université de Reims Champagne- Ardenne


Si la présence du lumicanne et de la décorine dans la peau et leur influence sur l’intégrité du derme sont bien établies, il n’y a pas de données sur la distribution du lumicanne et de la décorine dans des pathologies dermiques, en particulier dans le mélanome ma-lin humain. Notre étude avait donc pour but d’analyser la distribu-tion immunohistochimique du lumicanne et de la décorine dans le mélanome malin humain mais aussi dans des lésions dermiques non malignes telles que la mélanose de Dubreuilh. L’expression du lumicanne et de la décorine a été étudiée par immunohistochimie dans 34 mélanomes malins, 12 mélanoses de Dubreuilh et 4 mélanomes métastatiques cutanés.

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Nos données indiquent que le lumicanne et la décorine sont localisés dans le derme et le stroma péritumoral de mélanome malin mais pas dans les cellules tumorales. Dans le derme sain, distant de la tumeur, le ratio d’expression protéique lumicanne sur décorine diminue avec l’âge croissant des patients (p< 0.01) confirmant des résultats obtenus au niveau des transcrits. Dans le derme sain, distant de la tumeur, le ratio croissant d’expression protéique lumicanne sur décorine est inversément corrélé à la prolifération des cellules tumorales (p=0.035). La comparaison des mélanomes superficiels par rapport aux mélanomes nodu-laires montre une surexpression du lumicanne dans les types nodulaires. Dans le stroma péritumoral, le niveau d’expression du lumicanne, mais pas de la décorine, diminue significativement (p=0.016) avec le niveau croissant de Clark.De plus, les analyses in vitro d’immunocytochimie et de RT-PCR confirment que les fibroblastes dermiques, et pas les cellules tu-morales, sont responsables de la synthèse du lumicanne et de la décorine dans la peau. Ces résultats suggèrent que le lumicanne régule la progression verticale du mélanome malin humain.

RéférenceBrézillon S, Venteo L, Ramont L, D’Onofrio MF, Perreau C, Pluot M,

Maquart F-X, Wegrowski Y. Clin. Exp. Derm. 2007 ; 32 : 405-416

A4.8Intérêt pronostique de la mutation V600E de BRAF dans les cancers colorectaux sporadiques

L. Barault 1,2, C. Chapusot 1,2, M. Cortet 2, L. Martin 1, P. Rat 3, D. Le Corre 4, P. Laurent-Puig 4, J Faivre 2, F. Piard 1,2 1 Service d’Anatomie Pathologique, CHU Dijon2 INSERM U866 – Lipides, Nutrition, Cancer – Equipe n°5 ; Registre Bourguignon des Cancers Digestifs - Dijon 3 Service de chirurgie viscérale – CHU Dijon4 U775 Bases moléculaires de la réponse aux xénobiotiques, Paris VContact : [email protected]

BRAF est un membre de la famille des gènes RAF. Il code une kinase impliquée dans la voie MAP kinase dont le rôle est d’as-surer la régulation de la croissance, de la différenciation et de l’apoptose cellulaires. Une mutation activatrice du gène BRAF a récemment été décrite dans près de la moitié des cancers colo-rectaux sporadiques MSI-H, mais dans une très faible proportion de cancers stables (MSS). Une seule étude suggère une relation entre la substitution V600E de BRAF et la survie chez des patients présentant un cancer colorectal stable. Le but de notre travail a été de préciser la valeur pronostique de cette mutation sur une base de population.Nous avons inclus 523 patients opérés d’un adénocarcinome colorectal dans tout le département de Côte d’Or entre 1998 et 2001. L’instabilité microsatellite a été recherchée par PCR au ni-veau de l’ADN tumoral et sain par analyse de 11 microsatellites. La mutation de BRAF a été déterminée par allélotypage par PCR en temps réel. La présence de la mutation V600E de BRAF a été confrontée aux données anatomo-cliniques et moléculaires, et à la survie des patients. Au total, 64 tumeurs (12,2%) présentaient la mutation de BRAF En analyse univariée, cette mutation était

significativement associée à l’âge des patients, au sexe féminin, à la localisation proximale, et au phénotype MSI-H. Il n’y avait pas de différence significative de survie chez les patients MSI-H mu-tés ou non mutés pour BRAF (73 vs 78% à 3 ans). En revanche, les patients MSS sans mutation de BRAF (N=439) avaient une survie significativement meilleure (63 vs 40% à 3 ans) que les patients MSS avec la mutation de BRAF (N=22). En analyse uni variée le hazard ratio était de 0,42 (0,24-0,76). Après ajustement sur l’âge, le sexe, la localisation et le stade tumoral, cette diffé-rence n’était plus significative.La poursuite de ces travaux est nécessaire pour savoir si la muta-tion de BRAF est un facteur pronostique indépendant du stade.

A4.9L’hyperphosphorylation de FAK (Kinase des points d’adhérence) provoque sa translocation des points d’adhérence vers les renflements membranaires

A. Hamadi, T.B. Deramaudt, G. Fuhrmann, K. Takeda et P. RondéUMR CNRS 7175, Institut Gilbert Laustriat, CNRS/Université Louis Pasteur de Strasbourg, Faculté de Pharmacie – Illkirch


La migration cellulaire requiert la formation de protrusions à l’avant de la cellule, puis la formation des points d’adhérence (structures d’appui et de signalisation) et enfin la dissociation de ces points d’adhérence. Ces étapes sont nécessaires pour l’inva-sion et la métastase des cellules tumorales. La phosphorylation des résidus Tyrosine des protéines impliquées dans les points d’adhérence joue un rôle primordial dans leur dissociation, mais les mécanismes moléculaires qui contrôlent cette dissociation sont encore mal connus. La FAK (Kinase des points d’adhérence), l’une des protéines majeures des points d’adhérence, est activée suite à l’engagement des intégrines à la matrice extra-cellulaire. Nous avons montré précédemment que la phosphorylation de FAK régulait le turn-over des points d’adhérence par un mécanisme impliquant le temps de résidence de FAK dans ces structures. Ici, nous avons étudié la relation entre la dynamique de la FAK et son état de phosphorylation. Pour cela, nous avons utilisé une nou-velle approche qui consiste à utiliser une construction génétique fluorescente (Src Indicator) qui indique dans les cellules tumora-les astrocytaires vivantes, l’effet de la phosphorylation en temps réel des Tyrosines de FAK. Le traitement des cellules exprimant l’indicateur de phosphorylation da la FAK par le pervanadate in-duit une hyperphosphorylation de la FAK. Par vidéo-microscopie, nous avons observé la dissociation des points d’adhérence et l’apparition de nouveaux renflements membranaires. L’analyse cinétique a montré que ces deux événements étaient corrélés dans le temps. Cet effet été annulé en présence de PP2, un inhi-biteur spécifique de Src. Nos résultats montrent que l’hyperphos-phorylation de FAK permet la synchronisation des processus de désassemblage des points d’adhérence avec une activité mem-branaire nécessaire à l’évaluation de la rigidité du substrat.

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A4.10Recherche de microdélétions du chromosome Y chez des patients ayant demandé l’autoconservation de leur spermatozoïdes avant traitement de cancer testiculaire

V. Roze, O. Blagosklonov, M.C.Clavequin, J.L. BressonService de Génétique, Histologie, Biologie du Développement et de la Reproduction - CHU St Jacques – Besançon


Le cancer testiculaire est actuellement la plus fréquente indica-tion d’autoconservation du sperme avant traitement. Récemment une étude multicentrique a mis en évidence une association pos-sible entre une délétion partielle de type ‘gr/gr’ du locus AZFc (incidence de 2.3%) et une augmentation du risque de survenue de cancer testiculaire (Nathanson et col, 2005).Chez 37 hommes âgés de 21 à 44 ans, ayant eu recours à une autoconservation avant traitement pour séminome (n=14) ou pour une tumeur testiculaire non-séminomateuse (n=23) et ayant décidé d’arrêter la conservation et donné leur accord au CECOS de Besançon pour une utilisation de leurs prélèvements à des fins scientifiques, nous avons procédé de façon anonyme à une recherche de microdélétions des trois locus AZF et de délétions partielles du locus AZFc. L’ADN constitutionnel a été obtenu à partir d’échantillons de sperme conservés dans l’azote liquide. Au moment de l’autoconservation 16 patients présentaient une concentration spermatique dans les limites de la normale (>20 millions/ml), 17 - une oligozoospermie modéré (de 5 à 20millions de spz/ml) et 4 présentaient une oligozoospermie sévère (< à 5 millions/ml).Nous n’avons observé aucune délétion complète des locus AZF dans notre groupe ni de délétion partielle de type b2-b3 ; par contre un patient sur les 37 présentait une microdélétion partielle de type ‘gr/gr’ (2.7%).La recherche quasi-systématique de microdélétions complè-tes des locus AZFa, AZFb et AZFc dans l’infertilité masculine a conforté l’hypothèse de leur implication dans la spermatogenèse ; par contre, la signification de délétions partielles reste un sujet d’actualité. Ce résultat préliminaire en accord avec les conclu-sions de Nathanson et col., est un argument pour poursuivre dans ce sens la recherche de signification de ce type de remaniements

moléculaires dans la pathologie testiculaire.

A4.11Rôle de la Stromelysine 3 dans la progression tumorale

S. Blaise, M.C. RioINSERM U596 / CNRS UMR7104 - Département de pathologies moléculaires - Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire - Illkirch


De nombreuses études ont montré que la transformation des cellules épithéliales est la condition sine qua non pour le dé-veloppement des carcinomes. Cependant, la nature de l’envi-ronnement (stroma) est un élément crucial pour la progression tumorale. Cela suggère qu’une approche thérapeutique ciblant le microenvironnement telle que l’utilisation d’inhibiteurs syn-thétiques de protéases pourrait être envisagée. Cependant, ces derniers ont montré des effets limités voire néfastes lors des essais cliniques de phases III. Cet échec a conduit à orienter les recherches sur la compréhension de la biologie du compartiment stromal et notamment le lien entre l’invasion précoce des cellules cancéreuses et leur microenvironnement. Dans ce contexte, le laboratoire étudie le rôle la métalloprotease 11 (MMP11), encore appelée stromelysine-3 (ST3) dans les processus physiologiques et physiopathologiques.La présence d’une cellule cancéreuse dans le comportement stromal favorise une forte expression et une sécrétion de ST3 par des fibroblastes adjacents. Sur le plan clinique, l’expression de la ST3 est synonyme d’invasion tumorale et le pronostic pour le patient est mauvais. L’utilisation de différents modèles tumoraux murins a pu mettre en évidence que la ST3 est un partenaire essentiel dans la progression tumorale et que son action est très précoce. A l’heure actuelle, de nombreuses études se sont pen-chées sur les contacts entre la cellule cancéreuse et les différents constituants mésenchymateux tel que les cellules endothéliales, les fibroblastes et les cellules inflammatoires. De façon surpre-nante, l’interaction avec les adipocytes a été très peu étudiée. Il a été montré dans le laboratoire que les cellules cancéreuses inva-sives induisaient la synthèse de ST3 par les adipocytes adjacents. Ce travail a pour objectif de comprendre le rôle que jouent les adipocytes et la ST3 dans la progression tumorale. Nos résultats suggèrent que la libération de ST3 par les préadipocytes et les adipocytes pourrait favoriser leur différenciation et leur dédiffé-renciation en fibroblastes plutôt qu’en adipocytes. Nous avons confirmé cette hypothèse sur des souris déficientes pour le gène de la ST3 (souris KO ST3). Ces souris, comparées à des souris normales, présentent un tissu adipeux beaucoup plus important. L’analyse histologique a pu mettre en évidence que les adipocytes chez ces souris KO ST3 sont hypertrophiés par rapport à ceux des souris témoins, indiquant un effet régulateur négatif de l’adi-pogénèse pour ST3. Cet effet pourrait contribuer à la survie de la cellule cancéreuse dans le compartiment stromal et favoriser ainsi la progression tumorale.

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A5.1Effet protecteur de dérivés coumariniques sur le stress oxydant induit par la doxorubicine

A. Beillerot*, J.C. Rodriguez*, G. Kirsch, D. Bagrel.* Contribution égaleLaboratoire d’Ingénierie Moléculaire et Biochimie Pharmacologique, FR CNRS 2843, Université Paul Verlaine - Metz


L’utilisation de la doxorubicine (DOX) dans le traitement des tu-meurs solides est limitée par l’apparition d’effets secondaires importants, dont une cardiotoxicité consécutive à la génération d’un stress oxydant. Face à cette problématique, l’objectif de ce travail était d’identifier des dérivés coumariniques susceptibles de présenter une activité antioxydante protectrice, sans altérer l’efficacité anticancéreuse de la DOX. A cette fin, une série de dix huit dérivés coumariniques ont été synthétisés au laboratoire (1,2). Dans un premier temps, le pouvoir antioxydant de ces composés a été évalué, d’une part, in vitro (par mesure de leur capacité à réduire le fer ferrique) et, d’autre part, sur des cellules d’adénocarcinome mammaire humain MCF7 (par évaluation de leur action sur la génération d’espèces réactives de l’oxygène -ERO- dans les cultures). Comme attendu, les composés les plus actifs présentent une fonction ortho di-hydroxylée en position 7,8 sur le noyau coumarinique. La 4-méthyl-7,8-dihydroxycoumarine a été choisie pour la deuxième partie de l’étude en raison de son pouvoir antioxydant très important et de sa faible cytotoxicité. Ce dérivé s’est révélé intéressant car il diminue la production d’ERO générée par un traitement par la doxorubicine, sans altérer la

toxicité de cette anthracycline sur les cellules cancéreuses MCF7. Toutefois, de façon surprenante, ce composé n’a aucun effet sur la déplétion de glutathion réduit provoqué par la DOX. Cette étude a permis d’identifier des dérivés coumariniques inté-ressants dans l’objectif poursuivi. Elle sera complétée par l’étude des effets de ces composés sur des cellules épithéliales mam-maires non cancéreuses et par l’élaboration de nouvelles structu-res coumariniques substituées en vue d’une meilleure pénétration cellulaire.

Références1) J.C. Rodriguez-Dominguez, G.Kirsch, Synthesis, PSP66, 1898-1900, 20062) J.C Rodriguez-Dominguez, G.Kirsch, Tetrahedron Letters, 47, 3279-3281, 2006

A5.2Nouvelle famille de molécules inhibitrices de l’AP-N ou CD13, enzyme intervenant dans le processus d’angiogénèse des tumeurs cancéreuses

C. Charrier, S. Albrecht, A. Defoin, P. Bisseret and C. TarnusLaboratoire de Chimie Organique & Bioorganique –UMR7015 - Ecole Nationale Supérieure de Chimie - Mulhouse


L’angiogenèse est un processus très étudié dans la recherche contre le cancer. C’est une voie qui devrait permettre de lutter

Axe 5Compréhension et maîtrise des échecs thérapeutiques

A4.12Infra-red micro spectral imaging of xenografted colon tumors

R. Wolthuis1, A. Travo1, P. Jeannesson1, D. Guénot2, M.P. Gaub2, J. Abecassis3, M. Manfait1, O. Piot1

1 MéDIAN CNRS UMR6142, UFR Pharmacie, Reims2 INSERM U682, Strasbourg3 Centre Paul Strauss, Strasbourg


Infrared spectral imaging is increasingly applied in the biomedi-cal sciences. The method is non-destructive and gives a wealth of information on chemical composition and molecular structure of samples with a spatial resolution of 10 µm. Because the full chemical composition is targeted, it offers a different viewpoint than genetic and (immuno-)histologogical methods. As such it is a valuable addition to the current methodology.To develop IR spectroscopy for diagnostic and prognostic purpo-

ses we are searching for spectroscopic markers to classify pre-malignant, pre-invasive and early stage tumours. Despite all research efforts for genetic or molecular prognostic markers, staging based on tumour invasion is still the gold standard for staging colorectal carcinomas. In this study we measured FT-IR spectral images on thin sections of formalin-fixed paraffin embedded xenografts of human colon tumours. Xenografting offers the advantage of “pure” tumor tissue and identical growth conditions for all tumors, partly eliminating biological variation. The main objectives of the presented study are 1/ to establish histological models based on infrared signatures of the tissue and 2/ to develop, from spectral data, a classification of tumour areas versus non-tumour areas. For these investigations, an effective data pre-processing has been set up to eliminate interferences (paraffin, ZnSe substrates used for spectral imaging, ambient wa-ter vapor). Infrared micro-images were compared with HE stained sections, and spectral signals associated to tumour areas were correlated with KI-67 scores.

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contre la progression tumorale. Le CD13 est une aminopeptidase, surexprimé sur les cellules endothéliales angiogéniques. Elle est considérée aujourd’hui comme un régulateur important de la morphogenèse endothéliale. Ses inhibiteurs sont actifs dans des modèles classiques d’angiogenèse. Les premiers essais réalisés avec des composés décrits dans la littérature (bestatine) mon-trent que cette approche est prometteuse. Une nouvelle famille de composés organiques très puissants a été synthétisée et évaluée in vitro sur le CD13 purifiée au sein de notre laboratoire. Ce sont des composés de type amino-benzosuberone, dont la plupart des valeurs de Ki sont nM, le meilleur inhibiteur possèdant un Ki de 60 pM. Une structure générique est présentée, nous avons déposé un brevet («INHIBITEUR D’APN» 3 nov 2006 -FR 06.09615).NHROR 1R 2Amino- benzosuberone

Nos inhibiteurs empêchent l’organisation des cellules endothélia-les en tubes capillaires lorsqu’elles sont déposées sur une ma-trice artificielle de type Matrigel. Les concentrations utilisées sont bien inférieures à la dose cytotoxique (CD

50) déterminée aupara-

vant sur cette même lignée cellulaire . Dans ce modèle les tubes capillaires sont pratiquement inexistants en présence d’inhibiteur de CD13, ceux qui se forment sont d’une finesse extrême. Nous allons entreprendre les premiers essais in vivo sur l’animal afin de prouver l’intérêt thérapeutique de cette nouvelle classe de molécules.En parallèle de ces travaux, nous allons utiliser les Inhibiteurs du CD13 pour les radiothérapies basées sur la Capture de Neutrons par le Bore (BNCT). Nous allons modifier nos inhibiteurs avec des groupements de type carboranyle ou cages de Bore.

NHR

B10H10R

O

Les neutrons captés par les atomes Bore, concentrés sélective-ment par le CD13 inhibé, produira lors de la réaction nucléaire qui s’ensuit un rayonnement α, destructeur pour la cellule tumorale.

A5.3Sensibilisation à la chimiothérapie par traitement de glioblastomes humains avec un antagoniste de l’intégrine α5β1

E. Martinkova1, A. Maglott1, M. Stiborova2, S. Martin1 et M. Dontenwill11 Institut Gilbert Laustriat, UMR7175 CNRS, ULP, Département Phar-macologie et Physicochimie, Faculté de Pharmacie - Illkirch2 Département de Biochimie, Charles University, Faculté de Sciences - Prague, République Tchèque


L’intégrine α5β1 apparaît depuis peu comme une cible théra-peutique potentielle dans le traitement des tumeurs cérébrales de type glioblastomes. Nous avons pu montrer qu’un antagoniste non peptidique de cette intégrine, le SJ749, était capable d’in-hiber in vitro la prolifération de lignées cellulaires de glioblasto-mes humains en bloquant le cycle cellulaire en phase G0/G1. La clonogénicité des cellules est également réduite en présence de cet antagoniste en relation avec le taux d’expression de la sous-unité α5 (Maglott et al, Cancer Research, 2006) validant ainsi la cible proposée. De nombreux travaux montrent que l’adhérence de cellules tumorales à la matrice extracellulaire par l’intermé-diaire des intégrines était impliquée dans la chimiorésistance de ces cellules. Notre projet veut explorer les conséquences d’une inhibition de l’intégrine α5β1 par le SJ749 sur la sensibilité des cellules tumorales à un agent chimiothérapeutique, l’ellipticine. Nos résultats montrent que la combinaison des deux drogues inhibe de façon significativement plus importante la prolifération des cellules tumorales que chacune des deux drogues seules. De plus, un effet soutenu de blocage du cycle cellulaire en G0/G1 par la combinaison des deux drogues aboutit à la mort cellulaire par apoptose dans des conditions où chaque drogue seule est inefficace. L’exploration des mécanismes moléculaires mis en jeu révèle un effet inverse des deux drogues sur l’expression de p53. Ces résultats confirment des travaux récents suggérant que l’inhibition de p53 sensibilise spécifiquement les glioblastomes à la chimiothérapie. Nos travaux montrent pour la première fois que l’inhibition des fonctions de l’intégrine α5β1 par un antagoniste spécifique, le SJ749, sensibilise les glioblastomes à une chimio-thérapie et mettent en évidence un mode d’action original faisant intervenir p53. Ils ouvrent également des perspectives thérapeu-tiques innovantes pour traiter les glioblastomes qui sont à l’heure actuelle largement réfractaires aux traitements classiques.

A5.4Synthèse et évaluation biologique de thiénopyrimidinones comme inhibiteurs des phosphatases CDC25

A. Begouin,* E. Viry,* S. Hesse, D. Bagrel et G. Kirsch* Contribution équivalenteLaboratoire d’Ingénierie Moléculaire et Biochimie Pharmacologi-que, FR CNRS 2843, Université Paul Verlaine-Metz


Les motifs thiénopyrimidiniques se retrouvent dans de nom-breuses molécules présentant des activités biologiques variées (analgésiques, anti-inflammatoires, anti-angiogéniques…) ce qui explique l’intérêt croissant qui leur est porté. Une synthèse de tels composés a été réalisée dans notre laboratoire par couplages pal-lado-catalysés à partir de 2- ou 3-bromothiophènes porteurs d’un groupement ester en a du brome et de dérivés de la 2-amino-pyridine.1 Une réaction de couplage C-N suivie d’une cyclisation intramoléculaire impliquant l’atome d’azote du cycle pyridinique aboutit à la formation de thiénopyrimidinones. La thématique de recherche du laboratoire étant orientée vers la caractérisation de molécules anticancéreuses potentielles, les 11 composés de cette série ont été évalués pour leurs capacités

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inhibitrices de l’isoforme A des phosphatases CDC25. En effet, ces phosphatases sont des enzymes clés qui interviennent dans la progression du cycle cellulaire en régulant l’activité des kina-ses dépendantes des cyclines par déphosphorylation. Les CDC25 sont des cibles thérapeutiques intéressantes car leur surexpres-sion, notamment dans le cancer du sein, a pu être corrélée au développement de résistance à certains agents anticancéreux ainsi qu’à un mauvais pronostic. Un premier criblage in vitro en présence de CDC25 A purifiée et de 100 µM de composé a mis en évidence l’effet inhibiteur de 3 molécules parmi les 11 testées. Le composé 8 ci-dessous a ensuite été identifié comme étant le plus puissant des inhibiteurs testés par la réalisation de courbes effet-dose. Des tests de cytotoxicité sont actuellement en cours sur la lignée d’adénocarcinome mammaire humain MCF-7 ainsi que sur la lignée épithéliale mammaire non cancéreuse hTERT-HME1 afin d’évaluer les effets cellulaires de ce composé.

S

NC

MeS

NN

O

8

Référence1 A. Begouin, S. Hesse, M. -J. R. P. Queiroz, G. Kirsch Synthesis

2006, 2794

A5.5Le variant caspases-3s inhibe l’apoptose par interaction avec la caspase-3

F. Végran1, R. Boidot1, A. Hamman2, A. Bouchot3 et S. Lizard-Nacol11Laboratoire de Génétique Moléculaire – CGFL – Dijon2 Plate-forme de Cytométrie – IFR 100 – Faculté de Médecine - Dijon3 Plate-forme de microscopie – IFR 100 – Faculté de Médecine - Dijon


La Caspase-3 est une protéine pro-apoptotique. Son variant Cas-pase-3s a un rôle antagoniste et le mécanisme par lequel il inhibe l’apoptose est encore inconnu.Afin de préciser ce mécanisme, la lignée cancéreuse mammaire MCF-7, déficiente en Caspase-3 et –3s, a été transfectée à la Caspase-3 ou la Caspase-3s. Une co-transfection des deux va-riants a aussi été réalisée. Les effets de traitements à l’étoposide, au méthotrexate et à la vinblastine ont été observés. Les observa-tions d’apoptose par cytométrie en flux montrent que l’étoposide et le méthotrexate induisent l’apoptose des cellules transfectées à la Caspase-3 alors que peu d’effet est observé dans les cellules sauvages ou transfectées à la Caspase-3s. Nos résultats ne mon-trent pas d’induction d’apoptose dans les cellules transfectées par rapport au cellules sauvages. De façon intéressante, la co-

transfection induit une très forte inhibition de l’apoptose induite par l’étoposide et le méthotrexate. Ces résultats sont confirmés par une forte inhibition de l’activation de la pro-caspase-3 ainsi que par une nette diminution de son activité. De plus, nos ré-sultats indiquent que la présence de la Caspase-3s induit une modification de localisation de la Caspase-3 dans les cellules traitées à l’étoposide ou au méthotrexate. Ce phénomène semble s’expliquer par une interaction physique entre les deux protéines. En effet, la Caspase-3 co-immunoprécipite avec la Caspase-3s. Nos résultats mettent donc en évidence que le mécanisme d’in-hibition de l’apoptose par Caspase-3s nécessite une interaction avec la Caspase-3.

A5.6La Survivine-3B réduit l’apoptose par inhibition des caspases

R. Boidot1,2, F. Végran1,2, A. Hamman2, A. Sequeira-Le-grand2, E. Solary3, S. Lizard-Nacol11 Laboratoire de Génétique Moléculaire - Centre GF Leclerc - Dijon2 Plateforme de cytométrie – STIC Santé – Faculté de Médecine - Dijon3 INSERM U866 - Faculté de Médecine - Dijon


La Survivine-3B est la seule isoforme de Survivine dont les fonc-tions dans l’apoptose sont encore inconnues. La Survivine-3B couplée à l’YFP est transfectée stablement dans la lignée mammaire transformée HBL100. Les cellules sont en-suite traitées par trois poisons du fuseau : docétaxel, vinblastine et vincristine. Après 48h, l’apoptose est estimée par cytométrie en flux, le clivage des Caspases-3, -8 et -10 est étudié par western blot et les possibles interactions entre ces Caspases et la Survi-vine-3B sont analysées par co-immunoprécipitation. Après 48h de traitement, la sur-expression de Survivine-3B ré-duit fortement l’apoptose induite par ces poisons par rapport à la lignée parentale. La Survivine-3B inhibe fortement le clivage des Caspases-3 et -8 induit par la vinblastine, alors qu’aucun effet n’est observé pour le docétaxel et la vincristine. Le clivage de la Caspase-10 est fortement diminué par la Survivine-3B lors d’une exposition à la vinblastine, et faiblement diminué avec le docétaxel et la vincristine. La co-immunoprécipitation a montré une interaction entre la Survivine-3B et 1) les Caspases-3 et -8 en présence de docétaxel, 2) la Caspase-8 lors d’une exposition à la vinblastine, 3) la Caspase-10 lors d’un traitement à la vincris-tine. Nos résultats indiquent que la Survivine-3B inhibe l’apoptose induite par les poisons du fuseau et que le mécanisme d’inhibi-tion est dépendant du traitement appliqué. Ces résultats vont être confirmés par ARN interférence et par des tests clonogéniques.

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A5.7Identification d’un marqueur polypeptidique bipartite de la transformation maligne des tumeurs cartilagineuses humaines : un outil potentiel pour le diagnostic précoce des chondrosarcomes

J.B. Vincourt 1, L. Aïssi 1, F. Lionneton 1, J.M. Vignaud 2, F. Sirveaux 3, P. Netter 1, F. Guillemin 4, D. Mainard 1 et J. Magdalou 1.1 UMR 7561 CNRS-UHP-Nancy I - Vandœuvre lès Nancy2 Service d’anatomie pathologique du CHU de Nancy3 Clinique de traumatologie Nancy4 Centre Alexis Vautrin, CRAN UMR 7039 CNRS-INPL-UHP - Van-dœuvre-lès-Nancy


Les chondrocytes constituent un type cellulaire particulièrement inapte à la prolifération, dont la principale activité métabolique consiste à la synthèse de l’abondante matrice extracellulaire constituant le cartilage. Leurs précurseurs mésenchymateux peu-vent dégénérer en tumeurs cartilagineuses, en général bénignes (chondromes) et ne nécessitant pas de traitement particulier. Ce-pendant, 1% de ces tumeurs évoluent de manière cancéreuse particulièrement agressive (chondrosarcome). Le traitement clinique des chondrosarcomes est limité par deux contraintes : (i) la difficulté de diagnostic, en raison des similitudes morpho-logiques qu’ils présentent avec les chondromes, (ii) l’inefficacité des traitements chimiothérapeutiques et radiologiques, ne lais-sant souvent comme solution que l’amputation chirurgicale des membres affectés.Dans le but d’identifier des marqueurs moléculaires permettant le diagnostic précoce des chondrosarcomes, nous avons déve-loppé un programme d’analyse protéomique comparative des chondromes et chondrosarcomes. Cette étude a mis en évidence 2 polypeptides dont les degrés d’expression varient inversément au cours du processus de différenciation cancéreuse, que nous nommons respectivement C1CP et C2CP. L’analyse semi-quan-titative de leurs expressions dans les tissus tumoraux par wes-tern blot montre que C2CP est exprimé spécifiquement par les tumeurs conservant un phénotype chondrocytaire. Inversément, C1CP n’est exprimé que par les chondrosarcomes. Ainsi, le rapport des expressions relatives de C2CP et C1CP diminue de manière dramatique au cours de la transformation maligne. Nous travaillons actuellement à la validation de nos observations sur une population de tumeurs plus importante et à l’élaboration d’un outil de diagnostic compatible avec les méthodes classiquement utilisées dans les laboratoires d’anatomopathologie. Etude soutenue par l’ARC et la Ligue Régionale contre le Cancer

A5.8Adipocyte-fatty acid binding protein (A-FABP), a potential biomarker of bladder transitional cell carcinoma progression, is differentially regulated by Peroxisome Proliferator-Activated Receptor gamma (PPARγ) in bladder cancer cell lines

G. Boiteux1, I. Lascombe1, H. Bittard1,2 and S. Fauconnet1,2

1 EA 3181 « Carcinogenèse épithéliale : marqueurs prédictifs et pro-nostiques », IFR133 - Laboratoire de Biologie Cellulaire et Molécu-laire - UFR Sciences Médicales et Pharmaceutiques – Besançon2 Service d’Urologie et d’Andrologie, CHU St Jacques - Besançon


Transitional cell carcinoma (TCC) of the bladder ranks as the se-cond most common malignancy of the genitourinary tract. The clinical course of superficial TCC is characterized by a high risk of recurrence and a propensity to progress in grade or stage. Current investigations are targeted at identifying molecular markers for prognosis and metastatic potential of bladder cancer. Few studies provide evidence that loss of adipocyte-fatty acid binding protein (A-FABP) expression is associated with progression of human bladder TCC and suggest that it could be a putative marker of progression of the disease. A-FABP is involved in cell differen-tiation as peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ). PPARγ belongs to the nuclear receptor superfamily and some results indicate a negative association between PPARγ ex-pression and malignancy in bladder cancer cells. This receptor can be activated by a number of ligands either natural such as 15-deoxy-delta-12,14-prostaglandin J2, or synthetic such as an-tidiabetic thiazolidinediones (TZD) which exhibit antiproliferative, differentiation and apoptotic activities on different cancer cells. A-FABP is known to be regulated by PPARλ) in preadipocytes via a PPRE sequence located in the promoter. Our aim was to inves-tigate whether PPARγ agonists could regulate the expression of A-FABP in bladder cancer.We report for the first time that in two different human bladder cancer cell lines, RT4 (derived from grade I tumor) and T24 (de-rived from grade III tumor), A-FABP (mRNA and protein) is diffe-rentially up-regulated by PPARγ natural and synthetic agonists. Indeed, A-FABP expression is only increased in T24 cells. The ab-sence of effect of PPARγ activation on A-FABP expression in RT4 cell line seems to be due to the absence of the PPARγ co-activa-tor-1 (PGC-1). These data suggest that the TZD may provide an exciting novel therapeutic strategy by inducing A-FABP expression in order to inhibit bladder cancer progression.

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A5.9Disruption of ERα signalling pathway by PPARγ agonists in hormone-dependent breast cancer cell lines

J. Lecomte, S. Mazerbourg, I. Grillier-Vuissoz, S. FlamentEA 3442 Aspects cellulaires et moléculaires de la reproduction et du développement, Nancy-Université, Université Henri Poincaré-Nancy I, Faculté des Sciences - Vandoeuvre-lès-NancyContact: [email protected]

Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ) is a nuclear receptor that can be activated by natural ligands such as 15-deoxy-delta(12,14)-prostaglandin J2 (15d-PGJ(2)) as well as synthetic drugs such as thiazolidinediones. The treatment of human breast cancer cell lines with PPARγ agonists is known to have antiproliferative effects but the role of PPARγ activation in the process and the mechanism of action remain unclear. In the present study, we investigated the effects of four PPARγ agonists, Rosiglitazone (RGZ), Ciglitazone (CGZ), Troglitazone (TGZ) and the natural agonist 15d-PGJ(2), on estrogen receptor alpha (ERα) si-gnalling pathway in two hormone-dependent breast cancer cell lines, MCF-7 and ZR-75-1. In both of them, TGZ, CGZ and 15d-PGJ(2) induced an inhibition of ERα signalling associated with the degradation of ERα. ZR-75-1 cells were more sensitive than MCF-7 cells to these compounds. RGZ, the more potent activator of PPARγ had no effect on ERα proteolysis. The results were confirmed by immunocytochemistry using anti-ERα antibodies. Interestingly, in contrast to TGZ, CGZ and 15d-PGJ(2), RGZ had no effect on cell proliferation of both cell lines. TGZ-induced proteo-lysis of ERα did not occur in presence of the proteasome inhibitor MG132. 9-cis retinoic acid never potentiated the proteasomal degradation of ERα. Furthermore, T0070907, BADGE and GW 9662, three PPARγ antagonists, did not block the proteolysis of ERα in MCF-7 and ZR-75-1 cells treated with TGZ, indicating a PPARγ-independent mechanism. The use of thiazolidinedione de-rivatives able to trigger ERα degradation by a PPARγ-independent pathway could be an interesting tool for breast cancer therapy.

A5.10Intérêt des biomarqueurs sériques pour la détection des cancers mammaires : étude prospective

C. Mathelin 1,2, A. Cromer 1, C. Wendling 1, C. Tomasetto1, M.C. Rio 1

1 Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire - Il-lkirch2 Hôpitaux Universitaires de Strasbourg


L’objectif de notre étude prospective a été la mise en évidence de protéines circulantes dans le sérum de patientes atteintes d’un cancer mammaire, permettant l’identification du cancer à différents stades. Matériel et méthodes. L’étude a été menée après accord du CCPPRB d’Alsace. Les analyses protéomiques ont été réalisées au moyen d’un SELDI-TOF MS (Surface Enhanced Laser Desorption Ionisation-Time Of Flight Mass Spectrometry, Ciphergen). Qua-

tre-vingt neuf patientes ont été incluses (49 cancers à différents stades et 40 contrôles, 27 témoins et 13 pathologies bénignes du sein). Les prélèvements de sang ont été obtenus avant le début des thérapeutiques. Des échantillons dilués de sérum (50µl) ont été appliqués sur des barrettes IMAC30 (Immobilized metal affi-nity capture) activées avec 50 mmol/L de NiSO4. Deux analyses indépendantes ont été faites avec 2 calibrations différentes (All in one Protein Standard), respectivement focalisées à 4300 et 8500 Da, permettant l’étude des protéines dont le poids moléculaire était de 3400 à 7000 Da pour la première focalisation et de 7000 à 29000 Da pour la seconde. Résultats. 4 biomarqueurs (BC1a , 4286 ; BC1b, 4302 ; BC3a, 8919; BC3b, 8961 Da) ont été significativement altérés dans les cancers du sein (BC1a et BC1b diminués ; BC3a et BC3b augmentés) (p<0,02 à p<0,00007). Ces 4 biomarqueurs n’ont pas été corrélés significativement à l’âge des patientes ou à leur statut hormonal. Leur valeur n’a pas été affectée par les mala-dies bénignes du sein. Pour chaque biomarqueur, nous avons défini 2 seuils, l’un n’autorisant aucune erreur diagnostique et l’autre permettant moins de 10% d’erreurs. Ces 2 seuils ont été utilisés pour l’évaluation de l’association des 4 biomarqueurs BC1a/BC1b/BC3a/BC3b pour le diagnostic des cancers. Avec ces 2 seuils, nous avons respectivement diagnostiqué 33% et 45% des cancers. Le dosage combiné de BC1a/BC1b/BC3a/BC3b et du Ca 15.3 a augmenté le nombre de cancers détectés à 45% et 53% respectivement.

A5.11La cobalamine (vitamine B12) potentialise la cytotoxicité de la vinblastine en réprimant le gène mdr-1 dans les cellules HepG2

V. Marguerite, M. Beri-Dexheimer, S. Ortiou, J.L. Guéant et M. MertenLaboratoire de Pathologie Cellulaire et Moléculaire en Nutrition, INSERM U724, Faculté de Médecine - Vandoeuvre-les-Nancy


Introduction : La glycoprotéine P (Pgp), produit du gène mdr-1, est un mécanisme important de la chimiorésistance des cancers. Des modifications du statut de méthylation du promoteur de ce gène sont liées à son expression et dependent probablement des niveaux intracellulaires de S-adénosyl-méthionine. La lignée HepG2 a été utilisée pour évaluer le rôle du cycle de le méthionine (grâce à la cobalamine, cofacteur de la méthionine synthase) sur l’expression du gène mdr-1.Méthodes : la RT-PCR semi-quantitative du gène mdr-1, la ré-tention cellulaire de rhodamine-123, et la cytotoxicité à la vin-blastine ont été réalisées sur des cellules cultivées avec ou sans cobalamine. Le statut de méthylation du promoteur du gène mdr-1 a été déterminé par PCR méthylation-spécifique.Résultats : L’ajout de cobalamine aux cellules conduit à une aug-mentation de l’activité méthionine synthase, à une diminution de l’expression du gène mdr-1 corrélée à une augmentation de la rétention de Rhodamine 123. En outre, la cobalamine potentialise la sensitibilité des cellules à la vinblastine à un niveau similaire à celui généré par le vérapamil et empêche l’induction du gène par

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le méthotrexate. Toutefois, aucune modification de méthylation du promoteur n’a été observée.Conclusion : La cobalamine est capable de réprimer le gène mdr-1, conduisant à une diminution de la fonction de la Pgp et à une augmentation de la sensibilité à la vinblastine. Cette voie métabolique pourrait être avantageusement mise à profit pour diminuer la résistance des cellules cancéreuses à l’agent chimio-thérapeutique vinblastine et pourrait ainsi constituer un nouvel espoir thérapeutique.

A5.12L’activation de la phospholipase D médie la répression du gène mdr-1 induite par la cobalamine

V. Marguerite, S. Gkikopoulou, J.L. Guéant et M. MertenLaboratoire de Pathologie Cellulaire et Moléculaire en Nutrition, INSERM U724, Faculté de Médecine - Vandoeuvre-lès-Nancy


Introduction : L’échec de la chimiothérapie est en bonne partie dû à la résistance multiple aux drogues (MDR) souvent associée à l’expression du gène mdr-1. La cobalamine (Cbl) est le cofacteur de la méthionine synthase, un enzyme clé du cycle de la méthio-nine, cycle qui génère la méthionine, acide aminé précurseur de la S-adénosyl-méthionine (SAM), substrat des réactions de mé-thylation. Nous avons montré que la Cbl était capable de réprimer le gène mdr-1 mais sans modification du statut de méthylation du promoteur.Notre objectif est d’évaluer la participation de la phospholipase D (PLD) et de la voie de la méthylation des phospholipides dans cette observation.Résultats : La Cbl active la PLD dans les cellules HepG2. La répression du gène mdr-1 induite par la Cbl est similaire à celle induite par l’oléate (activateur de PLD) et est inhibée par le n-butanol (inhibiteur de PLD). La Cbl augmente le contenu cellulaire en SAM, substrat de la production de Phosphatidylcholine (PC) dépendante de la phosphatidylethanolamine-methyltransfe-rase (PEMT). L’augmentation de la PC cellulaire par la Cbl est dépendante de l’activité de la PEMT. L’activation de la PLD par l’oléate s’accompagne d’une augmentation de la sensibilité à la vinblastine alors que le n-butanol augmente la résistance à la vinblastine.Conclusion : ces données indiquent que la Cbl réprime le gène mdr-1 en augmentant les taux de SAM et de PC cellulaire et en activant la PLD. Ceci suggère que la PLD peut être une cible pour réprimer le gène mdr-1 et pourrait être une voie prometteuse pour améliorer la chimiothérapie.

A5.13Structure Based Design of a Superagonist for the Nuclear Receptor of Vitamin D

P. Antony1a, S. Hourai1a, BR. San-Martin1b, A. Mourino2, N. Rochel1a and D. Moras1a

1 Institut de Génétique de génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, UMR7104 - Illkircha Département de Biologie et Génomiques Structuralesb Département de Pathologie Moléculaire2 Universidad de Santiago de Compostela, Departamento de Quimica Organica and Unidad Asociada al SCIC – Espagne


Vitamin D nuclear receptor (VDR), a ligand-dependent transcrip-tional regulator, is an important target for multiple clinical applica-tions like inflammation, osteoporosis and cancer. A major side ef-fect of numerous VDR ligands resides in an exacerbated increase of calcium serum level hindering their intensive use for efficient therapeutic treatments. To alleviate this problem, superagonist molecules with limited calcemic effect are developed. Based on the crystal structures of human VDR bound to 1α,25(OH)2D3 and superagonists, notably KH1060, we designed a new superagonist ligand. In order to optimize the aliphatic side chain conformation with a subsequent entropy benefit, we incorporated an oxolane ring. Among the two stereo diasteroisomers that were synthesi-zed, only AMCR277A exhibits both superagonistic and anti-tumo-ral activities in vitro and hypocalcemic properties in vivo, while AMCR277B behaves like 1_,25(OH)2D3. The crystal structures of the complexes between the ligand binding domain of hVDR and these ligands provide a rational approach to design more potent superagonists ligands for clinical applications.

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A5.14Phosphoprotein array for molecular diagnostic in breast and head and neck squamous cell carcinoma

J.L. Merlin1, C. Ramacci1, M. Rouyer1, G. Giacometti1, A. Harlé1, F. Chergui1, P. Genin2, G. Dolivet3, A. Leroux2

1 Centre Alexis Vautrin, EA3452 Nancy Université, Unité de Biologie des Tumeurs2 Laboratoire d’Anatomie et Cytologie Pathologiques – Université de Nancy3 Unité de Chirurgie Cervico-faciale - Vandoeuvre les Nancy


Human epidermal growth factor receptors (HER) have major therapeutic implications in breast cancer. Receptor-directed monoclonal antibodies as well as tyrosine kinase inhibitors are designed to block HER downstream signaling and achieve proli-feration control and apoptosis induction. The expression of EGFR downstream signaling phosphoproteins of the MAP kinase and PI3 kinase/AKT pathways (EGFR, AKT, p70S6 kinase, ERK1/2, GSK3beta) was determined by multiplex immuno-analysis using Bioplex protein array.In previous in vitro studies, we demonstrated that signalling phos-phoprotein expression was related to functionality of PI3 kinase and MAP kinase signalling pathways and correlated with cellular response to anti-EGFR targeted therapyIn this study, we validate the use of multiplex phosphoproteins sin-gle-step analysis using suspension beads protein array to explore the functionality of HER downstream signaling in frozen biopsies taken at diagnosis from patients bearing breast and head and neck cancer. In breast as in head and neck cancer specimens, great (up to 400 fold-) variations of phosphoproteins expression were observed showing that before treatment initiation, HER downstream signa-ling functionality can dramatically differ from patient to patient. Such variations could probably be implicated and explain diffe-rences in clinical response to anti-HER drugs.All phosphoprotein array results, achieved in breast cancer speci-mens, were found to be fully consistent with paired western blot analyses.This study demonstrates the great interest of phosphoprotein ar-ray for single-step analysis of signalling functionality in clinical biopsies. Phosphoprotein array can be used with size-limited tu-mor specimens and therefore provide predictive and/or surrogate marker for clinical response to anti-HER drugs.Supported by the French « Ligue contre le Cancer » and Alexis

Vautrin Cancer Center Research Funds.

A5.15Detection and identification of multiprotein complexes by coupling of Surface Plasmon Resonance - Mass Spectrometry (BIA-MS)

G. Lucchi1, A. Rouleau2, W. Boireau2, P. Ducoroy1

1 Proteomic Platform IFR Santé-STIC – Université de Bourgogne / CHU –Dijon2 Proteomic Platform of Besançon – Institut FEMTO-ST – UMR6174 – Besançon


The aim of this approach is the protein complexome analysis by integration of Surface Plasmon Resonance (SPR - Biacore 2000) with MS technology. Biosensor technology based on SPR is a la-bel-free, non-destructive detection and direct-reading method for characterizing macromolecular interactions between an analyte in solution and its ligand immobilized on a chip. Biacore technology permits to determine the kinetics of proteins complexes but without the possibility to identify the partners. However, identification is crucial in proteomics and the combining of Biomolecular Interaction Analysis (BIA) and MALDI-TOF/TOF is an appropriated method to identify captured analytes. Most of BIA-MS studies, including steps of partners identification, are based on elution processes before digestion. The digest is spotted on a MALDI target and protein identification is performed by pep-tide mass fingerprint with an optimal sensitivity of 10 fmoles of protein trapped from a complex mixture. Few studies have repor-ting on-chip ligand fishing and characterization of known native analyte by MS, with a sensitivity of 500 amoles. Here, we reported an improved strategy combining Biacore analysis and MS iden-tification directly onto the chip without elution. We developed a SPR-MS protocol on a chip where the gold layer on the glass sur-face is functionalized with octadecylmercaptan. This hydrophobic surface allows the immobilization of proteins monolayer. After treatment of sample on the chip (reduction, digestion and matrix spotting) the biochip is transferred on a homemade MALDI target. SPR experiments allow the high control of the density of proteins in a window of 1 to 20 femtomoles per mm2. In this range, direct on-chip tryptic digestion and mass spectrometry analysis permit the identification of proteins in complex mixture by MS and MS/MS. Analysis of biomarkers complexome in cancerology might be considered with this technology.

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A6.1Amplification de la réponse anti-tumorale de lymphocytes T issus de patients porteurs de cancer par des cellules dendritiques provenant de donneurs sains

J.C. Eymard, A. Gervais, E. Toulmonde, J. BernardUnité de Thérapie Cellulaire - Institut Jean-Godinot - 51056 REIMS


L’alloréactivité génère un microenvironnement particulièrement riche en cytokines, en molécules d’adhésion et en ligands de co-activation, adjuvants puissants de l’immunité. Dans ce contexte nous avons déterminé si des cellules dendritiques (DC) allogéni-ques pulsées avec un peptide tumoral peuvent amplifier la répon-se immune spécifique anti-tumorale des lymphocytes provenant de patients porteurs de cancer. Dans le cadre d’une étude clini-que avec consentement éclairé, une collection de lymphocytes et de DC été constituée à partir de 40 donneurs sains et 16 patients (13 femmes porteuses d’un cancer du sein et 3 hommes avec un cancer de la prostate), tous HLA-A2+. Les lymphocytes de cha-que patient ont été cultivés en présence soit de DC autologues, soit de DC allogéniques, préalablement pulsées avec le peptide modèle Melan MART-1. Au terme de la culture les réponses im-munes anti-tumorales ont été comparées sur la base de l’expan-sion clonale des lymphocytes T spécifiques (technique des tétra-mères) et de l’activité cytolytique vis-à-vis d’une lignée tumorale exprimant l’antigène d’intérêt (méthode cytofluorométrique). Les résultats montrent que les DC allogéniques induisent une réponse T spécique en moyenne 2 fois supérieure à celle obtenue avec les DC du patient. De plus, l’analyse des réponses obtenues pour les lymphocytes d’un patient testées en présence d’un large panel de DC allogéniques montre pour la première fois qu’il est possible de sélectionner, dans une banque de cellules de donneurs sains, des DC à « haute performance » capables d’induire une réponse immune jusqu’à 17 fois supérieure à celle observée en situation autologue. Ces données peuvent ouvrir de nouvelles perspectives de thérapie cellulaire.

A6.2Synthetic mimetic of CD40L homotrimer activate dendritic cell

J. Beyrath1, S. Wieckowski1, C. Cormary2, L. Leserman2, G. Guichard1, S. Fournel11 CNRS UPR 9021, Immunologie et Chimie Thérapeutiques, Institut de Biologie Moléculaire et Cellulaire - Strasbourg2 Centre d’Immunologie de Marseille-Luminy, Biologie de la présen-tation antigénique, Parc scientifique et technologique de Luminy - Marseille


The importance of dendritic cells (DC) in cancer immunotherapy has recently been highlighted. DC are the best tumor antigen presenting cells and the only efficient for cytotoxic T cell diffe-rentiation. However, fully DC activation requires costimulatory si-gnals. Interaction between CD40, a member of the tumor necrosis factor receptor superfamily constitutively expressed on DC, and CD40L, a member of the tumor necrosis factor family transiently expressed on activated T cells, are essential for DC activation. In this context, we have developed various synthetic ligands named mini-CD40Ls, based on a C3-symmetry core holding 3 CD40-binding motifs Lys-Gly-Tyr-Tyr. In previous studies we showed that mini-CD40Ls reproduce some functional effects of soluble CD40L, such as induction of apoptosis of murine and human lym-phoma cell lines. Moreover, in a murine model of Trypanosoma cruzi infection, our ligands promote control of parasitemia and mouse survival by enhancing T cells producing interferon-γ sug-gesting that mini-CD40Ls induce in vivo DC activation. Here we report that mini-CD40Ls induce in vitro maturation of the murine dendritic cell line D1, characterized by increased expression of activation markers, activation of NFkB pathway and production of interleukin-12. Similar results have been obtained with murine BMDC (bone-marrow derived DC) and human dendritic cells. Mo-reover, mini-CD40Ls activated BMDC can induce T CD4+, showing that mini-CD40Ls activated DC are functional in priming adapta-tive immune response. To improve the efficacy of mini-CD40Ls we have synthesized a second generation of ligand in which we have substituted some amino-acids by non-natural amino-acids. Interestingly, one of them induce IL-12 production but is unable to activate NF-kB pathway and to induce activation marker expres-sion in the D1 model. Thus, mini-CD40Ls are not only valuable tools to dissect mechanisms of CD40-induced DC activation but also promising molecules for cancer immunotherapy.

Axe 6Thérapeutiques immunomoléculaires et cellulaires des cancers

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A6.3Conception de vaccins antitumoraux synthétiques à base de liposomes, de peptides antigéniques, de molécules de ciblage des cellules dendritiques et d’adjuvants lipopeptidiques.

J.-S. Thomann, B. Heurtault, F. Schuber et B. FrischInstitut Gilbert Laustriat, UMR 7175-LC1 CNRS/ULP, Laboratoire de Chimie Enzymatique et Vectorisation, Faculté de Pharmacie - Strasbourg


Nous développons des stratégies vaccinales antitumorales ba-sées sur l’utilisation de liposomes en tant que vecteurs d’antigè-nes peptidiques synthétiques. Des épitopes T-cytotoxiques (Tc) et T-auxiliaires (Th) greffés à la surface de liposomes sont présentés par les cellules dendritiques (DCs) aux lymphocytes CD8+ et CD4+ conduisant à une réponse immunitaire cellulaire avec destruction des cellules tumorales présentant le même antigène Tc. Nous avons conjugué deux épitopes sur une même nanovecteur: i) un peptide Tc (9 a.a.) issu de ErbB2 (Her2-neu), un proto-oncogène surexprimé à la surface de cellules tumorales (cancer du sein,…); ii) un peptide Th «universel» (13 a.a.), dérivé de l’hémagglutinine du virus de la grippe (stimulation de la réponse immunitaire contre Tc). Nous associons différents adjuvants lipopeptidiques synthé-tisés au laboratoire de type Pam

3Cys ou Pam

2Cys qui sont des

ligands des «Toll-like receptors» (TLR 2/1 et 2/6). Leur activation conduit à la maturation des DCs nécessaire à une réponse CTL efficace. L’efficacité thérapeutique des constructions liposomales a été testée in vivo sur un modèle murin (souris BALB/c et cellules syngéniques Renca) de tumeur solide sous-cutanée surexprimant la protéine ErbB2 humaine. De nombreuses constructions réa-lisées se sont révélées remarquablement efficaces et nous ont permis d’étudier différents paramètres (nature, structure, concen-tration des adjuvants…). Par exemple, nous avons observé jus-qu’à 90% de régression tumorale avec des quantités d’adjuvants de l’ordre de 0.1 µg. Récemment nous avons obtenu des résultats encore plus prometteurs en: i) «décorant» nos liposomes avec des antennes polymannosylées dans le but de cibler les DCs, ou ii) en ajoutant des analogues synthétiques des ligands des récepteurs CD1d. En conclusion, nous avons mis au point des constructions liposomales synthétiques «minimalistes» qui se révèlent particu-lièrement performantes dans l’éradication de tumeurs dans un modèle murin.

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PF1La plateforme de biopuces de l’IGBMC

B. Jost, L. Baudrey, D. Dembele, C. Thibault, C. Bole-Feysot, P. Gerber, C. Herouard, J. Jund, S. Vicaire, L. Einhorn, S. Dumanoir and P. KastnerPlate-forme Biopuces de Strasbourg – IGBMC - Strasbourg


La plate-forme Biopuces de L’IGBMC (http://www-microarrays.u-strasbg.fr/) est spécialisée dans l’analyse à grande échelle du transcriptome et du génome sur puces à ADN. Elle fait par-tie des plateformes technologiques nationales recensées par le Réseau Inter Organismes (RIO) et a obtenu pour son système de management de qualité la certification ISO 9001(version 2000) en décembre 2006.Une gamme complète de services allant de la fabrication de pu-ces à l’analyse des données selon des protocoles standardisés est proposée à la communauté scientifique (académique ou pri-vée) : - aide au design des expériences sur puces à ADN- étude de l’expression des gènes et analyse de liaison (génoty-page de SNPs) avec les puces à haute densité à oligonucléotides de la Société Affymetrix- fabrication et distribution de puces sur lames de verre pangéno-miques humaines et murines (oligonucleotides)- conception de puces à la carte sur lames de verre (ADNc ou oligonucleotides)- étude de l’expression des gènes et des aberrations chromoso-miques (CGH : Comparative Genomic Hybridization avec les puces sur lames de verre de fabrication maison ou commerciales : Agi-lent, NimbleGen, …)- analyse des données (normalisation, filtrage, classification et interprétation biologique)- veille technologique et mise au point de nouvelles applications (ChIP on chip : Chromatine Immuno Précipitation sur puce, puces exons pour l’étude des transcrits alternatifs, …)

PF2Proteomic analysis of human colon cancer xenografts

C. Bechetoille1, M. Arrive1,3, P. Gendry1, T. Wasselin2, J.M. Strub2, S. Sanglier2, A. Van Dorsselaer2, E. Guérin1,3 and J.F. Launay1

1 INSERM Unit 682 - Strasbourg Cedex2 Laboratoire de Spectrométrie de Masse Bio-Organique, Institut Pluridisciplinaire Hubert Curien, UMR7178 CNRS, Université Louis Pasteur - Strasbourg3 Laboratoire de Biochimie et Biologie Moléculaire, Hôpital de Hautepierre - Strasbourg


Colon cancer is an heterogeneous disease, characterized by microsatellite and chromosomal instability. In addition to this disease-related heterogeneity, intrinsic tumor heterogeneity is observed. Recently, it has been described that primary tumour genetic alterations and intra-tumoral heterogeneity are maintai-ned in xenografts of human colon cancers showing chromosome instability1. An important step towards a better understanding of colon cancer development is the whole analysis of the tumor specific protein expression pattern. This study combines a tumor xenotransplan-tation model in nude mice with proteomic analysis. After optimization of the 2-D gel conditions (pI range), we ge-nerated standard 2-D maps, focused on the proteins in the pH range of 5-8, of xenograft samples obtained from human colon tumors. To improve the protein pattern by increasing low-abun-dance protein detection, a first fractionation step of xenograft ex-tracts by ion-exchange chromatography was performed. 2D gels were further analysed with the PDQUEST software. Differentially expressed proteins were then identified by tandem mass spectro-metry techniques. Special attention was drawn during the protein identification process in order to unambiguously assess the hu-man or mouse origin of the identified proteins.A number of proteins with different expression levels were identi-fied. They belong to the glycolytic pathway (GAPDH: glyceraldehyde dehydrogenase), to the tricarboxylic acid cycle (triose-phosphate isomerase), to the antiapoptotic signaling (VCP: valosin-containing protein), to normoxic degradation (PHD: prolyl-hydroxylase) or are potential tumor suppressor proteins (15-PGDH: prostaglandin de-hydrogenase, prohibitin).Taken together, the combination of the xenotransplantation model in nude mice and proteomic analysis provided a valuable stra-tegy for the identification of potential protein biomarkers for colon cancer.

Référence1 Guenot et al. J. Pathol. 2006, 208, 643-652

Les plateformes technologiqueset hospitalières

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PF3Plateforme d’Imagerie Cellulaire et Tissulaire de Lorraine : Imageries Multimodales dans le cadre du Cancer

D. Dumas, L. Marchal, E. Werkmesiter, J.F. StoltzFaculté de Médecine de Nancy - Plateau d‘Imagerie et de Biophysique Cellulaire et Tissulaire - Vandoeuvre -les-Nancy


Le plateau technique d’Imagerie et de Biophysique Cellulaire (PTIBC, http://confocal.medecine.uhp-nancy.fr) est localisé dans le laboratoire « Mécanique et Ingénierie Cellulaire et Tissulaire » du Laboratoire Lemta UMR CNRS 7563 (plate forme technolo-giques IFR CNRS-UHP-INPL-CHU 111). Le PTIBC fait partie des équipes GDR 2588 CNRS « Microscopie Fonctionnelle du Vivant ». Il est une des plateformes mises en avant par le Cancéropôle du Grand-Est (plate-forme du gène au malade). Les laboratoires associés disposent depuis 1998 d’un système CellScan 3D et depuis 2001 d’un Microscope Confocal à Balayage Laser couplé à un oscillateur femtoseconde (Microscopie Multiphoton). La mise en œuvre des modes- Multiphoton permet l’observation de tissus denses et épais (vas-cularisation de tumeurs cancéreuses)- FLIM en 2004 permet de caractériser finement les processus photophysiques (fonctionnalisation de photosensibilisants en PDT)- FCS (corrélation de Fluorescence) en 2006 pour la mesure des coefficients de diffusion des molécules d’intérêt (transport et prise en charge des photosensibilisants)- FRAP avec le Centre Alexis Vautrin pour la mesure des constan-tes cinétiques intercellulaires via les jonctions communicantes intercellulaires dans le dépistage précoce du cancer- Seconde harmonique (SHG) qui permet de caractériser le degré d’organisation des protéines matricielles (collagènes en particu-lier) sans marquage fluorescent de tissus cancéreux

PF4Strasbourg Drug Discovery Center (SDDC) : Plateforme de chimie biologique intégrée de Strasbourg (PCBIS) et Plate forme des technologies des médicaments

B. Didier, J.L. Galzi, J. Haiech, M. Hibert et P. VillaEcole Supérieure de Biotechnologie de Strasbourg et Faculté de Pharmacie - Illkirch


Objectifs du centre :1. Catalyser et accroître la recherche focalisée sur la découverte de médicaments et l’utilisation d’outils chimiques pour compren-dre le vivant,2. Promouvoir les activités interdisciplinaires (compétences et ressources) qui permettent de mieux appréhender les processus physiologiques et pathophysiologiques nécessaires aux dévelop-pement thérapeutiques et diagnostiques,3. Développer les formations tant initiales que continues dans les domaines de la recherche et du développement de nouveaux mé-dicaments, la chimie biologie intégrative et la recherche cognitive en interface avec les domaines précédents.Objectifs de la plate-forme PCBIS1. Transférer les technologies de criblage (compétences et ressources) dans un environnement ISO9001 afin d’offrir à la communauté académique et aux sociétés privées la possibilité de trouver des molécules chimiques qui peuvent être optimisées pour devenir soit un candidat-médicament soit un outil de re-cherche,2. Offrir des essais génériques permettant d’étudier au moindre coût l’interaction entre les molécules d’une collection à forte di-versité chimique (Collection de molécules académiques libres de droit) avec soit des protéines membranaires soit des protéines so-lubles purifiées indépendamment de la fonction de ces protéines (technologie unique utilisant une collection de molécules fluores-centes et les techniques de fluorescence-FRET ou anisotropie).Caractéristiques du centre• Centre mixte universitaire-CNRS avec une emphase sur l’inter-disciplinarité Chimie-Biologie et la recherche allant de la molécule à l’animal,• Composé de deux unités mixtes de recherche et de deux plates-formes (Plate-forme de Chimie Biologie Intégrative de Strasbourg et Technologie du Médicament),• Facilitant l’interaction entre le secteur académique et le secteur privé,• Nœud français dans deux réseaux européens (European Library Collection and European Screening Center Network).

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PF5Les Puces à Cellules Transfectées : Analyses à haut débit de phénotypes cellulaires et identification de gènes à potentiel thérapeutique pour les traitements ciblés du cancer

A.L. Morand, A.M Dechampesme, L. Froidevaux, I.M. Bo-napace et L. Brino Laboratoire de Biologie et Génomique Structurale, «Puces à Cellules Transfectées», CEBGS-IGBMC - Illkirch


L’interférence ARN est un mécanisme post-transcriptionnel d’ex-tinction de l’expression de gènes, qui entraîne la destruction des ARN messagers via un mode d’action gène-spécifique. Elbashir et al. ont montré que l’expression des gènes dans les cellules de mammifères est efficacement éteinte par la transfection de petits ARNs double brins d’une taille de 21-23 nucléotides. Dès lors, l’interférence ARN a révolutionné la recherche en biologie, par la capacité d’analyser la fonction d’un gène en éteignant son expression. En d’autres termes, la capacité d’éteindre transitoire-ment et spécifiquement l’expression des gènes ou combinaison de gènes a permis l’analyse génétique par « perte de fonction » sur des systèmes de grande taille ou complexes. Avec le séquen-çage complet du génome humain, les priorités de la recherche sont passées de l’identification des gènes vers l’élucidation, la plus rapide, de leur fonction. Le développement des puces à cellules transfectées offre le potentiel d’accélérer les études en génétique fonctionnelle, et cela à haut débit. La compréhension du mécanisme de l’interférence ARN et la production industrielle de molécules siRNA de haute qualité a permis à de nombreuses équipes de générer des librairies de siRNAs pan-génomiques. La technologie des Puces à Cellules Transfectées rend possible aujourd’hui la transfection en parallèle de milliers de siRNAs dans les cellules de mammifères. Associée au développement de systèmes de détection et de visualisation des phénotypes moléculaires à l’échelle cellulaire et subcellulaire, cette nouvelle approche de génomique fonctionnelle génère une accumulation des connaissances qui permettront d’analyser les schémas fonc-tionnels. Dans ce contexte, il est maintenant possible de compa-rer l’expression différentielle des gènes dans un contexte sain ou pathologique et d’ouvrir la voie à une identification de nouvelles cibles thérapeutiques en relation avec les grandes pathologies dont le cancer.

PF6RReportGenerator, un outil polyvalent pour des analyses statistiques automatiques de criblages à haut débit

W. Raffelsberger1, Y. Krause1, A.L. Morand2, L. Brino2 and O. Poch1

1 Laboratoire de Bioinformatique et Génomique Intégratives, IGBMC, Illkirch2 Laboratoire de Biologie et Génomique Structurale, «Puces à Cellu-les Transfectées», CEBGS-IGBMC, Illkirch


La transcriptomique et les puces à cellules transfectées sont de-venues des outils de routine dans la recherche contre le cancer. Etant données les grandes quantités de données générées par ces méthodes de criblage à haut débit, le besoin en méthodes d’analyse automatique est grandissant.La plate-forme statistique « R » (www.r-project.org) et des vastes collections des modules supplémentaires sur CRAN et Biocon-ductor permettent des analyses très puissantes, mais sa syntaxe en ligne de commande rend ce programme inaccessible aux non statisticiens.Ici nous présentons RReportGenerator, un outil convivial permet-tant de bénéficier de la plate-forme « R » pour des analyses statis-tiques automatiques et des tâches de routine sans nécessiter des connaissances en langage R. RReportGenerator a été conçu pour effectuer des analyses suivant des scénarios prédéfinis choisis grâce à l’interface graphique de l’outil.En résultat, un rapport en format PDF contenant un résumé de l’analyse avec figures et tableaux est généré de manière automa-tique et peut être accompagné par des données supplémentaires pour permettre l’utilisation dans d’autres programmes (Excel, etc.). Cet outil a été utilisé avec succès sur des données générées par les plateformes Transcriptomique et Puces à Cellules Trans-fectées d’Illkirch.En conclusion, RReportGenerator permet d’effectuer des analyses statistique de routine tout en bénéficiant de l’environnement R à travers une interface graphique conviviale qui peut être utilisée facilement par des utilisateurs inexpérimentés.

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Screening de cellules dendritiques d’intéret vaccinalDr. Jacky BERNARDUnité de Thérapie Cellulaire de l’Institut Jean Godinot à Reims

Ganglion sentinelle axillaire droit 5 min. après injection dans la patte antérieure droite d’une souris nude de 20 pmol de quantum dots émettant à 655 nm (ex = 400-440 nm ; grossissement x 40).Emilie PIC Centre Alexis Vautrin, CRAN UMR 7039 CNRS Nancy-Université - Vandoeuvre-lès-Nancy

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Les axes de recherche du Cancéropôle du Grand-Est

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Axe 1 - Indicateurs de santé et évaluation des pratiques en cancérologieL’objectif de l’axe 1 porte sur :• une meilleure caractérisation des facteurs de risque, la validation d’indicateurs biologiques mais aussi sur la qualité de vie et des indicateurs de santé perçue• la mesure de l’impact des pratiques de prise en charge sur les patients, dans les domaines de la prévention, du diagnostic et des soins. Cet axe fait appel à des collaborations multidisciplinaires impliquant également des chercheurs en sciences

humaines et sociales. Il vise à formuler des recommandations de santé publique utiles à l’ensemble de la société.

Axe 2 - Agents infectieux et carcinogenèseLes projets de recherche de cet axe portent sur l’étude des mécanismes liés aux interactions avec des agents infectieux, en particulier les papillomavirus humains, conduisant à une dérégulation cellulaire et au cancer. Les résultats obtenus visent à la mise en oeuvre de meilleures politiques de prévention, grâce à l’emploi de nouvelles stratégies de dépistage ou d’approches vaccinales. Ils permettront également la création d’outils de diagnostic et de pronostic affinés, et la mise en place de thérapies innovantes, telles les virus « tueurs de tumeurs ».

Axe 3 : Contrôle local des cancers - Imagerie, outils de diagnostic, sensibilité aux traitements, nouvelles thérapiesLa guérison locale du cancer, tout en préservant la fonction d’organes est une étape primordiale dans la prise en charge des patients. Les objectifs de l’axe 3 sont ainsi :• d’aboutir à une meilleure identification de la tumeur et des tissus sains adjacents afin de mieux adapter la délivrance des thérapeutiques locales• de déterminer les facteurs biologiques de résistance tumorale à la radiothérapie pour adapter les stratégies thérapeutiques

• de développer de nouveaux outils technologiques qui permettront un meilleur traitement local des cancers

Axe 4 : Contrôle de la dissémination tumorale - Plasticité cellulaire, hétérogénéité tumorale et réaction stromaleL’axe 4 concerne la caractérisation des mécanismes moléculaires intervenant dans la progression tumorale. Les thèmes de recherche portent sur la capacité des cellules cancéreuses à se multiplier sans contrôle et à quitter leur site initial pour coloniser l’individu ainsi que sur les interactions avec les tissus environnants qui influencent cette invasion. Ces travaux ont pour objectif la mise au point de nouveaux tests pronostiques qui permettront de mieux adapter les traitements en fonction des tumeurs et d’identifier de nouvelles cibles thérapeutiques et de nouveaux marqueurs de diagnostic et de suivi.

Axe 5 - Compréhension et maîtrise des échecs thérapeutiquesL’axe 5 a pour objectif d’identifier les causes d’échec des thérapeutiques anticancéreuses en étudiant les mécanismes de résistance aux traitements. Les études des facteurs conditionnant la réponse à la thérapie et la recherche de marqueurs précoces ou prédictifs de cette réponse sont menées sur des modèles cellulaires ou animaux, mais aussi au travers d’essais cliniques. Le but est de parvenir à déterminer la situation d’un patient par rapport à son traitement, et de proposer des alternatives thérapeutiques en cas d’inefficacité.

Axe 6 – Thérapeutiques immunomoléculaires et cellulaires des cancersL’axe 6 porte sur l’immunothérapie du cancer. Des études portent sur le développement de thérapies cellulaires à visée antitumorale ou de reconstitution du système immunitaire après une greffe hématopoïétique ainsi que sur les relations hôtes-greffons. Une seconde approche concerne la production d’anticorps monoclonaux contre des antigènes tumoraux identifiés pour évaluer leur potentiel thérapeutique. Les travaux de cet axe s’appuient sur la plate-forme de bioingénierie de Besançon et les unités de thérapie cellulaire du Grand-Est.

Le 19 octobre 2007 au Palais des Congrès à Vittel 1 Forum...

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