La Cellule de Nageotte

Par : S / Abdessemed

Abdsalah

La cellule de Nageotte est un hématimètre qui permet de compter le nombre de cellules en suspension dans une solution.

Classiquement, elle est utilisée en cytologie urinaire ou pour l'examen du liquide céphalo-rachidien.

Elle est prévue pour le dénombrement de liquides pauvres en éléments.

Abdsalah

Description de la cellule de Nageotte La cellule de Nageotte est constituée d’un

quadrillage de 10mm côté et de 0.5 de profondeur.

Le volume de la cuve ainsi délimité est de 500mm3 .

elle est divisée en 40 bandes verticales. Compter séparément le nombre de

leucocytes et d’hématies contenus dans 8 bandes, soit N : N représente le nombre d’éléments / mm3

Abdsalah

Description de la cellule de Nageotte

Le Quadrillage total est constitué de 40 bandes Les dimensions d'une bande : Longueur : 10 mm Largeur : 0,25 mm Profondeur : 0,50 mm Chaque bande a un volume de 1,25 µl

Abdsalah

Mode opératoire: les bords de la cellule (là où reposeront

les bords de la lamelle) doivent être humectés avec un tout petit peu de liquide afin d’assurer une bonne adhésion de la lamelle : la manière la plus efficace et la plus pratique consiste à le faire à l’aide d’un doigt dont l’extrémité a été très légèrement humidifié avec de l’eau.

Abdsalah

.Placer une lamelle plane sur la cellule puis appuyer légèrement pour assurer sa bonne adhésion entre la lamelle et les bords de la cellule

.Poser la cellule sur une surface bien horizontale

Abdsalah

.Homogénéiser la suspension cellulaire à analyser 

.L’introduire à l’aide d’une pipette Pasteur (ou équivalent) en la laissant pénétrer par

capillarité : la totalité de la surface délimitée par les rigoles doit être recouverte par la suspension et la suspension ne doit pas déborder dans les rigoles

Abdsalah

.Le délai d’attente avant de procéder au comptage ne doit être :

.ni trop court (environ 10 min. sont nécessaires pour que les cellules à compter puissent sédimenter suffisamment)

.ni trop long (pour éviter un début de dessèchement de la préparation).

Abdsalah

Principe de comptage: Avant de faire le comptage  . faire une observation à l’objectif x10 non

seulement pour repérer le quadrillage mais aussi pour vérifier que les cellules à compter sont réparties de façon homogène ; si l’homogénéité est jugée insuffisante il faut tout recommencer, c’est-à-dire charger une nouvelle cellule de Nageotte à partir de la suspension réhomogénéisée.

Abdsalah

 . passer à l’objectif x40 pour effectuer le comptage;

Il est recommandé de compter les éléments (leucocytes, hématies, autres éléments éventuels) contenus dans 4 bandes au moins, c’est-à-dire les éléments contenus dans 1,25 x 4 = 5 µl

Abdsalah

. Il peut être nécessaire de diluer le liquide si le manipulateur considère que les éléments sont trop nombreux pour pouvoir réaliser un comptage précis.

Attention : ne pas oublier le facteur de dilution au moment du calcul

 

Abdsalah

. Un nombre élevé d’hématies peut gêner le comptage des leucocytes. On peut contourner la difficulté de la façon suivante :

- détruire les hématies en diluant au 1/2 le liquide à analyser dans une solution d’acide acétique à 0,5 pour cent (0,5 ml d’acide acétique pur dans 100 ml d’eau) puis procéder au comptage des leucocytes Attention : ne pas oublier le facteur de dilution

au 1/2 au moment de calculer le nombre de leucocytes.

Abdsalah

Le comptage des éléments qui chevauchent le côté de 2 bandes contiguës :

ne compter que ceux qui chevauchent l’un des 2 côtés : par exemple le côté droit et bas

Plus de colonnes sont comptées, meilleure est la représentativité du comptage.

Abdsalah

Le calcul du nombre d’éléments

Soit : V: le volume de comptage (V = 5 µl si on a compté les

éléments dans 4 bandes) n: le nombre d’éléments (hématies ou leucocytes)

contenus dans ce volume V d : la dilution du liquide introduit dans la cellule  Le nombre N d’éléments (hématies ou leucocytes) par µl de

liquide se calcule de la façon suivante :  N = (n / V) x d 

Abdsalah

Exemple 1e exemple : .liquide non dilué : d = 1 n = 72 V

= 5 µl (volume de 4 bandes) N = 14/µl 

2e exemple : .liquide dilué au ¼ donc d = 4 n =

550 V = 5 µl (volume de 4 bandes) N = 440/µl

Abdsalah

Nettoyage après usage : cellule et lamelle plane

Immersion pendant 10 à 15 minutes dans un bain d’eau de javel dilué

Rinçage à l’eau du robinet puis à l’eau distillée

Essuyage : linge fin ou papier absorbant non pelucheux (genre « Sopalin ») sans frotter

Laisser sécher à l’air libre durant quelques minutes

Ranger à l’abri des poussières.

Abdsalah

S / Abdessemed