Kloning gen penisilin v asilase dari bacillus sp
-
Upload
easter-tawy -
Category
Education
-
view
64 -
download
6
Transcript of Kloning gen penisilin v asilase dari bacillus sp
Kloning Gen Penisilin V Asilase dari Bacillus sp BAC4 di Industri Farmasi
Nama kelompok:Ruth Pistia Eusebeia (31130025)Gan Edytia Noer Cahyani (31130026)Elsa Narwastu Pesoa (31130027)Jesika Laurenza (31130028)
Antibiotik
Golongan beta-laktam
Penisilin (Alexander Fleming ,1929)
PVA ( Penisilin V Asilase )
Enzim ini merupakan kunci dalam pembuatan antibiotik beta-laktam semisintetik karena dapat menghidrolisis penisilin V untuk menghasilkan senyawa antara yaitu asam 6 amino penisilanat (6-APA)
Penisilin semisintetik, diantaranya metilsilin, kloksasilin, ampisilin dan karbenisilin
Peningkatan produksi enzim PVA dengan pendekatan genetika
Spesies Bacillus sp. BAC4:Tidak menghasilkan toksinMudah ditumbuhkanTidak memerlukan substrat yang mahalBertahan pada temperatur tinggiTidak ada hasil samping metabolismeKemampuan untuk menghasilkan
sejumlah besar protein ekstra seluler
Gen PVA dari Bacillus sp.BAC4 akan diklon ke dalam vektor plasmid menggunakan pustaka genom.
Pustaka genom dibuat dengan memurnikan DNA kromosom Bacillus sp.BAC4
Fragmen DNA diinsersikan ke vektor yang sesuai sehingga menghasilkan vektor rekombinan.
Vektor rekombinan ditransfeksi ke dalam sel inang yaitu E. coli
Ekspresi skrining dilakukan untuk melihat aktivitas PVA klon rekombinan.
DNA plasmid pHB201 diisolasi dari E. coli dengan menanamnya ke medium LB cair yang mengandung antibiotik kloramfenikol karena plasmid pHB201 memiliki gen resisten kloramfenikol, sehingga diharapkan koloni yang tumbuh dalam medium adalah koloni bakteri yang mengandung plasmid pHB201.
pemotongan DNA kromosom hasil isolasi dengan enzim restriksi HindIII menghasilkan fragmen yang berukuran lebih besar dari 23 kb
Koloni warna putih: Adanya vektor dengan DNA sisipanKoloni warna biru : tidak terdapat DNA sisipan pada vektor pHB201.Adanya koloni biru dan putih disebabkan DNA sisipan dimasukkan pada daerah pengkode gen lacZ. Gen lacZ tersebut merupakan daerah pengkode enzim beta-galaktosidase. Enzim ini dapat menguraikan senyawa mirip laktosa yaitu X-gal dan adanya IPTG sebagai penginduksi dihasilkan senyawa galaktosa dan 5-bromo-4 kloroindigo yang berwarna biru.
Daftar pustaka
Elvi Susanti VH,Ariani SR Dwi.2004. Kloning Gen Penisilin V Asilase dari Bacillus sp. BAC4 Melalui Pembuatan Pustaka Genom. Biodiversitas.Vol5(1):1-6p.
http://biodiversitas.mipa.uns.ac.id/D/D0501/D050101.pdf. diakses tanggal 23 November 2014 pukul 16.43WIB
Thanks you…….