KINETIKA ENZIM - mhanafi123.files.wordpress.com · 2 Pengukuran aktivitas enzim: Berdasar pada...
-
Upload
nguyentram -
Category
Documents
-
view
257 -
download
5
Transcript of KINETIKA ENZIM - mhanafi123.files.wordpress.com · 2 Pengukuran aktivitas enzim: Berdasar pada...
1
KINETIKA ENZIM
Penting untuk :Memahami fungsi katalitikMemahami fenomena biologik,
pengaruh suhu, pH dll.Prosudur pemurnian enzim
2
Pengukuran aktivitas enzim:
Berdasar pada aktivitasnya.1 IU, micromol P/menit
Pada enzim tertentu :1 IU, perobahan kepekatan pada 340nm
sebesar 0,001 per menit
Kecepatan reaksi :jumlah substrat yg diubah per satuan waktujumlah produk yg terbentuk per satuan waktu
3Kurve Perjalanan dari suatu reaksi enzimatik
0 t0
S
P( )
S
P( )
4
t0
S
P( )
A
BC
A’ B’ C’
Kec di 0 = tg
__=
= A__A’ = Kec di A
Kec di B = tg
Kec rata-ratad i B = B__
B’Kec rata-rata
Cdi CC’
5
Kecepatan awal :Pada waktu kadar substrat, produk dan enzim,suhu, pH dapat diketahui dengan tepat.Pada awal reaksi.Pada waktu kurve perjalanan masih lurus.Biasanya berkurangnya substrat < 10%.
Cara mengukur kecepatan awalAmbil bagian pada kurve perjalanan yang masihBerupa garis lurus (pada awal reaksi)
Kecepatan awal berbanding lurus dengan kadar enzim
6
Pengaruh kadar substrat terhadap reaksi enzimatik
Melakukan beberapa kali percobaankondisi sama kecuali kadar substratKadar substrat absis ( x )Kecepatan awal Vo ordinat ( y )Kurve berbentuk hiperbola
7
Persamaan Michaelis-Menten
Vomax [S]Vo= ----------
Km + [S]
Apabila [S] <<< Km
[S] >>> Km
[S] = Km
8
[S] <<< Km
9
10
Double reciprocal atau Lineweaver-Burk plot
11
Pengaruh pH terhadap reaksi enzimatik
• pH mempengaruhi muatan• Muatan mempengaruhi struktur enzim• Selanjutnya akan mempengaruhi
reaksi E S• Akibatnya kecepatan reaksi
dipengaruhi
12
CO
O HCN
+H
3
R
CO
OCN
+H
3
R-
CO
OCNH
R-2
pH = 3pH = 7
pH = 11
13
Pengaruh pH
1)PepsinpH optimum 1,6
2) Glukosa 6 fosfatasepH optimum 7,8
14
Pengaruh temperaturMakin tinggi temperaturMakin mudah rusak
Enzim lebih stabil padaTemperatur yang rendah
5060
7040
80
0C
0C
0C
0C
0C
S
P( )
S
P( )
t0 t2
Suhu
t__S
8040 6050 7000 0 0 0
V Rata-rata
=t
__S
15
INHIBITOR
Berdasar ikatan enzim :-inhibitor reversibel-inhibitor irreversibel
Berdasar sifat kinetika :-inhibitor kompetitif-inhibitor nonkompetitif
16
INHIBITOR KOMPETITIF
• Selalu bersifat reversibelE + I EI ES + I
E EI
ES E P++
17
Inhibitor kompetitif reversibelEfeknya dapat dihilangkan dengan menambah substratAnalog substrat :Strukturnya mirip substrat
IS
SI
Terikat di aktif site
18
COOHHOOCAs. Fumarat
COOHCCCOOH
HH
2
2
As.Suksinat
Suksinat dehidrogenase
COOHCC
COOH
HH
2
2
CH2
As.Glutarat
COOHCCOOH
H 2
As.Malonat
COOHCOOH
As.Oksalat
CHC
COOH
H
2
3
As.Propionat
19
20
21
Inhibtor nonkompetitif :
a) Inhibitor nonkompetitif reversibel
E + I EI ES + I ESIDpt berikatan dgn E bebas juga dengan ES komplek
Terikat tidak pada aktif siteStrukturnya tidak mirip substrat
E S
I
22
23
24
Inhibitor nonkompetitif irriversibel
Berikatan dgn enzim secara irriversibelMerobah seluruh konformasi enzimEnzim menjadi inaktifSecara kinetika mirip nonkompetitif reversibelMenurunkan VmaxTidak menurunkan Km
Contoh : Hg++, Ag++, Ba++