ISPITIVANJE BIOKOMPATIBILNOSTI MEDICINSKOG SREDSTVA ZA

TEHNI ČKI FAJL PROIZVO ĐAČA U CILJU DOBIJANJA CE ZNAKA

Autori: Mr. sc dr Jasminka MarkovDr sc. biohem. Slavica Ristić

KragujevacOktobar , 2016

Evropske DIREKTIVE za medicinska sredstva:

� 93/42 EEC 2007/47 EC MD

� 90/385 EEC 2007/47 EC AIMD

� 98/79 EC IVDD

PODELA OPŠTIH MEDICINSKIH SREDSTAVA

1) Prema stepenu rizika za korisnika medicinskog sredstva:

- Klasa I – sa niskim stepenom rizika- Klasa IIa – sa višim stepenom rizika - Klasa IIb – sa visokim stepenom rizika - Klasa III – sa najvišim stepenom rizika

2) Prema prirodi medicinskog sredstva i njihovoj povezanosti sa izvorima energije:- Neinvazivna - Invazivna - Aktivna

3) Prema dužini trajanja primene u ili na ljudskom organizmu,na medicinska sredstva:

- Prolazne primene (namenjene za kontinuiranu primenu kraću od 60 minuta);

- Kratkotrajne primene (namenjene za kontinuiranu primenu najduže 30 dana);

- Dugotrajne primene (namenjena za kontinuiranu primenu duže od 30 dana).

TEHNI ČKI FAJL

Tenički fajl mora da sadrži dokumenta u kojima je dokazana efikasnosti bezbednostmedicinskog sredstva.

Neophodna dokumentacija obuhvata:1. Kratak opis proizvoda2. Lista osnovnih zahteva3. Kratak opis proizvodnog postupka4. Biokompatibilnost5. Upravljanje rizikom6. Stabilnost proizvoda 7. Sastav; Specifikacije ulaznih sirovina; Specifikaciju gotovog proizvoda sa

metodom analize; Specifikaciju primarnog pakovanja8. Obeležavanje spoljnjeg i unutrašnjeg pakovanja 9. Uputstvo za upotrebu10. Klinička evaluacija

BIOKOMPATIBILNOST

Pre klini čke primene neophodno je ispitati neškodljivost, odnosno bezbednostnovog medicinskog sredstva.

Pretklini čka biomedicinska ispitivanja obuhvataju različite testove ispitivanja biokompatibilnosti materijala.

Svi testovi su standardizovani i definisani umeđunarodnom standardu ISO 10993 Biological evaluation of Medical Devices.

ISO 10993 definiše neophodne testove za ispitivanje materijala u zavisnosti od

� Vrste materijala � Njegove funkcije� Predviđenog vremena kontakta sa tkivom pacijenta na

kome se materijal primenjuje

Ispitivanje biokompatibilnosti

� ISO 10993-1:2009(E)Biological evaluation of medical devicesPart 1: Evaluation and testing with in a risk management process

� ISO 10993-2:2006(E)Biological evaluation of medical devicesPart 2: Animal welfare requirements

� EN ISO 10993-3:2009(E)Biological evaluation of medical devices Part 3: Tests for genotoxicity,carcinogenicity and reproductive toxicity (ISO 10993-3:2003)

� ISO 10993-5:2009(E)Biological evaluation of medical devicesPart 5 :Tests for in vitro citotoxity

� ISO 10993-6:2007(E)Biological evaluation of medical devices Part 6:Tests for local effects after

implantation� ISO 10993-10:2010(E)Biological evaluation of medical device

Part 10:Tests for irritation and skin sensitization

� EN ISO 10993-11:2009(E)Biological evaluation of medical devicesPart 11:Test for systemic toxity

Test primarne kutane iritacije

ISO 10993:10Koriste se najmanje tri klini čki zdrava kunića Albino rase, oba pola, starosti 3 meseca.

I Ispitivano medicinsko sredstvo se aplikuje jednokratno, direktno na obrijanu kožu na oba lateralna polja-kranijalno i prekriva se hipoalergiskim zavojem. Kontakt sa kožom traje 4 hKontrolne površine (oba lateralna polja- kaudalno) seprekrivaju samo hipoalergiskim zavojem.

Promene na koži se prate 1,24, 48 i 72h nakon uklanjanja

medicinskog sredstva i ocenjuju korišćenjem numeričkeskale zaprocenu eritema i edema.

Bez eritema 0Blag eritem 1Dobro definisan eritem 2Izražen eritem 3Težak eritem 4(duboke lezije, kraste, opekotine, nekroze)

� Bez edema 0� Veoma blag edem 1� Blag edem (ivice dobro definisane) 2� Umeren edem (oko 1mm debljine) 3� Težak edem 4(debljina veća od 1mm i širi se van polja aplikacije)

Procena stepena iritacije

Indeks kumulativne kutane iritacije (CII) � 0 - 0,4 neiritirajući� 0,5 - 1,9 blago iritirajući� 2 - 4,9 iritiraju ći� 5 - 8 jako iritiraju ći

Test kumulativne kutane iritacije

� Ovaj test se izvodi na istovetan način, kao i test primarne kutane iritacije, s tim što se aplikacija medicinskog sredstva uzastopno ponavlja 7 dana.

� Posmatranje i izračunavanje indeksa kumulativne kutane iritacije je identi čno kao i u testu primarne kutane iritacije.

Test senzibilizacije

� Izvodi se u cilju ispitivanja pozne senzibilizacije, koju može da prozrokuje medicinsko sredstvo.

� Koristi se 15 klinički zdravih Albino zamoraca (10 eksperimentalnih i 5 kontolnih), oba pola, starosti 3 meseca.I nedelja aplikacije (1., 2., 3. aplikacija)

� Medicinsko sredstvo se aplikuje na površinu kože dorzolateralno (kranijalno-bliže skapuli)na obrijanu kožu svakog od 10 zamoraca. Kao kontrola koristi se 5 zamoraca, na koje se postavlja sterilna gaza natopljena sa 0,5 ml izotoničnog rastvora NaCl.

� kontaktu sa kožom traje 6 sati� Ispitivani i kontrolni uzorak se aplikuju na isti na čin 2. i 3.

dana u I nedelji aplikacije (tri aplikacije nedeljno).

II nedelja aplikacije (4., 5., 6. aplikacija)7 dana posle I aplikacije medicinskog sredstva ista procedura se ponavlja na istim eksperimentalnim životinjama (3 aplikacije nedeljno).

III nedelja aplikacije (7., 8., 9. aplikacija)14 dana posle I aplikacije medicinskog sredstva ista procedura se ponavlja na istim eksperimentalnim životinjama (3 aplikacije nedeljno).

IV nedelja aplikacije (10. aplikacija-”faza promena”)� Posle pauze od 14 dana nakon poslednje aplikacije u III

nedelji (9.aplikacija), medicinsko sredstvo se postavlja na obrijanu kožu na netretiranom kaudalnom dorzolateralnom područiju kod istih eksperimentalnih životinja.

� Ispitivano medicinsko sredstvo se ostavlja u kontaktu sa kožom tokom 6 sati.

� Tretman kontrolne grupe obavlja se u istim vremenskim periodima kao i za eksperimentalnu grupu.

� Posmatranje eventualnih kutanih lezija vrši se neposredno nakon uklanjanja medicinskog sredstva, 24h i 48 h posle svake aplikacije.

� Kutane promene procenjuju se na koži za svaki navedeni period i obeležavaju prema numeričkoj skali za primarnu kutanu iritaciju.

� Izračunavanje indeksa senzibilizacije je identično kao i u testu primarne kutane iritacije.

Ispitivanje citotoksičnosti in vitro

� ISO 10993:5Koristi se direktni kontakt ispitivanog medicinskog sredstva sa ćelijskom kulturom fibroblasta (L 929).

Negativna kontrola – uzorak za koga je pouzdano utvrđenoda nije citotoksičan

Pozitivna kontrola – uzorak za koji je potvrđeno da dovodido citotoksičnih promena (4% rastvor fenola)

Posebna kontrola - kultura ćelija fibroblasta bez testmaterijala

� Nakon direktnog kontakta tokom 24 h sa ćelijskom kulturom fibroblasta, određuje se prisustvo / odsustvo citotoksičnog efekta.

� Citotoksičnost se procenjuje kvalitativno: malformacije, degeneracije, odlepljivanje od podloge, fragmentacije i liza ćelija.

� Kvantitativni esej indeksa promena:

0 nema citotokisčnog efekta1 blaga citotoksičnost2 i 3 umerena citotoksičnost4 i 5 ozbiljna citotoksičnost

� Kvalitativni esej indeksa promena:

0 bez promena1 blage promene2 srednje izražene promena3 ozbiljne promene

Rezultati kvalitativnih i kvantitativnih promena pokazuju da li ispitivano medicinsko sredstvo ispoljava citotoksičniefekat.

Posebna kontrola- kultura ćelija fibroblasta bez test materijala

Negativna kontrola

Pozitivna kontrolaIspitivano medicinsko sredstvo Cegal® N

Ispitivanje lokalnih efekata nakon implantacije

ISO 10993:7Ispitivanje se obavlja za procenu in vivo lokalne podnošljivosti medicinskog sredstva namenjenog za produženi kontakt.

Koristi se 12 klinički zdravih pacova Wistar soja (6 za period od 4 nedeljei 6 za period od 12 nedelja) oba pola, starosti 2 meseca.

Nakon anestezije životinjima se, u dorzo-lateralnom predelu sa obe strane, izvrši incizija i disekcijom se formiraju džepovi.

Medicinsko sredstvo se aplikuje u džepove sa leve strane, a džepovi sa desne strane su kontrolni.

Rane reza sa obe strane se zatvarju šavom.

� Na kraju eksperimentalnog perioda ( posle 4/12 nedelja) životinje se žrtvuju i uzimaju se uzorci tkiva za patohistološku analizu.

� Nakon standardne procedure sečenja i bojenja preseka, histološka analiza se vrši svetlosnom mikroskopijom.

� Zaklju čuje se da li ispitivano medicinsko sredstvo dovodi do patohistoloških promena(pojava fibrozne kapsule i inflamacije, degenerativnih promena, nekroze, granuloma, debrisa i infliltrovanog masnog tkiva).

Fisural D nakon 4 nedelje Kontrola nakon 4 nedelje

Fisural D nakon 12 nedelja Kontrola nakon 12 nedelja

Ispitivanje sistemske toksičnosti

ISO 10993:11Koriste se klinički zdravi miševi soja NMRI Hann ili klini čki zdravi pacovi soja Wistar, oba pola starosti 2 meseca.Ispitivanje akutne toksičnosti(5 eksperimentalnih i 5 kontrolnih životinja)Ispitivanje subakutne toksičnosti(10 eksperimentalnih i 5 kontrolnih životinja)Ispitivanje subhronične sistemske toksičnosti(20 eksperimentalnih i 10 kontrolnih životinja)

Ispitivani uzork medicinskog sredstva priprema se kao

vodeni ekstrakt (2 g sa 10 ml sterilisane vode, drži se u termostatu 72 h na 37°C).

Eksperimentalnoj grupi ispitivani vodeni ekstrakt seaplikuje peroralno gastričnom sondom u dozi od 1ml.

Kontrolna grupa tretira se ekvivalentnom zapreminomsterilisane vode.

� Za ispitivanje akutne toksičnosti aplikuje se vodeni ekstrakt medicinskog sredstva i voda jednokratno.

� Za ispitivanje subakutne toksičnosti aplikuje se vodeni ekstrakt medicinskog sredstva i voda svakodnevno u toku 14 dana.

� Za ispitivanje subhronične toksičnosti aplikuje se vodeni ekstrakt medicinskog sredstva i voda svakodnevno u toku 90 dana.

Opservacija

� Nakon aplikacije prate se uginuća, klinički znaci toksičnosti, zapisuju se sve promene i meri se telesna masa.

� Za ispitivanje akutne toksičnosti prati se još 14 dana.

� Za ispitivanje subakutne toksičnosti prati se još 14 dana, nakon poslednje aplikacije.

� Za ispitivanje subhronične toksičnosti životinje se prate svakodnevno u toku 90 dana.

Eutanazija i autopsija

� Eutanazija se obavlja cervikalnom dislokacijom nakon anestezije etrom.

� Autoposija se izvodi pregledom svih makroskopskih promena na unutrašnjim organima.

� Ukoliko postoje makroskopske promene na organima, uzimaju se uzorci: jetre, slezine, srca, bubrega, mozga, želuca, tankog i debelog creva za izradu patohistoloških preparata.

Tumačenje rezultata:

� Rezultati se porede između test i kontrolne grupe.� Prate se uginuća, klinički znaci intoksikacije pojedinih

funkcionalnih sistema, povećanje ili smanjenje telesne mase i po potrebi patohistološke promene tkiva.

Ispitivani uzorak se smatra netoksičnim, ako za odgovarajući period aplikacije nije došlo do :

uginuća, značajnih klini čkih znakova intoksikacije,makroskopskih promena pregledanih organa

u odnosu na kontrolnu grupu životinja.

ZAKLJUČAK

Značaj ispitivanja biokompatibilnosti je u objektivnoj proceni svakog medicinskog sredstva, kako bi bilo moguće izvršiti analizu rizika, što podrazumeva naučni i etički pristup u donošenju procene RIZIK / KORIST.

Nakon ovih ispitivanja donosi se odluka da li se medicinsko sredstvo može bezbedno primeniti na pacijentuu predviđenim indikacijama.

HVALA NA PAŽNJI !