1

ISOLASI, IDENTIFIKASI, VALIDASI PENETAPAN KADAR ALFA

MANGOSTIN DAN GAMMA MANGOSTIN KULIT BUAH MANGGIS

(Garcinia mangostana L.)

Disusun sebagai salah satu syarat menyelesaikan Program Studi Strata II pada Jurusan

Farmasi Science Sekolah Pascasarjana Universitas Muhammadiyah Surakarta

Oleh:

Kurniawan

V100170009

MAGISTER FARMASI

SEKOLAH PASCA SARJANA

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

2020

2

HALAMAN PERSETUJUAN

ISOLASI, IDENTIFIKASI, VALIDASI PENETAPAN KADAR ALFA

MANGOSTIN DAN GAMMA MANGOSTIN KULIT BUAH MANGGIS

(Garcinia mangostana L.)

PUBLIKASI ILMIAH

Oleh:

Kurniawan NIM. V 100170009

Telah diperiksa dan disetujui untuk di uji oleh :

Dosen

Pembimbing

i

1

HALAMAN PENGESAHAN

ISOLASI, IDENTIFIKASI, VALIDASI PENETAPAN KADAR ALFA

MANGOSTIN DAN GAMMA MANGOSTIN KULIT BUAH MANGGIS

(Garcinia mangostana L.)

OLEH

Kurniawan

V100170009

Telah dipertahankan di depan Dewan Penguji

Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Surakarta

Pada hari Senin, 16 Maret 2020

dan dinyatakan telah memenuhi syarat

Dewan Penguji:

1. Azis Saifudin, Ph.D., Apt. (……..……..)

(Ketua Dewan Penguji)

2. Prof. Dr. Muhammad Da`i, M.Si., Apt (……………)

(Anggota I Dewan Penguji)

3. Prof. Dr. Muhtadi, M.Si (…………....)

(Anggota II Dewan Penguji)

Direktur Sekolah Pascasarjana

Universitas Muhammadiyah Surakarta

Prof. Dr. Bambang Sumardjoko, M.Pd

NIDN : 0014056201

ii

1

iii

1

Isolasi, Identifikasi, Validasi Penetapan Kadar Senyawa Alfa

Mangostin dan Gamma Mangostin Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.)

ABSTRAK

. Kulit buah manggis saat ini banyak digunakan masyarakat sebagai bahan

minuman kesehatan. Oleh karena itu, perlu adanya standarisasi kualitas bahan baku,

sediaan ekstrak dan senyawanya agar memenuhi persyaratan mutu sebagaimana

tercantum dalam Farmakope Herbal Indonesia. Kandungan kulit buah manggis

(Garcinia mangostana L.) terdiri dari berbagai macam xanton terutama adalah α-

mangostin dan γ-mangostin. Keberadaan kedua senyawa tersebut dapat menjadi

parameter kualitas standar dari ekstrak kulit buah manggis sebagai bahan obat

herbal. Metode penetapan kadar baku standardalam ekstrak metanol kulit buah

manggis dengan metode KCKT serta membandingkan kadar α-mangostin dan γ-

mangostin dari dua produk yang ada dipasaran.Ekstrak dibuat dengan metode

maserasi menggunakan metanol. Kemudian difraksinasi dan dipurifikasi untuk

memperoleh fraksi menjadi isolat dengan berbagai teknik kromatografi. Identifikasi

senyawa hasil isolasi dengan KLT menggunakan fase gerak heksan:etil asetat (2 : 3),

H-NMR dan KCKT fase terbalik dengan fase gerak air: asetonitiril (80 : 20), Analisa

kuantitatif senyawa baku standar dengan persamaan regresi dan dibandingkan

dengan kadar senyawa yang terkait dengan dua produk di pasaran. Hasil penetapan

kadar untuk senyawa standar α-mangostin memiliki nilai rata-rata 0,155 mg/mL

dengan kadar produk A 0,17 mg/mL dan kadar produk B 0,23 mg/mL. Kadar untuk

senyawa standar γ-mangostin nilai rata-rata 0,386 mg/mL dengan kadar produk A

0,16 mg/mL dan produk B 0,232 mg/mL. Validasi metode penetapan kadar dengan

menentukan nilai-nilai parameter linearitas, batas deteksi dan batas kuantitasi.

Linearitas α-mangostin menunjukkan nilai koefisien relasi (r) sebesar 0,993 dengan

LOD sebesar 0,043 mg/ml dan LOQ sebesar 0,129 mg/ml. Sedangkan γ-mangostin

nilai koefisien korelasi (r) sebesar 0,997 dengan LOD sebesar 0,169 mg/ml dan LOQ

sebesar 0,51 mg/ml. Hasil uji α-mangostin dan γ-mangostin telah memenuhi kriteria

validasi

Kata kunci: Garcinia mangostana L, metabolit sekunder, α-mangostin dan γ-

mangostin, isolasi, fraksinasi dan purifikasi.

ABSTRACT Mangosteen rind is currently widely used by the public as a health drink.

Therefore, it is necessary to standardize the quality of raw materials, extracts and their compounds in order to meet the quality requirements as stated in the Indonesian Herbal Pharmacopoeia. The content of mangosteen rind (Garcinia mangostana L.) consists of various kinds of xantons, especially α-mangostin and γ-mangostin. The existence of these two compounds can be a standard quality parameter of mangosteen rind extract as herbal medicinal ingredients.The standard levels of methanol extract of α-mangostin and γ-mangostin in the mangosteen peel was extracted by HPLC method and the levels of α-mangostin and γ-mangostin from two products on the market were compared. The extract was made by maceration method using methanol. Then fractionated and purified to obtain fractions into isolates by various chromatographic techniques. Identification of isolated compounds by TLCused mobile phase hexane:ethyl acetate (2: 3), H-NMR and HPLC reversed phase with water:acetonitrile (80:20). Quantitative analysis of standard raw compounds using regression equations and compared with compound levels of two related products in the market. The results of the validation analysis of the determination of content for the standard alpha mangostin compound

1

1

has an average value 0,155 mg/mL whith for A product levels are 0,17 mg/mL and B product levels are 0,23 mg/mL. Content determination validation for gamma mangostin standard compound have an average value 0,386 mg/mL whith for A products are 0,16 mg/mL and B products are 0,232 mg/mL. Validation of the determination method by determining the values of linearity parameters, detection limits and quantitation limits. α-mangostin linearity shows the value of the relation coefficient (r) of 0.993 with a LOD of 0.043 mg / ml and LOQ of 0.129 mg / ml. While γ-mangostin the value of the correlation coefficient (r) of 0.997 with a LOD of 0.169 mg / ml and LOQ of 0.51 mg / ml. α-mangostin and γ-mangostin test results have met the validation criteria Keywords: Garcinia mangostana L, secondary metabolites, α-mangostin and γ-mangostin, isolation, fractionation and purification

PENDAHULUAN

Kulit buah manggis saat ini banyak digunakan masyarakat sebagai minuman

kesehatan. Oleh karena itu, perlu adanya standarisasi kualitas bahan baku, sediaan

ekstrak dan senyawanya agar memenuhi persyaratan mutu sebagaimana tercantum

dalam Farmakope Herbal Indonesia. Adanya penelitian standarisasi senyawa dari kulit

buah manggis ini diharapkan bisa memberikan kontribusi bagi masyarakat dan industri

obat tradisional agar kualitas senyawa kulit buah manggis dapat sesuai standar yang

ditetapkan.

Bioaktif metabolit sekunder dari Garcinia mangostana L adalah xanton,

xanton termasuk senyawa yang terdiri dari cincin aromatik trisklik, disubstitusi dengan

berbagai jenis gugus metoksi,isopren dan fenolik (Walker,2007). Senyawa itu

diantaranya adalah3-isomangostin, 9-hidroxicalabaxanton, 8-desoxigartanin, gartanin

(Warker,2007), senyawa mangostin baik (alfa, gamma dan beta) mangostin (Akao.,

2008). Senyawa mangostin adalah senyawa paling banyak yang ditemukan di kulit

buah mangis ( Jung,2006). Senyawa mangostin pada kulit manggis umumnya bersifat

non polar (Walker,2007).

Senyawa xanton telah banyak diteliti dan dilaporkan memiliki potensi

aktivitas, antitumor, antioksidan, antinflamasi, antijamur, antibakteri, antialergi,

antimalarial dan antiviral. Selain itu, mampu menghambat pertumbuhan sel kanker

payudara, ,small cell lung cancer, epidermoid carcinoma dan hepatocelullar carcinoma

(Obolskiy, 2009). Dapat menghambat pertumbuhan sel kanker usus besar (Akao, 2008).

Dan juga mempunyai aktifitas antiproliferatif terhadap sel leukimia HL60 dengan

menginduksi apoptosis, menghambat Mycobacterium tuberculosis dan sebagai

antioksidan (Jung,2006).

Isolasi alfa mangostin dan gamma mangostin akan dilakukan dengan metode

kromatografi preparatif, kolom dan juga dengan Sephadex. Identifikasi dengan KLT

fase gerak non polar, KCKT menggunakan fase gerak yang polar, menggunakan fase

diam C18 (Pothitirat and Gritsanapan, 2009), prinsipnya dengan cara metode KCKT

2

1.

1

tersebut menggunakan fase gerak tertentu untuk memisahkan dan memurnikan senyawa

xanton, juga mangostin yang adadi kulit buah manggis (Walker, 2007).

Berdasarkan uraian tersebut, maka menjadi relevan untuk dilakukan penelitian

apakah isolat α-mangostin dan γ-mangostin bisa diperoleh dari isolasi Garcinia

mangostana L., agar diperoleh standar baku kadar α-mangostin dan γ-mangostin yang

diperoleh dari kulit buah manggis dengan metode KCKT dan diketahui perbandingan

kadar senyawa α-mangostin dan γ-mangostin yang ada di pasaran. Adanya penelitian

standarisasi senyawa dari kulit buah manggis ini diharapkan bisa memberikan

kontribusi bagi masyarakat dan industri obat tradisional agar kualitas senyawa kulit

buah manggis dapat sesuai standar yang ditetapkan.

METODE PENELITIAN

Bahan dalam penelitian ini meliputi ekstrak Garcinia mangostana L., yang

diperoleh dari industri yang bekerja sama dengan laboratorium SEFA, serbuk manggis

dari Purworejo, pelarut metanol teknis, methanol pro analysis, etanol, asetonitril, etil

asetat, heksana, gel silica, plat KLT fase normal dan fase terbalik. Alatnya meliputi

Rotary Evaporator, KCKT, kolom KCV, H-NMR dan alat gelas lainnya yang

diperlukan.

Metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi, yaitu serbuk Garcinia dari

laboratorium SEFA ditimbang 5 gram diekstraksi dengan methanol 10 ml, disonifikasi

dan disaring, fraksinasi dengan ditambahkan air 10 ml dan etil asetat 10ml sebanyak

3x. Dalam pemilihan fase gerak yang sesuai untuk KLT fase normal yang dilakukan

berbagai variasi diantaranya metanol-kloroform (1:9), heksana-etil asetat (5:5),

kloroform-metanol (9,5:0,5), heksana-etil asetat (2:3). Sedangkan untuk fase terbalik

fase diam C-18 dengan fase gerak metanol-air (1:1) dan asetonitril-metanol-air (1:1:1).

Simplisia Garcinia diambil 400 gram ditambah metanol teknis sebanyak 2000 mL

dibiarkan selama tiga hari, dalam erlenmeyer dan disonifikasi selama 30 menit

kemudian ekstrak disaring (3x) dan dievaporasi pada suhu 7 dengan rotary

evaporator hingga pelarutnya hilang dan didapatkan ekstrak kental. Ekstrak metanol

yang diperoleh difraksinasi dengan corong pisah dengan pelarut.

Ekstrak metanol sebanyak 37g difraksinasi dengan ditambahkan air sebanyak

50ml dan etil asetat sebanyak 50ml sebanyak 3 kali. Kemudian corong pisah diambil

ekstrak yang sudah terpisah. Diperoleh fraksi sebanyak 16,49g. Sebanyak 15g diambil

dimasukkan pada Kolom KCV memiliki spesifikasi ukuran 15 x 4 cm dengan fase diam

silika gel (merck Sie-gel 60 GF254) berbobot 150 g dengan tinggi silika ± 10 cm saat

3

2.

1

Tabel 1. Hasil Rf Isolasi

α-mangostin γ -mangostin

0,80 0,93

dimasukkan kolom dan sampel dicampur 10 g silika gel impregnasi (merck kieselgel 60

GF254 0,2-0,5 mm). Fase gerak yang digunakan berurutan heksan (100%); heksan:etil

asetat (4:1); heksan: etil asetat (3:2), heksan: etil asetat (2:3), heksan:etil asetat (1:4)

dan etil asetat 100% masing-masing volumenya 600 ml.

Hasil sub fraksi dicek profil KLT dan dilihat di lampu UV 254 nm dan 365

nm. Apabila sudah tunggal bercaknya botol dipisahkan dan yang belum tunggal untuk

pemurnian lanjutan. Purifikasi dilakukan menggunakan kromatografi sephadex dan

KLT preparatif. Hasil pengecekan profil KLT menunjukkan fraksi yang dilakukan

purifikasi adalah fraksi B dengan bobot ± 3,26 g menggunakan kromatografi eksklusi

sephadex 20-LH (GE). Spesifikasi kolom yaitu panjang 50 cm, lebar 3 cm, ketinggian

fase diam 25. Fase gerak yang digunakan adalah metanol dan pembilasan kolom

menggunakan metanol. Pemisahan dilakukan dengan mengamati pemisahan warna pada

kolom dan menampung setiap pemisahan pada wadah dengan volume bervariasi. Hasil

pemisahan noda senyawa dikerok dan dipisahkan. Senyawa isolat dicek kemurnian

menggunakan KLT fase normal silika gel GF254 0,25 mm dengan fase gerak heksana :

etil asetat (2:3) dan KLT fase terbalik Silica gel 60 RP-18 F₂₅₄. Pemisahan senyawa di

validasi kemurniannya dengan KCKT dengan fase gerak air : asetonitril (8:2). Hasil

isolat dilanjutkan identifikasinya dengan H-NMR.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil isolat profil KLT alfa mangostin dan gamma mangostin dilihat di lampu UV

254 dan 365 nm dengan fase gerak hasil optimasi yang sudah dilakukan orientasi

sebelumnya.

Gambar 1. Hasil identifikasi KLT Fase normal dengan fase gerak heksana-etil asetat (2:3)

Hasil KLT dari isolasi senyawa dengan Rf α-mangostin adalah ,8 dan γ-

mangostin adalah 0,93 dengan fase gerak heksana-etil asetat (2:3) dibandingkan dengan

nilai Rf pada jurnal penelitian (Muchtaridi, 2017; Andayani, 2017) dengan nilai Rf α-

mangostin adalah 0,48 dan γ-mangostin adalah 0,8. Dari penelitian ini kromatogram

4

3.

1

yang diperoleh bahwa senyawa α-mangostin terjerab lebih lama pada fase diam silica

gel F254 yang polar, sehingga spot yang yang dihasilkan akan berada dibawah spot α-

mangostin memiliki polaritas yang lebih polar dibandingkan dengan γ-mangostin. Dari

beberapa referensi dan penelitian lain bahwa α-mangostin lebih polar dibandingkan

dengan γ-mangostin.

Senyawa hasil isolasi (isolat) dicek identitasnya menggunakan KCKT dengan fase

gerak menggunakan air : ACN (8:2) dan fase diam menggunakan kolom C-18 (RP

Cosmosil) dengan ukuran 150 mm x 4,6 mm. Hasil elusi dengan fase gerak tersebut

menunjukkan bahwa alfa mangostin memisah pada menit ke 2,982 dan gamma

mangostin memisah pada menit 4,222.

Gambar 2. Campuran alfa mangostin dan gamma mangostin

Gambar 3. Standar alfa mangostin

Gambar 4. Standar gamma mangostin

Analisa kadar baku standar yang dilakukan adalah dengan membandingkan

waktu retensi (Rt) senyawa sampel dengan konsentrasi kadar baku yang diperoleh.

Analisis kuantitatif yang dilakukan adalah penetapan kadar alfa mangostin dan gamma

mangostin berdasarkan luas puncak/area under curve (AUC) dari baku.

Alfa Mangostin

5

1

Gambar 9. Kurva Baku α-mangostin

Persamaan regresi : Y= bx+a, (r= 0,993 ; a= 92350; b =85260071,8)

Tabel 4. Hasil kadar baku standar alfa mangostin

No Konsentrasi

(mg/mL)

Luas Area (y) Kadar (x)

(mg/mL)

1 0,4 34245780 0,39

2 0,2 19486138 0,218

3 0,1 10059574 0,107

4 0,05 4508168 0,042

5 0,025 2394396 0,017

Rata2 = 0,155

No Konsentrasi

(mg/ml)

Luas Area

(y)

ý (y- ý) (y- ý)²

1 0,4 34245780 35027528,64 -781748,64 61,11309361 x 10¹º

2 0,2 19486138 2628714,403 16857423,6 28417,27304 x 10¹º

3 0,1 10059574 1776107,285 8283466,715 6861,582082 x 10¹º

4 0,05 4508168 1349803,274 3158364,274 997,5264887 x 10¹º

5 0,025 2394396 1257744,053 1136651,9 129,1977542 x 10¹º

∑= 36466,69246 x 10¹º

Sy/x / n-2

= / (5 – 2)

= 11025227,5

LOD = 3,3 x

= 3,3 x

= 0,043 mg/mL

LOQ = 10 x

= 10 x 0,0129

= 0,129 mg/mL

Sy/x 11025227,5 ; LOD = 0,043 mg/mL; LOQ = 0,129 mg/mL

6

1

Hasil analisa identifikasi senyawa alfa mangostin dengan KCKT diperoleh

data bahwa isolat alfa mangostin teridentifikasi pada waktu retensi (Rt) menit ke

2,639 dengan hasil yang mendekati waktu retensi (Rt) pada standar alfa mangostin

yaitu pada menit 2,982. Ini menunjukkan bahwa dengan metode KCKT fase terbalik

dengan fase diam (C18) yang kurang polar dibandingkan fase gerak (air : asetonitril)

(80 : 20) maka alfa mangostin akan terpisah dan teridentifikasi lebih cepat karena

polaritasnya yang polar.

Gamma Mangostin

Gambar 10. Kurva Baku γ-mangostin

Persamaan regresi : Y= bx+a, (r= 0,997 ; a= - 32160; b =22286187,6)

Tabel 5. Hasil kadar baku standar gamma mangostin

No Konsentrasi

(mg/mL)

Luas Area (y) Kadar (x)

(mg/mL)

1 1 21831883 0,99

2 0,5 11355707 0,524

3 0,25 4738107 0,227

4 0,125 2374971 0,12

5 0,062 1283226 0,072

Rata2= 0,386

No Konsentrasi

(mg/mL)

Luas Area

(y)

Ý (y- ý) (y- ý)²

1 1 21831883 21969297,76 -137414,76 1,888281627 x 10¹º

2 0,5 11355707 11122233,88 233473,12 5,450969776 x 10¹º

3 0, 25 4738107 5254656,94 -516549,94 26,68238405 x 10¹º

4 0,125 2374971 2468883,47 -93912,47 0,881952022 x 10¹º

5 0,062 1283226 1075996,73 207229,27 4,294397034 x 10¹º

7

1

∑= 39,19828451 x ¹º

Sy/x / n-2

= / (5 – 2)

= 1143070,201

LOD = 3,3 x

= 3,3 x

= 0,169 mg/mL

LOQ = 10 x

= 10 x 0,005129052

= 0,51 mg/mL

Sy/x = 1143070,201 ; LOD = 0,169 mg/mL ; LOQ = 0,51 mg/mL

Hasil analisa identifikasi senyawa gamma mangostin dengan KCKT diperoleh

data bahwa isolat gamma mangostin teridentifikasi pada waktu retensi (Rt) menit ke

3,633 dengan hasil yang mendekati waktu retensi (Rt) pada standar gamma mangostin

yaitu pada menit 4,222. Ini menunjukkan bahwa dengan metode KCKT fase terbalik

dengan fase diam (C18) yang kurang polar dibandingkan fase gerak (air : asetonitril)

(80 : 20) maka gamma mangostin akan terpisah dan teridentifikasi lebih lama karena

polaritasnya yang kurang polar dibandingkan alfa mangostin. Gamma mangostin

bersifat kurang polar sehingga terjerab lebih lama pada fase diam yang kurang polar.

Analisa Identifikasi Struktur Kimia dengan H-NMR

Isolat dianalisis kembali menggunakan NMR (JEOL ECA 400) yang

dijalankan pada 400 MHz untuk H-NMR. NMR dapat digunakan untuk menentukan

status senyawa sebagai senyawa yang telah diketahui atau senyawa baru melalui

informasi 1H NMR.

1H NMR memberikan data geseran kimia (δH) antara 0-15 ppm.

Jenis atom tetangga karbon pengikat H dapat diketahui yaitu CH3 pada 0,5-1,5 ppm;

CH2 pada 1-2 ppm; CH2-C= ada 1,2-1,9 ppm; -CH-O pada 3-4,5 ppm, CH2= pada

4,5-5 ppm; - CH benzyl pada 7-8 ppm dan seterusnya. Semakin banyak jumlah

hidrogen maka semakin tinggi puncak pada spectrum.. Pelarut yang digunakan pada

H-NMR adalah aceton.

8

1

Tabel 2. Hasil Analisa NMR

Posisi

3.319 12

3.335 11

3.335 11

4.175 16

4.192 16

5.296 17

6.281 4

6.810 5

Gambar 5. Hasil H-NMR α-mangostin

Gambar 6. Struktur kimia senyawa α-mangostin

Gambar 7. Hasil H-NMR γ –mangostin

9

1

Tabel 3. Hasil Analisa H-NMR

γ –mangostin Posisi Atom H

1.653 – 1.664 14, 15, 19, 20 12 atom H

1.792 12 5 atom H

1.844 17 5 atom H

3.445 – 3.462 11 dan 16 4 atom H

5.218 – 5.276 12 dan 17 4 atom H

6.610 – 6.633 4 dan 5 1 atom H

7.681 – 7.702 5 1 atom H

11.331 1 1 atom H

12.342 7 1 atom H

13.313 6 1 atom H

Gambar 8. Struktur kimia senyawa γ -mangostin

Hasil analisa identifikasi senyawa alfa mangsotin dan gamma mangostin

dengan H-NMR diperoleh data bahwa isolat alfa mangostin dan gamma mangostin

teridentifikasi dengan penjelasan posisi dan memberikan data geseran kimia (δH)

antara 0-15 ppm. Jenis atom tetangga karbon pengikat H dapat diketahui yaitu CH3

pada 0,5-1,5 ppm; CH2 pada 1-2 ppm; CH2-C= ada 1,2-1,9 ppm; -CH-O pada 3-4,5

ppm, CH2= pada 4,5-5 ppm; - CH benzyl pada 7-8 ppm dan seterusnya sesuai yang

dijelaskan pada tabel analisa H-NMR diatas.

Perhitungan Kadar Alfa Mangostin Produk A

Kadar alfa mangostin Produk A dihitung dengan menggunakan persamaan

regresi linier dari kurva baku. Persamaan kurva baku y= bx+a, (r= 0,991 ; a=30421; b

=890667), y= 890667x + 30421 dengan nilai R=0,991. Hasil penetapan kadar sebagai

berikut:

Tabel 6. Hasil Perhitungan kadar alfa mangostin Produk A

No Konsentrasi

(mg/mL)

Luas Area (y) Kadar (x)

(mg/mL)

1 0,3 294121 0,29

2 0,15 174521 0,16

3 0,075 90221 0,067

Rata2= 0,17

Perhitungan Kadar Gamma Mangostin Produk A

Kadar gamma mangostin Produk A dihitung dengan menggunakan persamaan

regresi linier dari kurva baku. Persamaan kurva baku y= bx+a, (r= 0,994 ; a= -

22180; b =1630228,57), y= 1630228,57x + (-22180) dengan nilai R=0,994. Hasil

penetapan kadar sebagai berikut:

10

1

Tabel 7. Hasil Perhitungan kadar baku standar gamma mangostin Produk A

No Konsentrasi

(mg/mL)

Luas Area (y) Kadar (x)

(mg/mL)

1 0,3 461620 0,28

2 0,15 238160 0,16

3 0,075 89550 0,06

Rata2= 0,16

Perhitungan Kadar Alfa Mangostin Produk B

Kadar alfa mangostin Produk B dihitung dengan menggunakan persamaan

regresi linier dari kurva baku. Persamaan kurva baku y= bx+a, (r= 0,998 ; a= -

10179; b =844300), y= 844300x + (-10179) dengan nilai R=0,998. Hasil penetapan

kadar sebagai berikut:

Tabel 8. Hasil Perhitungan kadar baku standar alfa mangostin Produk B

No Konsentrasi (mg/mL)

Luas Area (y) Kadar (x) (mg/mL)

1 0,4 329191 0,41

2 0,2 153731 0,19

3 0,1 77551 0,1

Rata2= 0,23

Perhitungan Kadar Gamma Mangostin Produk B

Kadar gamma mangostin Produk B dihitung dengan menggunakan persamaan

regresi linier dari kurva baku. Persamaan kurva baku y= bx+a, (r= 0,998 ; a= 16475;

b =1203050), y= 1203050x + 16475) dengan nilai R=0,998. Hasil penetapan kadar

sebagai berikut:

Tabel 9. Hasil Perhitungan kadar baku standar gamma mangostin Produk B

No Konsentrasi

(mg/mL)

Luas Area (y) Kadar (x)

(mg/mL) 1 0,4 500630 0,40

2 0,2 248280 0,192

3 0,1 142650 0,104

Rata2= 0,232

Validasi metode penetapan kadar α-mangostin dan γ-mangostin dalam ekstrak

metanol kulit buah manggis (Garcinia mangostana L.) dilakukan dengan

menentukan nilai-nilai parameter linearitas, batas deteksi dan batas kuantitasi. Studi

linearitas α-mangostin menunjukkan bahwa analisis yang dilakukan pada kisaran

konsentrasi (0,4; 0,2; 0,1; 0,05; 0,025) mg/ml memberikan pengukuran nilai

koefisien relasi (r) sebesar 0,993 dengan batas deteksi (LOD) sebesar 0,043 mg/ml

dan batas kuantitasi (LOQ) sebesar 0,129 mg/ml. Sedangkan studi linearitas γ-

11

1

mangostin yang dilakukan pada kisaran konsentrasi (1; 0,5; 0,25; 0,125; 0,062)

mg/ml memberikan nilai koefisien korelasi (r) sebesar 0,997 dengan batas deteksi

(LOD) sebesar 0,169 mg/ml dan batas kuantitasi (LOQ) sebesar 0,51 mg/ml.

Menurut Lawson (1996) nilai r minimum yang dapat diterima untuk jumlah larutan

standar sebanyak 5 larutan adalah 0,991; sebanyak 6 larutan adalah 0,974; sebanyak

7 larutan adalah 0,951 dan sebanyak 8 larutan adalah 0,925. Sehingga pada rentang

tersebut α-mangostin dan γ-mangostin memberikan respon yang linier.

Nilai spesifitas hasil pengujian kemurnian spectrum α-mangostin dan γ-

mangostin diperoleh nilai korelasi diatas 0,99. Menurut Dhandhukia dan Thakker

(2011), uji kemurnian (purity) memenuhi persyaratan jika korelasi > 0,95. Dari

penelitian ini dapat diketahui puncak dan kromatogram yang dihasilkan dapat

dikatakan murni karena nilai korelasi diatas 0,99 dan menentukan kemurnian puncak

menggunakan cross correlation function. Penentuan LOD dan LOQ dilakukan

dengan metode signal to noise (Chan, 2004). Berdasarkan nilai parameter-parameter

tersebut, metode analisis ini dapat dinyatakan valid untuk penetapan kadar senyawa

marker α-mangostin dan γ-mangostin dalam ekstrak metanol kulit buah manggis

(Garcinia mangostana L.).

4. PENUTUP

Senyawa α-mangostin dan γ-mangostin dapat diperoleh dari isolasi Kulit Buah

Manggis (Garcinia mangostana L.). Kadar baku standar α-mangostin 0,155 mg/mL

dan γ-mangostin 0,386 mg/mL yang dihasilkan dalam ekstrak methanol kulit buah

manggis. Validasi metode penetapan kadarnya telah memenuhi persyaratan validasi.

DAFTAR PUSTAKA

Abdulrahim (2012). Quantification of α-β and γ-mangostin in Garcinia Fruit rind

Extract by Reverse Phase HPLC. Journal of Medicine Plant Research. Vol 6.

Adnan, M..(1997). Teknik Kromatografi Untuk Analisis Bahan Makanan, Penerbit

Andi, Yogyakarta.

Andayani, R. (2017). Analisis α-mangostin dalam Minuman Herbal Kulit Buah

Manggis (Garcinia mangostana) dengan KLT-Densitometri. Jurnal Sains

Farmasi dan Klinis.

Anonim (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Dirjen

Pengawasan Obat dan Makanan. DepKes RI.

Akao (2008), Anti cancer Effect of Xanthones from Pericarps Mangosten. Journal

NCBI.

12

1

Amelia, F. (2018). The Optimation of Eluting Condition of Solid Phase Extraction

Method for Mangostin Purification in Mangosteen Pericarp Extract. DOI:

10.22159/ijap.2018v10i3.25415

Backer, C.A, Bakhuizen van den Brink. (1963), Flora of Java (Spermatophytes

Only), Vol. I, Wolter-Noordhoff, NVP., Groningen

Bruneton, J. (1999), Pharmacognosy Phytochemistry Medicinal Plants,Translated by

Caroline K Hatton,2nd edition, Lavoiser, France, pp303-304.

Chan, CC. (2004) Analytical method validation and instrument performance

verification. Canada : John Willey PP: 37-39, 43

Chen, L. (2007). Anti-inflamatory activity of mangostin from Garcinia mangostin.

ScienceDirect. DOI: 10.1016/J.Fct 200709096

Dhandhukia, PC & JN Thakker (2011). Quantitative Analysis and Validation of

Method Using HPTLC, Heidelberg, Springer:11-15

Gandjar dan Rohman. (2009). Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta

Guo, M. (2016). Alpha Mangostin Extraction from the Native Mangosteen (Garcinia

mangostana L.) and the Binding Mecahnism of α-mangostin to HST or TRF.

CrossMark.

Hartanto. (2011). Manggis Budi daya dan Analisis Usaha tani. Kanisius.Yogyakarta.

Hendayana. (2006). Kimia Pemisahan Metode Kromatografi dan Elektrolisis

Modern., PT Remaja Rosdakarya. Bandung

Hutapea, J.R. (1994), Inventaris Tanaman Obat Indonesia Jilid III, Departemen

Kesehatan RI dan Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.

Idawati, S. (2019). Pengaruh Metode Isolasi α-mangostin dari Kulit Buah Manggis

(Garcinia mangostana) terhadap Rendemen α-mangostin. Jurnal P. IPA.

Johnson & Stevenson. (1991). Dasar Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. ITB.

Bandung

Jung (2006). Garcinia mangostana L, A Phytochemical and Pharmacological

Review. Vol 54, No 6.

Kudani, J. (2009). Evaluation of Mangosteen Juice Blend on Biomarkers of

Inflammation in Obese Subject: a pilot, dose funding study. Nutrition Journal.

Larson, Ryan T., Jeffrey M. Lorch., Julia W. Pridgeon., dkk. (2010). The Biological

Activity of alpha-Mangostin, a Larvicidal Botanic Mosquito Sterol Carrier

Protein-2 Inhibitor. J. Med. Entomol. 47(2): 249Ð257 (2010); DOI:

10.1603/ME09160.

13

1

Lawson, L (1996). Evaluation of Callibratiom Curve of Linearity. Guidance Memo.

No. 96-007: 1-9

Mardiana. (2011). Ramuan dan Khasiat Kulit Manggis. Penebar Swadaya. Jakarta

Matsumoto (2003). Induction of Apoptosis by Xanthones from Mangosteen in Human

Leukemia. NCBI. Pub Med.

Misra, H. (2009). Development and Validation of High Perfomance Thin Layer

Chromatography Method for Determination of α-mangostin Fruit Pericarp of

Mangosteen Plant (Garcinia mangostana) using Uv-Vis. ACG Public Catalog.

Muchtaridi (2016). Quantitative Analysis of α-mangostin in Mangosteen (Garcinia

mangostana) Pericarp Extract from four District of West Java by HPLC

Method. Innovare Academic Science.

Muchtaridi (2017). Validation Analysis method alpha mangostin, gamma mangostin

and gartanin mixture in mangosteen (Garcinia mangostana L.) fruit rind

extract from west java with hplc. CrossMark.

Muchtaridi (2020). The Purity Identification and Radiolabeling of α-mangostin with

Technetium 99m. J.Adv.Pharm.Techno Research.

Nakasone, H. Y and R.E. Paull. (1999). Tropical Fruits. GAB Inc. New York. p:

359-369.

Nelli, G. (2013). Antidiabetic effect of alpha mangostin and its protective role in

sexual dysfunction of streptozotocin induced diabetic male rats. Informa. DOI

: 10.3109/19396368.2013820369.

Newman, Cragg, and Snader. (2012). Natural Products in Drug Dicovery and

Development. Journal of Natural Product.

Ni’maa, Dahlia Khairu., Subakir dan Suhardjono. (2011). Perbandingan Ekstrak

Kulit Buah Manggis (Garcinia Mangostana Linn) dengan Ketokonazole 2%

dalam Menghambat Pertumbuhan Pityrosporum Ovale pada Ketombe.

Semarang: Universitas Diponegoro.

Nugroho, Agung Endro. (2011). Manggis (Garcinia mangostana L.) : dari Kulit

Buah yang Terbuang Hingga Menjadi Kandidat Suatu Obat.

Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada.

Obolskiy (2009). Garcinia mangostana L., A Phytochemical. Phytothrapy Research

Phytother. Res 23, 1047-1065

Pratiwi, L. (2017). Development of TLC and HPLC Method for Determination α-

mangostin in Mangosteen Peels (Garcinia mangostana). IJPPR. Vol. 9.

14

1

Permana, Asep W., Siti Mariana Widayanti., Prabawati Sulusi., dan Dondy A S.

(2012). Sifat Antioksidan Bubuk Kulit Buah Manggis (Garcinia Mangostana

L.) Instan dan Aplikasinya Untuk Minuman Fungsional Berkarbonasi.

Bogor: J. Pascapanen 9(2) 2012: 88 – 95.

Pohitirat and Gritsanapan. (2009). The fruit Rind Extract of Mangosteen (Garcinia

mangostana L.)

Rahmah, Sylvia Aulia., Suharti dan Subandi. (2012). Uji Aantibakteri dan Daya

Inhibisi Ekstrak Kulit Manggis (Garcinia mangostana L.) Terhadap Aktivitas

Xantin Oksidase Yang Diisolasi dari Air Susu Sapi Segar. Malang:

Universitas Negeri Malang.

Rukmana R. (1995). Budi daya Manggis. Kanisius. Yogyakarta

Riyadi W. (2009). Validasi Metode Analisis. Tersedia di http://www.chem-is-try.org

Rohman, A. (2019). Chemical Composition and Antioxidant Studies of Underutilized

Part Of Mangosteen (Garcinia mangostana) Fruit. CrossMark.

Saifudin, A. (2014). Senyawa Alam Metabolit Sekunder: Teori, Konsep dan

Teknik Pemurnian (1st ed.). Yogyakarta: Deepublish

Seesoon W. (2012). Antileptospiral Activity of Xanthon from Garcinia mangostana

and Sinergy of Gamma Mangostin with Peniclillin G. Biomed Central.

Shabella, R. (2011), Terapi Kulit Manggis, Galmas Publisher, Yogyakarta.

Silverstein et al. (2005), Spectometric Identification of Organic Compund. Books

ResearchGate.

Stahl. (1985). Analisa Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi. ITB. Bandung

Steenis, C.G.G.J. van. (1947). Flora voor de scholen in Indonesia. Noordhoff –

Kolff N.V. , Batavia.

Sudarsono. (2002).. Uji Aktivitas Anti Radikal Bebas dari Isolat Alfa Magostin Kulit

Buah Manggis. Jurnal Farmasi Indonesia.

Verheij, E.W.M. (1992). Garcinia mangostana L. p. 177-181. In. E.W.M. Verheij

and R.E. Coronel (Eds). Edible Fruit and Nuts. Plant Resources of South East

Asia 2. Bogor. Indonesia.

Walker (2007). HPLC Analysis of Selected Xhantones in Garcinia mangostana L.

Phytochemistry 60 (5) : 541-548

Widowati, W. (2014). HPLC Analysis, Antioxidant, Antiagregation of Mangosteen

Pell Extract (Garcinia mangostana). International Journal of Bioscience

Biochemistry and Bioinformatics. .

15

1

Yodhnu, S. (2009). Validation of LC for the Determination of α-mangostin in

Mangosteen Pell Extract: A tool for Quality Asssesment of Garcinia. Journal

of Chromatography Science. Vol. 47

16