Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in...

233
Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the G12 family signaling pathways Georgina Garrido Antequera ADVERTIMENT. La consulta d’aquesta tesi queda condicionada a l’acceptació de les següents condicions d'ús: La difusió d’aquesta tesi per mitjà del servei TDX (www.tdx.cat) i a través del Dipòsit Digital de la UB (diposit.ub.edu) ha estat autoritzada pels titulars dels drets de propietat intel·lectual únicament per a usos privats emmarcats en activitats d’investigació i docència. No s’autoritza la seva reproducció amb finalitats de lucre ni la seva difusió i posada a disposició des d’un lloc aliè al servei TDX ni al Dipòsit Digital de la UB. No s’autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX o al Dipòsit Digital de la UB (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant al resum de presentació de la tesi com als seus continguts. En la utilització o cita de parts de la tesi és obligat indicar el nom de la persona autora. ADVERTENCIA. La consulta de esta tesis queda condicionada a la aceptación de las siguientes condiciones de uso: La difusión de esta tesis por medio del servicio TDR (www.tdx.cat) y a través del Repositorio Digital de la UB (diposit.ub.edu) ha sido autorizada por los titulares de los derechos de propiedad intelectual únicamente para usos privados enmarcados en actividades de investigación y docencia. No se autoriza su reproducción con finalidades de lucro ni su difusión y puesta a disposición desde un sitio ajeno al servicio TDR o al Repositorio Digital de la UB. No se autoriza la presentación de su contenido en una ventana o marco ajeno a TDR o al Repositorio Digital de la UB (framing). Esta reserva de derechos afecta tanto al resumen de presentación de la tesis como a sus contenidos. En la utilización o cita de partes de la tesis es obligado indicar el nombre de la persona autora. WARNING. On having consulted this thesis you’re accepting the following use conditions: Spreading this thesis by the TDX (www.tdx.cat) service and by the UB Digital Repository (diposit.ub.edu) has been authorized by the titular of the intellectual property rights only for private uses placed in investigation and teaching activities. Reproduction with lucrative aims is not authorized nor its spreading and availability from a site foreign to the TDX service or to the UB Digital Repository. Introducing its content in a window or frame foreign to the TDX service or to the UB Digital Repository is not authorized (framing). Those rights affect to the presentation summary of the thesis as well as to its contents. In the using or citation of parts of the thesis it’s obliged to indicate the name of the author.

Transcript of Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in...

Page 1: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the G12 family signaling pathways

Georgina Garrido Antequera

ADVERTIMENT. La consulta d’aquesta tesi queda condicionada a l’acceptació de les següents condicions d'ús: La difusió d’aquesta tesi per mitjà del servei TDX (www.tdx.cat) i a través del Dipòsit Digital de la UB (diposit.ub.edu) ha estat autoritzada pels titulars dels drets de propietat intel·lectual únicament per a usos privats emmarcats en activitats d’investigació i docència. No s’autoritza la seva reproducció amb finalitats de lucre ni la seva difusió i posada a disposició des d’un lloc aliè al servei TDX ni al Dipòsit Digital de la UB. No s’autoritza la presentació del seu contingut en una finestrao marc aliè a TDX o al Dipòsit Digital de la UB (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant al resum de presentació de la tesi com als seus continguts. En la utilització o cita de parts de la tesi és obligat indicar el nom de la persona autora.

ADVERTENCIA. La consulta de esta tesis queda condicionada a la aceptación de las siguientes condiciones de uso: La difusión de esta tesis por medio del servicio TDR (www.tdx.cat) y a través del Repositorio Digital de la UB (diposit.ub.edu) ha sido autorizada por los titulares de los derechos de propiedad intelectual únicamente para usos privados enmarcados en actividades de investigación y docencia. No se autoriza su reproducción con finalidades de lucro ni su difusión y puesta a disposición desde un sitio ajeno al servicio TDR o al Repositorio Digital de la UB. No se autoriza la presentación de su contenido en una ventana o marco ajeno a TDR o al Repositorio Digital de la UB (framing). Esta reserva de derechos afecta tanto al resumen de presentación de la tesis como a sus contenidos. En la utilización o cita de partes de la tesis es obligado indicar el nombre de la persona autora.

WARNING. On having consulted this thesis you’re accepting the following use conditions: Spreading this thesis by the TDX (www.tdx.cat) service and by the UB Digital Repository (diposit.ub.edu) has been authorized by the titular of the intellectual property rights only for private uses placed in investigation and teaching activities. Reproduction with lucrativeaims is not authorized nor its spreading and availability from a site foreign to the TDX service or to the UB Digital Repository. Introducing its content in a window or frame foreign to the TDX service or to the UB Digital Repository is not authorized (framing). Those rights affect to the presentation summary of the thesis as well as to its contents. In the using orcitation of parts of the thesis it’s obliged to indicate the name of the author.

Page 2: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

������������� ��� ����� ����

����� � ���������������������� � �����������

���������������� ����������������������

�����������������������������������

����������� ����������������������� ���������� ���

������������ ����������������� � �����������

���������������������� ������������������������������������������������������������������������������� ����� ������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������ �!��"������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������!���� ���� ����

���������� #�$�%�����������

���� ��� �����������!�&������'�� � � ������������������������������('���)*!%'!�

��

� �

Page 3: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 4: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

������������+�

���,���+�

� �

Page 5: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 6: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

����������� ��������������� ����������������� ������������

!���������������"������������ � +��

�" ����������������-.��� ��"����

(���/���)�

� �

Page 7: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 8: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

����� � � +� ������ ������� �� ��� ������� ��� �0.�� ��� � ��� ���� ��� � � �

���� $������� �� ����� ��������������������������������� ����������

���1���2������������+� 0�����3����� ��0�1��2����.���1 ����� ����� ���� ����

�������1������4���� #1������3#����������������������������0.������ ��5�������

��� #������6���������/���1#���� ��"��������"�� �� �"���� ��������"��������

��� .� ��"� � ��� �� ��"��� ����� ��7���� ��� ���� ��*�� ����� �� ��� ��������

����������1�+�/����������� � ������� � .��� /��'���7������"� � ������� ���

�����4��������������+���������" ���� ����� �����7������� � ��

� 8����� ������� ��"/� �� ������������� �� ��0.�� �6�� ����� � ���� �� �� ���

%������ ����������� �� ����3�� ������������������� �� ���.���/����� � �

��� ��1�������� ���0�6������ #1�����"��+� ��"/��0.����� ���� �����$��� �

����������� ����� ���������� ������1���� � �������9��*���� � �9����7�������

1�*����"������������� �����"� ���

,��"/� ������ ������� ��� ���� :;��� ���� �������� ��� �� �� �� ��� � ���

�����������&������+�6���������� ���/�������������6�� ��������������3��������

'� ���� ��+� ������ ������� ��� ���� !����+� � ��� ��� � � � �� �� ���� � 1��3+� ���� ����

����3�� �+���������6��������������1��� �����"��� � ����

� ����/�� ��"/���������������� � ����������� ���������� �����.� ���� �

���� ����� �� ���������!���+��������������� ��< � ������ ��������������

��������������� �0����4������7� �������"��� ���+�����������������������������

1��������������+����,.����+������=���+������%�����+����>�?�+������������+������� �.+���

����� �.+����0@����+��� � �������������������.�������� ������"��� �����������

Page 9: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� ������������0�������������������'���7����������#��������� ������������

��������� ����6� +������������"����9���9���� <�������������1���� � ����5���

���� ������������9�����������9�� ����� 0�����3����1��� ��� � � �������0.���

��� � +� ��� ��� ���� � � �� �� �� ���� +� .� 3��� ���� � ��"� �A� ����/�� ��"/�

������ ������� ���� ��� ����.�� �4�� ��������+� ������� �� �0B� ���������� �� �0B� �� � �� ���

�6������ ������� ���������0����� ����������.������� ���������������

������� ���� ��� ,��"/� ������� �� �0'����+� ��� ��� ���� ���"��� � � �� ��� ����

���&��"�����4+���7�����,��"/�������������<��+����������"���������������� � ������

���� �������� �� �� ��� �� �� � ������ �� ��� ������ ��� �0����+� �������� �� ��� ��� ���

����������7���������8�������+����'��+�������+��0�����+�����7 ���+���>�.�+��0C����+�����

� ,��"/���������������� �������������� ���������"����#������=��� �����

���#�������.���/��1 ����������+�����������������.���/������� �����0���� ��������+�

�� ����������� �����������7���������=� 7���+����0B� .�+�����#����+��0����+��������+�

���������+��0��#"��+�����

� B����� ������ ��������" �.�������� ��/���7������" �"��� �������

��������� �0.������������� ����������� ���� %������������ � �� 1��#������� ���

������������� �������� �����1������������3�+�������������6�����

���� ���6�������7���������������������#����������+����2��+�����3+�D���+����+�

!��� +��������+������/����� ���'��+�>����+�E����+���3+�������������/������7���

��� �����3���� :�� ��� � � /�� ��� ����������������� ��������� .������� �

6�� ������ �FG� �� �� ("�11�����+� ��� 6�� 1�� �� �� ������)� �� ������� ����� � � 6�� .��

���3� +������0���������"/�������.������7��������������� ��"����1�� ����B��

��������-���������������������-���+�6��������H�� � I����������������� �����

�������+������� �� ��������+�������������� �������3����� ��*.�� 6�� ��.��.��

1 ��/����$�����B������������.�������� �6�� �����?� ������ �+��#����.������1��

���� � ��� �������� :����+� %������ �� !������ !���� ��+� �� �� ��� �� �#�� �� ���� � �

�-�"������������ ����"�#������+������.���� 1 ���� ��������� ��� ������2����

��7������ � �����1�*���/��1��2���

����������������� � ����������-B���������!��� ��������1������JK��� ��

���/������������3���� � ������+������� ����������H1���� ���I��������������

Page 10: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

���/����"� 3����� ������� ��������4���� ������� ������ �3������� �/������� �

����� �� +� 1��LG+����������� �������������������������������������������� �

��� ������� ��� ������ �� �-� � �� ����� 1�*.�� ������� ��7���� ��� � ��� ���7�

����������1�*����"�+�������*.�+����� ������������� � ���

� 8��������������� ������� 1��#������������4����������������4��� >�������

���� ����/����������� ���� ���"��� +�����.���� ����3#��B����������0.���1 �

�� ��� ������+� � ����� �� ���� ���� ��� � ��� ��� "�� � � �� ������0.���

���� � ����������� ����0.������ � ��������������� � 1�� ���%������+� 6����������

�����4���,��"/������������������������1��#�������# �������>���+��0B�����������������

>�� 1�� �� �� ��� ��� ����3�+� ���� �� � �� ������ ��� �� ��� 1�� �� ��� "/+�

���������'���7����������� �������������

� '�����+��������������,��"/��4���������������������������.���� ���� ��

�0.��.������ � � ��,� �������4��/����7�����������%�����0.����6�� +����� � +�

�������� �� ��"� � � �-� ���� ��� #���+� ���� 6�� ��� � ���� �� ����� B�� �07�"� � �

�0� ��+� ���� �0.� �� � � ���������� �� ��� ��� ����� ��� ��7��� "/+� ��� ����

����� 7����� �� ������������������������/��������������0������!�����"����

���� ���������4�+��0.���������� �������������0�1��2����� �"�����M��������������

� �����"����#����+���������������������������������������������3���

����.���������������������������������� ����������������������� �������

�0.�������������3�����������������1������4��:����� � �/��������������1� ���

��� �"/����� ��1���� +������3��������������7������� � ���

� '����?� ���������� ������������ ��������� 6�� 1��FG��� ���,���+� ���

.��1 ���������������� � ���0�� ���,�� ���������9"�$���9����1��������+�����

��������������� �������� ��/����0���� �� �� ���������� ���������������������

���/�� ����� #1��AA���� �� � �����3�����������������"������� #1������������

���������� ����� �����4�������� ����� �� ��+������" �.������� � 1����� ��+�

�����.������� �����+����0.�������� ��� ���������� ���������� ���1#������

��3#� ���� ��� ��� �6��� �� ��� ������� �������4� ��# ���� -������� ��� �� � ��� ����

!���3- �.������ ��������������0.������� �����������:���� ������������������

�����������#+�������6��.��������,0� �����

Page 11: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 12: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 13: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 14: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

������ �����

Page 15: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 16: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

���NB8'�,'O=%� JL�

� �

'=,NO��!,'O=� JP�

F������� ������������ ������������� LF�

F�F����� ���������� ��� �����1� �����1���!N� LF�

F�J�5 �� ������������ ���� LL�

F�L������ ���Q*��"��� �� LR�

F�S�,.��TU����� LV�

J���FJ���"1���� � SG�

J�F��� ��� �����1��FJ���� ����" ���!N�� SG�

J�J�B11� �����1� .��QFJWFL���"��� �� SF�

J�L���� ��� �����1��QFJ�����QFL�" �N�%���� ���� SL�

J�S�N���� �����1��FJ���� ���� SL�

L�������������������1��FJ���"1���� � SS�

L�F��QFJWFL������������� ���� SX�

L�J��QFJWFL�������� ����1���� ���� SR�

L�L��QFJWFL������������� ����1���� ������������� SR�

S��N.���,����� SV�

S�F��� ��� �����1�N.����� ���� KG�

K��N5*N.��B��� KG�

K�F�% ��� �����1� �����1�N5*N.��B��� KF�

K�J�:�����$� �����1�N5*N.��B��� KJ�

K�L�N���� �����1�N5*N.��B����� ���� KL�

K�S�O .����"����1� .�N.��B��1���� � KK�

X���B�*5F� KX�

X�F�% ��� ���1� �����1��B�*5F� KR�

X�J�N���� �����1��B�*5F�" ������ �"���� KV�

X�L�N���� �����1��B�*5F�" ��.���.�� �� ���� KV�

X�S��B�*5F������ ����� KP�

X�K��. �����������1��� ������1��B�*5F� XG�

Page 17: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

R��!���� ��� XG�

R�F�!���� �������� ���� XF�

R�J��� ����� XJ�

R�L�! �Y������ XJ�

� �

O�>B!,'8B%� XR�

� �

��,BN'�:%��=���B,5O�%� RL�

F���� ������ RK�

F�F���11���������� ����� RK�

F�J�O��������� ��� RR�

F�L�%.�� �.�������N=�� RR�

F�S��������� RV�

F�K������� ��� �"���� VG�

F�X�%����� ��� �"���� VF�

F�R�!�������� VF�

J��� .��� VJ�

J�F��=���������� ����� VJ�

J�F�F�!��� � ������������ ���� VJ�

J�F�J���� ����� ����1���� ���� VL�

J�F�L��=��3 ��� ����1����"�� ���������� VL�

J�F�S��=�������������� ���.������ VS�

J�F�K��=������1��� ����1��������������� VS�

J�F�X���� ������.������� ����(�!N)� VS�

J�F�R��=���������� VK�

J�J�!���!�� ��� VR�

J�J�F����� ������������"��� ������ .������ VR�

J�J�J�% ��������1�$���W .�Z��������� VR�

J�J�L�,������ � ����1� ����� VV�

Page 18: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

J�J�S�% �"��Y���Y�Z����������� VP�

J�J�K�'����"����� ���3��������������,*NB3[�% � �� PG�

J�J�X�!��� �� �� �� PG�

J�J�R�!���� ��.����$� ���� PG�

J�J�V������� �����1������ �� �� PF�

J�J�P�� ����� �����1���� �������� �� ���� PF�

J�L���� ���B�� ���.������ PF�

J�L�F�%�%*���B�B�� ���.������ PF�

J�L�J�\� ���"�� � PJ�

J�L�L�'����� � ���� PJ�

J�S�'����������� � ����('�)� PL�

J�S�F�!�������'�� PL�

J�S�J�'���� �*5���������"��� PL�

J�K������ �����1��� ��� ��B����������� �� �� PL�

J�K�F�B3���������������1��� �����1��%,*N.���FR�� PL�

J�K�J�����*�Z���1��� ����B��� PS�

J�X�%NB*:���1�������� �� PK�

J�R������������������ ��.��� � � PK�

J�V�:��������������� PX�

J�P�\���*.���������� � PX�

J�FG������ �"�����*���� � �������� � PR�

J�FF�������1����������� � PR�

J�FJ����� �����1������ ���" �1��Z�� �� � � PR�

J�FL�% � �� ��������� ���� PV�

� �

NB%�:,%� FGF�

F���QFJ������ ���� ����� FGL�

F�F��� � ����� ��"� �����1��QFJ� � FGL�

F�J��QFJ�������$��� � .���"� �� ��� ��� FGP�

F�L��QFJ�������$��� � .��� ������� FFJ�

Page 19: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

F�S���� �����1��QFJ�������1� ����������������� FFL�

J��'� �1��� �����1��B�*5F�����������11� ���1����QFJ� FFV�

J�F��QFJ���� ����� ��� ��Z� .��B�*5F�� FFV�

J�F�F��QFJ���*������������ � ��Z� .��B�*5F� FFV�

J�F�J��B�*5F��� ��� ��Z� .��QFJ� .����.� .��5*�5������� FJG�

J�F�L�,.��� ��� ����" Z���B�*5F�����QFJ�����.����������QFJ��� ��� ����

FJL�

J�J��QFJ���� ���B�*5F��� ��� ���� FJX�

J�J�F��QFJ��.������B���� ��� ��1��B�*5F� FJR�

J�J�J��B�*5F���� ����������1�����QFJ� ��N.���� ��� ���� FJV�

J�L�N���� �����1��B�*5F� FJP�

J�L�F��QFJ������ �� .�������1��B�*5F�1��������� �"����

FLG�

J�L�J�5���*��������$� �����1��B�*5F� FLF�

J�L�L�'� ��� �����1��B�*5F�Z� .�FS*L*L� FLJ�

J�L�S��.���.�� �� �������%VVK����%PKP��1��B�*5F������ ��11� � .��� ��� ����Z� .��QFJ�

FLK�

L��%�"��������������$� �����1��B�*5F� FLX�

L�F��B�*5F���������$��Z� .� .������������� �������B������� FLX�

L�J��'� ����������������$� �����1��B�*5F����5:������� FSG�

L�L��B�*5F�������� �� � .���"� �� ��� ��� FSJ�

S��'������� ��1��B�*5F�����QFJ������������� .Z� �� FSL�

S�F�!�������$� �����1��QFJ�����B�*5F�� � .���"� � FSL�

S�F�F��.���.�� �� ����" ����������Y����� FSK�

S�J�!��� ����1���� ���������" ��QFJ������ ������B�*5F�Y���Y�Z�������

FSV�

S�L��B�*5F�Y���Y�Z���11� ����������� ���� FSP�

� �

�'%!�%%'O=� FKL�

F���QFJ������ ��� �Y������ FKX�

J��'� �1��� �����1��B�*5F�����������11� ���1����QFJ� FKP�

J�F������������ FXK�

L��%�"��������������$� �����1��B�*5F� FXV�

Page 20: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

S��'������� ��1��B�*5F�����QFJ������������� .Z� �� FXP�

� �

!O=!:�%'O=%� FRK�

� �

NB�BNB=!B%� FVF�

� �

NB%���B=�!�,�:]� JGK�

� �

'=�BD� JJL�

� �

���B=�'D�� JJP�

Page 21: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 22: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 23: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 24: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�""���� �����

JL��

������������

����� ��� �����1��*��� �������������

�����*Y��������.��������� ���

����������������"�����

������ ��^��Y�����

���� �����������������.���.� �

���"��.������ �

�������"���-�����1��B���������

������� . �����1�3��

�����3 ��"������������

��:*�� .�� .�� ���

���!"BN��"��������� ���KG

� B3 ����������

� �!��*3 ����������� ��3�

������������ � ����� �

���B . �������� ���� �������

���B�� .��������Z�1�� ���

����,���*�� ��� ������� ���

����������������� ��������� ������.�"� ���

��������������.���.� �

��������������� ��3�.����1�� ����

�������1������������ ���

�� ������ ��*��������� ���

����� � .����%* ����1����

����������� ���.���.� �

�5����

��5������ �����

�����=�J�. ��3 . ������$���=�J� .�����1���������

�#$%".� ��.��Y���� ���PG�

��'����������� � ����

&��>���=5J� �������Y�����

� '�� ��������.�����

Page 25: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�""���� �����

JS��

��(E����� ��

��Y���Y��

������Y�����������

�������) � ��.���"��� �������

������

������ ���*�� ��� ���� ���Y����

*+,���� ��

*������������"������������

�� ����� �"��*������$���*�� ��

�( '%������.�����

��-"=��� ��*SG�

$��" �,�FJG��� ����

������� ��� ���������� ���.������

����.���.� �"�11��������

� ���� ������.������� ����

��.��� � ��� ������ �PK+���Y�����+�$�����������*F�

�����Y� ����.������ �

���/��.���.� � ������ ��*S+K*"���.���.� �L*Y����

������ ���Y�������

�� 0���� ���Y�����!�_�

�� �.���.�������!�

�����.� �� . ����1�� ��1������

����1��!��� ���.���.� ���J�W�.���.� ���K

������� ��� ����1������

�������� ���, ������Y�����J�

���N���� �� ��1������ �������������

��N�%�.������ �

���N��������������

2$*N���� ������������ �

��N�� ��� ������Y�����

#������

���%����*�� �*����.� �

���% �����������1� .�����

Page 26: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�""���� �����

JK��

#����%.�� �.���������"������������

���%�������������� �

�,���*B�,��

3 �����*��� ���Y�����,�

����, ��� . � . ��������

�,������"����

2+#�,���(. ��3 � . �)*�����*� .���

���/4�\����� *��� ���������� ���LX�

���� � � ��.��*����� ���������� ��

5��\��� ��

����� ��

.��1��,��. �6��� ������� ���FWJ�

Page 27: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 28: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 29: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 30: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

������ ���

Page 31: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

Page 32: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LF��

�6������� �������� �������������

��� ���������� ��� ��� ����� �� � ������� ������ 1��� .� ������� ���Z .� ���

������ � �1� .� ��������� ����� .��� .� �"��� � �� ����+� ������� ���

������ �� �������� ���������� ���� 1���� .��� �������� �� %��.� �������� ������

.������+����Z .�1�� ���+���������� ���+����. +������ �+������+���������������

��������� ,.�� ������� �� ��� �Z� .� ����1��� ��� ���� ��� .� ���� ���1��+� ���

.��� "������ ��� �� �� �� ������ �1� �Z�� ���� ���������� �� �+� ���� ���� ��� ��

����1��� �������� �������� O�� �1� .� ��� � �"���� � ��� ����� �� � 1������� �1�

��"������� ������� .����� ������"������� ������������������� ���

������ ��� ���� (��!N�)� ��� � �� ������� � ��� ���+� .� . �� ������� ��

��� ����� %������ ������ ���� " � ��!N�� ��� 1����� ��� 1��� �� ����� ��� ���� �1�

�. ����������������������.��������� ���+������ ����� �����1�����+����. +������

��� �� +�� �"�����+������� +���1����� ����������������� ����(E�"��Y�+�

JGGR)���!������ � +� . ����������������� ��� .��. ��������������� ����+����

��� .������1������+���Y���� .���!N������1���� �����6��� ��� �1��� .���� ���

�� ��� ���� Z� .� ���� .��� SG`� �1� ��������� � ������� ����� ��� ���� ��!N�

��������������� ������������ ����(8������������+�JGFJ)��

�6��7, �+�,('(,8#�27 �72('93(�723#�9�� �

�� ��� ��� ������ ��� ���� (��!N�)� ��� �� ����� ��"���� ��� ����

����1��� .����� ��� �����1��� ����������. �� ������������ �����,.��Y�� �� .�

�������1� .�.����������� ����Y��Z�� .� � .��3�� ����� .���VGG�����

������� 1��� ��!N�� (����� ��� ���+� JGGJ)�� ���� ��� .��� �����+� ��!N�� .���

!

Page 33: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LJ��

"�� ������ �� �� 1���� ��"1�������� .� �.������� 1���� +� Z.��.� ��� .� ����� �

1���� a� .� 1��$$�W �� � 1���� a� .� ��� ��� � 1���� a� ��� .� ��� ��� 1���� �

(E�"��Y�+� JGGR)�� �� ����� 1��� ���� �1� .�� ��� ���� .��� ��Y��Z�� �. ���������

1��� ���+��������.�����!N����

��"����1� .���!N�����1���� ��.��� .�����"��������.� � ��+�����

. ���.�"��� ������"����(,�)�Q*.���������� �" � .��3 �������������

.�� �� ���������� ������� ,.� 3 ���������� ������� ��� ���� ����� ��� =* �������

������ ������ � �� ��� �� � ��� ��� �������"�� 1��� ������ "�����+� Z.��� .�

�� ������������������� .�!* ������� �������������� ���� .��� ��� ����Z� .���

��� ���+� ���� ���+� � .�� �Z�� ���� 11� ���� ��� ��� �������"�� 1��� ��� ���

���� �$� ����(8������������+�JGFJ)����� �� .� �.�������11���� ����1��" �������

�� � �����1���"������� ���+�.�Z��+���1Z�������������!N�� ��� ����.���

"���" ������� � ���������� ���3� �����,.���������.�����������1���

��1���� ���� 1������� ��������!N��� ��� ����� � �������� � 1��� .�������1�

����"���.������ �����������������+���"��Y� .����.� .������.�.�������

" � ������ � ���� ������ " � N�"� � :1Y�Z� $� ���� �� ���� .� � �������

�� ���� � � .� ���� ��!N� ���� � �"���$���� ���+� �� ��� +� ��� ��� ���1���� �����

���Y� �� �11�� � 1��� ������ �� ����� (1��� �� ��� � ���Z� ��� .� ��"6� � ��

(!�� ��$�+�JGFS))�� �,.����.����������Y��Z�����"���������� ���,.�1��� ������

��� ��� � �11��� .� ����� ��� � �� ����� � ��* ��� � .���� ��� 11� �� 1����

���11� �� .����.� .�������1������ .� ��.�Z��� .Z� ���� ��� ��

��!N��.��� ��� ������ �"��������������������"������� ����

"� �������������1�������" ���������� .���� � ��������� � .� ���!N������

�����1����.���*����. �������(����������+�JGGR)��O�������$� ������������� �

��� ��� ���� ���1��� 3�������+� ������ "������ �11��� +� �Z�� ���� ����������

����� ��� �1� .� ��� ���� ��� ��� ���� �����* ��Y� " Z�� ��!N�� �� .Z� ���

�� ������ +� � � ��������Y��Z�� .� ����*���������������������� .Z� ��1����� � � .�

�����* ��Y�" Z����!N*������������ .Z� �������� ��� ������Y�����(N,E)*�

�� .Z� ��(%���.�����������+�JGGG)���

Page 34: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LL��

�6��3�32��2+*32+ �$2��3+,#

5 �� ������� �� ��� ���� ������ � �1� Z�� 1��� ������ ���������� ��� �+� ��

������� ����� �� "������ �Q� ��"��� � ��� �� �TU� ���+� ��� �� � ��� ���������

�Z� �.��1��� .������ �����1�����������"���1������������������ ������1������

�,�*�� ��� �� �� ���*���� ��� � � �� :����*��� ��� �� ��� ���� ������ ��

���1���� �������.������� .��Q���"��� � .� ����� �� .�3�.�����1�"���*����

1����,����� .�������� �����1� .��Q���"��� �1���� .��TU������%�"���� � +�

"� .� ��"��� �� �� ��� � .��� �Z�� ���� 11� ����� ,.� . ��� ���� �1� .� "���*

�,��"��Y� ����������"����" � .��� ��������,������ ��� ��1� .��Q���"��� +����

" � .� .��� �1� �,���� ��� ���+� ���� ���� ��� .� ����� ���� �1� � �� 11� ��*

�� ��� ����� ,.� �Q*���� �*������� �� Z� .� .� 1�� �TU� ���� ��� .�

. �� ������*� �������������� ���������(������'F)���

�� �������� ��.������ 1��� ������� ����� ���� ��� ����� ��� �� � ����� ������

�� ��� �����1� .���� ���"������ .����� �$� �����1���� ���" �����1�����!N�

Y������ (�NE�)� (.���������� ���� �$� ���)+� Z.��.� ������ .� "������ �1�

�+:723��6,.��*��� ���� ����N�� ��*��� ������������ '�� .��"�����1� �����+�

.��Q� ��"��� � ��� ����"����� :����*�� ��� � ��� ��� �� �� ��� �� �B�� �������� ��

3�.�����1�����1����,����� .��Q���"��� ���TU�������� ��1�����Q&�,�+����"� .��1�

.��������� �� .������� ���11� �����,.�� ���� ����� �� .�"������ � �Z.���,��

���. ��� $� ������" ���� �� ��������,������ ��� ��1� .��Q���"��� +���������� .� �

���� "� �.���� " � .� ���� (�,���*�� ��� ���)� �� ��� � �1� ����� ���� �1� �� ��� ���

����������(N�%)���� �������� �1����(��!���������+�JGGK)�

Page 35: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LS��

���� ��� ��� ���+� "���Y���� 1�� .�� �� ��� ��� �� ��� ���� Z� .� .� ��"���� �

�� �����$� ���� �1� .� ��� ��� ��� ��� .���*��� � �������� �Q� ��"��� �� �� � "�

�� �����$� ��� Z��+� .���.� .��� ������� " � �� ����� � ��.������ (����� ��� ���+�

JGGK)���

%��� ���� ���� .� �,���� � ��� ���� � ������ �����3�� " Z��

Y��Z����!N*��� ��*��� ��. ���������������������� .��"������ ��� �

�� � ���� �1� .� �������"�� �*��� ���+� ����� �� � ���� ��������Z�� ���Z�� .���

�. ��������������������,.����� �����Z�����Z��" � .�1�������1��������

����1���� � �1� ��� ���+� ��� N���� ��� �1� �*��� ��� %��������+� HN�%I+� Z.��.�

������ � .��� ��������,������ ��� ��1� .��Q���"��� ��,.�N�%���� ������ ����

������1��� .��Q���"��� +������� �� .� ����� �����1������ ���� �������� .���

JG���"��� �1� N�%� ��� ���� .��� "�� �� �1�� ��� 1���� ���� .�� ��� ���� ���

�.���� ��$�" �.����������������FJG�����������HN�%�"�3I+�Z.��.�"���� ���Q*

�,�� (%�����Y�� ���\�����+�JGGK)��O�� .�� .��.��+� .��,���� � ��� ����"�

����� � ����� " � ���� 11� ���� .� � �� � ��� ����� 1��� �Q� ��"��� �+� ��� .�

�.���.�������!� 1����Q�� (��� ������ ���+� FPPJ)+� ��� � ������������ �� 3�.����

1�� ����(�B��)� .� ��� ��� � .�N.��1���� ��1� ��,������ ����� ���� .�������1�

����1����,��(E�$����������+�FPPV)��'��1�� +���!N���� �����B���1��� .��Q���"��� ���

,.��Y�� ������� �����1� .��� � ���� ��� ����1��������Q���"��� ���������

����,��"����1����+�Z�Y��Z���� ��1� .�1� �����1� .��Q���"��� ��(!������

������+�FPPSa�:��"���. �������+�FPPS+�FPPXa�%��Y�������+�FPPSa�,����������+�FPPR)����

,.��Q���"��� ������������1� Z����������F)�������� ��"������������Z� .�

.��.� � ��� �����.������ � ��N��*����1���� ��,����� .� � ����� ������� �� �� 1���

"��������� ���+�11� ���+�����TU��������J)�������.�*.������������ .� +����

���"��� ����Z� .� .�N��*��Y� �����+� 1����� �� �� ���Y � 1��� "������ �������

����� ��(������'J)�(%�����+�FPPR)��,.��1�3�"�������������%Z� �.�'+�''����

''��.�������1���� �������������� ���,��"���������. ��� ����(!������������+�

FPPSa� :��"���. � ��� ���+� FPPSa� %��Y� ��� ���+� FPPSa� ,���� ��� ���+� FPPR)�� ,.� =*

������� �1� �Q� ��"��� �� ��� ������ � � ���1�� " � .� � ��.�� � �1� .� 1� �

����� � ��� � � ��W��� ����� � � (\��� ��� ��� ���+� FPPKa� \��� ��+�

FPPV)�� ,.�����1��� ����� ���� �� ��� � .�� ��"��� �� �� .���"���� ���

�������� �� �1����� ��� �����"� .������� .���"��� �����" Z�� .���"��� ��

���� .����� ������

Page 36: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LK��

N�� � +� � � .��� "�� ����� .� �� � ��� � ��� ��� �1� .� ���� � �����3�

��������1������ �*1�����. �� �������������� *����������������TJ*

�������� ��� ���� ,.� ��� � �� � ��� � ��� ��� �1� TJ�N�Q�TU� �����3� ����

���1���� ��1���� ���� ��� .�Z� �� ��!N� �� ��� �� �� ��� ����� ,.� ����������

�� ��� �����" Z�� .�TJ�N�������������� .������*�������"�3 * �������Q*

.������1����. �� �����(N��������������+�JGFF)���

�� ����� ������ �1� . �� ������� �� ��� ���� ���� "� ������ � ������$� " �

��� � �� ��"� � �1� ��!N�+� ��� ���� ��� � �� ��� � Z� .� ��� ��� �� 1Z� �Z�� ����

11� ��� ��� �+� �������� .� ����1��� � �1� ���������� 1���� ��� ��� �� 11� ����

:�YZ��+� ���� ��!N�� ��� �"�� �� �� ��� � ���� .��� ��� �� ��� ��� ��" ���

=�� .���+� .� �� ��� ���� " Z�� .� �� ��� ��� ��� .� ��� ��� ��� ������

����� � ������ ��� ��� �"���� � � ����1��� ��� ��� �� ����� � �������������������

(,�"��'F)��%�� .�� �����1����"��� ������� Z��Y�� .� �����"���.������������

������ ��1��� .������ ��1������������������

�+:723��6N�""������������1� .��� � ���

� ��� ��� �1� .� TJ�N*��������3�� ,.�

��� �������.�Z����������+� .��Q�.������

������������+� .��Q��,�������������

��� +� .� �T� ��"��� � ��� ���. � "��Z�+� ���

.��U� ��"��� � ��� "���Y� (��3���� ��� ���+�JGFS)���

Page 37: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LX��

()'3��65 �� ������������ ����

'(##1;$3 �3,3 �<$23##+�, �993 ��2=#>�� ������ � � ��Q�������� � � �

�Q�� �=�%� �"���� ���� �!�(���� ��)����Q�D:� �=�%D:� =���������� �!����Q��1� �=�:� O�1�� �� ��.� ����+�"����� �!���

�Q�W�������� � � ��Q�F� �=�'F� \�� ��� ��"� � ��Q�J� �=�'J� �"���� ���� �!�( ���'+�'''+�8+�8'+�8'''+�'D)����Q�L� �=�'L� \�� ��� ��"� � ��Q�� �=�O� =������+������������ 8�!!��+��'NE���(�����TU)��Q$� �=�b� =������+���� � �� �!�(���8+�8')��+�N��F�����Q��� � �=�,L� ,�� �����+�"���.������ ��B����Q *�� �=�,F� N ��������+� �� ������ ��B�X(U*��"��� ���)����Q *�� �=�,J� N ���������� ��B�X(U*��"��� ����)���

�Q�WFF������� � � ��Q�� �=�M� �"���� ���� �:!*TF*S����QFF� �=�FF� ����� ��"���� ���� �:!*TF*S����QFS� �=�FS� E�� +����+������ �:!*TF*S���

�QFKWFX� �=�FX� 5�� ���� �������� �:!*TF*S����QFJWFL������� � � �

�QFJ� �=�FJ� �"���� ���� ��bN.��B�+�:�N�+�� Y+����F�+���.����

�QFL� �=�FL� �"���� ���� �FFKN.��B�+���bN.��B�+�:�N�+����3���

���� ������ � � �TF� �=�F� \�� +�� ��������� �!� ��'���TJ� �=�J� \�� +��� ��"� � �!� ��''+�'8+�8''���TL� �=�L� \�� +�� ���������� �:!*T�(TLcTJcTF)���TS� �=�S� \�� ��� ��"� � �'NEF*S���TK� �=�K� ����� �"����� N�� ���Y���������� ������ � � (�NEJ����L)���UF+�U��� �=�,F� N ��������+�"����� �'*L*E+�T+�U���UFS+�U���� �=�,J� N ���������+�"����� ,� ��8�!!���UJ+�UX� �=�J� \�� � (�TJUJ)=*+�WM*+N* ��8�!!���UL� �=�L� �����+�"���� �US� �=�S� ���������� .�� ������ �UK� �=�K� \�� � �UR� �=�R� \�� � �UV+�UP� �=�V� O�1�� �� W�����������

�� .������

UFG� �=�FG� \�� � �UFF� �=�FF� \�� � �UFJ� �=�FJ� \�� � �UFL� �=�FL� �����+� �� �"��� �� � � �

�!+� �� � �� � ����a� ��B+� �.���.��� ���a� �:!+� �.���.������� !a� �'NE+� �� ��� ��*����� �

��Z��� �� �1��� �� ������� �.����a� 8�!!+� ��� ��*��� � !�Jd� �.����a� �'*L*E+�

�.���.� � ������ ��� L*Y����a� �NE+� �� ��� ��*����� � Y����a� N.��B�+� N.�� ������� ����� ��

B3�.����1�� ������� �1����(\ ��.���Y����O11������+�JGGK)��

Page 38: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LR��

�6/�$2��3+,?�#7)7,+�#

���� � .� ��$� ��� ��� � ����� � �1� .� ��!N� ����1���� +� .�� ��� ��

��� ��� ����������"���1������ ���� �������� �1��� .���������"���1��11�� �

�� ���������� ���������� �������� ��������� �� ����� � Y��Z��+� ��� .� .�����

����� .�� ��� LS� ���� ������� �� ��� ���+� Z.��.� FR� ���� ��� 1��� �Q�

��"��� �+� K� ���� 1��� �T� ��"��� �� ��� FJ� ���� 1��� �U� ��"��� �� (��������� ���

E�� ���+�JGGX)��,.��Q���"��� �� ������� �� �� 1���� ��"1������� (�Q�+��Q�+��Q��

����QFJ)������"����1���.���"1���� ����� ��� ����� ������������.���"��

Y��Z��1��� .��� ��� �����1���������11� ����

��� ���.+� ���� .� Q*��"��� �� "�������� �� ��� ��"1���� � � ����� � �� � ��

� ����+�Z.���� .�Q*��"��� ��1������*��"1���� ���.�"� ��� � ��� ������O�� .�

� .��.��+� .���"����1� .������"1���� ��1���� ���������� ���.���.�������

�*T� (�:!*T)������"����1� .��FJ���"1���� ���� ������� ��� .� ����� �����1�

�������,����+� ������� .�� ����1��� 1��� ����� (������ 'L)��������� � ���� .���

11� ����Z�� "���� �� ������ � 1��� .������ �� ����� �1� .�� �Q*��"1��������

�� � .� ���Z���� ��� � �1� 11� ���+� ����� ���� ��� ��� ��� ��� ���� 1��� ��.� �Q�

��"��� �.����.���� .���������� �����������������1�������� ������ �����,������

����3������� � ���Y��Z�� .� � .��Q����� ����� ��� ��Y��������� .���� ��0��

������Y�����(����������+�FPPR)�����E!_�(���.� ���������+�JGFG)�"� ������"����

�� ��� ��� ��� ���� ��Y� \�NLX� (!�� ��� ��� ���+� JGFF)� ��� B��KG� (N��.�� ��� ���+�

JGGJ)� ������1Z��1� .���(1���������1���� ���������Z�(%e��.$*���e�$�

������+�JGFS))���

Page 39: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LV��

��

�6-�3�@A8+*32

,.� ���� ��� ������� " � Z�� ��� �� ��+� �T� ��� �U+� �� .���.�

1��� ������ �������������"����� .� Z����"��� ������� �"�������� �3�� �

Z� .��� ���� �������� ����"1��+� ��� .�.���������� .�����K�Y��Z��

�T���"��� �����FJ��U���"��� ����

,.� �T� ��"��� � ��� ��� ��� �1� Z�� � ��� ����� � �� ��� � ������+� ��� =*

������� ���� +� Z.��.� ��� ��� .��3� �1� �����3��� � � JG� ������ ����+� ��� .�

��������1� .�������+�Z.��.�����������1�������\����� �+�Z.��.�����Z��

.� ��� ��� �� "� 1��� ��� T*� ����� .� � ��� ������� ��� �� ����+� 1������� ��

��������� ��� ���(�������'S)�(!���.������=�+�FPPR)���

�+:723�/������� ��*��� �����������" ���!N6������1��������1��Q���"��� ���� ��� �

�11�� ��Z�� ����11� �������� �1���(N� �����5���+�JGGP)6

Page 40: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

LP��

����� ����"1��+� .��������U���"��� �"���� ��. � � �� .�T*���������

' �� ������ ������� 1����� �� ����*����� Z� .� .� ������ ������� ���*\�*��� �

�������1� .��T���"��� �������U���"��� �������� �� �� � .���!* ���������� *

������ ������ �(\��� ���������+�FPPK)+���� .�����������1��� ������������ �� �

1��� .� ��"���� ������$� ���� �1� .� �TU� ����� '�� ���� � .� �TU� ����� Z��

.���. � ��"������� ������ �1��� .����� ��� �����1��Q���"��� �+� .������� ����

���� ������ �Q� �� ��� ���� ��� .� �"���� �1� ��� ��� � ����� ���� (=�+� FPPK)��

5�Z��+� ��"���� � � ���� �.�Z� .� � �TU� ����� �� ��� � �����������

�� ��������.��������� .�.�� �(:��� . ���������+�FPVR)��,. ���������������� �

Z� .��Q���"��� ���������11� ���+� ���.� ��� .������1� .��Q������TU� .� �����

����� � "� .� "1��� ��� �1 �� �� ��� ���� " � ���� ������ ��� .� �� ��� ��*

�� ��� �Ef��.�����(�'NE)�(������������+�JGFG)�� ' �.���"���.�Z�� .� ��TU�����

����� � ���*�� ��3� �.������� " � �� ��� ���� N��F�*��� � ����*�� �

�������� ��� �� ����� �� ��� ���� (�.�� ��� ���+� JGFG)�� '�� .� ��� � JG� ���+� � � .���

"���� ����� .� � �TU� ��"��� �� ���� ����� � ��� � 11� ���� ���.� ���

�.���.�������!�T�(b.����������+�FPPX)+��� � ��� ������(,�������������+�FPPS)+����

��� ��*�� ����������.������(b�������������+�FPPR)��N�� � ��� �1��11� ����

�����+� ��� ��� Y����� �� (>������ ��� ���+� FPPP)+� ������� ����� �� 3�.����

1�� �������.�����FFS*N.��B��(=���������+�JGGL)+��'*L�Y��������1�����(E��.������

���+�JGGS)+���b*��� ����(:��������+�JGGX)+�����T*���� ����(%� $�������+�JGFS)+�������

� .�����

�+:723�-6�TFUF��� � ���� ��� �����T���"��� ���������������������������U���������

��� �1����(:������%���Y�+�JGFF)���

Page 41: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SG��

�6���#7)9(*+';�

,.� �� � � ������� ��"1���� � �1� . �� ������������ ����Z��� .��FJ�

��"1���� +�Z.��.�������������1���� � Z����"��+��QFJ�����QFL+��.������gRG`�

������ ���� �� � �� ,. � �11�� ��� .� =* ������� �.�� � ������ ��� .������

������� ���Z.��.� .����������� �� � ������FX`����KF`+����� ��� ���QFJ�

����QFL�Z�����������������.������ *"����!N�� �� � �����������"�����

��=�� ��"��� � ��� ��� �"���� ���� � 3����� (% �� .����� ��� %����+� FPPFa�

%���.�� ��� ���+� FPPS)�� ,.� �FJ� ��"1���� � .��� "�� �.�Z�� �� ����� � �� .Z� ��

������� ��� ���� ���Z .+� ���������� ��� ���� �.��� �.������,.��.����� � "��

��� ��11����� 1���� ��� .� ����������1��QFJ� ����QFL� ���11�� ���!N�+� ���

��� � �1� .� ������� .��� .� �"��� � �� �� ��� � "� .� �QFJ� ��� �QFL� ��� �����

5�Z��+� .����� ���" ����Z� .� .�Y���Y�� ��1��QFJ�����QFL������ �����1���

�. ����������� �������� 1��� ��.� �1� .��� \.��� �QFL*1���� � ���� �� � �

�"� ������ ���������� �1� �� ��������������(O11�������������+�FPPR)+�

�QFJ*1���� � ���� ����� ������� � Z� .�� � �� � 1����� � (O11������+�

JGGF)��,.��1������������ � .� ��QFJ�����QFL������ �������� ���.�� .�����

�. ����������� �����1������ .���.� "� .� ��� ���� .��� "�� �.�Z�� �� �� ��� �

�Z�� ���� N.�� ����������� � ��� .��� 1���� � �1� ��� ���� ��� .� ����� 1����� �1� .���

.���+�'�Z��������� �������� ����3����� �����1� .���11� ����� .Z� �����

.����. ����������������

�6�� �+B(�+�,�9���$2��3+,#);�� �#

���� ������ .����������� .����.��QFJ�����QFL������������ �"�����

.��� ��� �����1� .������� ����" ���!N��������� ����� �� ���� � �������

��� �� ���� $� 1���� �Z�� ���� �� ��� ��������� �� .� ����� � Y��Z��+�

���� .���LG���!N��.���"������ � �������� ���FJ���"1���� ��1������ �����

,.�� ��� ���� ������ ��� �����K*5,(S)N� ���K*5,(R)N+� ����� ����� ��� ���

�,F+��� .������� ����B,�����B,�+������������ �����:J+�� ���.���.� ����

���� ��� ��� :��+� ����������� �L� ��� ��+� ��� ��� �� ��� � ��� ���� ��NF+�

��NL������NS+� ��.�������*F��.���.� �%F�(JhK)� ��� ���+� ����� 1Z�� .����

(�������Y������ ���+� JGGJ)���� � ��Y���� 1� ����1� .� ��� ���� .� � ��� ������ ��

Page 42: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SF��

�FJ� ��� ���� ��� .� � . � �������"� � ������ �� ��� ��� ���� � .�� �� ��� ���+�

������� � ���Q��(5�����+�JGGLa�N��"������������+�JGGK)���

�6��993 ��2#�9��3�?��1�/#7)7,+�#

,.�Q*��"��� ���1� .��FJ���"1���� ��1������ ���+��QFJ�����QFL+�.���"��

���Y� �� �������� �� �� ���.� ��� � ��Y� ��� ��������� �� (��.�� ��� ���+� FPPKa�

��.��� ��� ���+� FPPP)� ��� � ���� �����1�� ���� (!������� ��� ���+� FPPR)� .����.� .�

�� ��� ���� �1� .� ������ �,���� N.���� �QFJ� ��� �QFL� �� ��� � N.�� ���������� �

.����.� ��� � �� ��� ���� �1� .� �� ��� ��Q� ��"��� �Z� .�N.�*����1��� �������

����� ��3�.����1�� ����(N.��B��)+�Z.��.����������� .��������11� �����

'��FPPV�� �Z����� �1�� .�1��� ������������Z�� ����"��������� ����1��FJ�

��� ���+� �FFKN.��B�� (5�� � ��� ���+� FPPVa� E�$���� ��� ���+� FPPV)�� �����

�FFKN.��B�+� � � ��� ��Z� Y��Z�� .� � � .�� N.��B��� ��� ���� ��� :�N�� ��� ��b*

N.��B�����11� �����1�� .���QFJ�����QFL����"� .������ .���N.��B���"����� ��

.� ��"1���� � �1� N.��B�� ���� N5*N.��B�+� �.���� ��$� " � .� �5� ��� �5�

������� ��� �� HN�%*��Y� �����I� .� � "���� �� .� �QFJWFL� ��� ����� ��� �� � ��

����� ���+� .�� ��"1���� � ��� .� N.�� ��� ���� Z���� "� ������� �� �� Z� .�

���� �����

����� .� N.��B��� ��� ���+� �� ����� ���� � �1� ��� ���� .��� "��

�� �1�� �� �� ��� � Z� .� �FJ� ��� ���� .��Y�� �� �Z� 3����� ���

�������� ���,.�"��������� �����1��FJ���� ������ ����������� �11� ���+�

��� ������ ������������ �����1��FJ�����������(������'K)���

�+:723 �!6� �QFJWFL� ����������� �QFJWFL�

���� ���"�������� � ��������Z��1���

�� ����� 1��� ������ �� ��� �� ,.�

�11�� � "������ ��� ���� �1� �QFJWFL�

����"�������1�� �� �� .���11�� �

�� ������� ��� ��� ��� ���+�

11� ���� ��� ����� ����� ��� �

1����(E�� �������+�JGGR)��

Page 43: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SJ��

���� � 11� ���� 1��� �FJ� ��� ���� ��� �������� �E��*:"�+� �E��FFG+�

bOFWJ+�N.��B��+��FJG� �+������.������' �����.�Z�� .� ��QFJ��������� ��� ����

�1�N.�� .����.� .����*N�%���� ����E��*:"��" ���Y��Z����.������(�����������

���+�JGGF)���E��FFG������1���� � ��� � �� ��QFL*������� ��� �����1��E��(=���

������+�JGGF)���QFJ��������� �� ���� ��. �6��� �����Z.����� � ��� ��� �Z� .� .�

���� � ��. � 6��� ������ ��� ���� $������ �������*F� ��� $�����*�������� J�

����� ���� ���� 6��� ����� �����!E� ����� (����� ��� E��.��+� FPPXa� � �� ��� ���+�

JGGJ+� JGGL)�� �FJ� ��� ���� ����� ����� ����� � ���� �.����� ��� ����� � ����

����� ���� .����.� .� �� ��� ���� Z� .� B*��.���+� ������ =*��.���� ���

��.���*FS� (����� ��� ���+� JGGF)� ����� ���� .� ����� �1� T*�� ���� 1���� .�

��.���� �����O�� .�� .��.��+��FJG� ��� �.���"���.�Z�� ��"���"��������� ���

�1��FJ���� ���+�Z.�����QFJ������ ��� ��"������ ����.����+����������� � �

.���.���*��� ����*�����.�����(E��Y� ��������+�JGGS)���

O .�� "������ ��� ���� 1��� �FJ� ��� ���� ����� �� � ��� ����� ���� ��� �����

������� ���+� .��.���.� ������J�������K�Z������ � ��"������ ������

�FJ���� ��*"�����+�Z.��.��.����� .����� ��� �(i������.��������+�JGGJa�b.�����

���+�JGGS)��%���N�%���� ���������� ���� ��� ���1�� ���� �Z� .�� .���QFJ����

�QFL�� \.��� N�%F� �� ��� � Z� .� �QFJ+� N�%FX� "���� �� �QFL� (���� $� ��� ���+� JGGGa�

>�.����� ��� ���+� JGGL)�� �3��+� Z.��.� ��� �� ��� ��� � ����� ��� �1� .�\� � ����������

�� .Z� ���� ����������N�%������+�Z����.�Z�� ���� ��� �Z� .��QFJ������ ������

�Z�����1����QFJWFL����� �������\� ������������� .Z� �(% ����������+�JGGX)���FJ�

��� ����.��������"������ � ���� ��� �Z� .�N��*���F�� ���Z������ �N���

����������(>�����������+�FPPV)���

������ +� .����������"��������� �����1��FJ���� ���������"�������1��

�� ����� ������ ���+��������"������� .�1�����'K��,.��+� .��� ��� ����Z� .� .�

�.������ 5��PG� ����� �� �QFJ� ������$� ���� �� ����� ��1 �� (\�.� ��� >���+�

JGGJ)� ��� �� �� ��.������ (������ ��� ���+� JGGV)�� O�� .� � .�� .��+� � � ���

����� �� � �� �� � .� � �QFJWFL� � ��� ���� ��� �"�� �� �� ��� � Z� .� ��"��� �1�

�11�� � 1������� �1� ���*��� ��� ������ Y������� Z.���� �QFJ� �� ��� � Z� .�

��� ��0�� ������Y����� (�,E)� (>�������� ���+� FPPV)� ���,�� (%�$�Y�� ��� ���+� JGGL)+�

�QFL� �� ��� �� Z� .� �iEJ� (%.�� ��� ���+� JGGG)�� ,.�� ���� �� ����� � .� � �QFJWFL�

��� ���� ����� � ������ Y����� �� ��� � .����.� ��� � �� ��� ���� Z� .� Y�����

��� ������QFL��� ��� ��Z� .����3��+�����"���1� .�BN��($���+����3��+������)�

Page 44: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SL��

1���� +� ���� ���� ��� ��������� ����1���� ���� (8���Y���� � ��� ���+� JGGG)� ���Z� .�

>:�F� (�*>��� =* ������� Y����(>=E)*�� ��� ���� ������ $����� ��� ��� F)� ��

����� � >=E� �� ��� � (E��.1� ��� ���+� JGGK)�� O .�� �� �1�� ��� ��� ��� ���� ���

%�����+�=O%+����5�3*F�(N�.�Y��������+�JGGSa�,� �Z��������+�JGGKa�������������+�

JGGX)��

,.���� ��1�"��������� �����1��QFJWFL���� ������� .������������� .Z� ��

�� �1�� �� � � ��� ��� ������� � ���Z����� ���� ��� � +� � � Z��� �.�Z�� .� �

�� ��� � �QFJWFL� ��*����� � �� ��3� � ������� ����� (���)*J� ����� ����

�������� ��.�� ���������������1�='5L,L�1�"��"��� ������(E���������+�JGFF)����

.� � N��*V� �� ��� �� �. ������ � Z� .� !���� ���+� .� ������� ��� �QFJWFL� ��"��� +�

��� ���� � �� ������$� ���� Z� .��� .� ���� ��� ����� ���� ���� ��� ���� ����

�� .Z� �(� ������N����+�JGFL)� .���.�� �.����� �"�������� .���������� ����

��������������������

�6/�3( �+B(�+�,�9�?��(,8�?�/);���$2��3+,#

:�Y� ���� � .�� . �� ������� �� ��� ��� Q� ��"��� �+� �QFJWFL� � ��� " Z��

���*"���� ���� ��� � � � ��� �,�*"���� �� ��� � � � ��� ������� ��� �� �������

�"��� � �� . ��� $� �,�� �� ����� ����1�� �QFJ� ���� �� �� ���Z�� �������

����� ��Y�� ���� .���� .���Q���"��� ��(%�����������+�FPPSa�E�$�������������+�

FPPK)+� Z.��.� ��� ������ � � Z� .� .� ��1�� ���� ���� �1� .�� �������� ���

��� ���� ��� ����� ��Y������ ���� �1� � ��Y� ���� ,.��� �� ��� ���� ������� ���

������ �" � .������� ��� ��1�N�%���� �������"����1� .�����������N5*

N.��B��1���� +��� �"1��+�.���"���.�Z�� ��"� .������������� ����1����FJ�

��"1���� ���"���(��Y�.����������+�FPPPa�!.��������+�JGGKa�,����������+�JGGKa�

E�� $�������+�JGGX)���

�6-�3:7'(�+�,�9���$2��3+,#

�QFJWFL� ��� ���� ������ ��� * ������ ������ ���1��� ����� .����.� .�

�� �����1� ��������������,.�����1��� ������11� � .���"�������� ������$� ����

��� .� �� ��� ����� �1� .� �Q� ��"��� �� Z� .� � .�� ��� ����� �Q� ��"��� �� ���

��"6� � �� =*� ��� � �� ���� ��W��� ����� � �� ���+� "���� �������"�� ���

Page 45: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SS��

�����"�+����� ��� ����Z����.�Z�� ��"���1��� .� ����1��������� � ����

�1� .��FJ���� ����(8� �������+�FPPSa�>��������� Y��+�FPPV)������� .�Z��*

Y��Z�������1��FJ���� ����� � .����������"���+�� ������������� � .� ��QFJ����

��� � �� .��� ��.������ ����� ������ ��.������� ����.���� � ����� ��� �

(������������+�JGGV)��

�.���.�� �� ���� �1� �Q� ��"��� �� ��� ��� .�� ����� �� ����1��� ���+� Z.��.�

����� �� .������ �������� �����1������ �������������QFJ�.���"������ �

��"�����"� �� �1������ ���Y�����!�(�E!)���� .���.� .��.���.�� �� ������ �.���

�� � "������+� .�=* ������� KG� ������ ���� ������ �������� ��� �����"��

������� ' � .��� "�� ���� �� � .� � �.���.�� �� ���� "���Y�� .� �� ��� ���� �1�

.� �QFJ� ��"��� � Z� .� .� �TU� ���+� ��� �TU� ���������� � "���Y�� .�

�.���.�� �� �����1��QFJ�" ��E!�(E�$�������������+�FPPX)��O�� .�� .��.��+���

��� � �.���.���� ����� ���� � �.�Z�� .� � �QFJ� ��� �.���.�� �� � ������

�� ����� ��� ����� XR+� "� � �� .���� ��� Y��Z�� �"�� � .��� ����� �.���.�� �� ����

1��� �������Z������ .�Y����� ������� ��� (O����������+�JGFG)��,.������ ���� �

����� ����� � �������1����QFJ������������ �������� �������

�����N=��� (��N=��)� ��� �������� � 3����� ���*������ N=��� .� �

����� ����3����������� * �������� ������ ��N�� � +�����*���������� ��������

��N=�� 3�������� .��� "�� ������� � ��� ������ � ��� ����������� �1�

�������(5�����������+�JGFF)�����FJ���� ����.���"������ �� .�� .� ������

"� ����� ������N=��� ��� � ����� "� ����� � " � .��� ���� ��� ���+� E�� � ���

��������� ���� �� � .� � �QFL� 3�������� Z��� ������� ��� ���� � � ������

����������� (E�� +� % ���+� ��� ���+� JGGX)� ��� .� ���N*FVJ� �����N*JGG� 1���� �

��"��� Z�� ����� ���� .� 3�������� �1� �=�FL� ��� * �������� ������ �

(N��.�������+�JGFL)��� ���� ��� +������ ����� ��.�Z�� .� ��QFJ��������ODOF+�

�� ��"�� �1� .� 1��Y.�� "�3� O� ��"1���� � �1� �������� ���� 1�� ���� .� � ���

������� ����� ��������+� ��� �QFJ� ����� �� ��N=�� ������ ���� ���

.�� �������������������(>����������+�JGFS)����

/6�+�'�:+ ('2�'3#�9���#7)9(*+';

,.���"����1� .��FJ���"1���� �����"���� ���� �3�������� . ����

������� � ��� .� ����� ���� �1� �� ���� � �1� �. ��������� ��� �� .��. ���������

Page 46: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SK��

������������"�"� � .���� �3 ����� �� ���������1��QFJWFL��������������Z .+�

�����1�� ���+� ��� ���� ����� ���� (������ 'X)� "����� �1� � �� �������� � ��� N.��

�� ��� � ��� �� ��� � ��� ��� ������$� ���� ��� Z��� ��� 1��� � �� ����� ���� ��� ������

���������'�Z������Z������ ��������� .����������������� ������� .��3 �

�� ������

�+:723�46%�.�� ����1��QFJWFL�11� ������������������� .Z� ������� �����������Z .�

��� ����1���� ���+� ����� ���� ��� ���������� � T*�� +� " �*�� ���a� �,�J+� �� ��� ����

�������� ���� 1�� ��*Ja� BNE+� 3 ���������� ������*����� � Y����a� ��!N+� �� ��� ��*

��������� ��a�6��F+��*6�����F*��Y����������� a�>=E+��*>���=* �������Y����a�

:��+� � ���.���.� ���� ���a� �BE+� �� ���*�� ��� � ��� ��� Y����W3 ����������

������*����� � Y����� Y����a� N.��B�+� N.�*����1��� ������� ����� �� 3�.����

1�� ��a� NO!E+�N.�� Y����a� %��*F+� !D!� �.��Y��� � ������ ���*���� 1�� ��*F�a� %NB+�

��������������� a�%N�+�������������1�� ������ �1���(>��6�����!�� +�JGGP)6

Page 47: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SX��

/6��?��1�/(,8 3''*+:2(�+�,

,.��"���� ���� .� � .�� �����1� .����������� 1���!���� ���+� .�

������ �� .����� �1� .� �QFJ� ��� �QFL� ��� ������� ��+� ����� � �� ���� 1����Z�

������ � ����� � .� � .��� ��� ��� Z��� ������ 1��� .� �������� �.���

�.����� ��� ����� �� .� � ������ ������ ������� ��� ���� ���� (���Y�� ���

\���.���+�FPPF)��:� ��� �Z������� �� � .� ���������� ����N.��B�J���� ���

Z������� ��Z�� �����1�!���� ��������� ����������� ������ ���� ����(���� �

��� ���+� FPPR)�� %���� � � Z��� ����� .� � �QFJWFL� 1��� ���� Z��� ���Y� �� .� ��� �

����� �����1�N.���� ��� +������ ����"1����!.��������� ��Y� ��� �������

������ 1��� ���� ����� ���� ��� ������� � ��� ����� ��� � " � N.�� �,����� (N��+�

!�SJ� ��� N.�)+� ��� ���������� " � �FJ� ��� ���� ��� �������"�� 1��� ��� � �1� .�

11� �� ��� ���� ����� � .� � �������� � N.�� �� ��� ����� :�YZ��� � � .��� "��

����� � .� � �FJ� ��� ���� ����� � � ��.�� � ��� �� ���.��� ����� ����

(���Y�� �� �������+�JGGFa�D��������+�JGGL)����� �����1��QFL� ��������������� .�

������$� ���� �1� .� ��������� � � �+� ���� ���� ��� � .��� � � � �����3��� � � � �

FG�K��1��"� �������(O11�������������+�FPPR)��!��� �������"�� �����1� .�����

��������QFJWFL����� �������������� ������1� .���"���������"�������� ����

�� �� �������� ���� �1� ��� ����� ��� �������������"����� ���Y��6� ����+�

���� ��� +����� �� ���� .������ �� ������1��FJ���� ������� .������� �

�1� .��� ������������ � ��(�����������+�JGGV)���

=�� .���+� �FJ� ��� ���� ���� ����� ����� � ���� ����� ���� ��� �� N.��*

����� �Z� ��' �.���"������ � .� ��FJ���� ����"��� �� .�� ������� ���

������ �1� ��.����� ����� ���� .� ����� �1� T*�� ���� ��� ������� � +�

�� ��� ���� .�T*�� ���*��� � �������� ����(�����������+�JGGF)��,.�"�������1�

�� ��� � �FJ� ��� ���� �� ��.����� �Z������ � .� B*��.���*��� � ���*

�����.����������� ��������� �� �����(�����������+�JGGJ)��O�� .�� .��.��+�� �

.��� "�� �.�Z�� .� � �QFL� �. ������ � �� ��� �� Z� .� 5�3*F+� �� � ��Y� ��*

������� +� ��� �� ��*�� ��� ���� �� ���������� ��� ��� ����� ���� ���� ����� �����

������+���*3���������1�5�3*F�� ��� ���QFL*� ����� ��� ��� ��1�N.��Z.���

�� � �� �����QFL*� ����� ��� ��� ��1�N���(N�.�Y��������+�JGGS)�������� �.���"��

�.�Z�� .� � �� ��� � �QFJ� ����� �� ��. � 6��� ���*��� � ������������

Page 48: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SR��

����"��� � .����.� .��� ��� �����1�%��� ������Y������� .Z� ��(� ��������+�

JGGJ+�JGGL)���

/6��?��1�/(,8 3''�2(,#9�2*(�+�,

!������� +� .� 1��� � �� �1�� 1��� ���� �1� .� �FJ� ��"1���� � Z��� �� � .�

�� ��� ���� �1� N.�� "� � .��� �"��� � �� ����� � ���Z .� ��� ����� ���������

����1���� ����(>�����������+�FPPLa�D��������+�FPPL)������+����3���������1�Y��Z�*

�FJ� �� ��� ���� ��!N�� ��� ��N*F� ��� .� �F� ����������� �� ��.����� ��� ���

����� ��1�"��"��� ����Z .��'�+����� ���1���������������� .� �� ����� ����

�1� ��N*F� ��� ��� ��� .� FLJF=F� �� ��� ���� ���� ���� ����� ���� ���Z .� ��� ��

�QFJ*��� �������(����� �������+�FPPK)��,.��� ������ �� .�. �� .����

.� ���!N���� �������� .����.��FJ���� ���� ������� � �������������� �����

���� ���Z .� (N�.�Y�� ��� �.����Y����+� JGGF)�� ��� � �1� .� ���Z .� ����� ����

��� ����1������� 11� �� �1� .� �FJ� ��� ���� ������ �� "� �������� � " � .�

N.��� 1���� � �1� ��������� �,������ % ����� ���� �1� N.��� �Z�� ���� �1� �FJ�

��� ���� ����� �� .� �� ��� ���� �1� �LV����E� (���������� ��� ���+� JGGF)+� %,�,L�

(E����+� %.��+� ��� ���+� JGGX)+� ����*Q� ��� ��� (E����+� 5�+� ��� ���+� JGGX)+� >=E�

(����������������+� JGGS)+� ���Z��� ���=�*j�*����� � �������� ���� (������������+�

FPPR)+� ����� ������� ��� *����� � �������� ���� (5���� ��� ���+� FPPK)+� ���

3�������� �1� !OD*J� (���� � ��� ���+� FPPPa� %���� ��� ���+� FPPP)�� ���� � �1� .�

�������� � �1� N.��� ��� ���� .�� ����1���� ���� �� �� � � .��� "�� ������� ��

� � ��Z.�� �QFL� ������ ���� ����1���� ���� ��� �� N.��*����� ������+�

.����.� .� �� ��� ���� �1� ���3��� (8���Y���� � ��� ���+� JGGG)�� ������+� � � Z���

����� � .� ����� ����1���� ���������" ��QFJ����='5L,L������Z������ �

.����.�N���(,��Y��.���������+�FPPR)���

/6/�?��1�/+,�, �:3,+ �2(,#9�2*(�+�,(,8 (, 32

�QFJWFL��������� � ��"����������� .������� ��1���������������

��� . � ��� 1���� ��*����� � "� .� ��� ��������� ������ ����� ��� ��� ������

������ ������� E�� � ��� ��*Z��Y��� ���� �� � .� � �FJ� ��� ���� Z�� ��*

����� � ��� ����� �������� 1���� �� �� �� Z� .� ������������� �1� .� "��� �

Page 49: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SV��

������� � a�.�Z��+��FJ����� ������ � ������������Z .�(E�� +������+����

���+� JGGXa� E�� +� % ���+� ��� ���+� JGGX)�� :�YZ��+� �QFL� Z��� 1���� �� "� .��.� �

3�������� .���� ���������������������������'����� ������+�������� � �������

�QFL�Z������� � ��"���� ����1������������������������������ ����(N��.�

������+�JGFL)��O .��� � ��.�Z�� .� �:�������� ������������������������� ����

��� ����Z� .��FJ���� �������Y ������ �����1� .��������(�����������+�JGGX)����

�QFJ�Z������������ � ��"���*����� ��������������������������������(O%!!)�

(!.���� ��� ���+� JGGP)�� � � ��� ��� +� � ����� ���� �1� ��.�������*F*�.���.� �

��� ��*J� (%�F)� ��� ����"�� ���� ���� ����� ��.�"� �� ��������� ���� .����.� �� N.�*

��� ��� .Z� ���Y� ���� �" ��FJ���� ����(:�� �������+�JGGK)��'�������1�

.��� ���+� .��� ��� �����1�N.�������� ��"���� �����1��� .���FJ*����� �

�� ���'� �� ���� +������ ����� �1���� .� ��QFJ�Z�����*����� ������ �� ��

Z� .� .�� ��������� ���������� (5!!)� ��� ������� ���� Z� .� ��������� � �� �� .�

����������1� .�3���������1��ODOF+��� ��������������+���� .� ������ ����

�1� ��N=��� (>���� ��� ���+� JGFS)�� �� ��� � �QFL� Z��� ����� �.�Z�� �� ������� ����

����������� .����.� .���.�"� �����1�N.������.������������������(��� ����/�

��� ���+� JGGV)�� ,.�� 1������� ����� � �� ���� ���� 1��� �FJ� ��� ���� �������� ���

������������������ +� Z.��.� ����� "� 3������ �1� ���� �*����1��� �11�����

3�� ���� .�������������������

-6�����(#3#

� �

���� �Y�� � ��� ����� ��� ���� N.��,����� ��+� ��� �� ���+� . � ���

���������� .������ �����1���� �"�����������������+�1�����.���������� ��� �

�����3������������11�� �� ����(B ���*������������5���+�JGGJ)��N.�����

����"���1� .�N�������1���� ��1��������,�*"��������� ���������Y�N��+�� ����

" Z�� ��� ���� ��� ���*"���� � � � �� ��� �� ��� �,�*"���� � � �� ��� 1��� .�

. �� ������������ ���+� .� � ��� ��� ����� �" � ������*����� �� 3�.����

1�� ����(�B��)+����" ��,���*�� ��� ������� ����(����)���,.����*"�������� ���

1�����1�N.��������� ���� .�� ���������������3�Z� .�N.���'+�Z.��.�� �"���$�� .�

���*N.�������3������.�"� �� .�3�.�����1�����1����,��(������'R)��

,.�N.�� 1���� � �1���������� �,����� ��� ������� " � .�� ��"1��������

N.��(�+��+����!)+�N���(F����J)+����!�SJ�������1� .������� ��������$� �����1�

Page 50: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

SP��

�� ��� � ��Y� ��+� "� � .��� �� ��� � 11� �� ��� ���� �.��� ��� ����� � (5���+�

FPPVa� %�.�� $� ��� ���+� JGGG)�� N.��� ����� �� �� �� ����� ��� ��� �"��� � ��+�

������� � +� .� 1���� ���� �1� � ���� 1�"��� ��� 1����� �.�����+� ����� ���� ����

�.��+�� ��.�� ������ ��� ��N��F����������� ������ ������ ���$� ������� .�

1���� �����1�����������+�Z.��.������� ������� ������6� ������� .���"������1�

.� ����� !�SJ� ����� �� 1���� ���� �1� 1�������+� Z.��.� ��� .��+� 1����*��Y�

� ������� ���3 ������� .� ���� ����� ��. ��� ���"�����������. �"� �������

��� .� ������ ���� �1� .� 3 ���������� �������� �� ,.� ��� � �� �1� 11� ����

�� �1��1���N.��+�N��F+�!�SJ����� .��1���� ���"����1�� �� .������3� �

�������� ��1� .����� ������

�+:723 �C6 ,.� N.�� �,���� �Z� �.�� ! ������ " Z�� .� ���� ��� (���*"���)� ���

�� ���(�,�*"���)�1������������� �" ������������� ��3�.����1�� ����(�B��)�

��� �,���*�� ��� ���� ��� ���� (����)�� ������� ����� �� ������� ���� ��.�"� ����

(��'�)� ��.�"� � ����� �� ������� ���� ��� ��� ���� � ������ �1� N.�� �,����� " Z��

��"�������� �������� ��+��,�*"�����,������� ��� �Z� .�11� ����������� ��

��� � �������� �������� ������������ ������ ��� �����1� .��,���� �Z� �.��������

.����.��� ��� �����1��B������� �1����(%�.�� ����5���+�JGGJ)��

Page 51: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KG��

-6�� �+B(�+�,�9���$2��3+,#

���� .� JG� .����� N.�� �,����� .�� ��� VL� �B��� ��� XR� ����+� ��� ��

��"� ��1�N.���,���������� � ��Y� � ��"� ����� �" ��B����������� (���.����

N=�La� ����� Y��Z�� ��� N5OB)�� N.�� �,����� ��� �� ��� � " � �� ��� � N.��B��

1�������� �"�� 1���� � N.��B��� (�1� Z.��.� .�� ��� XV)a� ��� ��� �1� � �Y������

(���Y)� 1���� � N.��B��� (�1� Z.��.� .�� ��� FF)a� �Z� �.*������� � ��� ��� RG�

(%\��RG)a����%:�,�(�����Y��Z������B�X)�(8�����������+�JGFG)��,.������ ����"� �

�.���� ��$�N.��B��1���� ���� .��"�*1���� +�Z.��.��.�������������� ��� �����

�� �1� ������ ���� �1� �� JKG*������ ���� � � �.� �1� ������ �������� � Z� .� �"�+�

Y��Z������5������+��6��� � �������Y� ����.������ �������(�5)�(8������ �

����-%��$�*%�.�� +�FPPRa�\.� .��������+�FPPR)���5�����������������"��1���

����� �� 3�.���� �� ��� � �Z��� �,����� �1� .� N.�� 1���� � ��� ��� .��.� �

������� Z� .��� .� ��"��� �1� .��� 1���� +� Z.���� �5� ������ .��� "��

������� � ������ ��� �1� ��� ��*��� ��� ������ ��*����� �� ��� ������ '����� �

����� .� �5h�5� ����� ��� .� �������� � ��� ����� ��� � .� � ���� ����� �

����� ��3�.���� ��� ����O .����������� �1��Z��1������� .�� ��� ����1�

N.��B������ ���+�Z.��.�������%5J+�%5L+�%�W,.�����, ��Y����+�N��*�B�+�N.�*

���+�N��*�B�+���b+������ �������5���������,.����� ��Y� � ��"� ������� ���

���������N.��B��� ����� ������� ��������������������������

!6���������#

��� �� ���� "1��� �QFJWFL� �� ��� � .�� ���������� N.��B����

�FFKN.��B�+���b*N.��B�����:�N��(E�$����������+�FPPVa���Y�.����������+�FPPP)+�

Z.��.� ��� ������� ��� �� ��"1���� � �1� N.��B��� ���� N5*N.��B���� %����

.��1 �+��E��*:"�������� �*:"�+� Z�������������� ���1�:"����� ��+�Z��1����

��"�����1����� �� ����� �" ��FJ���� ����(��������������+�JGGFa��� �������+�JGGS)��

5�Z��+�������� �������.�Z�� .� �:"�� �������� ������� � ����� �������

��� ���Y� � .����.� .������� ����Z� .��Q��(����������+�JGFG)���

Page 52: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KF��

!6���27 �72('93(�723#�9���������#

���� .������������N.��B������ ��������� �" ��QFJWFL�"����� ���"�*

N.��B��1���� ������� ������������ .� ��.������� ��������������� � �� .�

N�%��������1� .�N���� �����1��*��� ���%���������(N�%)���� �����,.�����������

N�%�����������.���� ��$�" ����������FJG�������.������1���( .�HN�%*

"�3I)� ��� ��� �������"�� �1� .� �� ��� ���� Z� .� %Z� �.� '� ��� ''� ������� �1� �Q�

��"��� �+������� ����� �������� ��� ��'����� ��� +� .�N5���������1��FFKN.��B��

���:�N�+������ ��� �H��N�%I�������(!.��������+�JGGF+�JGGL)+��.������� �

������ �������� � (" Z��FG� ���FK`)� �� .�N�%��������,.�N5��������

��� ���� � ��� .��� =* ������� ������� ��� �� �� � ���� � ���� �� ��� �� ��b*

N.��B�����:�N���� ������ � ��� ���� ����b������� ��� .���=* ������� ������

.� �����Z����������� ������ ���1������ ���� ���.������3���+� �������*��Y����Z .�

1�� ������ ��������!N��(%�.��+�JGGP)��

�� ,.�� ����JGS��1��QFL����� ����� ��%Z� �.�'������+�Z������� �� � ��"�

����� �� �1��� .��� ��� ����Z� .� .�N5���������1�"� .��FFKN.��B�����:�N��

(=�Y������������+�JGGSa����"��Y�����\��� ��+�JGGK)���,.��� � ���� ��� ���

�1��QFL� ��������3�Z� .��FFKN.��B�������b*N.��B������Z� �� ����� .�

����1��� ��������1��QFL� �������"�� 1��� .�"������ �� .��N.��B���(������ 'V)�

(!.��������+�JGGVa�5�6��Y�������+�JGFF)���

Page 53: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KJ��

,.�:"�*N.��B��.�����!* ������� �������.������LP`����������� �� � �

�� .� ���������N5��������,.��+� .�� ��� ���������� ��"�� � .�3�� ����1�

.� N5� ������ Z� .��� .� :"�*N.��B�� ������ ��� � � ��� Y��Z�� ��� HN�%*��YI�

������(������'P)���

!6��� ('+D(�+�,�9���������#

N5*N.��B��� ��� ����� ��� ���� �������� 1���� PGG� �� FXGG� ������ �����

�����3��� � �������Z�� �3������������������FFKN.��B������"�1����

��� .�� ���� ��� ����� ��� ������$�� .����.�� � .� � ������ �FFKN.��B�� ���

�������� � �� .� ���������"���� ����� � �� �� ��� ���� " � �FJ� ��� �����5��.�

�������� � ����� �1� ��b*N.��B�� ��� ���� � ��� .� �� ���� ������� � � �� "� �

������������� ������"� ������$� ��� .�� ����+�� � .���������.� �� ����

���� .����������"�����=�� .���+� .��� ��� ����" ��QFJWFL������������� ��

�� �� �����

�� ��� ��� ��� �� ��

��

����

�� ����

� �

���

��� ��� ��� �� �� ��

��

����

��� �� ��

� �

���

��� �� ��� � ����

�� �� ���� ���� �� ��� ��� �� ��

���� ������

��� ������

����

����� ���

��

���

����� ���� !���"!���#$��%

�+:723 �%6� ������� � ��� ��� �1� N.��B��� ���� � �� "� ��� � � ����� � " �

. �� ������� �� ��� ����� ,.� ������ ���� ���"��� �.�Z�� �"��� ��.� ��� ���

��������� �� .�.������� .��������� �1����(�� ��"�������+�JGFG)�

�+:723 �E�� % ��� ��� �1� .� �QFL*�FFK� N5� �����3� =�> ,.� �����3� ��� �.�Z�� ��� ��

��""��� ������+� Z� .� �QFL� ������ ��� ���� ��� .� N5� ������ �1� �FFKN.��B�� ���

���Z�� ���+� ��fJ+� ��� ���S*� ��� �.�Z�� ��� ����*1������� ��.���� !��"��+� �3 ��+�

�� ����+��.���.� +���������+���������+����1������� �������������Z.� +��+�

��Y�"��+������+������+����. ���� +�������. �"��+����� ��� ��,.�������������

��� �FFKN.��B�� " Z�� .� ���� �� �1��� ��� .� N�%� "�3� ��� �.�Z�� ��� �� ��.�

���Z������=�>��� ������Z��1� .��QFL*�FFKN.��B��N5�������11� ����� �1����

��� �1����(5�6��Y�������+�JGFF)���

Page 54: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KL��

�������� ���� �� .����������"�����O�� .�� .��.��+� :�N�� ��� �"���� ���� �

3���������� ��"� � .����.�� � .�� ������������� ����� ��+�3�� � ���

��!E�����+����Z.��.�:�N�����������$�� ��� �������"������'��1�"��"��� �+�:�N��

Z��� ���� � �� ������$� �� .� ����� �"��*������$���� �� �� ��� ������

����� �"��� ���Y�� ����� ��"� ����������� �(����������������+�JGGK)��%������� � ��

.�� .��N5*N.��B��+������� ���� ��� ����" ��FJ���� ����:�N����� �������� � ��

.����������"�����,.�:"�*N.��B�������������� ��*Y��������.��������� ���

(�E��)*:"�����.��.� �3�������� .�.�� ������� ��"� ����1���� .�� ����� ��

.����������"����Z������� ������ � ���� ��� ����" ��QFJWFL� (��������������+�

JGGF+�JGGS)��

!6/�3:7'(�+�,�9���������$2��3+,#

�� .���.��QFJ�����QFL���� .���� �.�����������������Q���"��� �����

�.�����������"���.����������� ��+� .�������������1��� ������������� ��11�� ��

�QFL+� "� � �� � �QFJ+� Z��� 1���� �� � ����� � .� �B�� �� ��� � �1� �FFKN.��B�� ���

��b*N.��B��� \.���� �QFL� �.����� Z�Y� � .� �B�� �� ��� � �1� :�N�+� �QFJ� ���

���� � �� �� ��� � :�N�� ��� � Z.�� � � ��� �.���.�� �� � (%�$�Y�� ��� ���+� JGGL)��

�.���.�� �� ������ ����� ����� �� � ����� ���� 1���N5*N.��B������ �������b*

N.��B�� ��� :�N��Z�� ���� � �� "� ������ �.���.�� �� � " � ��E� ��� ,��

(��Y�.���� ��� ���+� JGGFa� !.�Y���� ��� ���+� JGGS)+� Z.��� ��� ��� Y����� !� (�E!)� Q�

�.���.�� �� ���FFKN.��B�����������������O�� .�� .��.��+��JF*�� ��� �

Y�����F�(��EF)�����"��� �� .��5W�5���������1��FFKN.��B��("� ��� ��1�:�N��

��� ��b*N.��B�)+� ��� ��� � N��*����� ��.�"� ���� �1� N.��� �� ��� ����

(N���1� �������+�JGGX)���

��� ���"����1� .��"��1���� ��1��B��������� ���������"����� ���� ���

���1���� ����" ��� ������������� ��� ��������������� .��5�����5�����������

Z������� .������� �� ���������%��.��� ��� �����.���"��������� ��"���Y�

.��������1�N.���,����� �� .��� �� ����������W����������� .��B���� ��� �

�1� .�3�.����1�� ����(b.��+�JGGF)��N�� �� �������� �� � .� � .��� ��� �

�1��"��1���� ���"������������"������ � .����.���������$� �����'������Z� .�

.�� �"���� ����� �FFKN.��B�+� ��b*N.��B�+� :�N�� ��� �E��*:"�� .��� "��

���� � �� .���*� ��� . ������$� .����.� .��� ����*����� �� �1� ��� .� !*

Page 55: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KS��

������� ������� '�+� ��������$� ���� �1� N5*N.��B��� ���� �� ��� ��� �

����� � � �� �� ��� +� ��� � ���� �1� .� !* ������� �������� .� �"��� � �1� N5*

N.��B��� �� � ����� � .� 1���� ���� �1� N.�*�,�� ��� ����� ���� "����� ���� �����

(B���.����������+�JGGLa�!.�Y����������+�JGGSa������� �������+�JGGK)�� '�� ���+�.�Z�

.� !* ������� ��������$� ���� ��.�"� �� .� 1��� ���� �1� .�� N.��B��� ��� � ����

��Y��Z�� "����� !* ������� ��� �� � "��� .� �5*�5� ������ ��� �� � � .�� =*

������� ����� �� � ������� ��� .����+� .� "������ �1� �FJ� ��� ���� �� N5�

����������� ������ � .�����������$� ����(!.�Y����������+�JGGS)���������� �

�1� .� ��� � �����1���� � �.���� ��� ���� �1� .� .����� �FFKN.��B�+� ��b*N.��B�+�

:�N�+����:"�*N.��B���������"���� �"��'J��

()'3��6!.���� ��� �����1� .�1�����FJ*����� �N.��B����

$��!������ ��.������� ���� �) �������

�<$23##+�, ���������+�Z��

� ���Z������

!=%+�Z��� ���Z�

�����

�"���� ���� \��(�E��*:"��

���.�� )�

�+D3=�7*(,> PJR���� FKJJ���� FKSS��� 8����"��(������

������ �)�

���8�*(+, i�� i�� i�� N�%*��Y�(!*

������)�

�� ('+D(�+�,

+,( �+B39�2*

! ������� ! �������������

(���� �)�

! �������������

(���� �)�

! �������

�� ('+D(�+�,

( �+B39�2*

�������

��"����

�������

��"����

�������

��"����

�������

��"����

�?���+,87 38

���( �+B(�+�,

=�� =�� i�� i��

�?�/�+,87 38

���( �+B(�+�,

i�� i�� i�� i��

�3:7'(�+�,�9

���( �+B+�;

�E!�(f)+���E�(*)� ,�+���E�(f)� ,�+���E�(f)� �E��(*)�1����E��*

:"��

�'+:�*32+D(�+�, 5���*��������� 5���*����

. ��*���������

5���*����

. ��*���������

5���*���������

(�E��*:"�)�

��� �1����(%�.��+�JGGP)��

Page 56: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KK��

!6-���32*3*)32#�9��3������9(*+';

5������ � ����������� �1� .� �5� ��� �5� ������� .��� �� �1�� ��� .��

1���� ������ ���� � �� .�N5*N.��B��������(% ��Z���������+�JGGR)��,.���1���� �

�������� �E��*:"�+� �FFS*N.��B�+� �FPGN5��B�+� ��� �B�*5F� (������ 'FG)�

(�����3� ')�� ' �.���"�� �.�Z�� .� ������ ���� ���� � ����� � ������"����1�

.���1���� ��\.���� .������������� ��E��*:"������ ����� ���� �" ��QFJ+�"� .�

�QFJ� ��� �QFL� �.���� .� �B�� �� ��� � �1� .� �.�� �� 1���� :"�*N.��B�� ������

������ � .����.� ��������� .� ����� �1� �E�+�Z.��.� ��.�"� �� � �� �B�� �� ��� � " �

�.���.�� �� ���� ��� ������� �� � ����� �� � �1� FS*L*L� (�������� ��� ���+� JGGF+�

JGGS)����� .����"�+��FFS*N.��B�+�����"��� ��� �" ���!N������� ����� ����

�1� :��+� �������� N.��� �� ��� ���� (=��� ��� ���+� JGGL)�� �FFS*N.��B�� �� ��� � ���

����� �" ��TU�"� ��� �" ��Q���"��� �+� .����.�� ����� ��� ��� ����� ����� ����

"� .�N.������N��F��5�Z��+�� .������ ������� � .� �� ������� ���1���N.���

(=��� ����� '����Y�+�JGGK)��,.� Z�� ��� � ��� ���� �����FPGN.��B������B�*

5F� .��� �� � "�� �� �1�� ��� ��� �� �1� .� �� ��� ���� ���������� �� .Z� ���

�FPGN.��B�� ��� ������� � ��� ������� ��� ������ ��� ���� �� ��� +� �����

�������������� 1����� � ������� ���*!!EJ�� ����� ���������������� �� (:���������+�

JGGVa� i�� ��� ���+� JGFFa� ������ ��� ���+� JGFJ)�� ' � .��� ����� "�� ������� � ��� ������

� .��"����������1��� ������'��������������+��FPGN.��B������������ �*���� � ���

�� ��� � (\�� ��� ���+� JGGL)a� � � ��� ������� � ��� .� �� .������� �1� �� ��� ������

���� ���� (:��� ��� ���+� JGGK)a� ��� ��.�"� �� �3����� "����.���� ��� � �����

1���� ���� �Z�� ���� �1� 1����� �.����� Y����� (��E)(N���� ��� ���+� JGGS)a� ��� k*

�� ���� ������ ��������� ��� ����� ����.������� " � ��.�"� ���� N��1�

�� ��� � (E��� ��� ���+� JGGV)�� 5�Z��+� ��� � ���� �� �1� ���� ������ ����� � .� �

�FPGN.��B�� ��� �� ����� �Z�� ���� 11� ��� �1� �QFL� ((����7� ��� ���+� JGFS)�

��"�� )�� ,.� ����� ��� ��� 1��� ����� �1� .� �B�*5F� Z���� "� 3 ����� �

�������"��Z��

� �

Page 57: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KX��

46������

�B�*5F�.��� .��������� � ��"�������� � ������� �"������������ �

" ������ �"���"������(N�+�FPPVa�E����������+�JGGJ)��5�Z��+� .���.������

.� ������ ��� ��"���������� �������1���� .������� �1��� ����� ����' �.���

"�� ����� � .� � �B�*5F� ��� ����� 1���� ����� �"���� ����� .��� � � � �1�

��� ���$� ����� ,.��+� �B�*5F� ����� ���� " � ����� �"���� Z���� ������ �� ���Y�

" Z������� �"��� ����������N.��,������ ��� ���� ��������� ��1��������

"������������ �� ������

��� �� ���� "1��+� �� .���.� �B�*5F� .��� �� � "�� ������� ��� ��

�Z�� ���� 11� ��� �1� �QFJWFL+� ���� � ���� .��� 1���� ������ ������ ����

��� � �� ��� ���� ��� �� ��� ���� �1� �B�*5F� .����.� �FJ� ��� ����� ,.�1��+� ��

����� �����1�� ��� ��� ������1��� ������� ����"��Z��

�� �����

�� ������

�� ������

�� ������ �

�� ������ �

�� ���

�� ������

�� ��

�� ��

����������

����

��� ������

&�������

��������

��� '�

�(�� ���

���������

���� ������

��) ��

����*

�+:723 ��"6 ��������� �" ���� 1���� .������ � ����������� �1� .� �5� ��� �5�

������� �1� N5*N.��B��� Z� .� � .�� ��� � ��"��� �1� .� :"�� ��"1���� ��N.��B��B�J����!N.��B����� .�.������������� �����1� ..������FFKN.��B��

����������� ��� ������������� ��� ���������� � �� �������+� ���� ��� �� ����Y� .�����

N5N.��B��+ !N.��B�� ��� �N.��B�J� ��.� ��� ���� ��� !F� .������ � �������

��������� N�%+� ����� ��� �1� �� ��� ��� ���������a� �5+� "�� .������ a� �5+� ���Y� ����

.������ a� b+� ��ba� !+� !F� .������ � �����a� �E�+� "������ �� � 1��� ��� ��� Y����� ���

'������� �1����(% ��Z���������+�JGGR)�

Page 58: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KR��

46���27 �72393(�723#�9������

�B�*5F����3��������Z��������1�.����� �������\.����.������B�*

5F� ��� �� S+S*Y���"��� ����� �N=�� �������� +� .� ����� :1�� ����� � .��

�������� ��Z� .���� .���1�S�K*+�L�R*+����L�L*Y���"��������(N�+�FPPV)���B�*5F����

:1���.���VV`����������� �� � �����.�������������������� ��� ���(�����+�

FPPP)�(������'FF)��:1��Z������������ ��� �1������ ��!* ������� � ����� �1����

��� �� ��� ����"�� �� ����� ���� ����1���� ���� �1� ='5L,L� ����� Z.��

���3�����(\.� .��������+�FPPK)��5������B�*5F������������1�PVX�������

������� � .�=* ������������� .�������!F������+�Z.��.���� �������$���*1�����

�� �1��������� �� .�!F���� ���������(���)�"�������������1� .�� ��������� ���

Y����� !� (�E!)� 1���� �� ��� �� ��"�� �1� .� ��"1���� � �1� �"�*N.��B��+� �B�*5F�

�����������5������+�Z.��.����1��� � ���� �� ����� ��� ��\.�����B�*5F�����

�. ������ � �� ��� � .����.� .� �5� ������ Z� .� "� .� N.��� ��� N��F+� �B�*5F�

��� ��� � � ����� �� N.��� �� ��� �� �6��� � �� .� �5� ������ .�� ��� �� �5�

������ .� � ��� ������� ��� ����� �"��� "������ ��� ��� ���� �1� .� ��� ��� ��

�11�� ���"�������������� �� �+����.� ��. �6��� ������' �.���"������ �� �

.� � .� �5� ������ ��� ������ � 1��� .� �� ��� � �1� �B�*5F� ����� � ���� �1� �5�

������������ � .� ����1��������"��� ��1��B�*5F����='5L,L������(\.� .��

������+�FPPK)���B�*5F�.���������*������������ �!* ������+�Z.��.� ��� ������� ���

��� ��*��� ��� �� ��� ����� '�+� �B�*5F� �� ��� �� Z� .� ����"��� ���

������.����� .����.� � �� ����*����� �� �1� (N ��� ��� ���+� JGGK)�� �� ������ +� �� !*

������� � ����� � �B�*5F� ��� � � �� �"��� � �� �� ��� � Z� .� ����� �"����

����� ���� .� � .� ����*����� �� �1� ����� ��� �� �� ���� ��� �B�*5F� ����� �"���

������$� ����(N�+�FPPV)��

�$$��$$$

�� �� �����$$$$$$$$$$$$$$$���$

��$$$$$$$��

��� ���

��$��� �$$$�� ��

�+:723 ����� %�.�� ��� ����� � �����1��B�*5F� � ��� ���� !F+� $���� 1����*��� �������

!F������a��5+��"��.������ ������a��5+����Y� ����.������ ������a��*�a�����*�����

�� �1�

Page 59: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KV��

46��3:7'(�+�,�9������);*+ 2��7)7'3#

��� �� ���� "1��+� .� ��� � �.���� ��� ��� 1� ��� �1� �B�*5F� ��� � ��

����� ����" ������ �"�����\.��������� �"���"������ ��� ������� �Z� .� ��Z�

3�.������ ��� ��1��B�*5F� �Z���N.��+� .������1��������� �"�������� ��

��� �� ��� ���� �1� �B�*5F� ��� ������� � +� N.��� �� ��� ����� B��� � � ���� .���

"������ �� � .� � �� ���������������� ��"� � � ���� (!KL)�� � .� $���*1�����

���� ���� .�!F������������11���� � ������� .�������1������ �"���������$� ����

�1� .� ��� ��� (E���� ��� ���+� JGGJ)�� ������+� .� 3�������� �1� �B�*5F�

���� ��� �� .� � ��� 1���� � ��� ����� �"��� "������ ����� � �.����� ��� ����

����.���� �� ,.��+� .� ����� �1������ �"��� "������ ������ �� ��� ���� �1� �B�*5F�

(E����������+�JGGJ)������� �� � ������ � .� �,� 3*F+������. ��.����������� �

�1� .� ���� �� ��� �����3+� ��� .� 1�� ��� .� � ���Y�� �B�*5F� �� ����� �"����

���� ������� .���� ����������.�"� �� � �(�����������+�JGFJ)���

46/�3:7'(�+�,�9������);$��#$��2;'(�+�,

%����� � �������� ��������3������ ����" ��.���.�� �� �����1��B�*

5F� .����.� .��� �����1��11�� �Y�������,.�" +��B�*5F�����.���.�� �� �" �

�JF*�� ��� �Y�����F����S�(��EFWS)�(b�Y�������+�JGGSa�!����Z�������+�JGGK)+�" �

.� �� � ��� Y������ ������� �W�� ��� !YFW! ����� �� (���Y�1�� ��� ���+� JGGR)+� " �

BNEFWJ�(��6��.����������+�JGGV)+�" ���� ���Y�������(�E�)�(�����������+�JGGP)+����

" ���� � ������*1� ���F�(��NF)�Y�����(i���.��.��������+�JGFF)���

,.����"�3 �� ��������1��B�*5F���� ������������+�Z.����� ���� � .�

����� �.���.�� �� ���� �����+� .� � ��� ������ � 1��� ����������� �1� �B�*5F�

3�.���� �� ��� �� �� �� �� ���Y���� ������ ����� 1���� KRL� �� PVK� �.�Z� ��*

����� � �B�� �� ��� �� '�� 1�� +� �B�*5F� ���� "� �.���.�� �� � � � ����� VVK� " �

��EF� ��� �E�� ��� .��� �.���.�� �� ���� ������ FS*L*L� "������ �� �B�*5FW:1���

������+� � �.���"������� � .� � .����.���.�� �� ����.������ ��.�"� �� � ����

"����� ����� �� .� �*������$� ���� �1� �B�*5F� �� ����� �"����� ,.� �� .����

������� �� ���� ��� Z.��.� FS*L*L� ��� ���� �� � 1���� �B�*5F� �� �� �� �����

���1���� ���� .� ����������� �� ��� ����Z� .�N.�+������FS*L*L�.��� .��"��� �

Page 60: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

KP��

���� ��� �Z� .��B�*5F� .����.�� �������� ��� �%VVK������������������������ �

�� �� �,FFS+�������B�*5F��.���.�� �� ����(b�Y�������+�JGGSa������������+�JGGP)��

'�� ���� Z� .� .�� �"���� ����� .� ������ *����� ���� ����W .������ Y�����

��NF"�������������.���.�� �� �������%VVK����%PKP��1��B�*5F� .��+���.�"� ����

� �� 3�.���� �� ��� �� � � �� ������ +� �.���.�� �� ���� �1� �B�*5F� " � ��ES� "���Y��

�B�*5F*��� �� ����1�"��1���� �����������������ES*�B�*5F������3�

���1���� ��"�������� � ������� �"����(!����Z�������+�JGGK)��O�� .�� .��.��+�

BNEFWJ� ������ �.���.�� �� ���� ��� .������ XRV� �1� �B�*5F� �.������� � ��

�$ �� ��� �� ��� � �1� .� 3�.���� 1�� ��� �Z��� N.��� (��6��.���� ��� ���+� JGGV)��

B��� � ��� �� ����+� ������� �W�� ��� !YFW! ����� �� .��� "�� ���� � ��

�.���.�� �� � �B�*5F� ��� ����� VVK� ��� ����� PKP+� ���� ��� +� .�1���

��.�"� ���� �B�*5F� �� �� ��� �� ��� �� ��.���.�� �� ���� �1� �B�*5F� ������

���.��� �������N.����� ��� ���+�Z.��.������Y���������1����Z�1���� �������

����������������� �Y������(���Y�1��������+�JGGR)��,.���"���� ���������� �

.� �%VVK����%PKP��� ��� ������.�"� �� ��Z� �.���1��B�*5F+�Z.��.���� ��� �" �

��� ������ ��� �Y�������������� 3 *��� ���������

46-������+,*+��#+#

������1����B�*5F��������� ����������$��� ��� �����1�N.����������11�� �

� �����1�������������� �����.���"��� �"���.����11�� �� �����.�Z� .� �

�B�*5F��������������N.����� ��� �������������� ��.������ ���.�����W���

� �Y����������������� � ����� � .� �:1�����������1��� .�1���� �����1� .�

�� � �������������������.���������� ��.����������������Y����:1��Z���� �

�"�� ������"�������� ���1��� �������������(��Y���������+�JGGK)��%������� +���Y �

���� 1��� �B�*5F� ������ � �Y������ Z��� ���� �� � ��� 5:�� ����+� Z.��

�� ��"� ���� �1� �B�*5F� 1��� ���� ����� �� � ��� �"��� ������ � �B�*5F� �� ��� �

������ � �Y������ ��� ��� ����� " � .� �� � ��� Y������ ������� �W�� ���

!YFW! ������+��������� ��"����,.���.���.�� �� �������� ��� ������ �

.��� �� ����� ��� ��1��B�*5F� �Z���N.���������B!,J+���N.��B����� ����1���

N.��� ������$� ���� � � .� ��� ������ ��� 3� ��� �� Y � ����� ��� �1� �� �����

(,� ���� �� ��� ���+� FPPP)+� �B�*5F� ��� ����� �� Y � ��� �� ������� ��� � �Y������

(���Y�1��������+�JGGR)���

Page 61: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

XG��

46!��;#+�'�:+ ('97, �+�,#�9������

����� � �� ���� ����� ����+��B�*5F�.���"�� ������� � ���� .��"����������

��������� ���� 3����+� �B�*5F� .��� "�� �.�Z�� �� ����� � �� .����� ����

����"��� ��������� .�������"� ��1� .��� .���������"������(%�������������+�

JGGR)����� � ����������������� ��1� ���!E������� .����� ��. � 6��� �����(�����*

��� � ��� ���+� JGGL)�� �B�*5F� �� ���� � ��� �� .� ������� ��� ���������

����"��� � ��� ����� ����� �"��� ��� ���$� ���� (����Y���� ��� ���+� JGGX)��

:�YZ��+� �B�*5F� .��� "�� ���� � �� "��� ��� � � �� .� ��� ��� ��� ���

��������+� ��� .��� "������ .��� ��� ��.�"� �� � ���� ��� �B�*5F� �� ��� � (��6�$� ��� ���+�

JGGK)��%������� +��B�*5F���������������� ��������������$� ��������� ��� � .����.�

.� ����� �"��*����� � ���� �� �1� ���� �� ��� �� ,.��+� ���3�������� �1� :1��

������ .�����"� ��1� � ���� 1�"��� (E����������+�JGGJ)�Z.��� .�� ����� ����

Z� .� .���"��+� � ���.���.� ���� ���� ��� .� ����� �"��� ��� ���$���� ��� �

�����$��������� ��B�*5F����������Y�"� �� ��� ��� ����1�"��1���� ����

(����Y����������+�JGGX)�� �O�� .�� .��.��+��B�*5F� ����������Y ������ ����1� .�

3�� ����� .Z� ������� �� � ��.�Z�� .� ��B�*5F�������������� .������ ����

�1�������� ��11��Y������ .Z� ���1���� ����� ���������3�� �������'��1�� +��B�*

5F�����"�� ���� ��� ���� � �Z� .�%�K+���������� ��1� .�3�� � ������3+������

N�'� �,���*��� �������� ,.��� �� ��� ���� ���� N.��� �� ��� ���+�Z.��.� ���

��������� ��3�� � �����"� W������$� �������3�� �����(�� .�Y�������+�JGFJ)���

C6 3'' ; '3

9\.�������������+� .����� �"��������������+�6�� ������������������� �

����� 1���� �������� ��� ���� �� 1���� ���� �9�� ,.� ������ �� .������ � N���1�

8���.�Z�������� .����������� ������FVKV��,.�" +������������������� ������� �

��� Z�� �������� .� � ���� � �=�� ������ ���� ��� ����� ���� �1� ������ �

�.����������� �� Z������� ��������=�������� �������������� .�%��.��+�Z.��.�

������� FG*FJ� .����� ��� �������� �"�� � .��1� �1� .� ���*� ��� ��� ��� �� ������

���������� ����� �1 �� .� +� .� ����� ���� �1� ������ � �.��������� �������

������ .����.��+� ����� ����+�Z.��.� ������� ���� .��� ��� .���� �������������

������ � Z�� .� %� ��� .����.���+� .�� ��� Z������ �.����� �F� �.��+� ���

Page 62: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

XF��

Z.��.� ����� ������ �� �=�� � � .���a� ��� �J� �.��+� ��� Z.��.� ����� ������ ��

�� ������,.�1��� ���� � ��� ��� �������" � 1�����.���� (������ 'FJ)��!���� ����F�

���+�"1��� ���=�������� ���+�� ������ ����� � �������G��!���� ����G������� �

1��� .���6������ ��1� .����*���Z���+����*�����1�� ������������ .�.�����"� ��

C6� 3'' ; '323:7'(�+�,

��11�� ������������ ��������� � .� ����� ����1������������ ����.���

����� .���,.������1� .���� ����� � ����� .�� ����*��� �Y������(!�E)+���

1���� ��1������W� .��������� ���Y������ .� ������ ��� �� �����1������� ���1�

.� ���� � ���� \.�� �� ��� +� !�E� ����� �Z�� ���� �������� " �

�.���.�� �� ���� ��� � ��� ���� (������+� FPPKa� ����+� FPPK)�� ������+� . �

������� ��� �" ���������!Y���.�"� �� ���� ����(!E'�)����" ����� �����1� .�

� �������"��� ��� �����1���� �����1� .�� ����

�� �� ���������� ������ �����1������ ������ �� .������� ��1�������

�������+� ���� ���� ��� ��� ���� ����� ���� �����1�� ����� !��� � ��� ����� ����

������� �Z� .�������������� .����.��� � �����1���� ��������� �� �� ��11�� �

������1� .������ ����,.�" +��� � �����.���"���"������������������

!�E+� � �����+� !�E*�� ��� ���� �$ ��+� !E'+� !�E� ��"� �� �+� ��� �.�Y���� �

��� �����,.��+���������� ������ ������������� � ��������� ����������� ���

�+:723 ���6� ,.� �.���� �1� .����� � ���� ,.� ���� ���Z��

��� ������� � ��� �� ��.��+�

Z.��.������� ���1� .���.�����

�=�������� ����������1��� ��%�

�.��a��F���� .�����" Z����

�.��� ���%��.��a�Z.����J� ���

.�����" Z��%��.��������

�.���� '�� .� �� �.��+� .�

������� ��� .� � �������

�����

Page 63: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

XJ��

C6��+��#+#

,.����.��� ��� .� ������� ���� �1� .� ���� � ��� ��� ������� .� ��������

� �����1���������������� (�� ����)� ���� ������� ����������� (� �Y�����)��,.�

��� � ��1� .����� ����+�Z.��.�Z�����"���������������.�����1� .�� ��+����

��� � ���� �� �� Z�� ���. �� ������ ,.� �� ����� ��� ���� �� �� 1��� � �����

����.��+� ���� ��.��+� � ��.��+� ����.��� ��� ���.��+� Z.��.� ������ ���

� ��� � ���� ���� ���+� Z.��� � �Y������ "����� ��� ����.��� ��� ��� �����

.����.� ���.���������������.��+� .������� ��.������������������� ��

Z� .� .� �������$� ���� �1� .� � ��Y� ��� ��� .� ������� ������ "��Y��� '��

���� ��.��� .��.���������"����� ��.� ��������� ������� .��� � ���

���������� �1������O��������.���������������������� .���������� ��� .�

���� ��� ������� �� "� ��� � ��.���� � � ����.��� .� ��� �� �.���� ��� ���

����� �������� �Z��� .���������������������������� +������� ���.���

�6��� � �.��������� 1��� �� 1���� .� Z�����. �������+� ���������� �"��*

"��� ��"� � ����"��� ���� .� ��������� ������ ��� ��� ��� ��� ����� �� ���

� �Y������� ! ������� ��� �������� ��� ����� � " � .� �� �1� ���.��+� ��� .�

����������� ��������1� ��.����. �� ���� .�� � ���� �� �� ��.��+� ����������

.����1����.����

,.���������������3�� �����1��� ��������������� * ������ ��������� ����

" � ������ ��� ��� Y������� ! ����*�W!Y*F� �� ��� � ��� .� ������� 1���� .� �

����� ���� � ���� � ������������ � ���������������%������ .��Y��������Y�

.� ��Y�+� .� ='��� Y������ ��� .� ������� Y������ ��� � ��� ���� ����� ������

�� ������

C6/ ;���+,3#+#

�������� ���� � �Y������ ��� ��� �� � ������ ����.��+� Z.�� .� �� � ���

������ �������$�� �� 1���� �� ��� ���� � �1� �� ��������� ����� �"���� ��Z� �

" Z�� .� Z���� ���������� ��+�Z.��.��������� .��� ����������(���������

��$��)��,�� .��Z� .������ �"����1���� .��������� ��+� .��� ����������

1���� .����� �����1� .��������������" Z�� .� ����� � �.����������

,.��� ��� ���� ������� ��� ������ � .����.� �� �� .Z� � ���������� .� ������ �,����

Page 64: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

XL��

N.��+� ������ �� .�����"� ��1������ �� ����������� � .���� ������������� 3��

!�� ��� ���� �1� .� �� �� ����� ����� ���� �� ��� ���������� �1� .� � ��.� �������

��"���� �� 1������� �Y�� ��� 1����Z+�Z.��.���� � ����� .�� ��������� �� Z��

�������� � � .��� � ��+� ��� �� ����� ������ ����� � " � �� �����Z� �� ���������

"���� ��� ������� ��� �� ��������� "����� �1� ����� �"���� .� � ������� � � ��

�� ���������� ��� .���"� �(�����������"� )���. ����������� �����1� .�

������� ��� �� ����� ��� 1����� � ���������.� " � ���������"���� 1������� � � .�

�� ���������"�����!.������������� �������� �Y�� ���1����Z��������������

��� �� �" � .�BL��"���� ��� ����������.��������3�(��!)�� '�� .���� ��!�EF����

���� ��� ������� ������ ��� ���� ���������� ��� � ������ �����!������ � +�

��� � !�EF� ��"� �� �� ������ �.���.�� �� ���+� Z.��.� ����� � � �Y�� ���

1����Z���������������� � ���3� ��'�� .���� �� ���1��� ����+����������Y�������� .�

�������"�� �� ������� � .� ���������� �� .Z� � �� ����� � ����� ���� �1�

�.������������� ��������"�����������

N.������ .�Y ���� ������������ .���� ��* ���������� ����������1���

� �Y������� ' � ��� .����.� .� ����� ���� ��� .� �� ���� � " Z�� N.��B��� ���

N.������ .� �N.��� �������� �� �� .���� ��������� 3������� �� �� .�����"� �

��� �����������1� .� ��� ��� ��� ����� (���.������� ���+� JGGJa���� ���� ���+� JGGKa�

i;��������+�JGGK)����11�� �N.��B��������������������� ����� �������������

����"� � ��� ���������� �1� � �Y�� ��� 1����Z� (������ 'FL)�� � ��B�� .��� "��

�.�Z�� ���� ��� �Z� .� .��� �����W���������*������� ���� ���(!%��)����

��� ������ � 1��� ����� �� � �1� B!,J+� N.��� ��� ���*������ � ����� ''� �� .�

�� ���� ������ (�����������+�JGGP)��B!,J� ��� ����� � �� .��� �������������

��� ������ ��� 3� ��� ��� ������ � 1��� .� ��� ����� ������$� ���� ��� �� ��� ���� �1�

N.��+������ ������ ����� .�� �"���.�� ��1� .��������1����Z�� � .���� ������

��� 3�(%��������+�JGFF)���B�*5F���������������� �������������� �� ���� ���� .�

�� ��� ���� �1� N.��������� ������� 1����Z� ���������� ����� � ������ ��� ����

��������� ���� " Z�� .� ����� �"��� � Z��Y� �������"�� 1��� ����� ����

������� �� ����� ��� .� �� �� ����� ����� 1����Z� ���������� �������

(���Y�1��������+�JGGR)����� .����+�:�N��.���"������ � ��"�����������

������� � N.��B�� ������ 1��� .� ����� ���� �1� �"��������+� .� 1����� � ��� �1�

� �Y������(��� $�������+�JGFL)���

Page 65: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'� ���� �����

XS��

� �

�+:723 ��/6!�� �����1� .�N.��B��� ������� � ��� .� �� �� �����1��� ��������� ����

N.��B���3.�"� � ������� ��� ��� �1��� �����1��� .������������ �����1��� ������

Page 66: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

� �

Page 67: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

� �

Page 68: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

��&� ����

Page 69: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

Page 70: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�O"6� ����

XP��

5 �� ������� �� ��� ���� ��� ��� �� ����� ���� �1� ���� .���� ������ ,. � ���

������� � ������ �����1� �����������������%����Q���"��� ��Z�� ���� � ��

����� � �� ����+� "� � �� .���� ��� Y��Z�� �"�� � �QFJ�� ��� �� ����� ��� �� �������

����� �" � .��������,����N.�a� .��������1� .���� � �Z���

F��% � � .������1��QFJ��������������������

J��'� �1��� �����1������11� ����1����FJ������������� .Z� ���

L��% � �����.���� ��$� �����1� .��� ��� ����" Z���QFJ�����B�*5F��

S��% � � .���.�������1��� ��� ����" Z���QFJ�����B�*5F��

K�� '� �1��� �����1�������������������1����B�*5F����� ��������� �����������������

�� .Z� ������� �" ��QFJ��

Page 71: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 72: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 73: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 74: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

�����������������

Page 75: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 76: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

RK��

�6��������

�6��79932#(,8#�'7�+�,#

�79932 �*$�#+�+�, �**3,�#

�=��������"�11��XD� FG���� ���*5!���5�R�X�

G�FK`�(ZW�)�"�����.����"���

G�FK`�(ZW�)�3 ���� �����

XG`�(�W�)��� �����

XG���B�,��

� ���� �*JG�l!�

�,��"�11�� VG�����'�B%��5�R�

F����B�,��

F������!�J�

� ���� �S� l!�1��� ���� .���

L���� .��

F`�=�*SG�

F����B�,���5�V�

F����=�L8OS�

KG����=���

F������%��

K�m�W������� �����

K�m�W������� ���

��1��.�

5�%�J3� JKG����=�!��

P����E!��

F�K����=�J5�OS�

FG�����������

KG����5B�B%�

�6�� ��5�R�FJ�

1�� �����Y��� �S�l!

5�%� (N.��FR�� ����*

�Z�)�

JG���5B�B%��5�R�K�

FKG���=�!��

:��"�� . F`�=�!��

F`�(ZW�)�"�� �* � � ���

G�K`�(ZW�)�"�� �* �� �3 ��� �

�� ������

:�*���� :��"�� .�

F�K`�(ZW�)������� ������

��%�(FD) FLR����=�!��

J�R����E!��

FG����=�J5�OS�

J����E5J�OS�

�6�� ��5�R�S�

��� ��� �������� V*FJ`�

��� ����W"����� �����

Page 77: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

RX��

G�LRK���,���*5!���5�V�V�

G�F`�%�%�

G�F`���%�

,B�B��

�������� ����������� ���� FG`�(�W�)��� ��������

J`�(ZW�)�������*%�

N.��(�FR�)�� ����"�11�� JG����5B�B%��5�R�K�

FKG����=�!��

K������!�J�

F`�,�� ���D*FGG�

� ���� �S� l!�1��� ���� .���

L���� .�

F�����,,�

F������%��

FG�m�W������� �����

FG�m�W������� ���

��1��.�

N'���"�11��(FD)� LGG����=�!��

KG����,�����5�R�S�

G�F`�%�%�

G�K`��O!�

� ���� �Sn!�1������� .���L�

��� .�

F����B�,���5�V�

F����=�L8OS�

KG����=���

F`��*�� ��T*�*��� ����

F������%��

K�m�W������� �����

K�m�W������� ���

��1��.�

N'���Z��.�"�11��(FD)� LGG����=�!��

KG����,�����5�R�S�

G�F`�%�%�

G�K`��O!�

� ���� �S� l!�1��� ���� .���

L���� .�

F����B�,���5�V�

F����=�L8OS�

KG�m��=���

G�GF`��*�� ��T*�*��� ����

F������%��

��1��.�

%�%*��������"�11��(FGD)� G�JF���,����"���

F�PJ����� ����

G�GLK���%�%�

%�%*������"�11��(KD)� JKG����,���*5!���5�X�V�

KGG�����,,�

FG`�%�%�

���,,��������"�11��

Page 78: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

RR��

KG`�(�W�)��� �����

G�K`�(ZW�)�"�����.����"���

%O�� J`���� ��,� � ���

G�K`���� ��i�� �B3 ��� �

V�X����=�!��

J�K����E!��

FG������!�J�

FG������%OS�

�� ������������ �����

FG������!�J�

FG������%OS�

,�B� SG����,���*�� � ��5�R�X�

F����B�,��

,�%�(FGD)� G�F���,����"���

F�K���=�!��

�6�� ��5�R�S�

,�%*,Z��(FD)� ,�%�FD�

F`�(�W�)�,Z�*JG�

,����1��"�11��(FGD)� JK����,����"���

FPJ������ ����

FG`�� .�����

�6��'+:�,7 '3��+83#

�(*3 !F��/F

5�*�B�*5F*= �

E��'�1��Z���

!�!���,��!!��,��,�,�!!,�,�,���!��,,�!!,���!�,�,��!!�,!,�!���

�,!�����,!!�!,!��!��!���

5�*�B�*5F*= �

B��N8������,�!�,�!���,��,!�!�,�!�!�,!���!��!�!��!,�!,��!,����,���!�!!��

5�*�B�*5F*! �

E��'�1��Z���

!�!���,��!!��,��,�,�!!,�,�,���!��,,�!!,���!�,�,��!!��!��,�!�

!!��,!!�����������!�,,!�

5�*�B�*5F*! �

B��N8������,�!�,�!���,��,!��,!��!��,,���!,�!,!�������!�,�!���!�!,!�!!!�

�6/���2��(+2$+,���

#���� �$3 +3 '�,3�8(2:3�:3,3

�3 ��2 (2:3�#3G73, 3

�B�*5F(F)� .�����,N!=GGG

GGGLFRS�

�N5�B�J�

��:EO�F�

!�!,!,�,!!�,!����!,,,�

�B�*5F(J)� .�����,N!=GGG

GGGLFRK�

�N5�B�J�

��:EO�F� !��,�!!!,�,�!,,���,,,�

Page 79: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

RV��

�B�*5F(L)� .�����,N!=GGG

GGGLFRX�

�N5�B�J�

��:EO�F� !!!��!!,�!��,�,��!,�,�

�B�*5F(S)� .�����,N!=GGG

GGFGRXS�

�N5�B�J�

��:EO�F� �!��!���,,����,����,,�

�QFJ(F)� .�����,N!=GGG

GGLXRKX��=�FJ� �:EO�F� �!�!����,���!,,��!�,,�

�QFJ(J)� .�����,N!=GGG

GGLXRKV��=�FJ� �:EO�F� !!�,�!,�,������!�!!�,�

�B�*5F(K)� �����,N!=GGG

GFGPPVK�

�N5�B�J�

��:EO�F� �!������,,,�!��!!���,�

�B�*5F(X)� �����,N!=GGG

GFGPPVX�

�N5�B�J�

��:EO�F� !!,����,�,�,����,�!�,�

�B�*5F(R)� �����,N!=GGG

GFGPPVR�

�N5�B�J�

��:EO�F� !��!�!,,,�,�!,,���!,,�

�B�*5F(V)� �����,N!=GGG

GFGPPVV�

�N5�B�J�

��:EO�F� !!!,!�,,,�,!!,�!�,�,��

�B�*5F(P)� �����,N!=GGG

GFGPPVP�

�N5�B�J�

��:EO�F� ,!��,��!�,,!�!�!�!�,,�

�6-�'(#*+8#

�'(#*+8 �$3 +3# �3 ��2 ��72 3

FS*L*L�U*����� .����� �!�=�L�F� ����,����Z��������� �%�����5���� ��+�!�������

� �%N� .����� �!�=�L�F� ���� ���� .���"��� �� ��

�%NB*:�� � � � �������,�Y��$��,�1 ��������!� ������ ����

�N:*,E� � � ����>����,.����'���*!%'!������������

N.���FR�� � ��BD*J,�����E���������������� � ��1�=�� .�!��������

(�=!)��!.����5���+�=!��

�QFJ�� .����� �!�=�L�F� �� .���N����.�'�� � � +�%� �+�����

�QFJMJLF:� .����� �!�=�L�F� �� .���N����.�'�� � � +�%� �+�����

�QFL� .����� �!�=�L�F� �� .���N����.�'�� � � +�%� �+�����

�QFJ*���� ����� �!�=�L�F�����,�B������+�������� ��1�=�� .�!�������+�

��.������

�QFJMJJP:*���� ����� �!�=�L�F�����,�B������+�������� ��1�=�� .�!�������+�

��.������

� �*�QFJMJJP:� ����� �!�=�L�F� ����,�B������+�������� ��1�=�� .�!�������+�

Page 80: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

RP��

��.������

� �*

�QFJMJJP:BBB������ �!�=�L�F�

����,�B������+�������� ��1�=�� .�!�������+�

��.������

� �*

�QFJMJJP:�������� �!�=�L�F�

����,�B������+�������� ��1�=�� .�!�������+�

��.������

�QFJ�JJV�� ����� �!'%� �������%����+�!���1������'�� � � ��1�,�.����� ���

5�*�B�*5F� .����� �!�=�L�F������������Y��.���,.�%�������N����.�'�� � � +�

:��>������

5�*�B�*5F*= � .����� �!�=�L�F� ���� ������� ��1� .��� .����

5�*�B�*5F*! � .����� �!�=�L�F� ���� ������� ��1� .��� .����

5�*�B�*5F(�5*

�5)�.����� �!�=�L�F� ���� ������� ��1� .��� .����

B���*�B�*5F� .����� �!�8K������������Y��.���,.�%�������N����.�'�� � � +�

:��>������

B���*�B�*

5F!KLN�.����� �!�8K�

�����������Y��.���,.�%�������N����.�'�� � � +�

:��>������

B���*�B�*

5F%VVKWPKP��.����� �!�8K�

�����������Y��.���,.�%�������N����.�'�� � � +�

:��>������

B���*�B�*

5F%VVKWPKP��.����� �!�8K�

�����������Y��.���,.�%�������N����.�'�� � � +�

:��>������

5�*�B�*5F� .����� �!B�:� ���� ������� ��1� .��� .�����

8%8*�� � �������� �!�8� �������>����+�'���*!%'!������������

oNV�PF� � �������� �!�8� �������>����+�'���*!%'!������������

�����"�� � �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�QFJ*�.F� .����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�QFJ*�.J� .����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�B�*5F*�.F� .����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�B�*5F*�.J� .����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�B�*5F*�.L� .����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�B�*5F*�.S� .����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�B�*5F*�.K� ����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�B�*5F*�.X� ����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

Page 81: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VG��

�B�*5F*�.R� ����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�B�*5F*�.V� ����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�B�*5F*�.P� ����� �:EO�F� %�����(���� ��������������%����*�!�)��

�6!�2+*(2;(,�+)�8+3#

�,�+:3, �$3 +3# �7$$'+32 �39323, 3

KVE���������� ���

pKVE*Pq������ �"���� �"XJVS�

����FS*L*L�(E*FP)� ��""� � %�� ��!��$���� �.����� � ��*XJP�

������*��Y����� ����� ��+�,������ �o��:�"o�� o���+� XFGPLV�

T*�� ���� ����� ��+�,������ �o��:�"o�� o���+� KF*PGGFPJF�

�������*F� ����� b �� GL*XGGG�

������J� ����� %����*�����.� �SGSP�

�QFJ ��""� � �"���� �"LKGFX

�QFJ�(%*JG) ��""� � %�� ��!��$���� �.����� � ��*SGP�

�QFL�(%*JG) ��""� � %�� ��!��$���� �.����� � ��*SFG�

�B�*5F�p�SWRq� ����� �"���� �"PGRVL�

�B�*5F�(KK�X)� ��""� � !���%����������,�.����� r� SGRX�

���� ��""� � �����%"�� �7�����+�(''�*!%'!)� �

5��.��.��11��� � �� � N��.� FFVXRSJLGGF�

5������������6��� � ����� %����*�����.� �JGPK�

:1��(i*JG)� ��� � %�� ��!��$���� �.����� � ��*SPXVS�

����������''� ����� !������N����.������ �� ��%*FFGN�

� �������S�X� ����� ��������� GK*RJS�

=*��.���� ����� ��+�,������ �o��:�"o�� o���+� KF*PGGFPSL�

����� ����(B*FR)� ��� � %�� ��!��$���� �.����� � ��*JVFSJ�

��3�������r�SVV� � '��� ����� �FJLRP�

Page 82: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VF��

�.���������

��3�������r�KKK�

�.��������� '��� ����� �LSGKK�

N�"F� ����� �����������!����'�� � � +�������� �

N�"FF� ����� ��+�,������ �o��:�"o�� o���+� XFGXKX�

Q* �"�����(��F�)� ����� %����*�����.� ,PGJX�

T* �"������ ��""� � %����*�����.� ,JJGG�

�64�3 �,8(2;(,�+)�8+3#

�(*3 �7$$'+32 �+'7�+�,

��3��������SVV����6��� ���Y ��� �*�����'��� '��� ���� F�FGGG�

��3��������SVV����6��� ���Y ��� �*��""� �'�� '��� ���� F�FGGG�

��3��������KKK����6��� ���� ��� �*�����'�� '��� ���� F�FGGG�

��3��������KKK����6��� ���� ��� �*��""� �'��� '��� ����� F�FGGG�

��3��������KXV����6��� ���Y ��� �*��� �'��� '��� ���� F�FGGG�

��3��������XSR����6��� ���� ��� �*��""� �'��� '��� ����� F�FGGG�

'N� �XVG���� ��� �*��""� �'��� :'*!ON� F�JGGGG�

'N� �VGG���� ��� �*��""� �'��� :'*!ON� F�JGGGG�

'N� �VGG���� ��� �*�����'��� :'*!ON� F�JGGGG�

�6C 3'''+,3#

3'''+,3 �2+:+, �2�*

!O%*R� �1�������������Y �Y�� � �,!!�

5BE*JPL�

5������"� �����Y�� ������� �"� �

3�������� .�B�� ��������8�����(B�8)�

B�=�*F����1�����!�8WB�=��

'��� �����

5BE*JPL,�5������"� �����Y�� ��������� �������

�������%8*SG��������=����������,!!�

Page 83: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VJ��

�6�3���8#

�6����*(,+$7'(�+�,#

�6�6� �*$3�3,� 3''#$23$(2(�+�,

� ���� .� �������� ��� ��� ������� .� �11�� � �=�� ���� ��� �� Z��

�����1����� .������ � ����� �� ������5KQ�����5FG�� ����1����" �.� ��.��Y�

����� ������ ���+����� ��� ��

�� �������!����������������������� ���

� ,��������.� ��.��Y����� � ����� ������(�5KQ�� ����)+��������� �1����

��:�*�������� �Z���������� ����JKG�����1�%O�����Z�������"� �� �LR�l!�Z� .�

����������.�Y������ ������.����O�XGG�" Z��G�S*G�X���1 ���������� .���� ����

������1���K*FG����� �� ��� ��� .����Z .+�"�� ����Z����� �� �SGGG�����1���

FG����� ��� �S�l!����� �Z�������������FGG�����1���*����KG����!�!�J����

� ��� ��� ��� 1��� FG� ���� ��� ��� ���� Z�� ������ " � �� ��1��� ���� ���

����������FX�����1���*����KG����!�!�J*FK`��� ��������� ����������� �Z� .���

��*�.������� � ��������Z�������� ����JGG�s������ ���� �*VG�l!��

*����������������������������� ���

� ,���������� ������ � � ����� (�5FG��� ����)+� ��� ����� �Z������Y�

1������:�*�������� ����������� � ��KG�����1�%O�+�����"� �������. �� �LR�l!�

5:��5������� .������������� �������.�����

�����������������,!!�

��!E� ����*���" �������Y�� � �,!!�

�B��� ������"� �����1�"��"��� � b��$���+����

�B���QFJWFL(*W*)� ������"� �����1�"��"��� �EO�1����QFJWFL� O11������+�%��

='5L,L� ������"� �����1�"��"��� � �,!!�

,NBD*J,�

(�QFJMJLF:)�

5BE*JPL��

5BE*JPL������Z� .������"��3���������1�

�QFJMJLF:�

O" ������� .�

��"��� �� ��

Page 84: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VL��

Z.����.�Y����� �JKG������=3 �� �G�K����Z��� �Y������� ��KGG�����1�%O��

��� ����"� � � � LR� l!� Z.��� �.�Y���� �� ��� ��� O�KKG� �1� �����3��� � � G�V� Z���

���.��,.������Z��Y� �������1���FK����� ������� ��1���1���FG����� ��

� � KGGG� ����� � S� l!��,.���� �Z���Z��.� .�� ����Z� .�KGG���� �1� ��*����

FG`��� �������1 �� .���� ��� ��1��� ����� �S�l!+������Z������������G�K����

�1�FG`��� ��������LG�s�������� ��Z��Y� �� �*VG�l!��� �������

�6�6��( �32+('�2(,#9�2*(�+�,

�� �������!�

� ���� .� � �.��Y+� J� s�� �1� ����������=��Z��� �� �� �� FGG� s�� �1� ���� � �

�5KQ�������������"� �������1���JG����� ���=3 +� .���3 ���Z���������� ��

��Z� ��"� .�� �SJ�l!�1���PG����������"��Y�������1���J����� �+� ��Z.��.�F�����1�

LR� l!� Z���� :�� (Z� .� ��� �� �"�� ��� �)� Z��� �� ��� ����"� � 1��� LG�

���� ��� �LR�l!���"�� �JGG�s���1� .����� ������� ���Z�������������*Z����

:����� ��Z� .� .���������� ��� �"�� ���������Z��������. �� �LR�l!��=3 �� +�

��������Z�����Y������������:�������1���������. ���� ���� �LR�l!��

������������� ���

� ,.�"�� ���� ����1���� ����Z�����1���� ����"� ���+� 1���FG����� �����

��+�F�s���1��=��Z� .�LG�s���1��5FG���� ������ � �������,.�+�"�� ����Z��

����1��� �� �� ������ ���� ��� �� ��� �� ������ � ������ .� �B=B�

��:%BN�''�1�������N��� �JGG�O.��+�JK�������J�K�8�������Z������ ������ ���+�

KGG�s���1�:�������Z�������� .�"�� ������3�Z�������"� �� �LR�l!�1���LG�

���� ��Z.����.�Y����� �JKG����������� .� �"�� ������3+�FGG�s��Z������ ����

.�:����� ����� ������� .���������� ��� �"�� ����������"� �������. �� �LR�

l!�� !������� 1���� ������. � ��� ���� Z�� ���Y� .� 1����Z���� � � 1��� �������

������ �����

�6�6/���3<�2( �+�,92�*)( �32+(' 3''#

� ,�� ����1 � ��������� �=�� 1���� "�� ���� ��� ���� ����� ��� ��3�*���� Y� ��

Z�� ���� %����*����� ����1��� ���� �1� ������� �=�� Z��� ������ �� � Z� .� .�

Page 85: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VS��

��������� �=�� ����1��� ���� % � �� ��� ����� (���� ��)+� 1����Z����

����1�� ���-����� ������ :���*���������1��� �����1���������=��Z�����1����

��������3�*����Y� ��(M'��B=)+���������� �� .�����1�� ���^����� ��� �������� .�

��� ���������"������ .���Y������ ����� .���,.�����1���=��Z����� ����,B�

"�11�� ���Z� ��� ,.� ����� �� ���� �1��=�� �������Z���������Z� .� .�=�*

FGGG�=���������� ���.� �� �������1 Z���(=��������,�.�������)��

�6�6-���(:(2�#3:3'3'3 �2�$��23#+#

� ,.� ���� ���+� ��$� �� �1��� ���� ��� ����� ���� �1� �=�� �������� ���

1����� ��Z����1����" ������������� ���.�������� Z��G�V`����F`�

(ZW�)� �1� �� ���.������ ���� ������� ('��� ����)� ��� %i�Nr� %�1� (F�FGGGG)�

�=������ ����('��� ����)�Z�������,�B�"�11�����.� ���� .������Z���

�� ������ ����=���������Z�� ���� �� �� .�Z���� ����=���������"�11�����

���� �����*����1� K�s�� �1� J*:����=�� ���� (���:�"�)���=��Z��� �������$�������

�������������� � ��(% ���)��,���������$���� ���� � .�"����1����������+�

.�%�1�'�����J�G�����:��. �,������������ ���('��� ����)�Z���� ���$��

�6�6!���$72+9+ (�+�,92�*(:(2�#3:3'#

� �!N������ �������� ��=��1����� ��Z��3����1���������������

��������� �����������"�������=��Z���3 ��� �� ���$���� .���D[��!N��=��

��� ��� ���� ����1��� ���� Y� � (�B� 5�� .���)� 1����Z���� ����1�� ���-��

��� ��� ������

�6�64��';*32(#3 �(+,23( �+�,=� �>

�� ������� .�"��*����������������+�����1����������������� �� � �� .�

1���Y���� ������� �1� .� ��� � �=�� Z�� ������ ,.� ������� ��� ���� ���

�� ���� �� ��� ���� ��������� ������� �� �+� 1����� � ���� ��"���� � ���������

,.��.�����r�5��.*���� ��=����� �����(=Z�B�����������"�)�Z������ ��

�����1 � .��=����,.��!N���� ������3 ���Z���������" ������KG�����1��=��

���� � ���F3�!N�"�11�� (�.�����r�5��"�11�)+� FG����=,��� (% �� ���)+� J�K�

Page 86: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VK��

s���1���.����������F����1��.�����r���� �����(�����"�)������ �����������*

M�Z� ����� ��KG�s��� ,.� ��� ����Z��� �������� � ��� .�,.�����! �����>�����

1�������*N��Z� .� .����� ���������"����,�"���F��,.��!N�1����� ��Z��

�������F`����������� ���.�Y������ ��=�������1��� ������

()'3�����!N����� ������

�6�6C��� '�,+,:

� ��11�� � �������� Z�� ���� � ������ .��� � � �� ���� .� � .� �����

� �� � � ��� Z��� .� �������� �1� 1����� �� �" ���� " � .� ��� ����� �.����

��� ���� (�!N)� Z� .� .� ���� � �� ��� ���� �$ ���� '�� .� �� ������ �� ����

.�� ����� ��� ��1����� .���������� ���$� ��� .���� � +����� � ����������������

�" ����1����� .������ �� ���

*��"#�� ���� �������$%�������������� ���

� ,.� ����1�� �!N� ����� �� ��� �������� ��� ������� �� �=�� �� "� �����

(���� � ��� �� ��)� Z�� ��� � Z� .� .� ��������� � �� ��� ���� ����������

(�����"�)��'����KG�s��1�������������� ���+������3��� � �F�s���1���������=�����

.�Z.����!N��=�������� ����Z������ �Z� .�J����1� .��� ��� �����$ �����

.�������������"�11���������1��� .��������0���� ������1���J�.������ �

LR� l!�� %��� �� ��� ���� �$ ��� .��� �����.� ��Z�� �� ��� �Z.�� ��� ���� .�

�*���� �1� ������ �=�� (��� ���� ���� .� �!N� ����� �)� ��� .�1��� Z��

��� � 1��� FX� .����� � � LR� l!�� ,.� ��� � ����� �+� ���� � ��� �� ��+� Z��

��3$ 3*$32(�723 +*3 �**3,�#

5� �� �� � PV��l!� LG��� �

��� ��� ���� PV�l!� FG��� �

��������� SG*XK�l!� LG�����11�� ���������� ���� ����

Z��������������� .��������

B����� ���� RJ�l!� LG���,������������1����� ��=��(F�

Y"W���)�

! ���� � � % ���J+�L����S�Z����� �LG� ����

����������� ���� RJ�l!� FG����� �

Page 87: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VX��

����� �" ������������� ���.�������������1�������������������1��� ����

E� �1�����B�5�� .�����

������ �� ���� ���� ��� �1� � �� ��������� +� �.���.�� �� ���� �1� F� s�� �1�

������$� �=�� �� ��� Z��� ��1���� Z� .� .� �� ���� �1� F� �� �1� ��Y�����

�.���.� ���(�.�����1����N��.)����JG�m���1�F3��.���.�� �� ����"�11��� �LR�l!�

1���LG����� ���,.��.���.� ���Z������� ��� �� �XK�l!�������LG����� ���,.�

����� �+� ���� � ��� �� ��+� Z�� ����� � " � ������� ��� �� ���.������ ���

����1�� Z� .� .� ��D[� �!N� �=�� ��� ��� ���� ����1��� ���� Y� � (�B� 5�� .���)�

"1������� �����

�& ��� ���

� :��� ���� �1� �� ��� ��� ���� � Z��� ��1���� ������ ,S� �=�� ������ (=Z�

B�����������"�)��,.����� ������� ����Z���� �� ��� ���� .��������� ���" Z��

'��� � (')� ���8� ��� (8)�� �"8� 3� '� (��W��)� t� �"'� 3� 8� (��W��)�� ,.� ��� ����Z���

���Z� .�KG�����1��� ������JG�s�� 1����������+������F����1�,S��=�����������

����"� ����������. �� �FX�l!���� .� .����� ����������Z�������� ���+� .���������

Z�� ����1���� " � �� ������ ���� ��� ��� � ��� ����� ��� ��Z� .� .� ������

�� �"�� ������ ���+�Z.��.�Z������"� �� �LR�l!�������. ��,.��3 �� �������

��������Z�����Y�1�������*�����,���.�Y�Z.��.���������� ���� .�����

���� +� ��.� �=�� (L*K� s�)� Z��� ��� � 1��� J� .����� � � LR� l!� Z� .� .� ����� �

�� ��� ���� �$ ��� (������ � .� ���� ���� ��� 1��� .� �������)� ��� ���� ���

������� ���� ,.� �������� ��� ������� .� ���. � ���� �� Z�� .�� ������ ��

���1 � .� � . ���� ���� .�3�� �1����� ���

���"#�'���� ���

� ���� .� �������� ����� ��� .��� Z��Y� Z�� �� � 1��� ��������� ��� .�

%�������� !������� � %����� �1� !N��� (!� �� � N������4� ������������ *�

���� ���+���������)�� ,.�Y� � � ���$�Z������� � �F�F� ��� .� %������LRLG�

�=������ $��1�������������� � ����

Page 88: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VR��

�6� 3'' 7'�723

�6�6��(+,�(+,+,:(,8#7) 7'�72+,:��3 3''#

� !������ � ��� ���� ����� (����1�� �"��)� Z�� ���Z�� ��� ��B��

(���"���-�����1��B���-������)�('��� ����)�������� �Z� .�FG`�.� �

���� ��� � 1 ��� "����� ����� (��%+� '��� ����)+� J����:*��� ����� ('��� ����)�

���FGG������������W% �� �� ����(:��$�)�����������Z���������� ��������������

1��Z���"�� �(B%!O�:�"��� ��)�������Z�������.����1��� ����.���1�K`�!OJ�

�������� �LR�l!�(!���%��� �1���%������!%%*�!�)��'������ ����"��� ������ .�����+�

� �VG*PG`����1����������Z������+�Z��.����1��� �Z� .���*Z������%����

����"� ����Z� .� F���� �1� ,� ����WB�,�� ('��� ����)� � � LR� l!� �� ��� ����� ��.�

(�����3��� � �F*J����� �)���1 �Z���+������Z��������� ���1��.�������

,.���������� ���������1������Z�����1���+������� ���������" Z��F�FG����

F�JG���������� .�������

'�� .������1�,NBD*J,(�QFJMJLF:)�JPL������R�K�s�W����1�"��� ���������KG�

s�W����1� $����� �.����"� ������� � �� .����� 1��� ��"��� ������ .� ����+�

��� .� ���� ���� �1� ��� ��� 3�������� Z��� ��.��� Z� .� G�RK� s�W��� �1�

��� �����1���S�.�������

�6�6����2(:3(,89233D+,:1��(5+,: 3''#

� !����Z��Y� ���������� .��� Z����� .�������� �������1 �� .� ����Z�

"� �.��1� 1��$�������Z��� .�Z��!���� 1������ ���1��� �FG� �����.�Z�� ����� �

��� ������� ��� F�K� ��� �1� ����� � ��B�� ��� Y� � ��� ���� O�� ������ �1�

��"�� ����� �� � 1�$���������(JG`���%O+�KG`���%����LG`������ �

��B�)�Z��������*" *���� �� .������������������F�����1���������������

Z��� ����1��� ���� �� �* �"� (=���)��!����Z�� 1��� � � ��� ������ �����������*

1����1�$������� ������ �*VG�l!�1���F*J�� �� �������� .���� ����������� �"�������������

*F� l!W���� � �������� �� � ������ 1��� ������1��� ���� �� ������� ���� ���

����� ��,.�+������Z�� ����1��� ��������=J� ��Y�1�������� ���� ������

Page 89: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VV��

!����Z������Y� � .�Z������LR�l!�Z� ��"� .+���� �Z� .�P�����1���*Z����

���Z .������ ��� �� ��1��� � � FJGG� ���� 1��� K����� ��� ,.� ���� ��� �Z���

����������1��.������������ ��������.��

�6�6/2(,#+3,��2(,#93 �+�,#

*�()�������*���+�����������+�� ���

� ,������ � ����1� �����Z����1�������XG*RG`����1��� ������� ���

" ����������B=Br�X�(N��.)�����B,��B!,B=Br�����(���� 3)���������� �� .�

����1�� ���^�� ��� ��� ����� (�� ,�"�� �J)�� B3�������� �1� .� ��� ���� Z���

����� �1���JS�.�����(������1������1������� ����)��

()'3����,����1� ��������� ���������� ����� ���$�1��� .���Z��Y��

� �7�3,3 �3�(93 �3,3

!�� ������ �

��� ��(��)�

JJ�

(�FJ*Z������ )��XG�

JJ�

(�FJ*Z������ )��XG�

�=��(s�)�� �F� S� G�V� S�

,����1� �������� �

(s�)�L� FJ� J� FJ�

���� �����������1�

�=��������� �(s�)�KG� FPK� KG� LGG�

,� ���������(��)� F�GK� K�J� F�F� K�X�

*���� �����������������+�� ���

� !����Z����� � �����FG������.���� .��3 �� ������Z�� ����1� ��

���� +� FG� s�� �1� .� ������������ �=�� Z��� ��� � �� �� F�K� ��� �"� ���

����������LRK�s���1�� ���������*M�5JO��,.��FJK�s���1�F���!�!�J�Z�����3�

���Z� .���� 3����KGG�s���1�5�%�J3�Z��������*" *������ �� .���3 ��� ��

�" ������������ � �Z� .���������� �������1 ��LG����� �� .����������.���.� *

�=������������Z����� �� .��������

Page 90: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

VP��

�6�6-��()'3�,� �8�5, 3'''+,3#

� � ���$�����'%%'O=� �.N=�� .����� � � �� (%����*�����.)+� 1��� �B�*5F� ���

�QFJ+� ��� �'%%'O=� �.N=�� ����� � � �� (%����*�����.)� 1��� �B�*5F+� �.�� �

.������*�� �1�����N=���(�.N=�)� ��� ������� � .��������������1� .�.�����

��� ������ ���� Z�� ��� 1��� � �"�� Y���Y�Z�� �1� �������� ��� ����

3�������� ��� �11�� � ���� ������ ,.� ���������� ��� 1��� ��� ���� �.N=�� Z��

�" ����1����%������ �G�GK�m��������,.� ��� �������� � �1�����.���� ���

������ .��� �������� �����

*&��� � ������� ��������� ���

� J�K3FGX�5BE*JPL,����Y�����������Z���������FG������� ����.�1���

��.� �� ������� ������ 1��� .� �11�� � �N=�� ������� ��� ��� �� � �� ���

(��� ���)� .� � � "1��� ����1� ����� !�* ����1� ���+� �1� �:EO�F� �� ���+�

��� ������� .� �.N=���Z� .��!�8oNV�PF+�Z.��.�3������5'8����� ������+� ���

�8%8�� (������ � 1��� ������ ��� ��� ���� 1���� ���)� � � ������ ���� S�L�F+�

���� ��� +�Z��� ��� � ���$���� ���������.���.� �������Z��� ����� � �� �

JS� .����� 1��� J� � �� ��� 1�� �� .����.� G�SK� m�� �!B� 1�� �� (��������)�� 8�����

��� �����Z��� ���� �hVG�l!��

�, ����������� ���

� ,�� ��1� � ����" � ��������� ���+�K3FGS� �����Z�� �� �����X*Z������ ���

�1 ��JS�.����+�F�����1� .������*��� ���������� �� �Z����������� ��Z��

�� ��1��� � � FJGG3�� 1��� J� .����� � � ����� ���� ���� ,.� � � �1 �+� ��1� �

����� Z�� ��� � ����� L� s�W��� �1� ����� ���� (%����� �����.)� 1��� 5:�� ���

='5L,L���������F�K�s�W����1������ ����1����B�����5BE*JPL������ �� .�1��.�

������ B11���� � ��� ���� ������� �Y�� �"�� � L*X� � ��� ������ �� ��� ����

������+���������� ������ ��������� �� ����Z���������" � �� � ����������

��� .��11�� ����� ������,��Y�� .���� ������������� .�� �"��Y���Y�Z��

�������+������ ����(Fs�Ws�)�Z������ ������� ��� �� .������,.�11����� �

�1��.N=��Y���Y�����Z��Z������1����" �%�%*���B����Z� ���"�� ����� �����1�

��� ���3 ��� ��Z� .� .����� ��� �"�����

Page 91: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PG��

�6�6!�,87 +)'3$2��3+,3<$23##+�,7#+,:���<H�;#�3*

� ,.� ,*NB3[� % � �� ��� �� ��� ����*����� � ���������� 3��������

� � �� .� � ���� ����� �� � ��� �� 1���� .���� �� � ,�FG*���� ��� �����

(, )����� ��������������� +��QFJMJLF:�Z���������� �� .��!�=�S*,O��������

('��� ����)����5BE*JPL������Z�� ����1� ����������������.���.� �� .��

Z� .� ���=�S*,O*�QFJMJLF:� ��� �!=��X*,N� ('��� ����)� ��� �� F�X� ������ �����

�1 �� ����1� ���������Z�� �� �Z� .�R�K�s�W����1�"��� ���������KG�s�W����1�

$����� �� ��� � ����1� � ������ '�� ���� �� ������QFJMJLF:�3�������+� �����

Z�� �� �Z� .�G�RKs�W����1� ��� �����1���S�.�������

�6�64 3''�23(�*3,�#

� !��� ����� Z�� �� � Z� .� �11�� � ����� ������ .� ����� � ���

������(������1������1�������� ����)��

()'3�/��!��� �� �� ���

�27: �, 3,�2(�+�, +*3 �##(;

, ��� ����� G�K�s�W��� S�.�� �LR�l!�'����"��3���������1��QFJ����,NBD*

J,�(�QFJ)�5BE*JPL������

��1������ K�s�W��� LG������ �LR�l!� ������������"� �

=����$���FG�s�W���

LG����������+�

LG������ �LR�l!������ �"������ ���$� ����

JGG���W��� FX�.�� �LR�l!� !���� ��.����$� ����

�6�6C 3''#;, �2�,+D(�+�,

� �� ��.������� ��� ���� Z�� ������� � Z� .� JGG� ��W��� �����$���

(=��)�(%����������.)���� � ��������Z��Z��.���3� ����Z� .���%���������Z��

����Z� �� �������� .����.��� ����W� �Y������ 1��� Z�� .������ ,.�+� �����Z��

1�3�����������1���������� ���������

Page 92: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PF��

�6�6E�23$(2(�+�,�9 3''';#(�3#

� ,�� ������ �������� � �� �� �����Z��Z��.� Z���Z� .� ���� ��%� "1���

. �Z��� �����������JGG*RGG�m���1���*����� ����"�11��(�11�� �� ����"�11���

Z������N'��+��������: ������11�+�N.���FR��� ����"�11������,��"�11�)��,.�

�����Z�� .��.���� �Z� .� .�.����1������������� ����1��� �����������

F�K���� �"���,.�� ����Z�������Z� �������1���LG����� ��������� � ����Z.��

� � S� l!� "1��� �� ��1��� ���� � � FLGGG� ���� 1��� FK����� �� � � S� l!�� ,.� �����

� �� ��Z�� ����1��� �� 1��.� ������� F�K���� �"� ���Z�� �� � 1��� .�

���� ����� ���� �*VG�l!��

�6�6%�3�32*+,(�+�,�9$2��3+, �, 3,�2(�+�,

� ,.� ��� ��� ����� �� ���� ��� �������� � �� �� Z��� ����� ������ .�

���N����� ������� �(���N�)��� Z��J*S�s���1���������� �� ��Z����3�Z� .�

RPV*RPX� s�� �1� 5JO� ��� JGG� s�� �1� ���1��� ���� �� �"���"���� � � KPK� ���Z���

������ ��� ��� ���.� �� ��� ��� ��� ����� �� ���� Z��� ����� Z� .�

���� � �� .��"���"�����1�Y��Z������� �� ������1��%����� ����

�6/�2��3+,�'3 �2�$��23#+#

�6/6����������'3 �2�$��23#+#

� ,�� ����� � ��� ���+� ��� ��� ����*%�%� ��� �� ���.������ Z��� ���

1����Z���� .�� .������"�" �:������(FPRG)��'�� .���Z��Y�Z�.���� ���$�

����*��� ���, ���!���% � ��(���*N�)�1����� ���.������Z� .���� ��� �����

����� ���������� �����(%�%*���B)������ .��+�F�K���� .��Y��������Z� .�FG*FJ`�

�1���� �����1��� .�����������������Z� .�K`��1���� �����1��� .�� ��Y�������

Z������,.��������Z�������������K3%�%� �������"�11�����.� ����

1���K������ �PK� l!� ���� �����$� .���� �����B�� ���.������Z�������� � �����

���� ��� ���FD�%�%*���B���������"�11��� �FGG*FFK�8� 1��������3��� � �F*J�

.����� �� ��� .� ������� ���.� .� ���� ����� ���+� �������$� " � .�

Page 93: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PJ��

���N���[� ��� ���� ��� ��� ���� (���� ��)�� ,.� ���� Z�� .��

�� �� ����1���������� $�" �Z� ���"�� ���

�6/6��3#�32,)'��

� ��� ����Z�� ����1���1���� .���� �������� ����'���"����*�:��8���

��"����� (��������)� " � �� ��"�� ���� � ���$���� ����� ,����*��� � � � ��

(���N�)��,.� ����1����Z������ ���FD�,����1��"�11�+�� ������ ���� ���

Z� .����� �� ���� ���(XG�8)�1���FVG����� ����

�6/6/�**7,�83�3 �+�,

� ,.���1���� � ���������� .���Z��Y�.��� .����� ��� .� �.�����Z���

������ ������ ����� .� � .� �.������������ � .�� ��� �� � �11��� ,.�

O �� ������� ����������Z� .� Z����1�����.������1������ �1���������

� ���� ��� ��"������ ��� ��� � ���� Z��� ��1���� " � .� ���� ����

����"� ���� �1� .���"����Z� .� �� ����1��� ������ � �� �"� � ��� �� ��"���� �

������ ��� �"� ����6��� � ��'N� �(XVG����VGG�!\)������ +� .���"�����

Z�� "���Y� 1��� F� .���� Z� .� ,�%*,Z�� ������� � Z� .� L`� �%�� � � �����

���� ��� ����� ���Y������� 1�����=3 +� .���"����Z���Z��.� .�� ����

Z� .�,�%*,Z����� ����"� �Z� .� .������� ��� �"� �������. �� �S�l!��,.�

������ � ��� ������ � �� �"����Z�� ��� � ��� ,�%*,Z��Z� .� G�FK`� �%���

�1 �Z���+� .� ��"���� Z��� Z��.� .�� ���� Z� .� ,�%*,Z�� 1��� FG�

���� ����� ����"� �Z� .������� ��� �"� � 1���F�.����� � ����� ���� ���

(���� ������1����� �"� ���� ���)���1 �� .��1�����Z��.��Z� .���%�����"����

�1� ,Z�+� .���"����Z��� ���� $� � ���$���� .� O �� � % � �� ������ �

1����:'*!ON�� '1� .�"�� �Z������� $�1����� ��������� ���+� .���"����Z���

� ����� ������ N� ���\� ��� ��� � % �������� ��11�� (,.���� %��� �1��)� 1��� FK�

���� ��� �LR�l!���������Y������� 1�����,.�"�� �Z���Z��.�L� �������,�%*,Z��

"1��� "���Y���� ������ ��� �������� Z� .� �� �"� � ����"� ���� ��� �������� �

����� ��,.����� �1��� �����1� .�"����Z������Z� .�O �� ��L�G���1 Z����

Page 94: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PL��

�6-�**7,�$23 +$+�(�+�,=��>

'�� .���Z��Y� Z�� ����1������������� � �����('�)�.���"������

�6-6� '(##+ ��

� !����Z��� ��1���LG����� �����N'���� ����"�11���������������'�+�����1���

�� �"����Z������"� �Z� .�Z.�������� �� ��1���S�.��������������. �� �S�l!�

������� � ����Z.���'������������� �����%�.�����S���� ����Z�(�B�5�� .���[)�

Z���"���Y�Z� .�FGG�s���1�'���1���%��(FG���W��)��,.�+���� �����Z���Z��.�

.�� �������N'��+��� ������� �� ��������"� �1���F�K�.�� �S�l!��,.�"���

Z�� .��Z��.�1���� �������N'���������� $�" �������"�� �����

�6-6���(,�+���(:(2�#3)3(8#

� ������ �*5�������������� � ���+������Z��� ��1���LG��������N'���� ����

"�11��Z� .����Z� .�� ����S*�(K����=�!�+�L������!�L)������ +� .�� �� ��Z����*

�����Z� .�FG�s���1���� ������������"� �1���F�.����� �S�l!�������� � ����Z.���

,.�"���Z�����������JK�s���1�������������� �*5���������"���(%�����

�����.)�Z�� ����"� �Z� .� .� � �� � 1��� S� .���� � � S� l!� ��� �� �� � ����Z.���

,.�+� .�"���Z��Z��.�1��� �������N'���Z� .����Z� .�� ����S*�������� $�

" �������"�� �����

�6!6�,(';#+#�9( �+B(�38���#+, 3''';#(�3#

� ,.���� � .����%* ����1����(�%,)hN.���FR������*�Z������ �Z������

�� � � �� ��� ��B��� ��� ���� � �� �� (����#�*�� ��������+� JGGX)��,.����� �� ��1�

N.�������� �"�������� ����� .�1���.���.��.��11��� �1����B����

�6!6��<$23##+�,(,8$72+9+ (�+�,�9���������C�

� �:JF����� � ������Z�� ����1����Z� .� .���BD*S,*�%,*N.���FR��

�������" �.� ��.��Y������� ����:�*�������� ����� �������������������=3 �� �

Page 95: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PS��

�������� �Z������Y�1���� .�:�*�������� +������FGG����������. ���� ��� ���

:�*����������� Z��� ��� Z.��� �.�Y���� � � LR� l!� � � �"�� � JLG� ����� ,.�� .�

������. � ��� ���Z��� ��� � F�FG� ��� :�*����������� ��� ����"� � � � LR� l!�Z� .�

�.�Y���� 1��� LG� ���� ��� ��� ���� Z�� ����� �� ������ N.��� ��� ��� " �

�� �����1�'�,��(1���������� �� �����1�FGG�s�)�Z.����.�Y����������. �� ������

���� ����,.�"�� ����Z������� �" ��� ��1��� ����� �SGGG�u��+�FK����� ��

� � S� l!� ��� ������� ��� �� � ��� �1� FG���� ���� N.���FR�� � ���� "�11��� ���� .�

����1��� ����� ���Z���������� �� �S�l!��,.�� .�"�� ����Z�������� �������

1���X*V� ���+�FK���������.� ������ .�� �� ��Z�������1��" ��� ��1��� ����

� �JGGGG�u��+�FK����� ��� �S� l!��,.�� .� ������ �� �Z����3�Z� .�FKG�s��

��� � .���� %�.����� S�� "��� (�B� 5�� .���[)+� ��� ����"� � � � S� l!� 1��� F�

.����Z� .���� ��������� � �����=3 +�"���Z��Z��.� Z�� ����Z� .�FG�����1�

N.���FR��� ����"�11����� Z������ ����Z� .�FG�����1�5�%�������� �Z� .�

K������!�J����F�����,,������Z������������JWL�5�%+�K������!�J+�F�

����,,+����FWL��� ����+������� ����� ���� �*VG�l!���

�6!6��7''�8�5,�9( �+B3���#

� !����Z���� ����XG���� �� .�� �"1��� ����1� ����Z� .���������

������� 1���5�*�B�*5F�����QFJ���� �����,Z� *1����.������1 �� ����1� ����

�����Z������������1������ .��JS�.�������!����Z��Z��.� Z���Z� .���*

����5�%� ��� .���� � ��� JKG� s�� �1� ��*���� N.���FR�� � ���� "�11�� ������ �� ����

�������� : �� �� Z�� �� ��1��� � � FXGGG3� �� 1��� F� ���� � � � S� l!� ��� .�

������ �� �Z��� ����1��� ����1��.�F�K���� �"��,.���� �������� �� ����1����

� ��� ���� � �� � 1��� ����Z��������� ������ .� ���N�� ��� ��� ���� +� ��� .�

��������� ��1���� ���Z�����������.����� �����: �� ��Z����*�����" �

�� � ���� � � Z� .� KG� s�� �1� �%,� "���� �� ��� � .���� %�.����� (F���W��)� 1��� FG�

���� ��� �S�l!���%,�"���Z��������Z������ �� ��Z�� ����1��� �����Z�

�"�� ��� ������ � �1� JK� s�� 1���� ��.� ������Z��� ���� ��� %�%� "�11�� 1��� 1�� .��

���� �����,.��%,*N.���FR��"���(FG�s�)�Z���� ����.�� �� +��� � �1���

SK*XG����� ��� � �S� l!+����Z��.� .�� ����Z� .��%,N.���FR�� � ����"�11���

��� ��� �����3��Z���������" � ����� K�s�� �1� KD� %�%*���B� ������"�11��

���Z��������" �Z� ���"�� ����� �����

Page 96: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PK��

�64�����7 +932(#3(##(;#

� ,.�"� *�.���� ��$�11� ����1��� ��� �N.������ .�N.��Y����+�NO!E+�

Z.��.� ��� ����� �� ��� ��� ���$� ���� ��� ���� �� ����� ������� 1�� ��� (%N�)�

�� ��� ����� ���� .� ����� ������� 1�� ��� (%N�)� �� ��� ���� ���� � .� ���� ��

�������� 1��1� � ����1���� %���� N������ B��� � (�%NB�:)� ��� .� N������

����1����,. �����E����� (�N:*,E)�Z������,.��%NB�:� ����1�������� ��

������� ����� 1��� .� 1��1� � ����1���� ���� ���� �Z�� ���� �1� �� �� �� �

��������������� �(%NB)�Z.��.���� �����%N��"�������� ��"� ������� �� .�

���� � �����3� 1�� ��� "������ �� �� ,.� �N:*,E� ������� ����� N������

����1���� ���� ���� �Z�� ���� �1� �� . ����� Y����� ����� ��� ,.��+� ��*

����1� �����1��%NB�:�����N:*,E�����Z� .������ �����1�N������ ����1�������

1��1� � ����1���� .� � ���� "� ������ " � ��� �� .� ����*����1���r� ���� ��

���� �� � ��(������)��5BE*JPL������Z����� ������ ��1�gJKG�GGG������

���X*Z������ ���������Z� �����Z�1���JS�.������!����Z����* ����1� �Z� .�

G�F�m���1� %NB�:� ����1���� ���� ��������+� G�GF�m���1� �N:*,E�������+� ����� .�

����� � ��=���� ,� ��� ����� �� �1� ����1� � �=�� Z�� Y� � ���� �� � ������

Z���� " � ������� ���� .� �� � �� ��� �=��� ,.� ����� Z�� ��� ��� ��� .�

�������1�FG`���%�1���X�.�������� .�������� ����1���JS�.������!����Z��

Z��.�Z� .���%����� �����JGG�s���1�FD��������: ������11��(������)�1���JG�

���� ������� � ����� �S�l!��: �� ��Z�������1��" ��� ��1��� ����� �FLGGG�����

1���FK����� ������������1�JG�s���1�����3 ��� ��Z����3�Z� .�JK�s���1�:�N�''�

��� ���� � " � ������� � � 1��� 1��1� � ����1���� �� ��� � ��� �3 +� JK� s�� �1�

% ��v���� ���� �Z��� �� ��� 1��1� � N������ �� ��� �Z��� ������ ���1� �

����1���� �� ��� �������� ��Z�� �������$� 1��� .� ������������N������

����1������������������ ��Z����1������������,�*JGWJG� ������� ��

(%������r)��

�6C�'7�23# 3, 3+**7,� ;�� �3*+#�2;

� !����Z����� ���� .� ����1�������������(,.����%��� �1��)��1�FV����

��� �������Z� .��1�G�FX������� �������FJ*Z������� ���!����Z��Z��.�

Z��������%�"1��� . �Z��1�3�Z� .�1�����. �L�R`������%�1���FK����� ��

Page 97: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PX��

� � ����� ���� ��� ��� Z� .� ��*���� � .����� � � *JG� l!� 1��� FG� ���� ��� ,.�

1�3� ���� ���� ���� Z��� ����� ��� ����� Z�� Z��.� .�� ���� Z� .� ��%��

�1 �Z���+� ����� Z�� ����"���$� ��� "���Y� " � ����"� ���� Z� .� "���Y����

���� ����(G�K`�=�*SG+�F`��%�������%)�1���FG����� ��� ������ ���� ����,.�+�

.� ���������� Z�� ����1��� �� �� Z � �.��"�� ��� ����"� � Z� .� ������ �

�� �"���� ��� "���Y���� ���� ���� 1��� F� .���� � � ����� ���� ��+�Z��.� ������

����Z� .���%��������"� �Z� .���3�������r�('��� ����)������� ��� �"����

��� "���Y���� ���� ���� 1��� F� .���� � � ����� ���� ���� \.�� ��"�� ��"����� �1�

������ ��� �"����1���� .�����.�� �Z������������� ���"�1����� ���1�

�11��� *����1�� (>��Y���)�Z�� ���� ���� .� +� ��� �� ������ ����"� ����Z� .� JG�

s�W��� �1� ��"� 1����� �Z��� ������ �� � ��� "���Y���� ���� ���� 1��� F� .���� � � �����

���� ����1 �� .�1��� ������� ��� �"� �����"� ������

!����Z��Z��.������� ����Z� .���%�������� �Z� .�����:���r�����Z� .�

���'�('��� ����)�1���1����������������������"���� �����'�����Z����� ���

Z� .� �� ���1����� ����� ������� ���������� (:���� %�K)� ��� ���� ���� �� Z��

���� $� " � .� �����. � 1������������������� BXGG� (=�Y��)�� ���� .� ���1�����

������ �.�Z� ��� .��� Z��Y� Z�� �" ���� " � �� %�K� ���1����� ���������� 1����

:���� ������ � ��� ��� ���� ��� .� !%'!*'���*�!�� ������ ����������

��������� ���� ������� �" �B����N"�������

�6E�+B3 3''+*(:+,:

� :����������������1������������Z�����1��������������.��"��� �LR�l!�

�����:������RGGG����� �����������Z� .�SG3F�JK������"6� �������11�� ����

�� �1������� ��� �(�'!)��� �������� ������������������ ����Z������ �����" �

:���� :�%� ��� ��1 Z���� !���� Z�� ����� �� � LG� ������ 1��� �� ����� �1�

FG.������

�6%��7,8��3('+,:(##(;

� !��� �� ��� � Z��� ������ " � .� Z���*.������ ����� ���� ���� �� 5:��

����� ��1� �Z� .��������"���.N=��(�.%��F)�������.N=������1����� � ��� ����

�B�*5F���� ���(�.�B�*5F)�Z�����Z�� �������1��� ������� �������������� ���

Page 98: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PR��

��.��� �1 �� Z������� ��.� ����� ��� ���� "���� Z�� ����� " � Z��.����

Z� .� ��%�� ���.� �����Z��� �� ����� � �� '����� �1� .� Z���� �������

Z�� �Y��" ��.������ ��� ���������� �� ���� ���� ���(G�.)�����1 ��JS�.������

�6�"�+ 2��7)7'3 ��#38+*3,�(�+�,(##(;

� ,Z� *1����.������1 �� ����1� ����Z� .� .����������������5�*�B�*

5F�����QFJMJLF:������Z�� � �� ����,��"�11��������� �Z� .�F`�=�*SG+�

" � �������� .�� .����.� �� JK*����� � ����� ���� �1 �Z���+� ����� Z��

����"� ���� ��� 1���LG����� �+� ����� ���$� .������ �"���+���� .�� .�

� �� � Z��� �� ��1��� � � JG+GGG3� �� 1��� VG� ���� �� � � S� l!� �� ����� ��������

"�����,.������� �� �Z������ �Z� .��,��������� �Z� .�G�F`�=�*SG����

JG� m�� ����� �3�� (,�3��)� (%����� �����.)� Z��� �� �� ��.� ������� �1 ��

����"� ���� 1��� LG� ���� �� � � LR� l!+� .� ��� ���� ��3 ��� Z��� �� ��1��� � �

JG+GGG3� �� 1��� SG� ���� �� � � ����� ���� ���� ,.� ���� �� � ��� �� Z��

������� ��� � ���� "�11�+� ����� � " � %�%*���B� ��� ��"6� � �� Z� ���

"�� �������� ����Z� .�Z.���� �� ����������� �� ����

�6���� 7#9�2*+,:(##(;

� ='5L,L� ����� ��1� � Z� .� �� �����"�� �.N=�� (�.%��F)� ��� �� �.N=��

����1����� � ��� ���� �B�*5F� ��� ��� (�.�B�*5F)� Z�� ����1� � Z� .�

���=�L�F*�QFJMJLF:������ ��� ���(���=�L�F)��������Z����.������ �L*

S�� ������1 �� .��ZY�������Z��1�3�Z� .���*����� .������ �*JGn!�1���

FG� ���� ��� ,.�+� ����� Z�� � ���� Z� .� J� ��� �1� F`�� . ��� "��� � � �����

���� ��� 1��� J� ���� ��� !���� Z�� Z��.� ������ ���� Z� .� Z� �� ���

1����1����Z������ ���

�6���,(';#+#�9 3'' ; '3);9'�5 ;��*3�2;

� !����Z����� � ���FG� �����.�� ��� Z� *1����.����� �1 �+� �����Z��

� �����$�Z� .�F�����1� � ������������������P�����1�1��.������,.�+�FGX*

FGR����� Z�� �� ��1��� � � FJGG� ���� 1��� L� ���� �� � � ����� ���� ��� ���

Page 99: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�� ���������� .����

PV��

��� � Z��� Z��.� Z� .� ��%�� ,.� ���������� Z��� �� ��1��� � �����+� ��� .�

������ ����� Z�� ������� ��� KGG� s�� �1� ��%� Z� .� �� ��� ��� ��� ���

�1 �Z���+�S�K�����1�RG`� .�����Z�����3� �� .����������� ��1�3� .������1�����

�������� �1� J� .������ � � .��� ���� � ����� ���� "� � ��� " Z�� G� �� *SG� l!� 1���

��������� .���,��� ���� .������Z� .�������������+������Z���� ��1��� �

���Z��.� �����%� 1���XG� �������,.���� �Z��� ������� ���F���� �1� G�F`�

,�� ���D*FGG+�G�J���W����=��*1��N=��������JG�s�W����1��������������1���

LG����� �� � � ����� ���� ���� � �1 �� .� +� ����� ��� �� � 1��� .� ���� ���� " �

1��Z�� �� � ���

���Z� � �� ���� 3����� �� Z�� ������ �� � ������ ��� B����� D:� 1��Z�

� �� �� (!��� �� !������ ���+� 5����.+� ������)� ��� !� ��� !�� #1���� ��

,����������������*���Z�! �� � ���� ������� �" ����� >����!������,.�

��� ���� �Z��� � � ���Z� .� .� � ����� ���1����� ����� 3�� � ���� �1� .� ������

Z��� ��� ������ �� � ����� SVV��� ���*����� �����*���� ����� � � FK�\� ��Z���

���Z��� ��� �� (�%!)+� ��� ��� �� (%%!)� ��� �� (XJG� ��)� 1���������

1��� �'� Z�� �������� O� ����� ������� � Z��� "��� ��� �� ���$� �������

1���� FG� ��� 1������� � "��� ('������.�Y+� B����� ��������)�� ,��� Z���

��� ��� �� ��� ���� �1� .� � �"��� � �1� .� ��� ���� �� N� 1���������

Z��� ���6� � ��� �� FGJS� ��������� ������ .�� ������� ������ �� Z��

3���� �� ���� ������ ����� " � .��� ���� ���� ��Y� 1��������� ��������

�=�� ���� ���� (���� � ���� ���)� ��� ������ 1��������� .�� ������� Z���

������������ �� �����1 Z���(�.���3����Z�% � ��+�%�������+�!�)��

�6�/��(�+#�+ ('(,(';#+#

'����������+�3����� ��Z������ $�1���� � �� ����������1������" � * � ��

�� ���Y�� ��� ����� ��� �1� .� 1����Z���� �����1�������� w� t�xG�GK+� wwt�xG�GGK+�

wwwt�xG�GGF��

Page 100: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

Page 101: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

� �

Page 102: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

������

Page 103: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

Page 104: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FGL��

�6�?��23:7'(�3#*+��#+#

�FJ� ��� ���� ��� ������� � ��� �� � ���� �1� �������� �������� ���.� ���

���Z .� ��������1�� ���+� � ��Y� ��� ��������� � �������� ���� ��� ���������

(E�� ���� ���+� JGGR)�� ������� � ���� � �Z��� Y��Z�� .� ��QFJ�Z��� ������� ��� ����

�������� (%�$�Y�+�5�6��Y+� ��� ���+� JGGP)�� ��� ���.+� �������� ���� �� 1�������� ������

(����� ���� ���+� FPPK)����� �� � .� � �� �"���� ������ ��QFJ��������6� � ���

.������"���Y������������������" � .���"������FLJF=F�.������� ��� ����

����������� 6�� ��1 �� .������� ��1��QFJWFL���� ���+� .�%����-��������(>��������

���+�FPPL)����� �� � .� ��QFJ����3�������������1�����1�������1���� ���+�

����� ���� .� ��QFJ��11� ����������������������1�� ������1 �� .� ����1������ �

���� .� ��.����� ��� �QFJWFL� ���������� .��� 1����� ��� .� N.�*�� ���

��� ���$� ���� �3��� ��+� ��� ��� � �1� .�Z�� .� �1� ��1���� ���� �������� � (��

'� ���� ���)+� �� � ���.� ��� Y��Z�� ��� .� ���� �1� .�� ��� ���� ��� ���� ���������

N�� � +����Z������ �.������������ ���� .� �. �� ������������ ������

�� ���� �1��� ������������ � .����������"��������� ����!N�����11� ����

"� � .� � . � ���� "� ���� � � � .� � ��������� � ��� ���� ��� ��� �11�� �

��������� ��� ����"������ ,.��� ����� � .��� ���� �Z� Z� �� �1� .��Y����

�"�� ������ ��������������5��+������������� .���Z��Y�.���"�� ������ ��� � .�

���� ������������1��QFJ��������� �������

�6��+���+ 8+#�2+)7�+�,�9�?��� �

�1��� � �� ����Z� .� .� ���� ���� �1��QFJ� ��� ���� �������� .� 3���������1�

�QFJ� Z��� ���� $� ��� �11�� � ���� ����� (������ NF)�� !���� ���Z���� ��� �������

���� �����Z�� 1�3� ��� � ����Z� .� ��� �� �*�QFJ� ����1��� �� �"� �� �QFJ�Z���

1���� ������ .� � ������� Z� .� ���� � ������� ��� .� ��"���� ��� ��� �����

������ .� ������ ��� ����� ��� �� ��.��� (������ NF�)�� '� �� ���� +� �QFJ� Z���

�������� � ��� .����� ���Y�����6��� � ����� ���Z.� � � � �������� �����������

(������NF�)��,.������QFJ�� ��������� ���Z������� ����5:�+���!E����!O%*

R������������+� .���6��� ��1� .���������� �Y���������� � .�� ������ �������

��� .���������"�����%���������.�Z�� ����������� ��� ��������� ���� .� Z��

����� ��� ������� Z�� �=��Z��� � ����Z� .� ���'� (������ NF!)�� �\.�� �� ���� ���

Page 105: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FGS��

������� .� ������ �1� ��� ��� �.���� ��� 1��� �� .�� ��� ����� � ��� Z��

���� �� �������%�� ���� .������ ����1�����������.���� ���"��������"����

" Z�� .� ���. �� ������ %��� �1� .� ����� �"���� ��� �� .��� .���

�� �� ���� Z� .� �.���� ��� "����� !������� +� �QFJ� Z��� ���� � ��� .� �.���� ���

"������� ������������ �������Z����"����Z� .� .����� �"� +������ ���� .� �� �

Z����� ����������1����=��� ��������1� .��� �"� ���������������� �������Z���

�"��������"�����1������� ��� �"� ��

�+:723 ��6 ��� ������� � ������� �� ��� �1� �QFJ� ������ � �Y������ =�>�� ��.������������Z��1�3�������"�Z� .��� �"� ������� ����������QFJ�(�"���)����5:�+�

��!E� ��� FLJF=F� ����6 =�> % ��.������ 5:�� ����� Z�� 1�3� ��� ��������"��

������ ����������QFJ�Z� .�����1����� �"� �1�����"�������5:�+���!E����!O%*R�

�����= >�� ��.������������Z��1�3�������"�Z� .��� �"� ������� ���������

�QFJ(�"���)����FLJF=F����!O%*R�������!����Z���������$�" ����1�������������� ��

,.� ����� ���������� �� ��� �� �� �1� b*� ��Y�� '����� ��� ����� � ��� �1� .�

��6��� � �1� .� ����� ���� � ��� .� ��� � 1���� Z�� ����� � 3����� ��� %����

"�����FG�s��

Page 106: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FGK��

,.� �QFJ*�� ��� �"���� Z��� �" ���� ������ �� ��� ������� �� �*�QFJ�

�� �"� ������� � .�!* ������������������LRG*LRP��1��� ��QFJ���� ���(�"���)��

,.� �� �"� � ����� ������$� ����1����� � �� "��� �1� SS� Y��� �1� �������� ���

����1� � �QFJ� ��� 5BE*JPL� ����� ��� Z� ��� "�� � ���� ���� (������ NJ�)�� ' � Z���

����� �� � �����1 � 1�� .�� .�����1��� ��1� .��� �"� a� .�1���3����� ��

Z�������� ���$������� .���� �*�QFJ��� �"� �1����%�� ��!��$���� �.����� �

��� ������ � .� =* ������� ������ �1� ����� �QFJ�� ,.� ���� �� �" ����

���"�� .� � ������� � � .� ��"� � �"���� Z� .� .� �������� �"����

�� �"� � (������ NJ�)�� %�+� Z�� �11�� � �� �"���� ������ � �QFJ� ���� � ��� .�

������ � ����� ��+�Z.��.������ � .� � .�� ��������1��QFJ��������1����

,��1�� .�����1 � .�����1��� +�Z���� ��Y���Y�Z�� .�3���������1�

�QFJ� ��� 5:�� ����� � ���$���� Z�� �11�� � �.N=�� ������� ��� � ������ � .�

�������������1� .�.������=�FJ����(���� ��������� .��)���������"��

�.N=�� ������"�� ����������� �.N=�� � � �� (%����� �����.)� Z��� ��� ��� ��� �����

!��� � �� ��Z������ $�" �Z� ���"�� �Z� .��� �*�QFJ��� �"� �(������NL�)��

,.��������1� �Z� .��.*F�Z���� �����"���1�3��������1 ����������1� �����%�+�

� �Z����� ����1���1�� .��3����� ����.*J���1� �������.�Z���� �����1� .�

�������� 3�������� �1� �QFJ�� ,.� �.N=�� ����� Z�� ����� � � " �

������1���������(������NL�)����Z� .� .��������1�������������� �� ����

��� � �� 1��� � "��Y������Z����"���� ��� �.�QFJ� �� �5:�� ����� ������� ��

�+:723��6=�>5BE*JPL������Z�� ����1� ������ �Z� .����=�L��QFJ�MJLF:��\.���

���� � �� �� Z�� ������ " � %�%*���B� ��� ������"�� � Z� .� �� �*�QFJ� 1����

�"����� =�>� �QFJ� �� ��� � ������� ��� ��������B�� �����Z� .� �� �*�QFJ� �� �"� � 1����

%�� ��!��$���� ��.������������Z�� 1�3���� ������� ����Z� .��� �"� ������� �

���������QFJ��,.���������������� ������� ���1�b*� ��Y��!����Z���������$�

" ����1�������������� ��%����"�����FG�s��

Page 107: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FGX��

��� ���� ����� .� � ���� � .� 3�� � �� ���� ���� ����� �� � �.�QFJ� 5:��

����� .����� � ��������1� .���$��� ���������� ����+� ����� ���� .� � .��� ���

�"����Z�������1�����

��� .�� �������.� �Y�� �� ���� ��� � Z. .�� .� �� ��� �"����

��������� �� �QFJ� Z��� �� ��� �1� �� �.������ �QFJ� ��� ��� 1��� �� ����� ��

��������Z��Y�1����������"�(�������7� .���+�JGFL)��" ������1��� �������.������

���� �����QFJ���� ����,.����� ��� �����1� .���1��� �������.��������� ���Z�����

���� �.������ ����� �Q� ��"��� �� ����� � "����1�� ��� .��� =*� ��� !* �������

��������� �� .����� ��� ����Z� .� .���11� ���������� ���� .����.�"� .+�

=* ����������!* ���������������,.�1��+�����.�� ��"����� �Z� .��� .�

�� ������Q�������(5��.��������+�JGGFa�i�+�JGGJ)������� ���������"���Z���

����� �� 1��� .� �QFJWFL� ��"1���� � ����� .� ���� ���� �1� ���� ��� �� �����

������+�Z.��.� 1��� ���� 1��� �Q�� ��� �Q�+� "���Y� .� �� ��� � �1� �QFJ�� ������ +� ��

���� ��� �Z� .��������� �" Z�� .��������������FLP����������FSG�Z���

�" ���� .� ��.�Z�1��� ������ �" � ��� ��������*�Z��3����� ��Z� .�N5*N�%�

�+:723 �/6�QFJ�Y���Y�Z�� ��� 5:�� ���� ����� 5:�� ����� Z�� ��1� � " � �� �������

Z� .�����������1��.N=�������� ��QFJ(�.*J)��������� �����.N=�������� �Z� .�

����� �����=�>�: �� ��1������� �����.N=��(�.%��F)�����QFJ��.N=�*3��������5:��

�����Z�� ����� �" � ������"�� ����Z� .�T* �"����� 3����������� ��� �� ��� �����

=�>� �������� � ���1����� ���������.�� �1� 5:�� ��� ���� ����� (�.%��F)� ��� �QFJ�

Y���Y�Z�� �����Z�� 1�3� ��� ���"� ������ � �������� �QFJ�Z� .� Z�� �11�� �

����1����� �"���+����1�����"����(�)���� .�� .��1����%�� ��!��$�(���)��%����

"�����FG�s��

Page 108: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FGR��

�������������������������3����� ��(�������7� .���+�JGFL)��5�+�Z�Z��

�"�� ������ �� � .� � .��.��������� ���Z������������ ���������(������NS)��

' ����Z�� .��� ������ .� �.��.�3��������������1��QFJ*�,��Z�� �3���1��� .�����+�

��� � � ��� 3�������� �1�Z��� �� �QFJ�� !����Z� .� ��Z�� 3�������� ����+� ���� �

�QFJ������ ����� �.��������� ���� .�� ��������%���.����1���������������� �

Z��� �����"�� �� �"���� ��� ������� �1� �QFJ� 3�������� � � .���"� � ��� �� ����

�������� ����+�Z.��.������"��� ��������� ��Z� .��11�� ��� �"����(������NS+�

��� )��O������ .������ ������� � .� ��QFJ�������$�� �����1���������1� .�����

������ �� ����� ��� ����� � �� �����"�� ���� 1��� .� ��� ��� ��� ������ .�

� �Y����������������

%���� .� ��������� � � �� ����� � .� � �QFJ� ����� "� ���� ���� ��� .�

��$�����������������+�Z����� ���� �1 � .���"��������������$� �����1� .���

��� ��� ��� ��.� � ��� �1��� ������ ���� .� � �������5:�� �����Z�� � ��.����$�

Z� .������$��� �� �� ���+�J�.������� �+�� ����Z� .��� �*�QFJ��� �"���� ��

� ����������QFJ�(������NK)��'�����1���������� ��������� �1���QFJ�

.����.�� � .� ���� � ���� '�� .� ��� � �� ����+� ������ � ��.��� �QFJ� Z���

�� ��"� ��������� � � .����.�� � .�� ������������� ��� ����O��� .�

����.���� ���������.��+��QFJ����������$������Z�� .� ��������������� �� .�

������������ ��������� .������ �"��� ���Y���'�� ���.��� .��� ��� ��1��QFJ�

�+:723 �-6 �QFJ*���� ��� �������� � � � .� ������� 1����Z� ������ ������ .� �� �

� ���� �1� �� ����� �������� � ���1����� ���������.�� �1� 5:�� ����� ����1� � Z� .�

���=�L�F*�QFJMJJP:*����� ,Z� *1���� .����� �1 �� ����1� ���� �����Z�� 1�3� ���

���� �Z� .������������Z� .����'��,.���� ������������� ������� ���1�b*� ��Y�

1�������1�����%�K������������%����"�����FG�s��

Page 109: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FGV��

� �������������.�����QFJ�Z������ � � ������$� �� .���������$�����������

�� ����1� �����Z����"����� ������ +� ��� � �Y�������QFJ�Z��� ������Z� .���

.��� ���������"���������� ��� ��� .� ����� ��"� .���"� +������������

"� ��,.�� ������� ���� �Y������Z�����Z� ���� � �� ����\�������� � �� �1 �

�� ������������.�����

� �

����� ����"1���"� .��� �"������� ��� ������������� ��� ������� .�

������ =�� .���+� ��� ���� �� 1�� .�� ���1���� .� �� � ��� �� ��+� ����� Z��

� ��.����$� ��� � ���� Z� .� .� %�� �� !��$� �� �"� �� ����� �"� �����

1�"��"��� �(�B�)������Z��� ���������� ����������QFJ���� ���(�����NX)�� '��

��� � ���.��� �QFJ� Z��� ���� � ��� .� ������ ������ ��+� ��� Z.�� �� �����

����������QFJ�Z�������� �� ���������� ��� ���� ���������$����������

.� � � �� ��� 1����Z�� ������ � ��� ���� .� � ���"�� .������ �"����� '��

�� �� � ���� �QFJ� Z��� ���� ������� � � � .� ��"� �� ,.� �� ��� �"����

����� � .� � �QFJ� ���. � .��� 1��� ������ �����1������ � � �11�� � � ���� ������

,��-�

��. �

����

�/�

,��!��!*�� �#!��!*�� 0�����!*�� &1��2�#�*�*�/#�����!*��

�+:723�!6�� � ����� ��"� �����1��QFJ��5:�������Z��� ��.����$�Z� .������$��+�

1�3� ��� ���"� ������ � �������� �QFJ� Z� .� �� ����1��� �� �"� � ����.��� 1����

�"����� O�� �� �� �1� b*� ��Y� ��� �.�Z��� '����� Z�� �" ���� " � ������ �� :���� %�K�

���1�������������� ������������ � ����1� .���6��� ��1���������� ���� .���� ��

%����"�����FG�s���

Page 110: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FGP��

�� ����� ��� �������� � � �� �� ���� ��� .� ������$� ���� � � �� �� � ���� �1�

�� ������

�6��?��'� ('+D3#(���3*+8)�8;#�27 �723

��� 3������ ��� .� �� ���� ���+� 1����Z���� �.�������� ����� ���� ���

�� ����+���������������� �Y����������� �� .����. �������(������NR�)��'��

.� 1��� � � �� �1� � �Y�����+� .� ��� ��� ��� ����� (�� � ��� ��� ������� �1�

1����� ���� �� ��� (�*�� ��)� ��� .� �� ��� ��� ��� � ����*J+� ������ � .���

� ��� ����� ��� ����� �� � ��� ���)� ����� �� ���������� �1� .� ������� 1����Z��

�� ������ ���$� ����� � .���� ��� ����������������� ��� �����1� .��������,����

N.��� ��� � � ��� ����"�� ������ ����.��� ���� ���� .� ������ 1���� ��

���� ��� � .� ������"���� �� 1���� �� ������� 1����Z��\.��� 1����Z���� ����� �

��� � ����� .�� ��������� �� Z��������+� .���� �������� ���� ����������� �

" � ��� �� ��������� "����� ,.� �� ��������� "���� ��� ����� ��� "����� �1�

�� ��������� ����� �"���+� Z.��.� ������� � � .� ��"� � ������� � � �� �� � ���+�

� �Y����������� ��" ���������� ����"��������+�Z.��.����� ���������"��

1������� �1� .� ������� ��"���� " Z�� ������� ���. �� ����� (���$ �� ���

�����.+� JGFG)�� ����� .� �� ��� �"���� 1��� �QFJ+� � � Z��� �����"�� .� � �QFJ�

�+:723 �46�QFJ� �� ��� � ������� ��� ��������B�� ����� Z� .� �� �*�Q

FJ� �� �"� � 1����

%�� ��!��$���� ��.������������Z�� 1�3���� ������� ����Z� .��� �"� ������� ����������Q

FJ��,.���������������� ������� ���1�b*� ��Y��!����Z���������$�

" ����1�������������� ��%����"�����FG�s��

Page 111: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFG��

������$�� .��� � .���� ��� ���������Z.���� ������ ���$� ������������� �

.� ������� 1����Z�� ,.�1��+� � ��.������ 5:�� ����� Z�� � ���� ������ �

�������� �QFJ� ��� �*�� ��� Z� .� �.�������� �3��� (������ NR�)+� Z.��.� "����

����1����� � �� 1����� ���� �� ���� '� �� ���� +� �.�������� ��"�� .� ��� ��� ���

������1��� ���(������NR�+�������Z�)+��� .���.��QFJ�Z������� ���������������

����� .� ����� �� ��1� � � 1��� ����� �1� �QFJ�Z��� �"���� ��� .���$��� ���

�� ��� ������� .��Z��������������$� ����Z� .��*�� ����,.�" �Z������� � .�

�����"��� � .� ��QFJ�Z�������"���1� .���� ��� ��������� � .��������1����Z���

�+:723 �C6 ������� �� ����� �QFJ�

��� �� � ��*������$� Z� .� �� ��� ������ =�>� %�.�� ���

������� �1� .� �11�� � � ���� �1� � �Y������ (����� �"���+� ���a� �.���� ��+� "��a�

���������"���+�"���Ya���� ��� ����� �������+��a��� ������+�"���Y)����� �1����

(���$ �� ��� �����.+� JGFG)� =�>� !��1����� ��������� � �������� �1� � ��.������� 5:��

������ � � ���� �1� �� ��� Z��� ������ �� � ������ ��3�KKK*�.�������� (�)� ��� �� �*

�QFJ(���)� (�"���)�� ,.� Z.� � "�3� ����� �� .� $���� ���� ��� Z.� � ����Z��

�.�Z� ��� ��� ��� ����� �1� �� ���� ,.� ��� ��� ���������� ��� ������ �� �� �1� b*� ��Y��

'������������� � ����1� .���6��� ��1� .���������� ���� .���� ��%����"�����

FG�s���

Page 112: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFF��

�1 �� .��������������� �Y�����+������������ � ������ �� Z�����. ���

"� ������������ �1������� ���" ��������Z��� ���������"����Y��Z����� .�

��"� ���������� �"1��+���"� �����������" ��� �������������� �"���

"���� ��� � �� ���� ��� �� �� ��3� �1� �� ����� Z� .� .��.� �� ������ ��� +� Z.���

������� �������� ������Y��Z���,������ �����1� .��QFJ���������� ��� ��"����

������ � �Y������ �1� � ��.������5:�� �����Z��� .���"� a� �����Z�� � ����

������ ����������QFJ������������Q* �"�����(������NV)��'������Z� .�Z.� �

Z� .�� ��� "1��+� ���1����� ���������.�� �.�Z� � � �QFJ� ������ ������

����� �"��������������.��������� �� 1����Z� �������������� .� ��� ��� ��� �����

��������� .� ����� �"���� �1� .� ������ ������ ��� ������ ���.��+� �QFJ�

� ������� ������ ������ .� ����� �"���� ��+� ����+� ��� �� ����� �� � ����*

� ��� ������������� .��������1� .�1�������$����������:� ������ �Y�����+�

�QFJ�"���������� ������� .������ ��3��1� .���"� ��,.��+� .��� ��

���� �� � .� � �QFJ� �������� �� ��� .� �� � ��� ������ ������ �� ����� ���

�� ��� � .���"� ��

Page 113: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFJ��

�6/�?��'� ('+D3#(���3 3,�2�#�*3#

\.��Z� � �����B�� �����Z� .� �� �*�QFJ�Z��� ��� .� � .� �� �"����

Z�� � ������� �� � ��� ��� ���� � ������ .� ������� .� � ����� .�

�� ������(������NP�)��,.��� ����������������������������1��� ������

�������� " � .� ����� ������� �� ����� .� � ��� ����� ��� ��� �����3�� ���

����� ��� .����������� �"��� ������$���� �� �� (�,O!)� (������� ��� ��3� +�

JGFG)��,.��� ����������������� ��������� �� ��������������������.��������

� ��� ����� ���� ��� ����� �"��� ������$� ����� ����� ���� Z��� .� 1��� �

������� � �1� .� ����� ��������� ����� ����"� (��3� � ��� ���+� FPPS)� ��� ���

������� ��� .������ �"������ ���$� ���� ����,O!��� �,������ ���� �1� .�� �

�� ��� �1� �QFJ� ����� ��������� �� .� �� ������+� 5BE*JPL� ����� Z��

����1� �Z� .��QFJMJJP:*������� ������������������� ����Z���� ����

Z� .� �� ����1��� �� �"� �� '�+� �� � ��� ����� .� � 3����� 1������� �

�QFJMJJP:���� ���(������NP�)����� � .���������������� �� ��� ���

������Z� .��� �*�QFJ+������������$�Z� .������ �����,.�������$� �����������

Z� .� .� ���� ���� �1� .� �� ������� � � ������ � ���� �1� .� ������ 1���� .�

������� 1����Z�� '� �� ���� +� ��� .�� �Q� ��"��� +� �Q�+� Z��� �.�Z�� "1��� �� "�

�+:723�E6�QFJ����������� �Z� .�

�� � ��� ����� �"���� .����.�� �

�� ������ =�>� !��1�������������� �

�������� �1� � ��.������� 5:��

������ � � ���� �1� ��������

��� ���� Z��� ������ �� � Z� .�

�� �*�QFJ� (���)� (�"���)� ���

�� �*Q* �"����� (�)��\.� � "�3��

�.�Z�� $�������� ����� � ���

��� =�>� �������� � ���1�����

���������.�� �1� $���� ���� ��� ���

,.� ������ ��������� �� ���

�� ���1�b*� ��Y��������� � .�

��6��� ��1� ����� ��� .� �������1�

.�� ����� � 3����� ���

%����"�����FG�s���

Page 114: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFL��

���� ���� .��� ����������� � .���"� �(!.��5� ���+�JGGR)���QFJ�������� �

� � .� �� ������� ��� .�1��� ���. � .��� �� ���� ��� .� � �"���$� ���� �1�

����� �"����� N�� � ����� .��� �.�Z�� .� � �QFJWFL� ��� ������ � 1��� �,O!�

������ � ��� ����� �"��� ������� ��� ���� ������$� ���� (���������� ��� ���+� JGGV)��

,�Y���� �� .�� .�� � �� ����� � .� � �QFJ� ��� ������� � �� �,O!� ����� ����

����� �"��� ��������������������������O������� �� .� ��QFJ������"�1�������

�� ������+� ������ .� ����� �"���� ���Y�� ��� ��� .� ��� � � �� �1� � �Y������

������ ��� .� ��"� � ����+� ����� � .� � �QFJ� ����� "� �� Y � ����� ��� �1�

�� �������

�6-�3$'3�+�,�9�?�� (7#3#8393 �#+, 3''8+B+#+�,

,�� ���� ��� � Z. .�� �QFJ� ��� ��� ����� �� � ����� ��� �1� �� ����+�

��� ������� � ��� .� �� � � ��� �1��� ����+�Z� ����B�� ����� �� � �1� �QFJ� ���

�QFL����������� .��Z� .�Z��� ���B����������.����1���1����� �Y������

" �������1����������'��1�� �Z�. �� .��$� .� ��� ��"� �����1���������

�QFJ� 1��� ���� ���. � ������� .� 3 � � �1� ��� ������ ����� !���� Z�� � ����

�+:723�%6�QFJ� ��������$��Z� .������ �����=�>��� ��.��������B�������Z�� 1�3�

������"�1������������QFJ�Z� .�������1����� �"� �1�����"�����=�>��������� ����������.�� �.�Z� ���* ���� �QFJMJJP:� 3����� ������ � � ��� 5BE*JPL� �����

� � ���� �1� ����� ���� Z��� ������ �� � " � ������ �� ����1��� �� �"� � (�)�� \.� �

����Z�� ����� � .� ��������$� ����� '����� Z�� �Y�� " � ���1����� ��������� �� O��

�� ���1�b*� ��Y�����.�Z���'������������� � ����1� .���6��� ��1� .���������� �

��� .���� ��%����"�����FG�s���

Page 115: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFS��

������ � .�� �11�� � ��"���� ���Y���� =*��.���+� T*�� ���� ��� �.��������

������'�1����=��� ��������O"���� �����������1�������������� ��.�Z�����

��������Y���Y�� ��QFJWFL�Z� .���� ����������(������NFG�)� .� �Z��������� �

���Z��� ��������E���Y�� �������.�Z�������� ������ �������������Z� .�

Z��� ������+�Z� .���� ��������� ������� Z�����������Y�Z� .������ ���Y��

,�� �����"��� � .��� ��������� � �"���� ���� ���� � ��� ���� ���� Z��

��1����������1��Z�� �� � �(������NFG�)��E���Y�� �������.�Z�����������

��� ��� ������ ���� (S�KV`� y� G�LX`)� ������� Z� .� Z��� �� ����� (F�SS`� y�

G�J`)+������ ���� .� � .��� �����1��QFJWFL�Z����11� ���� ����������������

�������� �� .�� ���� ��� Z� ���� $� �QFJ*�� � 5:�� ����� Z� .�

�.N=��� '�� 1�� +�Z��"���� .� ��.�QFJ*�� �(�.*J)���������� ��"���� �

�� ����� ���� ���1����� ��������� � ������� �� ��� ���� ����� (�.%��F)� (������

�+:723��"����� ������ ��������B���QFJWFL�(*W*)�EO�������=�>��� ��.��������B��Z���

������B���QFJWFL�EO������Z��� ����Z� .� .������ ��� �"��������������$�

Z� .� ���1����� ��������� �� ,.� ����� ��������� ��� ������ �� �� �1� b*� ��Y�� !����

.��"������ ���� .��� ��� ������� ��� ����� � " � ��� �� ���Y�� '����� ���

����� � ����1� .���6��� ��1� .���������� ���� .���� ��%����"�����FG�s���=�>�M��� �1��� �����1���� ������ ������������1��Z�� �� � ���B��Z��� ������QFJWFL�

EO� ����� Z�� � ���� Z� .� ��������� ���� ('�)� ��� ���� $� " � 1��Z� � �� � ��

8������.�Z����� .������1� .������� �3����� ����������"��������� �y�

%B�������� � �� ��������� ���+�� ��Z������� �" � Z�* ����% �� -�� � � ���� ���Y�

����� ���xG�GGF�

Page 116: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFK��

NFF)�� ,.� ��6��� � �1� ����� �������� .����.� �� ����+� ��� �.��������

������� +� ����� ���+� ��� 1����Z� ���������� ������ ������� ��� ��� ���� �����

(�.%��F)�� '�� ��� ��� +��QFJ*�� � ����� �.�Z��11�� ��.�� ����1��� � ���

�"��� ������ �\� �"���� .� � ���� �1� .� �.�QFJ� ����� ��������� � �Y������

���� � ��� ����� �"��� ����� .� � ��� .�� �� �������� ��� 1�� .�� ��� ��

���� ����� (������NFF�)����� .� 1����Z�� �� � ������ ��� +��"�� � .�.��1��1� .�

����������� �QFJ*�� � ����� (���+� SR�VJ`� �1� ���� ����)� 3.�"� � ��"����

�"��� ����+� ��������� 3������ ��� ����� "�""���� ��� .� �������� � �� ������

� �Y������Z� .� .������ ����1� .��� ���������"����(������NFF!+�����Z�)��

'�� �� ���+� � .�� ����� 1����Z� � �Y������ Z� .� ������� � "� � . � ���� �

���"�������1����Z���+����� ���������������� ������(������NFF�)���

��� �� ���+� .� ��� � ��6��� � �1� .� ��� ���� ����� �� �� � 3.�"� �

��"���� ��� �"��� ��+� ��� ����� ������� � .����.� ���� ��������� ,.�+� Z�

������ .� ����� 1��� ����� 1��������.��� �� � �� �����1� ���.������ .�

��� ��������.�QFJ������ ��Y�����������1�JL����+� �.�Z�������������11�����

(������ NFFB)� " Z�� ��� ���� (�.%��F)� ��� �QFJ*�� � ����� (�.*J)�� ,.��

���� �� ����� � .� � .� ��� � � ��� �1��� ����� ��� �� �� � "� �11� � " � �QFJ��

�1 �� ���.���� �� +� .���.�QFJ�����������"�� ����1��������������"1���

3������+� Z.��.� ������ � ���� � ��� �� 1���� � �Y������� O�����+� .�� ���� ��

����� � .� � �QFJ� ������� �� "� ����� �� � 1��� .� ������� ���� �1� .� ��� �����

�� ��� ���������� �Y�������

Page 117: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFX��

�+:723 ���6 ��Z������� ���� �1� �QFJ�

������ �� � ��� �"��� ������ �� ��.�������

5:�� ����� Z�� ��1� � " � �� �������

��� ������� �� ������ �1� �.N=�� ������ �

�QFJ� � (�.*J)� ��� �� ������ �1� �����"��

��� ���� �.N=�� (�.%��F)�� ��� ��"� ���� �1�

�� � ��� �.�� ��� ��� 5:�� �QFJ� �.*J� ���

��� ���� �.%��F� ������ !�����1��� ���� �1�

�.�� ��� =�> ������ � �Y�����a (�)�.�� ��a� =�>� ������� � �Y�����a� =�>� ������������ ��� ����� . ���� ��� � ������

� ��.��+�1����� �����������a����= >=�>�1����� �Y���������"��������"��� �����

������� �Y������ .� ������ �������� ������������ ��� �Y������1�������8�����

��������������� ����1� � �������+�Z� .������"��������� ����y%B����� �������"���

�������� ��'��L������ �3����� �+��� � ����1�FFK��QFJ*�� ���������VX*

��� ���*�� � ����� Z�� ����� (ww�zG�GGK)�� =�>� M��� �1��� ���� �1� �������� ���

1��������.��� �� ���.����B�����"��������� �y�%B�+��tLG�

Page 118: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFR��

�\� .����1��������� ������� �����1��.�QFJ������� ����5:�������" �

1��Z�� �� � �(������NFJ)����.��.������� �����1��QFJ*�� ������(�QFJ��.*J)�

Z��� 1���� ��� �GW�F� �.��� (RF�GR`� y� G�KP`)+� ���"�"� � ���� +� ������� ��

��� ���������(�.%��F)�(KV�LR`�y�F�JJ`)��!��������� ���� �� .��G��.����� ����

���Y� �1� �� ��� � ��� ���Z���� 1�� ���+� ��� ������ .��� ����� �����������.��� � ���

����� ���,.�" +� .��� �����1��QFJ��� �"��� ����� .��� � ������.��� �

��� ����� � �� .� �G� �.��� �� ���� � �� � ��� �"��� ������ � ,.� �11�����

�"���� Z� .� .� Y���Y�� � ����� �� � "� �� �� .� ��� � ���� ������� .� �

Y���Y�� ���������Z� �������� ���.N=�� �� ������ .� ������ ���� �

��ZY�"1��� .����� �����,.��1��� ������� ���1������ �������������Z� .�����

���������"���� ����� ����� ���� .� ��QFJ�.������ ����� �� � ���� ���������������

�������� ���� .� � .�������1��QFJ��11� �� .�������������� �����1���������������

��

�+:723 ���6 �������� ���� �1� ����� ��� �GW�F� �.��� ����� " � �QFJ� �� ��"� �����

�� ��.�������5:�������Z�� ��1� �" � �� ���������� ����������������1��.N=��

������ ��QFJ� � (�.*J)������ �������1� �����"����� �����.N=��(�.%��F)��!����Z��

1�3+�� ����Z� .��������������('�)�������� $�" �1��Z�� �� � ��5:���.�QFJ�

������.�Z���� ��������1����� ������� ��GW�F��.����������Z� .���� ����5:��

�.%��F������� �8����� �.�Z����� .������1� Z�� ����� �3����� ����������

"���� ����� � y� %B��� ���� � � �� ����� ���� ���+� � �� Z�� ����� � " � Z�* ����

% �� -�� � � ���� ���Y������ ���zG�GGGF�

Page 119: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFV��

�6�83,�+9+ (�+�,�9������(#(,�B3'3993 ��29�2�?��

�6��?��$2��3+,+,�32( �#5+��������

O���� �"���.� .� ��QFJ������� ����1������������ �Y�����+�Z����� ��

�� �1 � .��Z�� ����11� �����1��QFJ�������� ���� .�� �Y����������������

��� ������������ ��1� .���� ���* ���������� �����1�� �Y�������������� .�������

�,���� N.��� Z.��� ������$� ���� ��� �� ��� ���� ��� ���� ���� " � N.�� �������

����� ��3�.����1�� ����(N.��B��)�����,������ ��� ������� ����(N.�����)��

' � ��� .����.� .������ ���� ��� .� �� ���� �" Z��N.��B������N.������ .� �

N.��� �������� �� �� .� ��� ������ ��� 3� ��� ��� �� �� .� ����"� � ���

�����������1� .���� ��� ��������(��� �������+�JGGKa�i;��������+�JGGKa�:�����������+�

JGFJ)�� ��11�� � N.��B��� .��� "�� ����"� �� "� ������� �������� ����� ��

����� .� ������ ����"� � ��� ���������� �1� .� � �Y�� ��� 1����Z�� ,.��+�

� ��B�+� B!,J+� �B�*5F+� ��� :�N�� 3.�"� � ������� � �� ��� � 1��� ����� 1��� .�

������ ����� ���� �1��� ����� (�� ������ 'FL)�� ,�� � +� �B�*5F� ��� .���. � �� "�

������� � ��� ���.��������� �� �Y������ (���Y�1��������+�JGGR)��:�N��Z���

�.�Z�� ��"������� 1��� .��"��������+� .� ��� �� ���1�� �Y������(��� $�������+�

JGFL)��:�N�� ��� ��N5*N.��B���� ��� �" ��QFJ�������.���.�� �� ���� (%�$�Y�����

���+�JGGL)��O���Z��Y����. �� .������� .� ��QFJ������"��� ��� ����"� .�N.��B��+�

�B�*5F�� ���� �� ����1�� �Y���������:�N����� .�1��������������\.���� .�

��.�������1��� ��� �����1�:�N��" ��QFJWFL���� ����� ����Z���� �"���.+��� .����

���Y��Z���"�� � .��� ��� �����1��B�*5F�" ��QFJ���������������+�Z���� ��

���� ��� ��1��B�*5F������"����Z�� ����11� ���1����QFJ��

�6�6��?�� ��+**7,�$23 +$+�(�3#5+��������

�,�� ����� � Z. .�� �B�*5F� ����� "� �� �Z�� ���� 11� ��� �1� �QFJ+�

������������ � ���� 3����� �� Z�� ��� Z� .� .� Z�� ��"��� �1� .�

��"1���� � �1� �FJ� ��� ���+� �QFJ� ��� �QFL+� ��� 1���� ��� .� �B�*5F�� ,.�

.������ ����(5�)* �����B�*5F�Z�����*3�����Z� .� .��� ��� ��+���� .�

���� � � ��� ��� ��� 1������1��QFJ�����QFL� ���5BE*JPL�������N��� ���.�Z� .� �

�QFJMJJP:� ��*������������ � �Z� .�5�* �����B�*5Fa�Z.�����QFLMJJX:�

��*������������ � � � � ����� �������� �� .� "��Y������ �1� .� ��� ���� ����

Page 120: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FFP��

(������ NFL�)�� '�� ���� �� �����"��� � .�� ���� �+� �� ���������� ��*

������������ � ���� ���� � Z��� ��1���� ������������ � ���� � �* ����

�QFJMJJP:� ��� ����� ��*3�������� 5�* ���� �B�*5F�� '�� ���� Z� .� ���� ��������

�"���� ����+� 5�*�B�*5F� ��*������������ � � Z� .� � �*�QFJMJJP:� (������

NFL�)�� ' �Z��� ����� �� � �� ������ .� ��*������������ � ����Z� .� ��������

��� ���� �� �� .� ��Z� ����� �1� �QFJ� ��� .� ��6��� � �1� ����+� ��*

������������ � ���� Z��� ������ �� � ����1� ���� �QFJMJLF:� ���

������������ � ���� �������� �B�*5F� ��� 5BE*JPL� ������ ��� ���� "� ��� ���

������NFL!+��QFJMJLF:���*������������ � ��Z� .����������B�*5F���

,�� ���� $� .� ������� �1� �B�*5F� ������� ��� .� �� ��� ���� Z� .� �QFJ�

��� ��+�Z�������3����������������Z� .�5�* ����1������1� .�=*����!*

������� ����� � ������� �1� �B�*5F� �� �� .� ���=�L�F�� ,.� =* �������

1����� � ��������� 1��������������F� ��KRF������� ����� .��5*�5���������

,.�!* �������������Z�����"�����1��������������KRJ� ��PVX�$'��"� .�����+�

��� '��

/�3�

��� '�

��� ��

4��

�������

����2�!��

&�

�������� '��

��������1*!��*�

'� ��� '��

,1� ��5����'� ��� '��

� �

4� �

�4�

4�4�

,1� ���/�3,

1��

�1*!��*�

����

����

����

2�!�

6�

�����'� ��� '��

,1� ���

��5�������5�����'� ��� '��

'� ��� '��

'� ��� '��

4

4

4

4

4

4

4

����

����

����

���

2�!�

��7���

/�3'��

�1*!��*�

��

��7���

�+:723��/6�QFJ������������� � ��Z� .��B�*

5F�5BE*JPL� �����Z����* ����1� �Z� .� =�>����=�L�F+� �!�=�L�F*�QFJMJLF:+� �!�=�L�F*

�QFLMJJX:� ��� �!�=�L�F*5�*�B�*5Fa� =�>��!�=�L�F*� �*�QFJMJJP:� ��� ���=�L�*5�*

�B�*5F� ��� = >� �!=��L�F*�QFJ�� : �� �� Z��

��"6� � �� ������������ � ���� JS.� �1 ��

����1� ���� Z� .� =�>� �� �*5�� 1��� �� �������"��a�=�>��� �*� ���� �"� ����= >��� �*�B�*5F�1��� �������� ������������ � �����1��B�*5F�

�� ���� $ " �� � 5� �� � �Q �� � �Q

"��� �� �*� �� �� �"� ���� = >� �� �*�B�*5F� 1��� �������� ������������ � ���� �1�

�B�*5F� ��� ���� $� " � �� �*5�+� �� �*�QFJ+� �� �*�QFL+� �� �*� �� ��� �� �*�B�*5F�

������"�� ������� �� ��� ����� �� ����1� � � ��� � .�� ����� � 3����� ��Z� .�

������� ���� ��

Page 121: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJG��

.�5��������������Z����������*1��������� � ���� �����1� .�������

�������1� .���� ��+� .������� ������������* �������5�* �����B�*5F�=*�

���!* ������� ����� �1������������NFS���.�Z�� .���� ���������� �� ���� .��

���� ��� ��� ,.� 1���� ��� .� ��� ����� � 1����� Z�� � � Z� .� ��� �� �*5��

����1��� �� �"� � Z.�� 3����� ��� 5BE*JPL� ����� (������ NFS�)�� ���� � �1�

����1� ���� ����� ����� �� �1� ���� �B�*5F� 3�������� �� ���� ��� ������� .�

����� � �1� .� !* ������� ��� ������� ������+� .� � ��� ��� ��� ���� �1� .� !*

��������� ��Z�����Z� ��.��.����

�6�6�������+,�32( �#5+���?����2�7:���3�����8�*(+,

����� ������� .��� ���� �����B�*5F��������"���1� .��"��1���� � .� �

���Y�� .�N5��������%�+������������� .�������������� �����1�Z.��.������������

"� ������� � ��� �� ��� ��� "������� '� �� ���� +� �B�*5F� .��+� ��� � �� !* �������

�����+� �� ����*������� �1� .� � � ��� ����� � �.���� ������� �� ��Z� .� .��� N�%*

��Y��������1� .�N5*N.��B���(������NFK+��" ����1�����������7� .���+�JGFL)��

,.��+� �Y������������� � .��������������� ��1� .�����*�����������" Z��

.���"����1��B�*5F���"1���� �Z�1��� �. �� .��$� .� � .���������Z����"�

�� HN5*��YI������� .����.�Z.��.� .�N.��B����1� .��� ��"1���� �Z���� �� ��� �

Z� .������ ������

�+:723 ��-6 B3�������� �1�

�� ��* ���� 1���� ��� .+�=*����

!* ������� ����� � 1����� �1�

�B�*5F� =�> !�� ���� �1� .�

�11�� � 1����� �1� �B�*5F�� 1����

��� .�(F*PVX����)+�=* �������(F*

KRF� ���)+� ��� !* ������� (KRJ� ��

PVX����)��=�>: �� ��1������� ����

5BE*JPL� ����� ��� �����

3�������� .� �11�� ��

���� ��� �� �1� �B�*5F� Z��

��"6� � ��Z� ���"�� ����� ����

Z� .� �� �*5�� �� �"� ��

B3����� �� Z�� ��� � � �

��� � .�� ���� Z� .� ��������

���� ���

Page 122: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJF��

,.� �"��� � �1� .� 5�*�B�*5F� ����� � 1����� (������ NFS)� �� "��� �QFJ�

Z��� ���� ��� �" ���*������������ � ����3����� ���5�* �����B�*5F�1����

��� .� (�:)+� *= +� ��� *! � ����� � 1����� Z�� ������ � � ����1� � ����� ���

�� .�� Z� .� �QFJMJLF:+� ��� ������������ � � ������ �� ����������� �� �*5��

"�*1��� �� �"� �� ,.� ���� �� �.�Z� .� � �QFJ� ��*������������ � � Z� .�

.� ������ ������� 1���� �1� �B�*5F+� Z.���� ��� ��*������������ � ���� Z���

�"����Z� .� .�!* ������� 1���� (������NFX)��,.�=* ������� ����� � 1����

��� ����� .� �5*�5� ������+� Z.��.� ���1�� � �� �� �� ��� �� ��� � �Z���� N.����

������� �1� �QFJ� �� ������� �� ��� �1� .� N5� ������ �1� N5*N.��B��� .��� "��

��� � � ����� � 1��� � .��N.��B��� (!.����� ���+� JGGKa� %�$�Y�+� ,���� �+���� ���+�

JGGP)��

�+:723 ��!6 %����� ������� � " Z�� .� N5� ������� �1� N5*N.��B��� ��� ����

1���� � ��� ��"��� �1� .� �B�*5F� 1���� � ������ ����� ��� ������ "��� ���

������� ������������� �� .�!��� �����.������"�3������ .�������� � ����� �

.� ������$� ���� �1� .����� ��� .� ������� � "��� ��� �� � ��� � ��� ����� ����Y� "����

���� .� ������� � ����� � .� ��� �1� ������� ���� � � ��.� ����1��� ���� �����

=��"�������� � .�� �� �������1� .�N5*��Y���������� .���������� ������

����� ��FFK*��Y�1�����B�*5F*��Y���������O" ����1���� .�����1�������7���

Page 123: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJJ��

5��+�Z��3 ����� ��� � .��"��� ��1� .��5*�5���������1��B�*5F� ��

�� ��� � Z� .� �QFJ�� ���� .� � ������� ��� .�� ����� � �� �� � Z��� �" ����

� ���$���� .�������������� �� � ��������"�"1����,.��+����5*�5�5�* ����

���� ��� ��1�.������B�*5F�1��������������JLK� ��KRF���������� ��� �� ��1� .�

1������� .�5�*�B�*5F!KLN�Z����� ������ ��� ���*������������ � �������� ��

����������1����� � � ��� ��� ����QFJ���� ������5BE*JPL������(������NFR)��,.�

�B�*5F!KLN� �� �� � ����� � "��� �� ����� �"���� ��� Z��� �.�Z�� "1��� �� "�

�$ �� ����� ������� ��� (���Y�1��������+� JGGR)�� � ,.� 1�����NFR� �.�Z� .� �

�QFJ� ��*������������ � �Z� .�5�*�B�*5F(�5*�5)� ��� ��� 1�� +� .��� ����� �

1�����.�Z� ������� ������������ � ���� .��� .� 1���� ��� .���� ����O�� .�

� .�� .��+� 5�*� �B�*5F!KLN� ����� ��*������������ � � ���� 11���� � � Z� .�

�QFJ� .��� .� Z��� �� 1���� (������ NFR!)�� ' � ��� �����"�� .� � �B�*5F� .���

�� ���.�"� �� � ������� ��� 1���� ��� .� ��� ��+� Z.��.� ��� �"�� � ��� .� �5*�5�

���� ��� �� O�� .� � .�� .��� .� ������� ���� ������� �"���� Z���� "� ��.�"� �� ��

O�����+� ������������ � �������� �� �.�Z� .� � .��5*�5���������1��B�*5F�

�����11���� �1��� .�"������Z� .��QFJ��

�+:723 ��46 �QFJ� ������������ � ��

��� �Z� .� .�=* ��������1�5�*�B�*5F�

��� ������� .� �5� ��� �5� ��������

5BE*JPL� ����� Z�� ����1� � Z� .�

�11�� � ���"��� ���� �1� � �%N�

(��� ���� �� ��)� ��� �������� �������

�QFJMJLF:+� 5�*�B�*5F*! � ���5�*�B�*

5F*= �� ,Z� *1���� .����� �1 ��

����1� ���+� ����� Z�� � �� ���

������������ � � Z� .� �� �*5��

�� �"� � ������ �� ������� "����

'����������� � �� ��� � ��� � �� ��

Z�� ���� $� " � Z� ��� "�� � Z� .�

����1��� �� �"����� ��� �� �.�Z�� ���

����� � ��� �1� .�� ����� �

3����� ���

Page 124: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJL��

�6�6/ �3 +,�32( �+�, )3�533, ������ (,8 �?�� +# 3,�(, 38 7$�, �?��

( �+B(�+�,

,.� �QFJ� ��� ��� "���� �� � .�� N.��B��� ����� ��� ��� �� ��� ���� ��� � ��

�,�� 1�����,.�11� ��1������ ����� ��� ��������B�*5F� �� ��� ����Z������� $�

������������ � ����5�*�B�*5F�����������������"�����1����S*�(������NFV�)��

�+:723��C6,.��5*�5��������1��B�*5F������11���� � ����*'��Z� .��QFJ���=�>�5BE*JPL������ Z�� ����1� �Z� .� �11�� � ���"��� ����� �1� �������� ������� �QFJMJLF:+�

5�*�B�*5F+� 5�*�B�*5F*5�!KLN� ��� 5�*�B�*5F(�5*�5)�� ,Z� *1���� .����� �1 ��

����1� ���+� ����� Z�� � �� ��� .� �11�� � ���� ��� �� �1� 5�*�B�*5F� Z��

������������ � � Z� .� ��� �� �*5�� ������*���6��� � �� �"� ��

'����������� � �� ��� � ��� � �� �� Z�� ���� $� " � Z� ��� "�� � Z� .� ����1���

�� �"����� !�� ���� ���� �.�Z�� ����1� ���� Z� .� �� � �!�=�L�F� �� ���� =�>�N���� � ������ �����1� .��11�� ����� ��� ������= >�,.�"�� ��Z������ �1��

" �O��� +�������� ��Z��3������������ ������ ��� �� .�������" ����1���1���*

��� .��B�*5F��,.�����.��.�Z�������y�%�B����1�L������ ��3����� ���8�����

�����1���� � ��11�� �1����1���*��� .��B�*5F�������Y�Z� .����(��z�G�GK)���� .��

�� ���Y��(��z�G�GGK)��

Page 125: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJS��

���S*� ������� .� Uh�.���.� � �1� �,�+� 1���� � �� ��� ���� .� �Q� ��� ��� �������

������ ����� � ����������"��"���+� .��Z��������������1� .��QFJ�"����

���B�*5F�����������1����S*�(������NFV�)��

Page 126: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJK��

������+�Z� ���� ��� � .� �� ��� ����Z� .� .� ���� � � ��� � ���� ���

���*"���� �QFJ�JJV�� �� �� �� ����� ��� .+� !* ������� ��� =* ������� 1����� �1�

5�*�B�*5F� Z�� ������������ � � ��� ����� 3�������� �QFJMJLF:� ���

�QFJ�JJV�� �� �� �� (������ NFV!)�� ,.� ���� �� �.�Z� .� � �QFJMJLF:� ��*

������������ � �Z� .� 1���� ��� .� ��� =* ������� ���� ��� � �1� �B�*5F+� ���Z�

.�� ��� "1��+� Z.���� �QFJ�JJV��Z��� ���"�� �� ��*������������ � � Z� .�

.��11�� ����� ��� ���1��B�*5F��!���� ��� +�� �����1�����NFV������ � .� � .�

�� ��� ����� � ��1��QFJ��������� �� �1��� .��� ��� ����Z� .��B�*5F���

N�� � +� � � .��� "�� ����"� N.��B�*�������� �QFJ� �� �� �� (� �*�

�QFJMJJP:(BBB)� ���� �*�QFJMJJP:(��))� .� � 1���� �� �� ��� �Z� .� .� Z���

Y��Z�� �QFJWFL*�� ��� � N.��B�� :�N�� ��� �FFKN.��B�� (N� �.�� ��� ���+� JGFL)��

,.���.��B�*5F���� �� � .��� ��N5� ������ � � � ���� ���� "� �����"�� .� � �B�*5F�

"���� �� �QFJ� " � �� �������� ��.������ ��� .� N5*N.��B���� 5BE*JPL� ����� Z��

����1� �Z� .�� �*�QFJMJJP:+�� �*�QFJMJJP:(BBB)+�� �*�QFJMJJP:(��)����

.��11�� ����� ��� ���1�5�*�B�*5F�Z�������������� � �(������NFP)�����

���� "� �"���� ��� .� 1����� "� .��� �� �� �1� �QFJ� ��*������������ � �Z� .�

1������� .����=* ������� ����� �1�����1��B�*5F������ ���� .� � .��� � �����

�1��QFJ� .� ��11� �N5*N.��B��"����������� ���11���� � �� ���� .��� ��� ����

Z� .��B�*5F��,.��+� .��� ������� � .� � .���.�������1��� ��� ����" Z��

�B�*5F�����QFJ�����11�� �1���� .�� �"���.���.������Z� .� .�Y��Z��N5*

N.��B���:�N������FFKN.��B����� �����

�+:723��E6!�*'���1��QFJ�Z� .��B�*5F*5������.����������� ��� ����=�>�QFJ����

�B�*5F*5��3��������5BE*JPL������Z�������������� � �Z� .��� �*5�*�������

����������������"�����1�K����=�!�����L������!�L��'����������� � �����Z.���

����� �� ��Z��������" �%�%*���B����������"�� �Z� .��� �*�B�*5F������ �*

�QFJ��� �"�����!�� ���������.�Z�� ����1� ����Z� .�� �%N��� ����,.�"�� ��Z��

���� �1��" �O��� +�������� ��Z��3������������ ����1���*������������ � �

�QFJ���� ��� �������������� � ��B�*5F��=�>�M��� �1��� �����1��QFJ�"���� ���B�*

5F��,.�����.��.�Z�������y�%�B����1� .������� ��3����� ���= >5�*�B�*5F+�5�*�B�*5F*! +�5�*�B�*5F*= +��QFJMJLF:�����QFJ�JJV��3��������5BEJPL������

Z�� � �+� ��"6� � �� ������������ � ���� ������ �� �*5�� ������� "��� ���

���� $�" �%�%*���B����� ����Z�� � �Z� .� .������ ���� ���������� �� ���

�1� .������� �3����� ��Z� .������������� ��

Page 127: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJX��

�6��?��*38+(�3#������( �+B(�+�,

,�Y�� �� .�+� .����� ���" ���� ������Z������ � .� ��QFJ���� �����*

������������ � �� ����1����� � Z� .� �B�*5F+� Z.��.� ����� "� ��� ����� ���� �1� ��

�����"����� ��� ��� �����\������ ����� .� � .������������ �� �1��� .���

����"� � ��� ���� � � � .�=* ������� ������Z.�� .��5*�5������� ��� 1���+�

������� .� � .��5*�5������������"���11���� �1��� .��� ��� �����' ����Z���

� �"���.� .���� ������1��FJ���"1���� ���� .�� ����� �����1� .��� ��������B��

�� ��� ��1� .�� .��N5*N.��B������ ���+������� ��N.����� ��� ���+������� ���+�

����� ���� .��� ��� �����1� .�N.��,������ ��� � �Z���� .��Q���"��� ���,.��+�

Z����� ��3������� �� .�"���.���������1��� �������.���� ��$� ���� .� ��QFJ�

3� �������B�*5F������ .����� ��� �����

�+:723��%6�� �� ���1��QFJ������������� � �Z� .�1������� .���� .�=* ��������1�

�B�*5F*5��� 5BE*JPL� ����� Z�� ����1� � Z� .� �11�� � ���"��� ���� �1� � �%N�

(��� ���� �� ��)� ��� �������� ������� � �*�QFJMJJP:+� � �*�QFJMJJP:(BBB)+� � �*

�QFJMJJP:(��)+� 5�*�B�*5F+� 5�*�B�*5F*! � ��� 5�*�B�*5F*= �� ,Z� *1���� .�����

�1 �� ����1� ���+� ����� Z�� � �� ��� .� �11�� � ���� ��� �� �1� 5�*�B�*5F� Z��

������������ � �Z� .��� �*5�*��������'����������� � ����� � ���� �� ��Z��

���� $� " �Z� ��� "�� �Z� .� ����1��� �� �"����� ��� �� �.�Z�� ��� ����� � ����1�

.������� �3����� ��������Y�����Z������� �1������� .�(�:)+�!* �������(! )�

���=* �������(= )�1������1�5�*�B�*5F��

Page 128: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJR��

�6�6��?��3,�(, 3#���( �+B+�;�9������

,.���� ������1��QFJ��������� ������ ��������B���� ��� �����1��B�*5F�Z���

������" � .��"��� ��1��B�*5F� ��"���N.���" �����11��� ������� � �������� +����

����"� �������� � (����#�*�� �� ��� ���+� JGGX)�� ,.��� ���� � �Y�� ���� ��� �1� ��

9����� �� 1�9��� �� �N.���FR�+�Z.��.�.���.��.��11��� � 1����� ����B����,.�

�� � ���� (�FR�)� ����� .� ��� ��� ���"�� �� "��� ���� ��� �,�� ��� .��� � � �

������� .��� ���� �� � � .� ����"���� �� .��B�������%,* ������������1�

.����� �� ���� ���Z���3������������1��1��������� +�"���� ����� � .���*

%�.����� "��� ��� ��� �� ����*�Z�� �� ��� �B��� 1���� ���� � �� ��� 5BE*JPL�

����� Z�� ����1� � Z� .� 5�* ���� �B�*5F� ��� ������ ��� �"���� �1�

���� � � ��� � �� ��� �QFJ� ��� Z.��� ���� � �� �� Z�� ��"6� � �� ����*�Z��

���� �� ����*�Z�� Z� .� �%,*N.���FR�� "��� ��� ������� ��� N.��B�� 3��������

���� � ��� ��� �B�*5F� ������ � ���� (������ NJG)�� ,.� �%,*N.���FR�� ��� ���

��� ��������B�*5F�1���� .���� ��������� �� �+�Z.��.������"��� �����B�*

5F�"������� ��� ��=� �"� +� .������ ��1��� ����B�*5F�Z��������������������*

����1� � Z� .� .� �� ��� �QFJ� ��"��� �� ,.� � ��� ���� � �� �� �.�Z� ��������

����� ���1��B�*5F���� .���� ������� .���* ����1� �������+������ ���� .� �

.�3���������1��QFJ���� ������� ��� ���B�*5F��������� .����� ������� .�

���� � Z��� ������ ,.� ����� �1� �B�*5F� ��� .� ����*�Z�� ��� .� � �� �� Z��

���� �1�� " � ��� �� � � (O �� � � � �)�� ,.� ����� � �1� �� ��� �B�*5F� ���

��.� ������ Z��� �������$� �� .� ������������ � ��� �B�*5F� ���� � � � .�

� �� �+� ��� .�� ��Z��3�������� 1��� ������� �������Z� .� .� ��� ����

�Y�������� ��'�� .������� �3����� �+�Z�1������������ � ��������

��� �B�*5F� ������ � � Z� .� �%,*N.���FR�� 1����Z���� �QFJMJLF:� 3���������

,.�� ���� �� ���� �� � .� � ���� � � ��� � �� ��� �QFJ� ��� ��� ����� ���

������� �1� �B�*5F� ����"�� �1� ������� ���� Z� .� N.���FR�+� ���"�"� � �1�� ����

�� ��� �����1��B�*5F��

Page 129: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJV��

�6�6�������*38+(�3##+:,('#92�*�?�������( �+B(�+�,

\� .��� 1���� .� � �.���� �B�*5F� �� ��� ���� ������� .����.� .�

�� ��� ����Z� .��QFJ��,.��+������3 �����Z��� ��������"���.������������1�

.�1��� �����������1��B�*5F�����QFJ������������� .Z� ����� .�� ������ �� �

.� �� ��� �����1�N.���" �. �� ������������ ���� ���N.��B��� ��� .� ����� �

������� ���1� .�%NB*����1������ ��� � (%�$�Y��������+�JGGL)��,.���� .�� ���

"��� ��� .� ������� � �1� .� ����� ������� 1�� ��� (%N�)*��� �

�������� ������ �� ��� ���� �1� �� ����1���� ���� �� ��� ��� ����� " � .�

�������� ����������� �� ���� �%NB�:������ .� �������+�1������� .�5�*�B�*5F�

Z��� 3����� ��� �� �����"�� ���� ���� .� � � �"� � 3������ �QFJMJLF:+� ,NBD*

J,(�QFJMJLF:)�5BE*JPL�������'�� .�,*NBD[�� � �� .�3���������1� .�����1�

�� �� ������������� .��"�����1� .����� ��+���� .������� ��� ����+�������

�����Z.�� ��� �����Z��� �� �� .������ %�+�Z� ���� 3����� .��QFJ�

���� ��� ����� ���� ����� �������� .� �3��� 11� �� ���� " � ���� ���

3���������1��QFJ�� !����Z�� ����������������. ��������� ��"� ���� �

1��� %N�� �� ��� ���� ��� ���� �� ��Z�� .� ����� �1� N.�� �� ��� �� B3�������� �1�

�+:723 ��"6 ����*�Z�� �1� �� ��� � �B�*5F� Z� .� N.���FR�� ��� �.���� " � �QFJ��

�� ��� �B�*5F� Z��� ��� ��� 1���� 5BE*JPL� ����� 3�������� �B�*5F*5�� ���

�QFJMJLF:��������%,*N.���FR��1��������� ��������� ����� � .����%�.�����S���

��� ��� "���� �� .�Z��.� "���Z��� ���� $� " � %�%*���B� ��� ������"�� �

Z� .��� �*�B�*5F������ �*�QFJ��� �"������B�*5F�����*�Z��Z���3��������1���

������� 1���� �B�*5F� ���� � � � .� � �� ��� �� �� �.�Z�� ��� 1���� ��� 3����� �

����� � ����1� .������� �3����� ��Z� .������������� ����

Page 130: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FJP��

�QFJMJLF:��������� �������3��� � �J*1�����������1�"�����%N���� ��� +����Z�

3�� � ������QFJ�Z��� 3����� ��� .� ���� � � ��� �� ��� 1�����1� .���� ���

(������ NJF)� ��� 3�������� �1� 5�*�B�*5F� �.�Z� J�K*1��� �������� 5�Z��+�

Z.�� �B�*5F�Z��� ��*3�����Z� .� �QFJMJLF:� �����Y� �.����� � �1� %N��

�� ��� ����Z����"�����,.������ ������� � .��������� ��1��B�*5F���� .�

������������ .Z� ��1��QFJ� ��N.����� ��� �����

�6/�3:7'(�+�,�9������

,.����� ���� .���� ��� .������� ��������� �����������1����B�*5F�

���"�������Z�� ����11� ����1��QFJ���� .� � .��5*�5���������1��B�*5F����

��11���� �1��� .��� ��� ������,��" ������ ��� .������������.������ .� �

������� .��� ��� ����" Z���QFJ�����B�*5F�Z�1�������� .�11� � .� �

�QFJ������3� ���� .������ �����1��B�*5F��

�+:723���6%NB*����1���� 3�������� �����" ��B�*5F� ���,NBD*J,(�QFJMJLF:)�

�����"�� ������ �� � �"�� ���� ���� Z� .� �����"�� 3�������� �1� �QFJ� Z��� �� � ���

�������������"�����1� ��� �����1���S�.����� ���QFJ�3���������!����Z����*

����1� � Z� .� 5�*�B�*5F+� �%NB*:� �� � ��� ,E*N������� !�� ���� ���� �.�Z��

����1� ����Z� .�� �%N��%�3�.������1 �� ����1� ���+������Z������*� ����1���

FX�.�������� ��� �����Z�����1���S�.����� ���QFJ����3���������N.���� ��� �

Z��� ������ " � �������� ���� 1���� .� %NB*����1���� ���� ��� �� �� Z���

�������$� 1��� ��� ��� 3�������� ��� N������ �� ��� � ��� � �� ��� ,.� ����.� �.�Z��

����� y� %�B��� �1� L� ����� �� 3����� ��� 8����� �����1���� � � �11�� � ���

���Y�Z� .� Z���� ���Y��(��z�G�GK)����

Page 131: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLG��

�6/6��?��$2�*��3#��323'3(#3�9������92�**+ 2��7)7'3#

�B�*5F���� .�������N.��B�� .� ����"������������ �" ������ �"����

(���Y�1��������+�JGGV)+� ��FPGN.��B�� � ��������"������������ �"����"� � ����� �

����� �" � .����\����� ��� �1�� .��Z. .���QFJ������ �� .��� ��� ����

" Z���B�*5F��������� �"��������������������� .� ��������Z���1����

����� �"�����*���� � �������� � ��������3��������5�*�B�*5F���������Z� .�

.� ���� � � ��� � �� ��� 1���� �1� �QFJ�� !�*���� � ���� �1� �B�*5F� ��� .�

����� �"��*��� ������� ��� � Z��� �� ���1�� ��� .� ������ �1� ����� �3�+� ��

����� �"��*� �"���$���� ��� �� ��� ���� "� �"���� ��� 1����� NJJ� .� ��� ���

����� ��1��B�*5F�������� �Z� .������ �"����Z��������1���� � ������Z.��

�QFJMJLF:� Z��� ���� �� '�� .��� ���� +� .� � ��� ����� � �1� ����� �"����

���� �(� �"���$������ �"���)�Z��� .������������������+������ ���� .� �

.� ����� � �1� �B�*5F� "���� ������� �"����Z��� ����� ��� .� ������ �1�

�QFJMJLF:�� ,.�� ���� �� ����� � .� � �QFJ� ����� �� �B�*5F*����� �"���

������� ���+����1�� .������� ��� �����1� .�N.��B���

Page 132: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLF��

�6/6���*���'+:�*32+D(�+�,�9������

N�� ������� ����� � .� � .���"����1� .�N5*N.��B�� 1���� �����

1���� ��������� .����.� .��� !* ������� ������� ��� .����+� ��bN.��B�� ���

:�N�� ���� 1���� . ����������� �����3�+� Z.���� �FFKN.��B�� ��� � ����

������� �� Z� .� � ��1�� ���� � �1� .� 1�� � .� � .� !* ������� ������ .��� �� �

� �"�� 11� � ��� .� �� �� ��� �� ��� � �1� .� N.��B��+� � ���� �1� .� !*

����������� � ������ ��������1� .����B���� ��� ��,.�����������$� ���� �Y��

����� .����.� .� !* ������� ������ �1� .� N.��B��� ��� � � ��� Y��Z�� �� .��� ���

��.�"� �� �����(!.�Y����������+�JGGSa������� �������+�JGGK)��,.�1���Z�����. � ��

����� Z. .�� �B�*5F� ���� ��������$� ��� .�Z� �QFJ� ����� �11� � .���

��������$� ����� ,�� .��� �+� ����� Z�� ����1� � Z� .� �B�*5F*���� ��� 1����

��� .+� !* ������� ���=* ������� ����� � 1����� �1�5�*�B�*5F� ��� ������ ���

�"���� �1� �QFJMJLF:� (������ NJL)�� ��� ����� �� +� ��*������������ � ���� �1�

�B�*5F*���� Z��� �"���� Z� .� ��.� ���� ��� � �1� 5�*�B�*5F� � �� � %���� !*

������� 1���� Z��� .� .��.� � 3����+� ���� �B�*5F*���� Z��� ��*

������������ � ������ � .�1�� � .� � .�3��������������1� .�=* �������

1�������1������� .���� ���Z������+� .��Z�������� ��������B�*5F*������*

������������ � � Z� .� .� =* ������� ���� ��� �� O�� .� � .�� .��+� .�

�������1� .����� � � ��� ��� ����QFJ��� ����� ���11� � .���������$� �����1�

.��������3�.����1�� �����,�Y�� �� .�� .������ ������� � .� ��B�*5F�����

1������������������ "���� .���"����1� .�N5*N.��B����"1���� +� .����.�

� �� !* ������� ������Z.���B�*5F�.��� �� ����*������� �1�� ��� .�� 3����� ��

�.���� "� ��� ��� ���� �� ���� ���� Z. .�� .��� .���*��������$� ���� ���

�+:723���6B11� ���1��QFJMJLF:���� .�������� �����1��B�*5F�Z� .������ �"�����=�>�5BE*JPL� �����Z�� ����1� �Z� .� ���"��� ����� �1� �������� �������5�*�B�*5F�

��� �QFJMJLF:� ��� JS.� �1 �� ����1� ���� ����� Z�� ��"6� � �� ����� �"��� ��*

���� � �������� ������� �"������ ��������� �1��� �����Z������ $�" �Z� ���

"�� � Z� .� ����1��� �� �"����� =�>� ,.� ����� �� �1� ����� �"��*������� � �B�*5F�

��� ��� �� .��� �1� T* �"����� Z�� ���� �1�� Z� .� O �� -�� ��1 Z��� ��� Z��

�������$� �� �B�*5F� 3�������� ��� ���� �� �� �� �.�Z�� ��� 1���� ��� 3����� �

����� � ����1� .������� �3����� ��Z� .������������� ���

Page 133: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLJ��

�11� ���� .��� �� ����� ��� ��1��B�*5F��=�� .���+��QFJ������ ���� ����� �

�������� �� �����1��� .��������"����.�������1������ �����1��B�*5F���

�6/6/�,�32( �+�,�9������5+���-�/�/

�B�*5F�.���"���.�Z�� ��.������������ ������ ����" ��.���.�� �� ����

(b�Y�������+�JGGSa�!����Z�������+�JGGKa����Y�1��������+�JGGRa���6��.����������+�JGGVa�

�����������+�JGGPa�i���.��.��������+�JGFF)��%�����Y�����+� �����������������W�+�

�E�+� �����YF�.���"�� �.�Z�� ���.���.�� �� ��B�*5F���� %�VVK� ��� ���� ��

.��.� �11��� *"������ �� � 1��� FS*L*L� ��� ����� %���� �11�� � Y������ ����

�.���.�� �� � .���������� � � ��� .���. � .� � ����� ����� ���� ���* �������

�������� FS*L*L� ��� ���� ��� ��� ���� .� � ������ � �� � ��� ����+� Z.�� ��.�

�������.�����"�������� �1��� .������+���� .��� ��� ����Z� .�FS*L*L���� ����

����� � ��� ��� � .����.� �.���.�� �� � ����� ��� .������ ������

�+:723��/6�����$� �����1��B�*5F��5BE*JPL������Z�� ������ � � ����1� �Z� .�

�11�� � ���"��� ����� �1� �������� ������� �QFJMJLF:+� B���*�B�*5F+� 5�*�B�*5F+�

5�*�B�*5F*5�*! ����5�*�B�*5F*= ��,Z� *1����.������1 �� ����1� ���������Z��

� ����� .��11�� ����� ��� ���1�5�*�B�*5F������������� � �Z� .������ �*5��

������*���6��� ��� �"� �� '����������� � ����� � ��� � �� ��Z������ $�" �

Z� ���"�� �Z� .�����1����� �"�����!�� ���� �����.�Z�� ����1� ����Z� .�� �%N��

�� ���������� � ����1�� ���� � .������� �3����� ���

Page 134: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLL��

(������ �������.�+� JGGS)��=� ����.� ���Y��Z���"�� � .� �����1�������1� .�

�� ��� ����" Z���B�*5F����FS*L*L���� ������' �.���"������� � ��.�����

��� ��� ����� �� � ���� ����� � �� "������ ��� ������� � Z� .� �� ����� ��� �B��

�� ��� � �1� �B�*5F�� =�� .���+� .� 11� � �1� Y������ ��� �B�*5F� �� ��� � ���

1��� ����.���"����������� �" ������ ����� �� �� �(E����������+�JGGJa�

���Y�1�� ��� ���+� JGGRa� ����� ��� ���+� JGGP)�� ,.�" � Z� Z���� Z. .�� .�

�� ��� ���� �1� �B�*5F�Z� .� FS*L*L� ��� ���� ����� "� �11� � " � .� ������ �1�

�QFJ�� ���� .� � ������+� ����� Z�� ����1� � Z� .� ���"��� ����� �1� �QFJMJLF:+�

5�*�B�*5F+�5�*�B�*5F*! +�5�*�B�*5F*= +����FS*L*L�U���� .��11�� �� ����

���� ��� �����1������� .��B�*5F�Z�������������� � �(������NJS)����������

"� �"���+� FS*L*L� U� ��� � ��*������������ � �� Z� .� �B�*5F� ��� ������ �1�

�QFJMJLF:� (������ NJS�)� ��� Z��� ��� Z� .� 5�*�B�*5F*! +� Z.���� ��� ��*

������������ � ���� Z��� �"���� Z� .� .� =* ������� 1���� �1� �B�*5F�� ,.��

���� ������������� �Z� .�� �� .� ��.�Z�� .� ��B�*5F�"���� ��FS*L*L� .����.�

� ��!* �������������(b�Y�������+�JGGSa������������+�JGGP)��'� �� ���� +�Z.�� .�

��*������������ � ���� 3����� �� Z�� ��� ��� �"���� �1� �.���.� ���

��.�"� ���� �� ����� ��� ���� �1� .� ��*������������ � � FS*L*L� ���� "� �� �

Z� .� .�1������� .���� .�!* ���������� ��1��B�*5F�(������NJS�)���

O��� ���� ���.�Z� .� ��QFJ��.����� .� �� ��� ����" Z���B�*5F����

FS*L*L+� Z.��.� ��� �������� � � Z� .� �� ���� .� � ����� �� �� ���� 1��� �QFJ� ��� ��

���� �������� ������FS*L*L��������� �������� ��� 1����B�*5F�����3����� ����

1��� .��� �������� � ����� "� .� 1�� � .� � .� � ���� ��� �� ��� ��Z� �� �� �

����������.���1���� ���� �������1 � .������ ������.�������1��B�*5F���

Page 135: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLS��

�+:723��-6�?��3,�(, 3#��3+,�32( �+�,)3�533,�-�/�/(,8������65BE*JPL������ Z�� ����1� � Z� .� �11�� � ���"��� ����� �1� � �%N� (��� ���� �� ��)� ���

����������������QFJMJLF:+�����*FS*L*L�U+�5�*�B�*5F+�5�*�B�*5F*! ����5�*�B�*

5F*= � ��� =�>� ��� �QFJMJLF:+� ����*FS*L*L� U+� 5�*�B�*5F� ��� 5�*�B�*5F*! � ��� =�>��,Z� *1���� .����� �1 �� ����1� ���+� ����� Z�� � �� ��� ������������ � �Z� .�

�� �*5���� �"� ������� ���������"����'����������� � ����� � ���� �� ��Z��

���� $�" �Z� ���"�� �Z� .�����1����� �"�����'��=�>������Z��� �����N'���"�11��

��� �"���� �1� �.���.� ���� ��.�"� ���� (=�L8OS+� =��� ��� B�,�)�� ��� �� �.�Z�� ���

����� � ����1� .������� �3����� ���

Page 136: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLK��

�6/6- ���#$��2;'(�+�, �, �EE! (,8 �%!% �9 ������ 8�3# ,�� (993 � ��3

+,�32( �+�,5+���?��

'������ ��" ������ ��� .���.�������1� �� ��� ����" Z���B�*

5F�����QFJ�Z�����. � �� �����Z. .���.���.�� �� ���������"������ �� �

1��� .� �� ��� ����� ,.��+�Z� ��Y� ���� ��� �1� Z�� �.���.�� �� ������ �� �� �1�

�B�*5F�� �� �.���.�� �� ���*1���� � �� �� +� �B�*5F%VVKWPKP�+� ��� ��

�.���.���� ��� �� �� +� �B�*5F%VVKWPKP��� ' � .��� "�� �.�Z�� .� � .��

������ ��� �.���.�� �� � ������ �� ������ !���� Z�� ����1� � Z� .� "� .�

�� �� �� ��� .� Z��� �� 1���� �1� ���* ���� �B�*5F� ����� ��� ��� ������ �1�

�QFJMJLF:� (������ NJK)�� ,�Y���� �� .�� ���� .� ���� �� �" ���� ��� �11�� �

3����� � �QFJ� ��*������������ � � Z� .� "� .� �� �� �+� �B�*5F%VVKWPKP��

����B�*5F%VVKWPKP�+�Z� .�����11���� �������Z� .� .�Z��� �� 1�����1�

�B�*5F���� .���.�� �.���"���.�Z�� .� � .��������Z���.���.�� �� ����

���� ������� ��,������������N.���������� � ������ 3 +�� ������ ������Z. .��

�.���.�� �� �����������.�"� ��B���� ��� ��1� .�3�.����1�� ����=�� .���+� .�

�� ��� �����1��QFJ�Z� .��B�*5F������ ��11� �" � .��.���.�� �� ����� � ��1� .�

������%VVK����%PKP��1��B�*5F����

Page 137: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLX��

/6�7) 3''7'(2'� ('+D(�+�,�9������

/6������� �'� ('+D3#5+����3��':+($$(2(�7#+,��� 3''#

'������ �� �.���� ��$� .� ��"�������� ������$� �����1��B�*5F+�Z� � �� �

" ��������$�������������B�*5F�����B������������ ��.����!������� +��� �*�B�*

5F�� ����� � .�������������������������� ����������� ��������� ���Z���

���� ����"� .����� ���(������NJX)���

,����� ���� .�����1��� ��1� .��� �"� +�Z���� ���������B�*5F�" �

�.�� � .������*�� �1�����N=�� (�.N=�)�� ���� �11�� � �.N=�� ������� ��� �

������ � .��������������1� .�������N5�J����(���� ���������� .��)�

�+:723��46�B�*5F����� ���������������� ��� ����B��� !��1��������������.���1�

�B�� ����� ��������"�� Z� .� �� �*�B�*5F� (�"���)� (�)� ��� ���� � Z� .�

�����������Z� .����'�("��)��'������.�Z���������� � ����1� .���6��� ��1� .�

����� ��� .���� ��O�������� ���1����� ����� �� �� ����.�Z�� ��� .����������.���%����

"�����FG�s���

�+:723 ��!6 =�>� �B�*5F� �.���.�� �� ���� �� �� �� ��*������������ � � Z� .� �QFJ�

5BE*JPL� ����� Z�� ��* ����1� � Z� .� �!�8K*B���*�B�*5F+� �!�8K*B���*�B�*

5F%VVKWPKP�+� �!�8K*B���*�B�*5F%VVKWPKP�+����=�L�F*�QFJMJLF:�����!�=�L�F*

� �%N�� ,Z� *1���� .����� �1 �� ����1� ���� ����� Z�� � �� ��� ��"6� � ��

������������ � ���� ������ �� �*���� �� �"� �� '����������� � �� ��� Z.��� ����

� �� ��Z������ $�" �%�%*���B+���� ������"�� �Z� .��� �*��������� �*�QFJ�

�� �"������� ���������� �� ����1� .������� �3����� ��Z� .������������� ���

Page 138: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLR��

���Z�������������"����� ����(�.%��F)�Z�������1 �� �� ���������1� �����B��

�����Z����� �Z� .������ �������Z.������� � �� ��Z�� ���� �����%�%*

���B�����,.�Z� ���"�� ����� �����1� .���� �� ��Z� .������ �*�B�*5F��� �"� �

�.�Z� .� � Z���.N=�+������K����V+������ .���� ��������(������NJR�)��

!����X����R�.������� ���� ��������������B�*5F�3���������������������

P� ���� � �������� �B�*5F� 3�������� ��� .� ��� ����� ,.�+� ������� ����� �1�

�������� �B�*5F� Z��� ��1���� ��� ��� ���� (�.%��F)� ��� � �"�� �B�*5F*

�� � (�.K� ��� �.V)� �B�� ����� (������ NJR�)�� �.�B�*5F*�B�� ����� ��� � .�

����1�������������� ������+�Z.��.����"� .�����1��� ��1� .��� �"� ����������

� ����� �� �� .� ��B�*5F� ��� ���� �� � .������������.� ����Z������ ��� .�

������"������

,.� ���������� � ������� �1� �B�*5F� Z��� 1�� .�� 3����� ������ ��������

��"����������� ������Y����N�"FF������ ��� ������� ��� ������� ������� +�Z���

�+:723 ��C6,�������� ������ ��������� �1� �B�*5F� " � �.N=�� ������ ��� ��� �����Z� .� Z�� �11�� � ��� � ���������B��Z��� �� �����Z�� ��1� � " � �� �������

Z� .� 1����11�� ���������1� �.N=��(K� ��P)������� ��B�*5F������ ��� ���� �.N=��

(�.%��F)�� � =�>� : �� �� 1���� � �"�� �����"�� (�.%��F)� ��� �B�*5F� �.N=�*3��������

�B�������Z������� �" �������"�� ��������������� �*�B�*5F�(!���%��������)����

�� �*T* �"����� ��� ��� ���� (����� ����)�� M��� �1��� ���� �1� ��� ��� ���� Z��� ��� " �

O �� ���� .������1��B�*5F�3��������Z����������$�" �T* �"�������� �������

(��Z������)��=�>�,.� �������� ���������������Z�������� �" �������1�����������

!��1��������������.��1�� �"�������"������B�*5F��.*K�����.*V��B��1�3������Z��

� ���� 1����B�*5F�(�"���)��!����Z������ �Z� .���������������� ����������'��

%����"�����FG�s���

Page 139: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLV��

��� ��� �� ������ ������ ���Y�a� �������+� �� ��� ��� ������� ��� ��� ��*

����� ���� ����+�����������������Y����� ��a�N�"F+���������Y��1��� .�

�� ���� � ������ �� � ��� ���������� � ������� ������������� ''+� ��� ��

���������Y����B�� �����Z�� ������� ���� 1��� .� �"��*�� ���� ��� ����

��� 1��� �������� �B�*5F� (������ NJV)�� � N�"FF� ������$� ��� �� �� �.� ��� .�

���������������� .� ����������� �� .���� ����� ������������ �� ������

1Z�������� �� .����.�� � .�� ���������� .��� ���������"�����'�� .�������

�B�*5F� �.�Z� .� ���� � ������� �� ��� ��� N�"FF� Z� .� ��������$� ���� � � .�

���������� ��������� ��� .�� �� �� �� .� �� ���������"�����!������� �.�Z�

��������� ��� �11��� � ������� ��� �� ��+� ��� Z��� ��� ���������� � ������+� ���

��������$� ����Z� .��B�*5F�Z���1������� .������������������5�Z��+��� .��

N�"F���������������''���� ������������$�Z� .��B�*5F��,.������ ������� �

.� ��B�*5F�����������.������������������ ��11��Y�����

��

Page 140: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FLP��

,.��������� ��� �������������Y�+����������� ''+�����������11���

� ������� ��� � ������� �� ��� ��� � �1� .� ���������� ������ � ������� .� � Z�

3�� ������ .������������ ��" ������ ��� .����� ���"�����"���Z�

��� �� � � ��� .�� ������ ���Y�+� KVE� ��� ��� (1�������� ����1����

� ���������)� (������ NJP)�� '������ ������� �1� �������� �B�*5F� ��� KVE�

��� ����.�Z����������������$� ����" Z���B�*5F������"����� ��� ����

�1� .������������� ���(������NJP�)���

��1������(���)������1������� �"��� � .� ������������"��������"� �

�1� .������������3��� ���� �"������ Z��Y� .� �����"���"��� �� .�����������

� �������(E�������������+�FPPJ)������Z������ ������� � .�������� ��� ������

������KVE�����B�*5F�������$� ����Z���3������1 �� �� �� ��1� .������Z� .�

����� !���� Z�� ����� �� � Z� .� �����$��+� ��� �� �*��������� ��� +� Z.��.�

�� �1��� Z� .� .� ��� ���$� ���� �1� ����� �"����� � 5��.� ����� �� ����� �1�

�����$��� ���������� �"������ ���$� ����Z.���� � � ��Z� ����� �� �����

�����$��� �� ��� ������ ����� �"��� ������+� "� � ����� �"���� �� �� �

��� ���$� (>����� ��� ���+� FPPJa� 8����$� ��� ���+� FPPRa� ���6�Y�� ��� ���+� JGGJ)��

=����$��� �� �� � �� �� ��������$� ���� �1� �B�*5F� � � ������ ������ ��� (������

NJP�)�� ���� �� �� � ����� ������ ����"����� ��+� ������� � +� .� �B�*5F�

� �������� � .�����������������Z������ �(������NJP�)��'� �� ���� +������� .���

.���� � �Z�����"���.� .� ��B�*5F� ��� ������� ��������� ��11��Y���� .����.� .�

����� �����1� .���� ������3�� ����� .Z� ��(�� .�Y�������+�JGFJ)��,�Y���� .�

���� �� ���� �� .��Z� ���� ������� .� � �B�*5F� ������$�� � � ������ ������ ��� ���

�B���������� .�����"��������������$� ����Z����"���� �Z� .� .���������B�*5F�

1��� ������

�+:723 ��E6 %�"�������� �� ��"� ���� �1� �B�*5F� Z� .� N�"FF+� N�"F+� �������� ���

���������� ''�� �B�� ����� Z�� 1�3� ��� ��������"�� 1��� �������� �B�*5F�

(�"���)�(�)����N�"FF+�N�"F+����������������������''�(���)����3���������

�����1���������1� .������ ������,.�����Z����� .��������� ���������$� ����

Z� .��B�*5F��O�����������1������������ ������.�Z����� .����������.���%����"�����

FG�s���

Page 141: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSG��

/6��,�2( 3''7'(2'� ('+D(�+�,�9������+,�3�( 3''#

��� ������ �.���� ��$� ���� �1� .� �� ���������� �� ��"� ���� �1� 1���� ��� .�

�B�*5F� ���� �� � .� � � � ��� ������� � Z� .� ����� �"���� (E���� ��� ���+�

JGGJ)��,.�3���������1�5�* ���� 1���� ��� .���� ���������� 1��������� ��� ���

�.�Z�� ��� 1����� NLG+�Z.�� � � ��� �� � �� �"���� .� �.���� ��� ��� ����� �"���

������$� �����1� .���� ����,.���.�Z�.��� ���� ���� .� � .��� �"� ������� �

�B�*5F���"����� ������ ��B�*5F��������� �"������������ ��.����

�+:723��%�%�"���������� ��"� �����1����������B�*5F�����11�� ��������1��B��

������.�Z�� .� ��B�*5F�������$��Z� .����������Y����=�>�!��1��������������.���1��B��

������ ���������� ����������B�*5F�(�"���)�(�)����������KVE���� ���(���)��

��3���������������1�������1� .������=�>�B�������Z�� �� �Z� .�"�1������

(K� s�W��)� ��� �����$��� (FG� s�W��)� 1��� LG� ���� �+� 1�3� ��� ���"� ������ �

���������B�*5F����������KVE���� �����O�����������1������������ ������.�Z��

��� .����������.���%����"�����FG�s���

Page 142: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSF��

\� ����. � �� 1����Z� .� ������$� ���� �1� .� �������� �B�*5F� ��� ���

������ .��11�� �� �����1��� ����� ���5:�������(������NLF)���� � ��������Z� .�

.� �� �*�B�*5F� �� �"� � � ���� .��� � ��� ������� ����� ��� �� ���� �1��� ����+�

�B�*5F� Z��� .��������� � �� ��"� � .����.� .� � ������� ��� � ��.����

,.�+��������.����B�*5F�"���� ��"�������$�Z� .� .������������� ������ .�

��� ������ ����� " Z�� .� ���. �� ������ � '�� ��� � ���.��� �B�*5F� Z���

������$� � � �� ������� ��� ��$��� ��� 1����� +� ��� �� � ���.��+� �B�*5F�

��"��������*��Y�� ��� ��������������� .���$�����,.��� ������� .� �

�� 1��� ���� �1� �B�*5F� ������$�� �� .� ������ ������ ��� .����.�� � ���� � ���� �1�

�� �������������Z� .���������� ��(���Y�1��������+�JGGR)���

�+:723 �/"6 %�"�������� �� ��"� ���� �1� � .�� 5�*�B�*5F� ��� B���*�B�*5F� �.�Z�� ��

����� �"��� �� ��� ��� 5BE*JPL� ������ =�>� !��1����� ���������.�� �1� ����� ����1� �

Z� .� ���=�L*5�*�B�*5F�� � ,Z� *1���� .����� �1 �� ����1� ���� �����Z�� 1�3� ���

� ����Z� .� Z�� �11�� � �� �"���+� �� �*�B�*5F� (�"���)� (�)� ��� �� �*5�� (�)��

�� .��� �"�����.�Z����������� ����1������ ��������=�>�!��1��������������.���1������

����1� �Z� .��!�8K*B���*�B�*5F�� �,Z� *1����.����� �� �+������Z��1�3����

��������O���� ���1�b*� ��Y�����.�Z���'������������� � ����1� .���6��� ��1�

������%����"�����FG�s��

Page 143: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSJ��

/6/������+#'� (�38(���3*+8)�8;#�27 �723

����� ���� "1��+��B�*5F������ �� ������$�N.��� �� ��� ���� ������

� �Y���������� .���� �����1� .��� � ���Y��������������W�����!YFW! �������

(���Y�1��������+�JGGR)��,.������ ���������1���� �������Z.��.���� ����� ��� ��� ��

�B���� ��� � ��� .������ 3 ��,.��.���� ��$� �����1� .� �� ��� ����" Z���QFJ�

��� �B�*5F� �� ��� �� ������� �B�*5F� ��� �� ����� �Z�� ���� 11� ��� 1��� �QFJ�

����������� ����� .� 1�� � .� � �QFJ� ��� ��� ��� ���� � � � .� ��"� � ������

� �Y������ ��� .� � �B�*5F� ��� ������� ���� ��� ����� �� ��� ��� ������ �������

1����Z�����������Z��3 �����. � ���������$��B�*5F����� �Y��������

=3 +� Z� 3����� ��� ���� ���� .� �� ��"� ���� �1� �B�*5F� ������

� �Y�������!����Z��� ���������� ����������B�*5F�(������NLJ�)�������

���� "� �"���� �� ����*��Y� � ��� ���Z��� ���� � " Z�� Z��������� ����� ���

5:�� ��� FLJF=F� ������ :�YZ��+� 3�������� �1� ���*�B�*5F� 1������ ��� ��� ���

5BE*JPL������(������NLJ�)��.�Z� .� ����*�B�*5F�Z���������� � �������$�

�+:723�/�6��� ��"� �����1��B�*5F��������� ����� ���5:�� �������� ��.������5:��

����� Z�� 1�3� ��� ���"� ������ � �������� �B�*5F� Z� .� �� �*�B�*5F� (%�� ��

!��$)�(�)��!����Z������ �Z� .���������������� ����������'����3���������

�����1�� �������1� .� ���� ����� �� '�����Z�� �Y�� " � ���1�������������� ��

,.���������������� ��������������1������� ���%����"�����FG�s��

Page 144: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSL��

Z� .��� .��� ���������"����� � .���"� ���,.��� �����1���� .� ��B�*5F�

���������$�� � .���"� ��������'� �� ���� +� .���������$� ������������Z� .� .�

������$� ���� �1� �QFJ�� ' � ������� �� "� � �"���.� �1� ��� �"���� �1� �QFJ+� �B�*5F�

������$��� � .���"� ��

-6�,B�'B3*3,��9������+,�?��#+:,('+,:$(��5(;#

-6� �'� ('+D(�+�,�9�?��(,8������(���3*+8)�8;

����� .� 1�� � .� � ��"�������� �� ��"� ���� ���� ���� �1� �QFJ� ��� �B�*5F�

.����.� �� ����� ����� � .� � "� .� ��� ���� ��� ��� .� ���� � ��� ��� ������

� �Y�����+� Z� ��1���� ��"�� ������� ������� �1� �������� �B�*5F� ���

�QFJ�(������NLL)�

�+:723�/�6�B�*5F����������$�� � .���"� �� ��� ���������� �Y�������=�>�5:�������Z���� �� �Z� .������$���J.�"1��� .�1�3� ����Z� .�,!����� ��.�������

FLJF=F������Z��1�3�Z� .���*����� .������!��1��������������.���1���������"�

������ ����������B�*5F�(�"���)��=�>��B�*5F*����������� �� ���"� ��!��1�����

���������.�� �1� 5:�� ����� ����1� � Z� .� �!�8K*B���*�B�*5F+� JS.� �1 ��

����1� ���������Z��1�3�����������1���������1��������+�������� �Z� .�

���'�� ��3� ����� ��������1�� ������ �1� .� ���� ����� �� '����� �.�Z� �� ������

�� ���1������1�����������%����"�����FG�s��

Page 145: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSS��

�+:723�//6!�������$� ���� �1� �B�*5F�����QFJ� ������ � �Y������� �!��1�����

��������� � �������� �1� �� ��.�������

��!E� =�>� ��� � ��.������� 5:��

=�I >� ������ � � � ���� �1� �B�*5F� ����QFJ� Z��� ������ �� � ������ �� �*�B�*

5F�(%�� ��!��$�����*������"�������!)�

��� �� �*�QFJ� (�"���)+� ���� ��� ��

O�� ������ ���1����� ����� �� �� ���

�.�Z�� ��� .����������.���%����"�����

FG�s��

Page 146: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSK��

��� ���� "� �"���� �QFJ� Z��� ������� � � ������$� � � .� ����*��Y�

� ��� ��� .� � ���������� �� ��"� � Z.���� �B�*5F� � ������� Z��� ����

���� �"� ������Z�������� �������� �Z� .���"� �(������NLL)��'����!E������

.�������1��QFJ�Z�������������Z.�����B�*5F���"�����Z��������� ������

.� ��"� � (������ NLL�)�� !���� ��������$� ���� ���� "� �"����� O�� .� � .��

.��+�����������5:��������.�Z���.��.���QFJ���"� �� �������������B�*5F�

���������������� .�� ��� ����1��QFJ��,.�� ������Z�� �Y��Z� .� .�%�� �*

!��$��� �"� ������� ��B�*5F�(������NLL�W�)������ ����� ���$���� .��� �*�B�*5F�

�� �"� �1�����"����������.�Z����������������$� �����1��B�*5F�����QFJ����1�����

NLL!�� ,�Y�� �� .�� .�� � �� ����� � .� � �QFJ� ��� �B�*5F� ������$� � � .�

��"� � ������ � �Y������� ,.�1��+� � � ����� "� �����"�� .� � �QFJ� �� ��� ��

�B�*5F�������� �Y��������

-6�6����#$��2;'(�+�,);�72�2(��+,(#3

���Z��� �����"����B�*5F��������� �" � .��� � ���Y�������������

�W�����!YFW! ������� .����.��� �����" ��.���.�� �� �������%�VVK����%�PKP+�

���� ��� �� \.��� �B�*5F� ��� �� "� �.���.�� �� � ������ �� N.���

�� ��� ���+� .� �.���.���� ��� �� �� � �B�*5F%VVKWPKP�� �� �� � �� �� .�

�$ �� ��� �� ��� � �1� �B�*5F� ����� ���� .� � �� ������ ����� ���� ��� ��

(���Y�1����� ���+� JGGR)��,�� 1�� .�� �.���� ��$��B�*5F� 1��� ������������ �����

Z� 1����Z� �.���.�� �� � �B�*5F� ������ �� �.���.�*����1��� �� �"� � �����

������ � .��%�VVK��� ��� ��� � ��.����$�5:�� ����� .����.�� � .��11�� �

� ���� �1��� ������ ���� � �1� .� .��������� ��� ����. � � � ������� �1� �B�*5F� ���

���������� ��.��+�.��.�������1����������.���.�*�B�*5F�������� ��.���

(������ NLS)� Z�� �"���� ��*������$���� Z� .� �� ������+� Z.���� ���

�.���.�� �� �" ����������Y������\.�������Z������Z� ���������� .����.�

�� ������.���.�� �� ��B�*5F������� ��1����Z������ �"��� ���Y���������.��+�

��� ��� ���.��� � � ���� "� �"���� .� � �B�*5F� ��� ���� � ����������� .�

��$����

Page 147: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSX��

��� �� ���� �������� � ��� .� �� ���� ���+� ��� � �.���.���� �����

���� ��.�Z�� .� ��QFJ�����.���.�� �� ��������� �������������XR+�"� ��� .����

���Y��Z���"�� � .���������.���.�� �� ����1��� �������Z������ .�Y������������

�����'1��QFJ��������� �� �1���� �Y������� ����������"�� ��. �� .��$� .� ��QFJ����. �

"� ����� � ��� .��� ������+� ��� ��� ��.������ �1� ����� ���� ����� "�

�.���.�� �� ����� ��� ������� �� Y����� �.���.�� �� �� �B�*5F�Z� ������� .�

�����"��� � .� ����������Y�����Z����"� .��������"���1��QFJ��.���.�� �� �����

����"��������1���������� �������Z���������� ��.������5:�������(������

NLK)���

�)��� ��

� '�

���

�/�

,��-�

�#!��!*�� 0�����!*��,��!��!*��/#�����!*��

�+:6�/-6%�"�������� ������$� �����1��.���.�� �� ��B�*5F��% ��.����$�5:�������Z�� 1�3� ��� ���"� Z� .� �� �*�.���.�*%VVK*�B�*5F�� �� � ��� � ���� Z��

����� " � ��"������ �=��Z� .� ���'�� ,.� ��� ��� ���������� �� ��� �� �� �1� b*

� ��Y�1�������1�����%�K������������%����"�����FG�s��

Page 148: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSR��

'��� ��.��+����������Y�����Z���������� � ���� �������Z.�����QFJ�

Z������ ��� ��"� ���� .�� ������������ � .�������� ������� ��������1�

���������QFJ��" ������� .����� ���.�Z��"�������B�������(������NP�)�� �

Z��� �� � �����"�� �� �" ���� .� ���� � ������� ��� 5:�� ������ ����� ��� �� ���� �1�

�� �������� .����.�����.��+��QFJ���������$�Z� .����������Y������ � .�������

������ ������� ���.��� .�� Z��� ��������$� ���� ������ .� ����� �"��� ���Y��

Z.���� ��� � �Y������ .� � ������� �1� ������� �� Z��� ����� ��� �QFJ� Z���

���� � Z� .��� .� �� ��������� "���� � � .� ��"� �� � ,.�� Z��� �� ���� �

��������$� �����"���� ��� .� �� �� �����1��� ��������� .��3����� ��Z����"�

�� ������ ���� .������1� .��QFJ��.���.�� �� ������������ ������

�+:6 �/!6 !�������$� ���� " Z�� �QFJ� ��� ������� �� Y����� � � �11�� � � ���� �1�

�� ������ �������� � ���1����� ���������.�� �1� � ��.����$� 5:�� ������ � � ���� �1�

�����������������Y���������QFJ�Z����������� �" ��������� �*���������(���)�

����� �*�QFJ�(�)�(�"���)��� �"���+����� ��� ��\.� �"�3������� � .�$����

�������Z.� �����Z���.�Z����*������$� ����� ��� �����'�����Z�� �Y��" ����1�����

��������� ��O���� ���1�b*� ��Y�����.�Z���'������������� � ����1� .���6��� ��1�

.���������� ���� .���� ��%����"�����FG�s��

Page 149: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSV��

-6� 3''�2(,#9�2*(�+�,+,87 38);�?��+#('�3238+,�������,� �8�5, 3''#

�QFJ� ��� ��� Z��� �.�Z�� �� .��� ����1������� �� ��� � Z.�� ���

���3��������� ������ � � ��� ��� ���1�������='5L,L������(>�����������+�FPPL)��

,�� 1�� .�� ���� ��� � Z. .�� �B�*5F� ���� "� �� �Z�� ���� 11� ��� 1��� �QFJ�

��� ��+� Z� ����1� � �QFJMJLF:� ��� �B�*5F� Y���Y�Z�� ����� (�.*K)� ��� ���

��� ����(�.%��F)�='5L,L�������'���B�*5F��� �='5L,L������(VV�K`��1��B�*5F�

��������)+� .��Z�������� ������� .����"���1�1����(J�K�y�G�FP)���������� ����

����� .� ��.�Z�����1����(FR�L�y�F)�� �O��3���������1��QFJMJLF:�����������

1���� (LF�P�y� G�LV)� .��� ��� ���� ���� ����+� ��� 3�� ���QFJMJLF:�3�������� ���

����� Z� .� ���� ����� �1� �B�*5F� 1���� K�P� y� G�JJ� �������� (������ NLX)��

=� �"� ��B�*5F�Y���Y�Z��������.�Z��������� � ������� � .�1���� �����1�

1����� �������Z� .� ��� ���� ����� (������ NLX�)�� ,.� ���� 1��������.���� �Z���

1����" Z����� ��������B�*5F*�� ������(������LX!)��!���� ��� +� .��

���� �� ����� � .� � �B�*5F� ������� �� "� �� �QFJ� �Z�� ���� 11� ��� ��� .���

�� .Z� ���

Page 150: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FSP��

-6/�������,� �8�5,(993 �# 3''*+:2(�+�,

�������� � ���� .��� �.�Z�� .� � �QFJWFL� Z�� ��������"�� 1���

������� � ��� ��� � ���� ����� ���� (���������� ��� ���+� JGGK)�� ,�� ���� ��� �

Z. .���B�*5F�Z����Z�� �����1��QFJ*������� ���������� ����Z� � � .�

�����1��B�*5F���� .����� .Z� �" ����� �.�Z����.���������� ������B�*5F�� �"��

Y���Y*�Z��5:��������

5:�� ���� ����� ���� Z��� ��� �� � ��� .� ������ �1� FG`� ����� ��� ��

������ ���1����1��� �����+�������������Z����1����� �G����JS�.��1 ��

Z�������� !���� ����� � �� �� .� Z���� ��� �. �� �� �1���� ��. � ������ ��

Z� .������ ��JS�.��,.��� ��1�Z����.������Z�����������B�*5F�Y���Y�Z�������

�������Z� .� .��.N=����� ����(�.%��F)�������� �JS.���� *���� �.���+� .��B�*

5F�Y���Y�Z�������.�� .�Z����.���� �KV`��������Z� .� .�Z�����1�

.���� ���� .� �Z���.���� �VG`�(������NLR)��,.������ ������� � .� ��B�*

5F� ����� �� ����� ����� ���� �1 �� ����� � ����� ���+� �� ������� .� � � � ��� �����

��� ����� " � �QFJ�� ��� .�� � ���� � ���$���� �� ��� � �QFJ� ��� �.�B�*5F� �����

.��� �� ���Z�� .� ��� ���� �1� �QFJ� ��� �� �� ��� � �B�*5F� �� ����� ����

����� ������

�+:723 �/46 ������ +# +*$�2�(,� �� �?���+,87 38 3'' �2(,#9�2*(�+�,6 ='5L,L������Z����1� �" ��� �������Z� .�����������1��.N=�������� ��B�*5F+������ ����

�.N=�� ��� ����� Z�� ��� � Z� .� ����� ����� =�> : �� �� 1���� ��� ���� �.N=��

(�.%��F)�����B�*5F��.N=�*3��������='5L,L������Z������� �" �������"�� ����

Z� .� T* �"����� 3�������� ��� ��� �� ��� ����� =�>� �.��� ��� ��� � ������ �1� ='5L,L�

�.%��F�����B�*5F�Y���Y�Z�������3���������QFJMJLF:����� �%N+���������� ����

�� ���� �1 �� .��ZY�� �1� ��� ��+� .� ��.��Z�� 1�3�Z� .� .����� ��� � ����

Z� .�� . ���"����\.� �����Z�� ����� � ����1���� ���� 1������= >��.������ ��� ������� �1� .� 1����� ����.���� � �1� ��� ���� (�.%��F)� ��� �B�*5F� �.*K� ='5L,L� �����

����1� �Z� .��QFJMJLF:��=�>�M��� �1��� �����1� .����"���1� ����1���� 1����" �

���3������������� ��1��QFJMJLF:������� ����(�.%��F)�����B�*5F*�� ������(�.*

K)������.���.�Z������y�%�B����1�L������ ��3����� ��

Page 151: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N��� ���

FKG��

$

�+:723�/C6E���Y�Z���1��B�*5F����� ��Z���*�������������� ����5:��Z���

�������Z����1� �" ��� �������Z� .� Z���11�� ���������1��.N=��(F����L)�

������ � �B�*5F� ��� �� ��� ���� �.N=�� (�.%��F)�� � =�> : �� �� 1���� � �"�� �����"��

(�.%��F)�����B�*5F� �.N=�*3��������5:�� �����Z�� ����� �" � ������"�� ����

����������� �*�B�*5F�(!���%��������)������ �*T* �"����������� ����=�>N���� � ����.��� ��� ��� � ������ �1� Z���� �.%��F� (����� ����)� ��� �B�*5F� Y���Y*�Z��

(��Z������)�5:�������� �G����JS�.������1 ��Z��������\��������� �G�.������� *

���� �.���� Z��� ����� ��� FGG`�� = >� ,.� ����.� �.�Z�� ����� y� %�B��� �1� L�

����� ��3����� ����

Page 152: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 153: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 154: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

��� ������

Page 155: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

Page 156: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FKK��

�� .� ���� � Z��Y+� Z� .��� ���� ��� � .� ���� 1��� �QFJ� ��� ��� ������

�� ������ \� .��� �.�Z�� .� � �QFJ� ��� ����� � � � .� ��"� � ������

� �Y������ ��+� ���� ����� �� +� ���� �� � .� � �QFJ� ��� ��� ���� 1��� .�

������� ����� �� ��"� ���� �1� �QFJ� 1��� ���� ���� � ����� � ��� 1� ���\� .���

���������� � .� ����� �Y�������QFJ����. ������ � .�N.��B����� ����B�*5F��

�B�*5F� ��� �� ����� �"��*����� � 3�.���� 1�� ��� .� � ������� ����� �"���

������� �� N.��� �� ��� ����� '� �� ���� +� .� ���� �� �" ���� ������ � �����

������1��B�*5F������������QFJ��Z�� ����11� ����

'

Page 157: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FKX��

�6�?���������� ���������

!���� ������ .�� ����� ������� ���� �����������"�����'�+� .��

���3 �����3����� ���� ���������� .���� * ������ ���������1��� ������1���

��� ���+� Z.��.� ��� .���. � �� 1����� � � .��� ��"���� ������$� ���� (%e��.$*

���e�$� ��� ���+� JGFS)�� ���� � .��+� .�� ��� ���������� ����� .� �

. �� ������� �� ��� ���� ��� ����� ���� � � � �������� ���� ����� �� ��� � 1���� .�

���������"������������� .������������� ���(% �Z�������+�FPPF)+�����������

� ������� � (������� ��� ���+� FPVV)+� � ��Y� ��� (!������� ��� ���+� FPVX)+� �������

(!����.+� FPPF)+� ��� �� ��.������ (N$���� ��� ���+� JGGKa� ������ ��� ���+� JGGVa�

�����e� ��� ���+� JGFS)�� ��� ������� +� �QFJ� Z��� ���� � �� "� ��� � ��

�� ��.��������� ��"����������� .���� �����1��� ��.�����������.���� ����

�������(������������+�JGGV)���

,.�� �������� �.����.����.�Z����������������1�������1����QFJ�

���� �Y�������\�1���� .� ��QFJ�Z���������� �Z� .� .������������� ������ .�

�� �� �����1��� ��������� �Z�������� �� � .���"� �������� �Y�������,.���

�����������$� �������������� �Z� .���1��� �������.�� ��������� �����1��QFJ�

����� ����� ������ ���� ��� ��� ������� �1� .� ���� ������ ���� ����GW�F� �.����

�QFJWFL� Y���Y�� � �B�� ����� .��� ��� ������� ������� �1� ��� ������ ���� ���

�������������������� ������������" ������ ������� ����� ��QFJ*�� ������" �

�.�� � .������� N=�� ����� �.�Z� ��� ������ � ����� ��� 1���� � �Y������ Z.��

���� $����� .������������ !������� +� 1��Z� � �� � � ���� ���� �1� .�� �����

�.�Z� ��� �������� ���� ��� �GW�F� �.��� ����� ���� ��� ���� � �1� .� ����� ��� .���

�.�����

�� .� 1������������ � .� � .��"�����1��QFJ�.������ ����� ��������� ����

!������� +� .� ���� ���� " � 1��Z� � �� � � �1� �.N=�� �QFJ*�� � ����� �� �� �

�.�Z� ��� ������� ������ ������ � ������ ,.��� �11����Z� .� .� Y���Y�� � ����

���� ����� "� �� �� 3����� ��� ���� ����� ����� �"���� ���� ���� .�

��������� � ����� �.�Z� .��������1���� ������ � ������ ,�� �� � �1� �����

1���1��Z�� �� � ����� ������������ ������������������������.N=�*�QFJ������

.� �.��"�����Z����������� ����Z���� ����� ��� ���������� �� �� ���

' � ��� �����"�� .� � ���� �1� .�� ����� �� �� � ������ 1���� .� ���� ����� O�� .�

� .��.��+����.��� �� ������� .� ��QFJWFL�Y���Y�� ��B������������ � �"�� ����

Page 158: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FKR��

���� .� �����1������"��1���� ��"� ����� ���� ����1�BV�JK+� .����"� ���

.���������� ������.�1��+�������� �+����������������� ����Y��Y�

������ �"�������������������� ��"� ������ �BP�K�(���������+�JGGJ)��,.�

1�� � .� � .� ���� ���� ��� ���"������� .� � .� ����� �1� �QFJWFL� ��� ���� .��� "��

������� ����.�Z����� ���������"�� .� � .��GW�F����� �.���"����������

� � ��� +�Z� ����� � 1��� � .� �Y���Y�� � ����� ����� ��1�"� .��QFJ�����QFL+�

��� �� �.N=�� �� � ����� .��� ��� � ������.� 3�������� �1� �QFJ�� ' � ���

����� �� � �� �� � .� � .� �Z������ ���� �1� � .�� ��� ���� ������� � ���

� �Y������ ����� � �GW�F� ���� � (����� � ��� ���+� JGGLa� ����� ��� ���+� JGGP)��

!� ��������������� ���������1��� .��� ��� �����1�� �Y������Z.��.��� ����

���� ����������� ���������"��������Z�������������� �����GW�F��.���(����� �

������+�JGGL)���� ������ +� .������� �����1� .��� ������Z� .��������������

" ���������������� ������1� ������ �Y���������1���� ��� ��%��.������

���� �� ��GW�F��.���(5���.���11�������+�JGGFa�����������+�JGGF)��O�� .�� .��.��+�

����� ������� ����" � 1��Z�� �� � ������ �"���� ��1��� ��� �������� .� �

����� ��� ���� � ��� �GW�F�� ��� ������� ��� �GW�F� �.��� ����� ����� "� �� �� ��

�� ������ ����������������'������ �����1����������� �����GW�F��.���� �Z����

"� �� �� ��� ������ 3����� � ��������� .� ��� .� �1� .� ���� � ����

'� �� ���� +� ��� ��� ���� Z� .� .�� �"���� ����+� Z� 1���� .� � �QFJ� �����

��������$�� Z� .� ����� ���+� Z.��.� 1����� �� �����3� Z� .� U* �"����� � � .�

�� �����+�����������������O�����+�"� .�������������� �1� ����������������+�

Z.��.��������� �"��Z� .��������1��QFJ������ ������

,.� ��� �1� ��*����� ���� ��������� � Z��� �� � ��1���� ��� ����� � �

����Z���� ���� �1 ��11�� ��� � ����.�� �������QFJ��.N=��5:������+���� �

�1� .�� ���� ���� ��� 1� ��� � �Y������� �� ��6��� � �1� �QFJ*�� � �����

����� � ����� � ��� ��� ��� ����� ���������+� "� � .�� ���� ����� �.�Z�

�������� � �Y������ Z� .���"���� "�""���� ��� .� ������ �1� ����� � �

�� ��������� "������ O .�� ����� �.�Z� ����� �1� ��"���� � �"��� � ������ �� �

� ���� �1��� ����+� .���.� . � �������� ������ � .����.��� ����� . �Z�� �� �

�"�� �� ������ �"��������� ��������� �� 1���� "������ � ����+� ��� �� ����

"1���� ���� � �1� .� � ��� � �1� .� ����� ���� � �"���� � �� ����+� ���� �����

�� ���� � "���� ����� � Z.��.� ����� "� �� �� .� ������� 3�������� �1�

�QFJ�� ,.��� � ��� �.�� ��� �"���� .�� ��� �������� � �1� .� �� ���� �1�

Page 159: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FKV��

�� � ��� ����� ���+� ���.���+� .�N.���11� ��� �� ����Y�������� .��� ���"�������

��� �����������(�-������������+�JGGSa�B�.���������+�JGGS)��,.��� �����1���������

�����3 �������"����"�""������� .���������������� �������� �Y������

1�������� ' � .��� "�� ���� � .� � �������� ��� ����� �� � � � ������ � ���� ������

��� *1����Z���� �� �� ��� � �Y�����+� ��� ��"� ���� �� ��"� � �� ��� ���� ���

� �"��� ��O�� .�� .��.��+��� �����1��� ���*Y������������������� ������ �

�.�� ���!����������������������� � .����.��� ����+��� ��������������"� +�

���� �Y������ 1����Z� �����������5�Z��+� . ������ � ����� ������� ����

.� ����� �"��� � ����� (B�.������ ���+� JGGS)�� �����QFJ����. � "� ����� �� � 1���

��� ������ �"��� ��1� .��� � ��������+����Z������1��� .������ �����1�N.����� ��� �

��� .���� 3 ��1�� �Y�����+� .���� ���� .� �������� ��"����Z�����Z. .��

�QFJ��.����"������ �� �1��� .�1���� ��������� ��� �����1� .���"� ��

' � ��� �� Z�� . � .� � ��� � ���������� ��� � .� � ������"����1�

.���"1���� ��1��Q����"��� ��Z������ �� � .��� ���������� .���"� +�

��� ������� ���� ����� �������������������������(!.�����E.��+�JGGR)�������

3���������1��,���*1���� ��Q�F����� ����1� ���� �Y������Z.�����Q�L�

Z��� �� ����� �������� �� ����� .���.� � � �� �� � �11� � � �Y������� ,.�

�� .���� ������� .� � .� �11���� �� � ����� 1���� .��� �11����� �� ����������

������$� ����� '��������� ��+��Q�� ��� ������� ������ ������ �� ���������������� ���

"� .� ����"��� �� ��� %O�� ����� (%�.�1�� ��� ���+� JGGF)�� ' � .��� "�� �.�Z�� .� �

���3���������1��Q������� �����1�. �� ������������ ��������3��������

1� �����"� .����������� � ������� ������ �������$� �������"� .����� ��+�

����� ���� .� �. �� ������������ ������ ��� � Z���� ��� ��� .Z� �� ������ �

�� �� ���������������������������Q���"��� ��(�Q�F+��Q�+��Q�)�.���"���.�Z��

�� �� ��� � �"����� �,���� (N� �.�Z.�� � ��� ���+� FPPP)�� �QFJWFL� ��� ���� ���

������ � 1��� ����� �"��*������$���� �� �� (�,O!)� ������ � ��� ����� �"����

�������(����������������+�JGGV)���QFJWFL���� ������� ����� ������ ������ �"���

�������������QFJWFL�Y���Y�� ��B����������� ��� ��������� ��� ����

,.��� .����������������� ���Z.��.��QFJWFL����. �3� � ��� ���� 1��� ����� ���

�,O!�������$� ������������ �"���� ���������������� ������ ��������� �

.����.� :�N�� ��� ����F�� �QFJWFL� ����� ���� �1� ����� �"���� .��� "�� �.�Z��

������ ���� ����� ���� ��� ��� ��1���� ���� Z��� Y��Z�� 1��� � .�� ��������� O���

���� ������ �� � .� ��QFJ�������� �� � .������������� ��� .����.��11�� �

Page 160: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FKP��

� ������������ �� �� � .� �� �� �����1��� ������ ' � ��������"�� .� ��QFJ�.�����

��������� ���� .�N.��1��� �������� �Y������"� �������������� �"���������$� ����

���������� ������� .���.� .����� ���" ����Z� .�������������� ��1��������

����� ��� �� � �.�Z� �� � �11����� ��� .� ��� 1���� " Z�� ����.��� ���

���.�������������1�����������1��QFJ��%�+��� �1��� ������11� ��1��QFJ����

����� �"��� ��������.����.����������� ���.����

�6������� ������������������������ ������?��

�B�*5F��������"���1� .��"��1���� ��1�N.��B���"�������� ������"1���� �

����� ������� " � �FFSN.��B�+� �FPGN.��B�+� ��� �E��*:"�� ��� ����� N�� �

�������.�Z� .� ������ ��������� ����� � .��N.��B����� .���.� .�������

�������"�� 1��� .� �� ��� ���� ��� � ���� ��Y��Z�� (�������� ��� ���+� JGGFa� =��� ��� ���+�

JGGL)������� ������� .��� ���� ���+� .�����"1���� ��1��B����������� ���� �

�� .� ��"��� �1� .� N5� ��"1���� �� �FFKN.��B�+� :�N�+� ��� ��bN.��B���

5�Z��+� .�������11����" Z�� .� Z����"1���������� .�1�� � .� � . ���

�� � ��� ���� .� N5� ������� '�� ���� �� ����.� 1��� �� �� � ��� �� ��� ��� "������

����������B�*5F+�Z���1���������������������" Z�� .���"����1�

.��B�*5F���"1���� ���� .�N5���"1���� �(������NFK)��,.�����*������� �1����

.�!* ��������������1� .��B�*5F���"1���� ��.����Z�Y�.������ �Z� .� .�N5�

������ (" Z�� FF� ��� FX`)�� ,.���.� .��� Z�Y� .������ � Z���� .��� "��

�������1���� � � � Z��� ��� ������� � �� �� ���� .� � �� ������ �1� ������ Z��

������� "���� .� ���� ����� �� � 1��� .� .��3*.��3� � ��� ��� �1� .� N�%�

��������'��1�� +� .�N5�� ��� �����������.������� ���Z�.������ �Z� .� .�N�%�

� ��� ��� (N���� ��� \��Y�+� JGGG)�� %�+� � � ����� "� �����"�� .� � .��� ����*�����

� ��� ���".���������N�%*��Y��������������������� ���.�Z� .� ��E��*:"��

�����"�� ����� �" ��QFJ������ ����N.����� ��� ������ .���.��QFL�Z����� �"�

�"�� �� � ����� � � �� �� ��� � (�������� ��� ���+� JGGF)�� '�� �� ���+� .� ������ ������ �

��� �*:"�� Z��� 1���� �� 1���� �����3�� Z� .� �QFJ� ��������� ��!N� ���������� ��

N.���� ,.� �� .���� ����� � .� � :"�*N.��B�����. � ��� ���� �� �� � ��� N5*��Y�

������ ��� .�!* ������� ������ .����.�Z.��.�:"�*N.��B��Z���� �� ��� �Z� .�

�QFJ�(�� �������+�JGGS)�������������� ��1���������������� �1 ��FPGN.��B�������

Page 161: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXG��

����� �Z�� ���� 11� ��� �1� �QFJWFL� ��� ���a� ��� .��� ���� �QFL� �� ��� �� ���

�� ��� �� �FPGN.��B��� ,.���Z��Y� � � ��� ����� � .� � �QFL��� � "� ��� ����� �� �

����� ��� �1� ������ ������ � �� ����� ((����7� ��� ���+� JGFS)� ��"�� )���

'� �� ���� +� .��� ��� ����" Z���FPGN.��B������QFL���� .����.� .�����*

��������������� �� � .�!* ��������������1� .�N.��B����

������ � ��� ����� ������� �������.�� ���� ������ Z��� �"�� �� ����� � ��

���� 1��� .� �� ��� ����" Z���FPGN.��B������QFL+�Z.�����FPGN.��B��

����� �� ��� � Z� .� �QFL� .����.� ������ ������ .� QF+� QL+� QV� ��� QP� .�����

((����7�������+�JGFS)���"�� )�(�������F�)+�Z.��.�Z����"��������� �Z� .� .�

Y��Z�� �� ��� ���� " Z�� N5� � ��� ���� Z� .� �QFJWFL� ��� ����� ,.� �� � ���

� ��� ����1� .�N5��������1��FFKN.��B����������3�Z� .� .��.������1��QFLW�*K�

�� �1�� Z�� �� ��� � ���1���� �1� N5� .� � �� ��� �Z� .� �Q� ��"��� � (!.�� ��� ���+�

JGGK)��,.�1��� ��������� .�=* �������T=*Q=�.��������1�N5�(������FR*LP)��,.�

����� ��� �� � ���1��� �������� ������ ������ ������ .� �FFKN.��B�� N5�

������(������SS*JLL��QJ*QFF)+�Z.��.���� �� �Z� .�%Z� �.�''���� .�QL�.��3��1�

�QFLW�*K��%���1����� +�QL*QS+�QV*QP����QFG*QFF� ���������.��3�QV��1�N5�������

�������������������� �� ��Z� .��QFLW�*K���:�Y� .�N5��������1��FFKN.��B�+� .�

���1��� �1� .�N5*��Y� ������ �1� �FPGN.��B��������� �� �� ��� �Z� .��QFL� ���

��� ��� � �.����� ' � ��� �� �� ���� .� 1�� � .� � �B�*5F� ��� .� ��� � ����� �

��"�� ������ .� ��"1���� � (!��Y� ��� ���+� JGFL)� ��� � � ��� ��Y� � .� � �B�*5F�

����� ����� � � �1� �FPGN.��B�+� �FFSN.��B�� ��� �E��*:"���\� .��� .�

����*����� ������ .� ��� � ����� � ������ �� � ��� .� QV� �� QFJ� .������

!����������" Z���B�*5F�����FPGN.��B���.�Z� Z������������FSVS����

���FSPG+� ���� �Z� .���QV����QP�.����� .� ������ ��������" Z�� .��

Z����� ����(�������F�)��'� �� ���� +���� �������1������������.�Z� .� �

���� � �� �� �� �1� �FPGN.��B�� �1� .�� �.���� �����+� �������"� � ����

.��� "������ �� �QFL� ('$�����+� ')�� �� ������ +� ��� �1� .� ��� � ����Y�"��

�11�������� .���� .��1�.��3�QFG��1��B�*5F+�Z.��.���� .��.�� � �" Z�� .�

��"����1� .���"1���� � (�������F�)��%������������ ���.�Z� .� ��QFJ����� �

"��� .�!* ������� �������1� .��B�*5F���� ��+�Z�������� .� � .������ �

������1������� .������1�.�����QV� ��QFJ�Z����"� .��������"���1� .���� �

�1� .����� ��� �����

Page 162: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXF��

�FFSN.��B�� .��� "�� ���� � �� "� � ����� � ��� � � .����.� � ��

�� ��� ����Z� .��TU�(=���������+�JGGL)����������������� ���"���1� .��B�*5F�

1���� �Z� � � .��������� ��1��TU���"��� ����� .��� ��� �����1��B�*5F��\�

����� �� � 1��� �� � ���"��� ���� �1� �TU� ��"��� �� .� � �� ��*������������ � �

Z� .��B�*5F+���������� � .������"��� ��1� .����� ��� �����

����� ������������ �������� � .�. �� .���� .� ��QFJ�"���� �� .��5*

�5��������1��B�*5F��N�� ����� ��.���������� � .��5*�5��������1�� .��

N.��B��� ��� .� �� ��� ���� Z� .� �Q� ��"��� ��� ��� ���.+� �Q�� "���� �� .� �5*�5�

�������1� .��XLN.��B����� ���(:� $�������+�JGGR)��,.��� � ���� ��� ����1� .�

�Q���XL*N.��B�������3������ .� ���� ��1� .�QJ����QL�.�����1���� .��5�

��������Y� ��� �� �Z� .� � �Q�� (:� $� ��� ���+� JGGR)�� O�� .� � .�� .��+� ��� � �

���� ���.�Z� .� �"���� .��� ��� �����1��FFKN.��B��Z� .��QFL� .����.�� ��

N5� �����+� �FFKN.��B�� ���� ����� �� ��� � .����.� .� �"�� .������ � ������

(!.��������+�JGFJ)��,.��� .��������������������Z.��.� .�"�������1� .�N�%*

�+:723��6!���� ���������������������� ��1� .�����*������������1��B�*

5F���"1���� �N.��B���=�>!���� �������1� .�N5*��Y��������1��FPGN.��B�����

�����3�Z� .��QFL��N5*��Y��������1��FPGN.��B������.�Z������� �����QFL�����.�Z��

��� ���Z��=�>�%������������ �" Z��.�����N5*N.��B������.�������"���

�1��B�*5F���"1���� ��!�����"�3���.�Z�����FSVS+����"��+�������FSPG+���������+��1�

�FPGN.��B���

Page 163: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXJ��

.������ ������� ���QFL� 1����� � �� .� �� ��� ����Z� .� .��5������+� .�" �

����� ����� �������������� ��3�.������ ��� ��5�Z��+� .��5������������

�� � �� � "� ��11���� � �� ������� �Z� .� .� �Q� ��"��� � ����� .� "������ �11��� �

" Z�� �5� ��� �� ��� � �QFL� ��� ��Z�� O .�� � ���� ���� �� � .� � :�N��

����� ����� �� ��� � .����.� � ���5*�5�������Z� .��QFL+�"���� .�N5�������

��� .�!* �������������(%�$�Y�+�,���� �+�������+�JGGP)��%�+��� ��� �����" Z��

.� �5� ������� �1� N.��B��� ��� .��� ����� �� � ��� ���� ���. � "� �� �������

��.������1�������� ������

��� � ��"��� �1� .� �"�� 1���� � �1� N.��B��� ��� ���� ���� ��� �� "�����

���� ��� ���1���� ���� " � �� ����������� �� ��� ����� ���������� .� �5� ��� �5�

������� ��� Z��� ��� � .�� ����� �� � �������� %��.� �� ��� ����� .��� "��

������� ��"���Y� .��������1�N.���,����� �� .��5���������W�����������

.� �B�� �� ��� � �1� .� 3�.���� 1�� ��� (��.�$�.� ��� ���+� JGGGa� ��� ��� ���+� JGGFa�

b.��+� JGGF)�� ��11�� � � ���� ����� � .� � ��"��� �1� .� N5*N.��B���

��"1���� � ���� 1���� .���*� ��� . ��*��������� " � .��� !* ������� ������ ���

���� �� ����� � .��� N.��B�� �� ��� � (B���.���� ��� ���+� JGGLa� !.�Y���� ��� ���+�

JGGS)�� N������� �� �B�*5F� ����� ���+� � � .��� "�� �.�Z�� .� � �B�*5F� ���

����� �" ��.���.�� �� ����"� ��� ����.����Y��Z���"�� � .������"������� ����

" � �� ����������� �� ��� ������ �������� ���� �� �.�Z� .� � � ���� �1� !*

������� ������ �1� �B�*5F� ���� ����� � �������� � �� "����� N.��B�� �� ��� �

������� ��� ��1������� .�1����(E����������+�JGGJ)+������ ���������.�"� �� �����

1��� .�!* ������� �������\� 1���� .� ��B�*5F� ���������$� ������ � ��Y� �

.����.�� ��!* �����������������B�*5F�Z�����*������������ � �Z� .� .�!*

������� ����� �1�����1��B�*5F������ ��1� .�.��.��3��������������1� .�

!* �������1�����1��B�*5F�������� �� .�1������� .�1����� ��������� �� � ���� �

.� ���������3�������������Z��1����Z� .� .�=* �������1����.�Z��+�����

�B�*5F� Z��� ��*������������ � �� %�+� .�� ���� �� ���. � ����� � .� � .�

����$� ���� �Y�� ����� ����� � .����.� .� !* ������� �����+� ��� ��� � ��Y� �

.����.� .� ����*����� �� �1� ��� � � .��� ��� "1��� 1��� .� � .��� N5*N.��B����

=�� .���+�Z������ ������� .������"��� � .� � .�=* ��������������1��B�*

5F�����������"������������� ������������� ��� ������1� .���� ���"�����Z�

����� �"���� ��*������������ � ���� �1� �B�*5F� Z� .� .��� ����� � 1����� � �

��� ��� +� �QFJ� "������ �� �B�*5F� ��� �� � ����� � .� ����$� ���� ��� .��� ���

Page 164: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXL��

������ � �Z� .� �������� � �� ���Z.��.� .� "������ �1� �QFL� �� .�N5������� �1�

�FFKN.��B�+� ��b*N.��B�� ��� :�N�� ��� �� � �11� � .��� ��������$� ����

(!.�Y����������+�JGGS)��O��3����� ����1��� .������� ������"� .� � .�"�������� �

1��� �QFJ� ��� ���� � � � .� �5*�5� ������� �1� �B�*5F� ��� ���"�"� � � .��

����� ���� �� � "� ������� ��� .� ����� ���� ��.������ �1� �B�*5F�� ��� .��

3����� �� Z���� "� ������ � �� ���� ���� .� �����"�� ���� �1� .� !* �������

����������B�*5F��� ��� ����

' � ��� Z��� � �"���.� .� ����� ���� �1� �B�*5F� .����.� � �� "������ ��

����� �"���� (E���� ��� ���+� JGGJ)�� ,.� ������� ���� ����� �� .� �

����� �"��*"�����B�*5F� ��� ���� ������ � ������� 1��������� �"���� ���� ��

�������������� ���B���� ��� � �Z����N.����%�+� .��"���� �����1����������� .�

����� � �1� �B�*5F� "���� �� ����� �"���� ��� .� ������ �1� .� ���� � � ��� �

�� ���1�����1��QFJ������� �� .��� ���� .� ��QFJ�Z����"������ ���� .������

�1� �B�*5F� 1���� ����� �"���� ��� ���� �� �� ��� � .� ��� ��+� ��������� .�

�� ��� ���� �1� N.���� 5�Z��+� 1�� .�� 3����� �� Z� .� ����1�� ��� ���� ���

����� �"����Z����.��� ��������� .��������

��� � � .��� "�� �� ���� "1��� �B�*5F� ����� "� ����� � " �

�.���.�� �� ����� �B�*5F� ������� �.���.�� �� ���� � � LV� �11�� � ������

(��������� ����+� .������ ��� ������ ������ " � �.���.��� �

(ZZZ��.���.��� ����))+� ����� ���� �� �����3� ����� ���� �1� � �� �� ��� �� �� �� � �1�

Z��Y� .��� "�� ��� � � ���� .� �.���.�� �� ���� �1� ����� VVK�� ' � .��� "��

���� � .� � �B�*5F� ���� "� �.���.�� �� � � � %VVK� " � ������� �W�� Y�����+�

��EF+����F"�Y���������E��(b�Y�������+�JGGSa����Y�1��������+�JGGRa������������+�

JGGPa� i���.��.�� ��� ���+� JGFF)�� ���� ��� ���+� ������ ��� � �� ����� �B�*5F� ���

�.���.�� �� �" � .��� � ���Y��������������W����� .������3�!YFW� �������

������� ����.�"� �� ���� �� ����� ��� ��>�� ������� ��� ������ �Y�����+��B�*5F����

�.���.�� �� � ����Z���� .� �� ��� ���� �1� N.��� (���Y�1�� ��� ���+� JGGR)��

�� ������ +����F"�������.���.�� �� ��B�*5F� ����.�"� �N.��*����� �� ����

1�"���1���� ����(i���.��.��������+�JGFF)��O�� .�� .��.��+���EF��.���.�� �� ��

�B�*5F���������FS*L*L�"�������������� �����1�FS*L*L� ������� �"����(b�Y�

������+�JGGS)����� .����+��1 ���E���.���.�� �� �����B�*5F������������� ��Z� .�

FS*L*L� ��� � �� 3�.���� �� ��� � Z��� �������� (����� ��� ���+� JGGP)�� � ,.��

Page 165: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXS��

�"���� ���������� � .� �%VVK�".�����������.�"� �� ��Z� �.��1��B�*5F+�Z.��.����

��� �" ���� ������ ��� �Y�������������� 3 *��� ����������

%���� �.���.�� �� � �B�*5F� � � %VVK� Z��� ���� � �� ����� FS*L*L�

"������ .� � ��.�"� �� .� 3�.���� �� ��� � �1� �B�*5F� (����� ��� ���+� JGGP)� Z�

���� ��� �Z. .���QFJ������"��11� ���� .��� �� ��� �����FS*L*L���� �������

����� �� � ��� ���� .� � "��� �� �� ���� � �1� �������� ��� �+� ��������� .�

������� � ������ �����+�N�1�Y����+������ ��*��� ��.���.� ���!�JK+����

� .��� (���������+�JGGG)��FS*L*L�"������ ����� �� .���"�������� ������$� �������

�� ��� � �1� .�� ��� ���� ��� .��� �"��� � �� �� ��� �Z� .� � .�� ������� �� �1�

�� ���������������������� .Z� ���%���������� +��������� ���.�Z� .� ���� �Z.��

.� ���� � � ��� � �� ��� 1���� �1� �QFJ� Z��� ���� � Z� �"���� ��*

������������ � �����1�FS*L*L�U�Z� .��B�*5F�� �O������� �������3�� ������

���� 1��� � . �� .����Z��� .� � �QFJ�Z���� ���� .� �� ��� ����" Z�� FS*L*L�

����B�*5F����������� +� .� �FS*L*L�Z�����11� � .���*������������ � �����1�

�QFJ� Z� .� �B�*5F�� '�� �+� Z� �"���� ��� �.������� �1� .� FS*L*L� "������ ��

�B�*5F�Z.���QFJ�Z������� ��B3����� ��Z����� ������� ����Z� .� .�

���� ���� �� ��� Z� .� �11�� � ���� ��� �� �1� �B�*5F�� \.���� .� =* �������

1����Z����� ��"�� �� ��*������������ � �FS*L*L+� .�!* ������� 1������� � ��*

������������ � �FS*L*L�����������1��QFJ��' ��������"� .� �FS*L*L�"���� ��

.�!* ��������������1� .���� ���(b�Y�������+�JGGSa������������+�JGGP)��FS*L*L�

"���� ����� � �� �.���.�� �� � ������ �1� ��� ���� ��� ����� \� ����� � �

Z. .�� .� �� ��� ���� " Z�� �B�*5F� ��� FS*L*L� Z��� ��� � �1�

�.���.�� �� ����� '�+� Z.�� Z� ��1���� .� ��*������������ � ���� ���

�"�����1��.���.� �����.�"� ����������� ��������� .���*������������ � �

FS*L*L� Z��� �"���+� �����"��� ���� .� �������� ���� ��� ������ ��� .���

���� �������� �FS*L*L�Z�����*������������ � ����Z� .��B�*5F���� .�������

�1� �QFJ�� ��� ��������� .�� ���� �� �� �� � 1� � Z� .� �� ���� Z.���� �QFJ�

�� ��� �� �B�*5F� ��� FS*L*L� ���. � "� ��.�"� ���� �B�*5F� �� �� ��� �� ��� �� O��

�����"��3����� �����1� .��������� ������"� .� � .���*������������ � ����

���� �� Z�� ��� Z� .� .� FS*L*L� U� ���1���� Z.���� ���� �� �.�Z�� FS*L*L�

���� ��� �����1��B�*5F�������Z� .� .�FS*L*L�_�+�{����|����1�����(b�Y�������+�

JGGSa������������+�JGGP)��,.������������1������1�FS*L*L���� ��������������+�

��� � � ��� ������"�� .� � �11�� � ���1����� ��� ������� � ��� �11�� � ����� �� �

Page 166: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXK��

�� .Z� ���O�� .�� .��.��+�� �����������"������"�� .� ��QFJ��� ��� ���B�*5F+�

.�1��� .���� ��� �Y������������1���� ���� .� �����Z��� ���.���.�� �� ����

����� �� .�"������ ��FS*L*L�Z.��.�Z������� ��� ������ ��� �����'��1�� +������ �

���+� (JGFJ)� ����� � �� ����� �� � ��.������ .� � ���Y�� �B�*5F� �� ����� �"����

.����.� .� ������ ��� ���. � �.����,� 3*F���� ��� (�����������+� JGFJ)�� '�� .���

���� � .� �� .���� ���� �� � .� � ,� 3*F� ���.���� �B�*5F� �� ����� �"����

.����.� ��� ��.�"� �� ���.������ .� � �������� �E�*�.���.�� �� ���� �1� %VVK� �1�

�B�*5F� ��� ������� � � FS*L*L� "������� =�� .���+� �� � � ������ ���� ��

(b�Y� ��� ���+� JGGSa� ����� ��� ���+� JGGP)� .��� "�� �� �1�� FS*L*L� ��� ���� ���

"��������� ����1����B�*5F������� ���Y� �"������������ �������� ����1���� ��

�� �� ����� ��� ��5�Z��+� .���.�������1������ �����1��B�*5F��� ��� �����

�� "� ���� �������� � ��� ���"�"� � ���� ��� ��� ��� �� ��� ���� ��

���� ��� .����������"�����Z.���QFJ�Z����� ��� �����B�*5F���� ���������

� �������1��������� �"������

�6��2�$�#38*�83'

���� ��� ���� .� ��1���� ���� ����� � (��������� "������ ������� ���

�� ��� ��������� ��� ������.������)+�Z����������Z��Y�������� �������� �

1��� .� ���� ���� �� �� ������� ��� �B�*5F� �� ��� ���� " � �QFJ� (������ �J)���

'�� ���� ��B�*5F����"���� ������� �"����Z� .�FS*L*L����� .� ����. �"�1�������

.���� ����������������1���� �����'�� .������� ���� � ��B�*5F�����.���.�� �� �

��� Z�� ������� %VVK+� .������� �"������ �� � 1���FS*L*L���� ���+� ���,FFS+� ��

������������� ��� ���� � �Z�������"��������� �(�����������+�JGGP)������� .�

�� ���� �1� ���� ����� ��� ��� ��+� Z.��.� Z� . �� .��$� .� � Z���� "� ��

�.���.� ��+� �B�*5F� Z���� "� �.���.�� �� � ����� ���� �� ���1���� ������

�.����(F)��'������������1���� ���+� .��5*�5�����������1�� ���� ��� �Z� .�

�� ����QFJ+�Z.��.������ �� .�������1��B�*5F�1��������� �"��������B�*5F�

�� ��� �����!������ � +��� ��� ��B�*5F�Z����"��"�� ���� ��� �N.��(J)���\.��

.� ������� �� 1����.� .� ������������� .������� �� ���� ���Z����"��� ���+�

��� Z� ������ � .� � ��� .��� ���� Z���� "� �� Y������ �B�*5F� Z���� "�

�.���.�� �� ���������%VVK�������� ��"����� ��� �(L)��\������� � .� �

.��� �.���.�� �� ���� Z���� ����� � �� 1��� � FS*L*L� "������ ��� �QFJ� �������� �

Page 167: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXX��

1�����B�*5F�(S)��,.��+�FS*L*L�"������Z��������� ������1���� �������.�������

�B�*5F� .� � 1����� � �� .��QFJ� ����� ��� �� ������ �"�������1� � .��FS*L*L�

������+� � ������� .� ��� ��� �� � �� ���� ��� ��� ���� � � � (X)�� � � .��� ���� �Z�

. �� .��$� .� ��B�*5F��������������������$� ���� ������� �� ���� ��� � � ��

�� �� ����� ��� ��������� ��� �����.������ ������� �"����"������(K)�����1���

.� �� �����1� ���� ����� �� ���� ����B�*5F�Z���� ������� �� ��� �*� ��� �� ��

.�� ���������(R)���

�����"���1���� ����������� ��"�������������� ���+� .��� ���� �

" Z�� �QFJ� ��� FS*L*L� ��� ���� .��� �� "� �����1��� \� .��� �.�Z�� .� � .�

�� ��� ���� " Z�� FS*L*L� ��� �B�*5F� ��� �.���� " � .� ������ �1� �QFJ+�

�+:723��6������������1� .������������.������1����B�*5F��� ��� ����" ��QFJ���

Page 168: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXR��

Z.����� �Z����������� ����� � .� � .�"�������1�FS*L*L�.������.�"� �� �����

1����B�*5F��� ��� �(�����������+�JGGP)��5�Z��+� ����� ������Z. .��FS*L*L�����

��.�"� ��B�*5F��� ��� ��' ����Y��Z�� .� ��1 ���B�*5F��.���.�� �� �������%VVK� .�

��� ��� �������� �� �� .������ �"���+���� .� ��.���.�� �� ��������� ��FS*L*

L�"����������"�"� �FS*L*L���� ��������� ��"�� ����.�"� ��B�*5F��������"�����

. �����Y�����1���� ��"������ ���B�*5F�"� � . �Z�������� �����B�*5F������

��������1���� ���� ��.�"� ���� � ���� �� ����� ��� ��FS*L*L���� ����Z������ �

���� ��� �Z� .�� .��N.��B����������� ���+��E��*:"��Z����.�Z�� ��"���.�"� �

" �FS*L*L�"������������E���.���.�� �� ����"�����FS*L*L� �� �1���Z� .� .�

�� ��� ����" Z���E��*:"�����N.���(��������������+�JGGS)��O�� .�� .��.��+�

�FPGN.��B����������� �� ��� �Z� .�FS*L*L� (b.���������+�JGGF)��5�Z��+�Z. .��

.��� �� ��� ���� �11� �� .� ���������� ����� ��� �1� �FPGN.��B�� ������� �� "�

����� ��

'�� .�������Z�������� .����1�Y����������.���.� �����������

�� ����� � .� �� .Z� �� �� .���.� .� ����1��� ��� ��� ������ �� "� ����� +�

�QFJ� Z���� "� ����� ���� .� ����� �� � ��W��� ����� ���� �1� .� Y������ ���

�.���.� ���� ������� ��� .� �������� ���� ��� ���+� � � ��� Y��Z�� .� � �QFJ� ����

�� ��� � .��.���.� �����J�������� ������� � .������ �"��*�.���.�� �� �

��� ��� ��� (b.�� ��� ���+� JGGS)�� '� �� ���� +� .� N5*N.��B�� :�N�� ������� ,��

�.���.�� �� ���� ��"��"�� ���� ��� �Z� .��QFJ�(%�$�Y��������+�JGGL)��,.��� .����

�����������.���������Z.��.��� ��� ��QFJ��� ������ �,�������������3��� ��1�

:�N�� ��� 1����� � � � �� �.���.�� �� ����� 5�Z��+� ������ �.���.�� �� ���� �1�

:�N�� " � ,�� ��� �� � �11� � � �� "����� N.��B�� �� ��� +� "� � �� .�� �.����� � ��

����� ����" ��Q���"��� ����

O�� .�� .��.��+�� �����������Z.��.�11� �Z����3� � .�����$� �������

�B�*5F� �� ��� �� ��� � � ��� ����� � "1��+� ������ N.��B��� ��� ����� � " �

�� ����������� �� ��� ����� .� � �� � � .� ������"��� � �1� .� �5� ������ ��

N.��,��������� ������� .�� ������ ���� ������1���� ����(!.�Y����������+�JGGSa�

������ � ��� ���+� JGGK)�� =�� .���+� 1�� .�� 3����� �� ��� �� ��� ���� ��

����� � .�� ��������������.������" Z���B�*5F�����QFJ����

Page 169: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXV��

/6��� ��������� ���.������������

N�� � ������ �.�Z� .� � �B�*5F� ��� ������� � ��� .� ����� ���� �1�

������� ��11��Y�����1���� ����� ���������3�� �����(�� .�Y�������+�JGFJ)���B�*

5F� .��� "�� �.�Z�� �� "� ������� ��� .� ����� ���� �1� .� 3�� ��� �����3�

.����.� .��� ��� �����1�N.����������+� .�3�� � ������3���������������� ��

��� �������� �� .���"� �������������� �Y������(5�������+�JGGP)��O���

���� �� �1� �B�*5F� ������$� ���� � � ������ ������ ��� Z���� "� ��� ���� Z� .� .��

�������� �"���� ������ ' � ��� ��Y� � .� � .� ���������� ������$� ���� �1� �B�*5F� ���

�B��� ����� Z���� "� ��� � Z� .� ������ ��11��Y���� ����� .� �����*�������

��"���� ��11��Y���� ��� ����� � " � N.���� ��� .����+� ��������$� ����

3����� �� ����� ��������$� ���� �1� �������� �B�*5F� Z� .� N�"FF� ���

�������+� Z.��� ��� ��������$� ���� Z��� �"���� Z� .� N�"F� ��� ���������� ''��

�� .�Y������*Z��Y����.�Z� .� ��� �����1��B�*5F����� ������������� ����

�1� N�"FF*���� ��� ������� (�� .�Y� ��� ���+� JGFJ)�� ,.��+� N�"FF+� ��Z��� � �"���.�

�� �������������������� *��������� ������Y�+�����B�*5F��� �"��������

��� .� ����� ���� �1� .� �� ������ �� .Z� �� '� �� ���� +� 1����Z� ���������� ���

�"����������������������" ���� ������� ������������"���� ���1�������" �

������ ��11��Y����(%�.Z� $��������+�JGGKa�B�.��+�JGGV)+�Z.��.����1�� � �����

1����������1����Z�����������(������.�Y�������+�FPPVa�:��� ����\���.���+�JGGG)�

��� � � ��� ����� �� ��� �� � ���.��� � ���� (%.�� �� ��� ������+� JGGJ)�� ,Z��

�� ��� � ������ ����� �1� ������� .��� "�� ������� � Z� .� ����� ���� �1�

� �Y������������*�������������������������1������ �������������

(B�.��+� JGGV)�� '�� ��� ������+� ������� ����� 1���� �� ������ ������� ���� "�

�������$�" � .��������,����N�"FF�(i��������+�JGGR)��%�+�Z������� � .� � .�

��������$� ����" Z���B�*5F����N�"FF�Z����"� ��� .� �� ������ �������

������� ��� � �Y������� �B�*5F� ����� ��������$� Z� .� �������+� Z.��.� ��� ��� �

Z� .� .� ������ ������ ��� ��� "� ������� ��� ��� ��*����� ���� ������

,.�� ��������$� ���� 1������� �� � "� ���*����1��� ��� � �1� .� 1�� � .� � .���

��"�������� ������$� ���� �1� �B�*5F� Z��� ��� � 1���� ��� �B��� ������ ,�� � +� �� �

����� .��� "�� ���� � �������� �� �����"�� ���� 1��� �QFJ� ��� �������

��11��Y������

Page 170: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FXP��

�� ��� � ���� � �.�Z��.�Z� N.��W�B�*5F������ �� .� ������� ���� �1�

�� ��� ��� ����� �"��� � ��Y� ��� ����� ���� ��� ������ ��11��Y���� ������

����� �������������������(�� .�Y�����������������+�JGFL)��,.��+�� ����� ��

"� ��� ������� ����� .���.� .� ��������� ��.������ ���� ���� .� �������

������� ����� � �������� ����� .� 1�� � .� � �QFJ� �� ��� �� �B�*5F� ������

� �Y����������B�*5F�Z����"������������� ����� .���� .Z� ������� �" �

�QFJ+� .���� ���� .� ���������Z���� �����Z��Z. .���QFJ�Z����"���� �����1�

�B�*5F*������ ��11��Y��������� �����

-6���������������������?������������������

�� .���.�N.��� �� ��� ��� .��� "�� ���� � �� "� ������ 1��� ���� � ���

����������� � � �11�� � �.���+� ��� � � ���� .��� ����� �� � ��� .� ���� �1�

N.��� ��� � �Y������Z.�� .� �� ��� � �1� N.��� ��� ��� ����� N.��� ������$�� .�

����"� ��1� .���� ��� ����������������� .��� �� ����*��������� ��� �����1�

.��������1����Z�(���Z����(������������"��+�JGGR)��N.��B��������� �����

��� ���� ������ � 1��� .� ������ ����"� +� ���� ��� ���+� ��� � �"��� � �1� .�

��� ��� ��������(,� ���� ��������+�FPPPa�\��������+�JGGXa����Y�1��������+�JGGRa�%��

������+�JGFF)��B!,J�������$������� ��� ��N.���� � .��������1����Z�(=��.������

��� i������+� JGGX)+� Z.����� ��B�� �� � ��� �� 1��� ������ ��� � � � .� �������

1����Z� �� ������ 1����Z� ���������������� � �Y������ (\����� ���+� JGGX)��O .��

���� ������ �����B�*5F����:�N����� .��� �� �����1�� �Y�������������B�*5F�

��� .� � ��� "1��� �"��������� ��� ���� N.��� �� ��� ���� � � .� ���� ��� 3�

(���Y�1��������+�JGGR)����:�N�������� �1��� .���� �� �+��"���������(��� $����

���+� JGFL)�� � ,.� 1�� � ��� .� � "� .� �B�*5F� ��� :�N�� ��� �Z�� ���� 11� ���� �1�

�QFJ�((%�$�Y��������+�JGGL)��������� ������ �.�)���� .� ��QFJ���������� �

������� � Z� .� .� ������ ������ ��� ��� ���� � � � .� ��"� � ������

� �Y������ ����� ���� .� � ��� � ��Y� � .� �� ��� ���� �1� .�� ��� ���� " � �QFJ�

�Y�� ����� ��� �� �� � ��� ��� 3 �� '�� 1�� +� Z� ����� �"���� �B�*5F� ��� �QFJ�

��������$���� ��� �� ����*��Y� � ��� ��� .� � �.���� "� .� ��"� �� ������+� .�

�� ��� ����" Z��:�N������QFJ+����Z������� ���� �� ����� ��� +�� ��������� �

" ��.���.�� �� ����(%�$�Y��������+�JGGL)�����B�*5F� ������������� �" �������

Page 171: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FRG��

Y�������%�+�� ����������"�� .� � .�������� ����" Z�� .������ �����1��B�*5F�

���:�N��" ��QFJ�Z����"���Y ����������� .���� �����1�� �Y������(�������L)��

' �Z����"��� ��.��������� ������ �� � .�������������� ��1��QFJ���� .�

�B���������� �����1�� .���1���� ������������ ��1����� �Y������(��� $����

���+�JGFL)���

���� .�1� ��+�� �Z����"��� �� ���� ������ $�.�Z��11�� �N.����B������

������� � .����.� ����� �"���+� �� � ��� Y�����+� ��� ������� � ����������

1�� ���� ������� ����1��� ����11�� ����� ���1���������������� �Y������

����"����������

�+:723 �/6 �� � ��� ����� ��� �� ���� =�> ���� �1� .� �� � ��� ��.������ �1�

�� ��� ����" Z���B�*5F�����QFJ� ����� ����6=�>�����1� � .������ ����" ��QFJ�

�������� �������

Page 172: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

������������

FRF��

�QFJ�.���"���.�Z�� ��� ����� ������1�� ���������� ��11�� �����������

%������ ����.����� �1�� .� � .��� ����������������" ��QFJ������������� ��

1������� ���������������� .Z� ������ ����1���� .�N������Z������N.��1���� ��1�

�,����+�>=E+�!ODJ+����T*�� ����(!.���������+�FPPLa��.����Y������������ +�

FPPXa������������+�JGGF)��\.��� .��� ����.�������� � .� ��QFJ������� ����� �

������� ��� ���� ���Z .� ����� ���+� .� ��������� ��.������� ������� ��� .���

������� �1� ����1���� ���� ��� �����1�� ���� ������ �������� ' � ��� Z��� Y��Z�� .�

����1������� �� � ���� �1� �QFJWFL� ��� ���� ��� ='5L,L� ����� (>����� ��� ���+� FPPL)��

N������� .����� ���� ����1���� ������.�����+�N������� ����� ������ ��

���� ��� .� ����1������� �� ��� � �1� �QFJ� .��� N.��� ��� !�SJ� ��� ='5L,L� �����

(,��Y��.���������+�FPPR)�� '� �� ���� +��������� ���.�Z� .� ��B�*5F*�� �

='5L,L� ����� ��� � .� ����1������� �� ��� �Z.�� .� ���� � � ��� �� ��� 1���� �1�

�QFJ� Z��� ���� +� ����� ���� �� �� � ��� ���� 1��� �B�*5F� ��� .��� �QFJ*�����

���������� �� .Z� �� �� .���.� �B�*5F� Z��� ��������� � ����"� ��� �� ����� ��

3�.���� 1�� ��� 1���N������N.���(N�+�FPPV)+� �� ��� ��������� � ��"�N.��*

����1���(E����������+�JGGJ)��5�Z��+���� ����������Y��������B�*5F� ��N���

�� ��� ���� (!����Z�������+� JGGK)��,.��� .����������������� ���Z.��.� .����.�

��ES��.���.�� �� �����B�*5F�Z������� ��� ������ �N.������� ��� �N����%�+�

� � Z���� "� �����"�� .� � �B�*5F� Z���� �� ��� � N��� �1 �� �QFJ*� ����� ���� ��

����� � ���� ����1���� ����� =�� .���+� .�� ��� �������� � ���� ��� ����

3����� �������������� ������ ��� � .������������.��������� .�

��� ������������� .����� .Z� ���

���� ��������������� ���������1����� �����.���������Z�������������

�"� ������� ��� � � ���Z��� Y��Z�� .� ���� ��1� .�� � ��Y� ��� �.��������

"����. � " � N.�*1���� � �,������ ' � .��� "�� ���� � .� � �QFJWFL� ��� ���� ���

�"���� � ���� ����1������ ��������������� �������Z����.����������������N.��

�� ��� � � � .� ������ �+� Z.��.� �� � ��� ���� .� 1���� ���� �1� � �"��

����� �"�����������F�(���������� ����+�JGGK)���5:��Y���Y�Z�������1����B�*5F�

�.�Z� �� ����� ��� ���� ����� ���� 11����� � ������� �� ��� ���� ������ ,.��

���� �� Z���� ����� � .� � �B�*5F� ��� ������� ��� ���� �� ��� �� �� .���.� .�

������� ���� �1� �B�*5F� ��� ���� ����� ���� Z��� ���� � ��"���.� (=��"�� � ��� ���+�

JGGP)+�1�� .��3����� ���.����"����������� ������ ����Z. .���B�*5F�

�����"��Z�� �����1��QFJ*�������������� �����

Page 173: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 174: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 175: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 176: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

�� �������

Page 177: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

��

Page 178: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

!������������

FRR��

F���QFJ������ ���� ������

F� �QFJ����������$�Z� .� .������������� ������ .��� �� �����1��� ����+�

����� ��������.������ ���.������Z��������� .���"� �������

� �Y�������

J� � ���$�����QFJ*����Z����� �� � .� ��QFJ���������$��Z� .������ �������

�� �������� ��� ������������ ��������5BE*JPL�������B���������QFJ�

��������1����Z� .������ ��������������"� �����1�"��"��� ���

L� �� ��"� �����1��QFJWFL�1��� �������� ����������������1���������� ������

����QFJWFL�Y���Y�Z���������"� �����1�"��"��� ���

S� :�����1�1��� �����1��QFJ���� ���� ���$�����.N=������� ���"���� ��� ����+�

Z� .�������������������� � ���������������� �Y�����+����� ��������

"������ �������5:��������

K� �.N=�*�QFJ*�� ���������� �����������������������GW�F��.����1�����

������������ $�" �1��Z�� �� � ��

J��'� �1��� �����1��B�*5F�����������11� ���1����QFJ��

X� �QFJ�"� ��� ��QFL���*������������ � ��Z� .��B�*5F����5BE*JPL�������

R� �B�*5F���*������������ � ��Z� .��QFJ� .����.�� ���5*�5���������

V� ��QFJ��� ��� �����.����� .�"������ ���B�*5F+�������" � �� ���������

Z� .����S*a�3�������� .����� � � ����� ����� �� ��1��QFJ�(�QFJ�MJLF:)�

��� .������� ����� ����� �� ��QFJ�JJV���

P� �QFJ������ ���� ��� �����1��B�*5F+��1�� �" � .����� �����1��B�*5F�

"������ �� .����� ���1�����1�N.���(N.���FR�)���

Page 179: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

!������������

FRV��

FG� �B�*5F���� ���QFJ*N.���� ��� �������" ���������� .�%NB�

����� ������1������ ��� ����5BE*JPL��������

FF� �QFJ������ �� .�������1��B�*5F�1��������� �"�����

FJ� �QFJ��.����� .�"������" Z���B�*5F����FS*L*L���� �����

L��%�"��������������$� �����1��B�*5F��

FL� �B�*5F����������$�� � .������+������������$�Z� .�N�"FF���������������

�B��������

S��'������� ��1��B�*5F�����QFJ������������� .Z� ���

FS� �B�*5F���������$��Z� .��QFJ������� .������ �"�������� �������������

���.��������� .���"� �������� �Y�������

FK� �B�*5F���������� �1����QFJ*��������� ����1���� �������='5L,L�������

FX� �B�*5F����������������������� �������� $�" � .�Z���*.������

� .�����

Page 180: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 181: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 182: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

������� ��

Page 183: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 184: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FVL��

��.�$�.��+�:�Z� �\B+�5�����Di+����N�����E�(JGGG)�% ��� �����"�����1������1��1��� ���.�"� �����1� .��"��.������ ��������1���� �*�������8���" � �������.���.�� �� �����������"��XJKhLL��

�.��%�+������ ���+��������+����������%�(JGFG)������ ���" ���������"��� ������� ������.����� .����.�N��F������ ��11� ���N�����-�. ���������E!�XKLVhKF��

��6�$�%+��-� ����+�!� ��%+�������%+������ ��E�(JGGK)���������1��B�*5F� �� .� ��. �6��� ���*������� ���� ���������������� �������.�"� �����1�N.����������������FW%��.��� ����� ��������������E�RRRhVX��

�� ��"��+����� .�!�+����,����>>��(JGFG)�% ��� ���������� �����1�5 �� ������������ ��*N���� �N.���������=���� ��B3�.������� �����*���/��������CC�FFFhFJK��

��3����=%+������������+�E� ���'+�% ���N�+�5����5B+���������>�(JGFS)�B��� ������� �����1� .��.������*�*��� ��������3����Y�� .�QK�.��3� ������������"���'����*���. ������KXhXL+�=� �����"���.���������+������������1�������������"���.���:��� ������N��. ��N�����

�����>�+�i��>b+����� ��N>+����N�����Y����(JGGK)�� ��*��������N�� ���% ����� ��������� ������.���'� �����$� ���� .����.�:����N�1 �}����% � ����:������!�������*���. ��������4C�FSPLhFKGS��

��������8+�E� �$�����+����8� ��*i��� �Y� ��,��(JGGV)������.�FJ���� ��� � �� .��� ��.����������11� ���� ��.�����������.���� ������ ��� ��(#'�.�-����JVJFhLF��

��������8+�8���Y���� �N+�E� �$�����+����1�������>+�%Y����N�+����8� ��*i��� �Y� ��,�(JGGX)�=������.��������1������ ��*��� ������ �����1��� .������� ���*�3��� � .����*���/��������4%�PRKhVJ��

����� ���+�!�������:N+���� ��N+�\� �����>+����������>N+����Z��>5+����%������'�(FPPK)��FJ�N������ �1���,.���"��*� ����� ����B3������������=��% � .�������FLJF=F��� ��� ����!���+�,.�>��������1������������!.��� � ��

������+�\���+��� ��������+����\��M�(JGGP)�!� �����W���������*������� ���� �������� ��� �Y��������������� ���� .������ �� ��1�� ��B�� �� .��� �����������*���. ���������"�FSJVhSG��

�������i+�=�����%E+�������"����(FPVV)�'� �1��� �����1�������� ����������.������������ ��������1����������������-�. ���������4/�FXLKJhR��

������ �:+�>�����.�=+��������������(JGGK)�:�����$����*��� �.���*��������$� ��������� �� .�N.�*�B���� ��� ��1��E��*:"���-�. ���������E"�FKSGKhFJ��

Page 185: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FVS��

��Y���!>+��������+�:�N���>+�\����!�+����.��+�E��Y�����%+��%�������+�\����+����N� ����N�(JGGK)�,.�N.���,��3�.����1�� ���:1������� ������������"� ������� ��� ������/���"����#���' �0�'�#��"��PKJPhLS��

���������+��������"�����(JGGR)�! �Y��������������������Y���� .�������!� ��������/��VSRhVXG��

���� �E+�:� ����+����% �����>�(FPPR)�,.�N.���,����������� � ���N.��B����� ��������������� .Z� �1��� .������.����.��������������.������� ���� ����������%��PGKhFK+�B�������

��� ����/�N�+�\���. �=+�������*O� �$�'+�%e��.$*:�����>+����,�3�4�>�(JGGV)��� ��� ��(���.�)FL������������������������ .����.��FPGN.����*��� ���.�"� �����1�N.����� ��� ��������1���4E�VJJFhLG��

������+�:���+�:���i+����*����� ���+����"�����:+����,�Y��$���(JGFG)�,.�:"��N.�������������� ��3�.����1�� ���Q*�� ������3���1��� ����������� ����*������������������ .������������� ����������N.��WNO!E��� ��� �����-�. ���������E!�LJPFPhJX��

��� �\�+�����Y�5�+�������������Z���(JGGK)�������� �"��*��� �$����1��� ���N.�������������������������1��� �����-������. ����C"�PFhFGF��

�����*��� ��+�������+������*��������!+�B�Y� �>+�N�������+��������,�+�!��6����+�������%+������ ��E�(JGGL)�'� �1��� �����1��� ��. �6��� ���*������� ������������� ��3�.����1�� ��� .� ��� ��� ��N.���������� ������������������"��� ��-������. ����4"�RJPhSG��

����E+����\+�E�$����,+����5�����Di�(FPPR)����� �� ����� �����1���� ��-�� ������Y�����" ��(�)*��� ������.�*��"��� ��"�����/E%�JPXhP��

�����e�!+���������7�>+����� ���%.��Y��+���#�*��$�N+���~�$�>�+����������+����Z��>5+�����. ��=+�b��$�����+�B��#��$�>�+��������� ����(JGFS)����Z����*������������ .Z� ��1��Q(�)���� �������� ������ ��.������� ����������"����� ����������' ������4�FFLKhSX��

������%+�E��*N��1����,+�!�� ��N+�N�"��� ����+��������!\+�'�������,+�����������=�(JGFG)������.�(�)������" �������6��� � ������ � .����1���� ������1�����" �������11� ��+� .�������������� ��*�� ��� �Ef��.�����(�'NE)��-�. ���������E!�XFRPhVK��

��� ����+�����Y�>:+�>.����i+�B3 ���>5+�N.�%�+����N����B��(FPPJ)��.���.�������!*" ��F�������,���*�� ��� ������� ���1�����WFF+�� ���. �������������� ���������C"�SFFhV��

����+��"������+�b.��E+�%�������+�B����+����b.���i�(JGGF)��� ���.�"� ������.�������1���� �*�"���*��������. ������FSXLhRS��

Page 186: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FVK��

������+���.��������!+�i��>+������.�%�+�����bE+�i�N�+����5�����%�(JGGX)�,.��FJWFL*N.��������������� .Z� ���� ��"� �� ��11���� �� ���.���.� �������*� ����� ���������� �����2��������!�JJLShSS��

���Y�1��>+�=��"�� ��+���.����+��� $�O+�5�.��E�+������Y��.����(JGGR)��B�*5F������ ��������$�N.����� ��� ����������� �Y���������� .���� �����1��� � ���Y�������������������XPPhRFJ��

���Y�1��>+�=��"�� ��+�i����%*5+������Y��.����(JGGV)�!�������1��� ������1��B�*5F+�������� �"��*����� �N.�*�B�������� ���B�*5F��� ��� ����������� ������ ��1�������� .��������3�����������. ����E�JFGhP��

����Y������+�� �.���+�����.Y����+���Y��.���+�����Y���E�+����8�������(JGGX)��B�*5F�������������������� *�����.������������� ��� .�����"������ �1��� �����#��-�/��� ���&��������*���/��� ����%"�:KSGhV��

���6�Y���:+��.���8�+�E� Y�,>+����E��1�����%5�(JGGJ)���F������J����*� ������� �1����Z��������� �"������ ���$� �������.�����"��� ���������������"�PFhPP��

�������+��������.������(JGGS)�FS*L*L���� �������=��"���1����� �����1�����=��"����� ����' �'34���""-��FG��

��.����+�>�.�����=:+��.����Y�����=+����>�.������:�(FPPK)���FJ������FL�% ����� �N.�*��� �% ������"������� ��������������.���������"� ��-�. ���������C"�JSXLFhJSXLS��

!����Z���+�b�$�� ��%+����.�$Y ��:+�>�������+����%����,�(JGGK)���ES���� ������.����������.����� .����.� .������ �����1��B�*5F��-������' ���E�FVXFhRJ��

!�������EB+�\���Y������>+�=Z.������+�������������N�(FPVX)����� ���� �����1� .�" ����"��� �������� �������������� �*"����������� �� ���� ����Z� .� .�� ��Y� ����*���/��������/"�SXLhV��

!�� ����+����� ��+�:�"������+�:����.��+�������� �>*:�(JGFF)�\�NLX��� ����������11������ ��� .��������*��� ��*��������� ��+��Q������.���.�������!T����������������������3��-������' ���-�LJPJhLGS��

!.�����+��������,�+���������B%+�!.���+���Y��,+�������������%��(FPPL)�B3����������=��!��������1���,����1����������B������� .�\��*, �����FJ��������� ��*��������. ����/�RXJ��

!.��b+�����:+�5����>+��� �Z�Y��%+�%������%N+����% ��Z����!�(JGFJ)��� ��� �����1��FFK*N.��B������������ �������� �����1��QFL���� .��"��.������ ��������-�. ���������EC�JKSPGhKGG��

Page 187: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FVX��

!.��b+�%�����\�+�����.�%�+�% ��Z����!+����%������%N�(JGGV)�N����� �����1� .��� ��� �� � ���1�����.�FL�" � .���N�%��������1���bN.��B���'�������4�FKLJhSL��

!.��b+�%�����\�+�% ��Z����!+����%������%N�(JGGK)�% ��� ����1� .��FFKN.��B����N�%������*����.�FLW�F��.����������3������ ��������� ����� �����1����,������ ��� ����"���'����*���. ������FPFhR��

!.��b+�%�����\�+�\����!�+�%������%N+����% ��Z����!�(JGGL)��������� .�����.�FL�"�������� �1����1� .���N�%��������1��FFKN.��B���-�. ���������CE�PPFJhP��

!.��b+�\����!�+�% ��Z����!+����%������%N�(JGGF)�% ��� ����1� .���N�%��������1��FFKN.��B���"���'����. ���E�VGKhP��

!.����%!+�!.�����������8N+�%��.��+�b����N�+�:���%5+�%���Y������%+��� .���� .���N+������%%+�,��%5+��� ��8+������ Y���>%�(JGGP)����3�����������.��������������������������������������1�����" ����Y�1�� ���3�������2����2����-!�RFJhP��

!.�Y����5+��������+��."�.�����+�����i+�,���� ��5+�b.���i+������ Y���>%�(JGGS)�5���*����. ��*��������$� �����1���b*N.��B�+�:�N������FFKN.��B��" � .���!* ������������������ �� .�����������N.���B���� ��� ���� ����1��������� � �����2��������/�JLLhSG��

!.��5+����E.���>5�(JGGR)�:�����$� �����1�������.����� ������� .��� ����������� � .���"� ��������� ����1��� .�����������������������-������. ����CE�JSKhJKK��

!���.����B+����=��B>�(FPPR)����NO,B'=�TU�%���=',%��#���1���/��������3�� ���/C�FXRhJGL��

!�������B+����.������+�:�B+�:�����B+����������+����%������%N�(FPPS)�% ��� �����1��� ������1���� ������1�������.��F���� .���.�������1��,��. ��� �����' ����567��8��4!�FSGKhFSFJ��

!�������:N+�N��Y ��\��+�O�1�Y �>�+�������Z��>5�(FPPR)�,.��FJ������� .���"������ ���� ����� ���� ������� .����.� .�%.��%5J��������2��������!�KPKhXGG��

!��Y��N+�N�������E:+�������!>�(JGFL)�N.�������������� ��3�.����1�� ���������� �����1�N.���,������ ��� ���������� ����������2������+�����FG�FGLVW����JGFL�LXJ��

!�� ��$��%�(JGFS)������������� ��*��������� ������������3�Z� .�"���������� ���3������/��������' +�����FG�FGFXW6� ����JGFS�GS�GGS��

!����.����(FPPF)����Z .�1�� ��*����������������������������" � �������� �����1�������.�� �� .���������(#'�.�-�!�JGGhX��

Page 188: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FVR��

�-��������+�%��������%+�������������(JGGS)��� � ��������� ��Y ���� ��1� ���������$� �����1� .���� ��� ��������������� �Y�������������.����" �N.�������������" �N����-������. ����44�XFhRF��

������.�Y���8+����Y�\!+����Z��BB+����:��Y���E�(FPPV)�N������ �1�������� �"��������Z���"����1���� ����������� �Y�������1�D�������"� ��������. ����%-�SRhXG��

��������+������3� �%>�(JGFG)������ ���������������1��� �������������-������. ����EE�FVFhPG��

���� �>�+�N ��N+�O������+�N �B�+�����.����Y�����=�(FPPP)�O���������� �� ��1�����.�FJ�� ����� �����������1�� ���� .����.�� ���3 ����*J������������� .Z� ��2��������E�RFVKhP+�=� �����"���.�����������

�.����Y�����=+�������� �>��(FPPX)�%���������" � .��FJ��������1������ ����������' �����E�JLKhSK��

���������+��"����:+�!� ��.���%+�����������:�(JGGS)����.�������1�"� .��E�����FS*L*L���.�"� �� .�N.�*�B���� ��� ��1� .��E��*:"�����������������3���*.2�-��/�JVFFhJG��

���������+�%�������>+����%�� �>��(JGGF)��E��*:"�����.������� ���Y��������������� ������.��FJ*��� ���N.�*��� �� ����1�"��1���� �����-�. ���������C4�SSJSRhKR��

�����8+����E��.�����(FPPX)�'� �1��� �����1����1������1������ ��������E!� .� ���������$�Z� .� ��. �6��� ������-�*�����. ����-%�FPPhJGP��

��3� �%>+�% ����+�B�����:+�!���������+����E����.�����(FPPS)������ ���+���.��.� ���������� ��������� ������������������ �"���������$� ����������C4�XLPhKG��

�� ��+�=�� ��=+����,�Y��$���(JGGS)�N����1�:"��N.��B������QFJWFL*������������� ��N.���,����������' ������4�JGFhJGP��

B�.�����(JGGV)���"���� ��11������������$� �����1�������������������� �Y�������. �����'��3�����/4�LPKhP��

B�.����+�5��Y�����ND+���� �B+����O-��������5�(JGGS)�,�������� �Y�������� ����������1 �����N=�������������. ����-�FXVKhPL��

B���.����,�+���������%��+�\��������:�+�!���.����%N+����:�����>�(JGGL)�,.�N.�������������� ��3�.����1�� ���:���.���*��������$����������� ��� ������ � .����.������������ �����"�3 �� ������� .� �����"�� �������������������1������-�. ���������CE�LGPRKhVS��

Page 189: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FVV��

B ���*���������%+����5������(JGGJ)�N.���,������������"����� ��"�����-�"�XJPhLK��

���5+�%�"���������NN+������� ���%!�(JGGG)�FS*L*L���� ������ ��� ��+�1��� ���+��������� �����#���1���/��������3�� ���-"�XFRhSR��

��6��.����%*5+�,��������%+�����%+�E��.��� ��i+�\� ���"�E+����E�.�����(JGGV)�BNEFWJ��.���.�� �� ��B�*5F� ���.����� �������������� ��3�.������ ��� � �Z���N.����. �����. ������1���������/4E�FXJhR��

��Y�.����%+�!.�Y����5+������ Y���>%�(JGGF)�N�%*��� �������N.��B���� .������������Y�" Z�� ����1������������ �������N.���2��������"�FXXFhV��

��Y�.����%+�������!+�b�.����+�'���.��,+������ Y���>%�(FPPP)���=������b��������!�� ��������������=���� ��B3�.������� ���:��Y��5 �� ������������ ���� ��N.���-�. ���������C-�KVXVhKVRP��

����#�*�� ��N+�\���"���E+��� .���\,+�=����=E+�B���"��Y�%�+�����������E�(JGGX)����� �����1��� ��� ����������B����������� �� ���*���������������-"4�SJKhLR��

���Y�� �� �'+����� �E+�%�YY�8+�5���"����+�,1���E+��� $��,+��111��E+��������.��E��(JGGF)�:������������1������������$���������+������ �����1�� ��.�� ��� ��� �������������������"���9��������VKKhXJ��

������>����(FPPP)�,.��"�*��� ���� ��+�:1�+�:�����$�� ������� �"���������� �� .��� ��� �����1�N���%����������� .Z� �����!�����-�. ���������C-�JJRPhJJVK��

��.����+�O11�������%+�,.������+����\��Y��,��(FPPP)���11�� ����'������� ��1���FJ������FL����N�� ��*��� �% ������"������� �����-�. ���������C-�FRPGFhFRPGR��

�����������+�E� $����,�+�E�������5+����� ��,+�O11�������%+����������N�(JGGK)�����.�FJWFL������� ����1������ ���������� �������������$�N.�*���F�1��� �����-�. ���������E"�SJJSJhKF��

�����������+�E�������5+�B�����+����������N�(JGGV)�:�N���������F����Y�����.�FJWFL� ������������ ��������� �"��� ��������*���. ���������%�LGhSG��

���"��Y��B+����\��� ������(JGGK)����� �����������������1������.��FL��� � ����� .� ������ ��� ��� ����Z� .��FFKN.��B���2��������-�JFKKhXK��

����� ��+�>���$ Y��+�%����"�����>+�5���������B+���������+����������'+�����"����+������3� �%�(JGGL)��������.�������� ����1� .��� ������� ��������������1��� .�1������ �����1�� �Y���������� � ��� ��%��.����-������. ����4��KLKhSK��

Page 190: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FVP��

���>:+��;����%+���������8+�O11�������%+����%������'�(JGGJ)�'� ��� �����1������.�(FJ)�Z� .������.�(FL)���������.�(�)������������� .Z� ���/���"����#���' �0�'�#�%%�PLKJhR��

���$ ��>+���������.��\�(JGFG)�! �Y�� ����"�������������������������'�� �����������. ������PGPhFX+�B������: ��

5�6��Y�=+�E�Y��� �*=������+����.���*,���������!+�!.�Z�!N+�%.����$���+�,����,+��� ���+�i�Y� ����%+����E�$����,�(JGFF)�'� �1��� �����1���� ���������������(���.�)FL�1���� ����� �����1��FFKN.��B���� ��� ���� .�� ��� ����1� .��(���.�)FL*�FFKN.��B������� ����1������ �������������.������ �(N5)������������3��-�. ���������E4�JGXJKhLX��

5������(FPPV)�N.���,�������� .��� ���! ��Y� ����' ����567��8��C%�KGPhKFS��

5�� ��>+�>�����D+�E�$����,+�N�����\+�%�����\�+����������+�% ��Z����!+�������������(FPPV)����� �� ����� �����1� .������������� ��3�.������ ��� ��1��FFKN.��B��" �����.�FL��' ����567��8��E"�JFFJhJFFS��

5��+��������\�(JGGP)�,.�3�� � ������3����������$�3�� ����������2� �������. ������KLRhSJ��

5������B�(JGGL)�����.����������.����������������� �����1� .���� ������ ��1����������� ��*��� ��*��������� �����/��������3����%%�JKhSS��

5����!%+�\ ���>+����,�������N�(FPPK)�,.�N.��1���� ��,�����N.��+�N����+����!�!SJ5������ � �������� �������� ��� ����" �%N��������E��FFKPhFFRG+�B�������

5���.���11�B5+��������>+�!.����+�E.�6�Y����+����%������(JGGF)�N������ ��1����� ���������� ��� �1�������� �������������� .����.��F��� ��%��.����' �����%��FKSRhKG��

5�����i+�%.��D>+�b���M+�\����%�+�,����%�+����b.�����b�(JGFF)������������1��� ������1������N=���������Z��-�/��� ���. �����4C�FJPhLP��

5��.��,B+�b.����5+�:��� . ����B+�������� �!5�(JGGF)�8������$� �����1���1��� ����������.���*����1������� ���� ���1����������������������������� ����Z� .� .����������"������������ �" ��� � �������� ��� �������" ������� �����1������ � �� ������ �+�"� ��� �"��� ��� ������� �" ���� ��������-�. ���������C4�SJJRhLK��

>������!+�i������ �=+�8���:�� �>+�:���������>+�8���.�>N+�����Y����>+�������.� ���8�(FPPP)��" ������*��� ������ �����1�������������$� ������� .����.� .���� ��� ��� �����1���� ���Y�������������%E�KPhXV��

Page 191: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPG��

>�����5+�\���+����%������'�(FPPL)�,.� ����1��������� ��� ��1��� ��� ������FJ��(�.'�//"�LFPhLJJ��

>�����i+����\+�\���i+�E�$����,+�5� ����%+����5�����Di�(FPPV)�,.������ ��������.�FJ�� ����� ����� ��-�� ������Y����������������� .����.�����������5W����������"�����/%!�VGVhFL��

>�.�����B=+�%��.�� $�,�+�\�.���+�E�� $��+�%�$�Y��=+�E�$����,+�>����,:b+����Z��>5+������� �E��(JGGL)�N�%FX���.�"� ������������� .����.� .������.��FL*N.���3����"��������. ���!�FGPKhFGL��

>����,:b+������ Y���>%�(FPPV)�����.�FJ���������� �� ����1���� �� ����1��������� ��� ��. ���� �����/C�LFPXhJGJ��

>��������+�,.��Z���+����\������:�(FPPJ)�B11� ���1����"��� ��+�����. ��� �3�����������$�������� � �����������'������ �����1��� .������1������ �"��� ������������ ������-������' ��"�=��/�SGFhFX��

>��6��>+����!�� ��>�(JGGP)�N����1��FJ���� ��������������������� �� ������.��-�/���������!E�LJhSG��

>����5%+�%��i*N+�i����i�+�E���>5+����>+�:�%>+�E���E�+����E���%��(JGFS)��QFJ������������.�"� ���ODOF����.�� ����������������������������������1���N*FLK"������N*FPS� ������ ����������' ������4�FSKXhFSXK��

E��.1�E+�:�!�+�5��>5+�N �B�+�����.����Y������=�(JGGK)�>=E*�� ��� ����������$�������� ����������������11��������� ������ .�����.�FL������������� .Z� ��. ���� �����--�FSGPGhX��

E�� ��+�!�� ��>+���������,B�(JGGR)�������������� ������1� .��FJ�%�"1���� ��1�5 �� ������������ ���}�����Z .�+������ ���+����� �� ������. ���� �����-4�XXRRhXXVR��

E�� ��+��������>+�>��6��>+���������+����!>+����Y��i+��Z.��� ��\+������,��+����!�� ��>�(JGGX)�,.��FJ�1���� ��1�. �� ������������ ��������� ��"��� �������������������� �� ������/���"����#���' �0�'�#��"/�VFRLhV��

E�� ��+�% ����:=+�����>�+������,�+����Y��i+����!�� ��>�(JGGX)�������1��� .��FJ�1���� ��1�. �� ������������ ����������� � �����������������-�. ���������E��JXSVLhPG��

E��.���EN+�!�� �N:+���!�� ��+�\� ����=+���'� ���\B+�� ����!*%+�������������>!�(JGGS)���11�� �������� ��� ��1��.���.� � ������ ���L*Y������FFG������ �����1������1������ ���" �������������-�. ���������C%�SSKKShXJ��

Page 192: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPF��

E���B*%+�:�E*�+�=�.��*i+�����������(JGFF)�N���� �����1��� ��3�� ������� ������������������" ��(���.�FJWFL)���� �������='5L,L������1�"��"��� �������2����1����%�JPRhLGF��

E���5+�5���>*N+����Y�>+�O.��+�>����%B+�!.����%+�:��M+�:�Ei+�E��5+�%����\*>+����E���E�(JGGV)��� �*�� ���*�������� �������.�������������� ���������1��FPGN.��B���� ��� ���� .����.��Y F*��� ��.���.�� �� �����-�. ���������E/�PRRhVR��

E�������N�+����������>�+����:������� *%�.Z�� $�>�(FPPJ)���1������������. ���� �� .���� �����1���"���� ��11��������������� ��� ����-������. �����4�FGRFhVG��

E�"��Y���E�(JGGR)������ ���!�����N�� ���% ��� �������� ��� �����. �� ��. ������#����C4E�RPShVGR��

E�$����,+��������������(FPPK)�����1��� �����1�����"���� ������ ����1����%1P������" �.3�.�� ���� ��������1�������� ���"��� ���!.���� ��$� �����1�QFJ������.�"� �����1��� � ��� �����" �Q$��-�. ���������C"�FRLShFRSF��

E�$����,+��������������(FPPX)���� ���E�����!��.���.�� �� ���FJ����.������'�.�"� ��' ��'� ��� ����Z� .���" �����������-�. ���������C��FJKXJhFJKXR��

E�$����,+�>�����D+�5�� ��>+�% ��Z�����+�%�����\�+����������+���������+����% ��Z����!�(FPPV)��FFK�N.��B��+����,������ ��� ������� ���1�������.�FJ��������.�FL��' ����567��8��E"�JFGPhJFFF��

E��Y� ����+����Z� ���8�8+��������� ����(JGGS)�������1�������.�FJW����.�FL�����FJG� ������� �����/���"����#���' �0�'�#��"��FGLFShP��

E�����+�b�Y��,+������Y��.����(JGGJ)�=���� ��3�.����1�� ����B�*5F���� �������* ��Y�" Z������� �"������� .��� ���� ��Y� ����"��������. ���-�JPShLGF��

E�� $��+�i�����+�=�����N+�,���"�%+�,����>>�+����E�$����,�(JGGX)����Z��������.� �����������1��� �����������.����"��� �� ���� .��� ��� ������ ��� �� ��� �����1������.�(FJWFL)���� �����. ���� �����-!�FXRhRS��

E�����N=+�5��>5+�N�.�Y���.����N+�����.����Y������=�(JGGX)�,������ ��� �����1���� � *�������Z .�1�� ������ ������.��" � .��,���*1���� ��� ��� ��� �� ��1�����.�FJ��*��������. ����4�KGhXJ��

E�����N=+�%.���%E+�����.����Y�����=�(JGGX)�=����� ��� ����1���� ����" � .����������+�����.�FJ+�������������������" �%,�,L��2��������!�VPPhPGX��

:��"���. ���+�=���>�+�5����5B+����%��������(FPPS)�% ��� ����� ������ ��1����� ��� �����1� .����.�*��"��� ��1���. �� ������������ ����"�����/4%�XJFhV��

Page 193: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPJ��

:��"���. ���+�%��Y�>+���.���+�%Y�"��=�+�5����5B+����%��������(FPPX)�,.�J�G����� � ���� ��� ����1���. �� ������������ ����"�����/C%�LFFhP��

:��� �,+����\���.����B�(JGGG)�������$����� �����1��Z���"����1������� �������������������������������1� .�������.�����"� ���-������. ����!"�VSPhXG��

:�� ��+����Y�>*5+�5���,+�����������(JGGK)�,.������ ��*��������� ���%F�J������ ��N.�WN.��Y������� .Z� � ����.�"� � �������������� �����������1���4!�LRVVhPK��

:��b+������O+�����������Y�N��(JGGX)�������FL��� ��� ��Z� .���b������*��� ���������� �����-�. ���������E��FFGXXhRL��

:���i+�:���%*,+�,������+�������+������*,��1����>�+�!.��D:+��� ��%�+�!�� *%����N+�b.���>+�:���5+�%�.���1��\\+�=��"�� ��+���Y��.���+�'�����+�\� ����*% ����!+����%�.���1�����(JGGV)�� EJ������E������ ����� ���FPGN.�������������� ��3�.����1�� �������� �N.����� ��� +�1������.�����1���� ���+���������� ��� ��-������. ����E"�FVRhJGL��

:���5+�b.���>+����%�.���1��\\�(JGGK)�N=�*"��������� ���������������������� �����1����. �����1����� ���� ���������������� ���� .��� .��������1��� ������������� ����� ��*���)������-�LXSLhKP��

:���i+����%���Y����8�(JGFF)����� ���������������N����� ����" ������ ���" ��������%�"��� ����� .��� .� ���.��������������,��� �����*���/��������E"�KKFhKKR��

:��� . ����B+�E����.��i+�������>+�=��B>+����!���.����B�(FPVR)�,.�" ����������"��� ���1��,�*"��������� ������ ��� � .������������Ef��.��������.�� ��"�����/�!�LJFhX��

:������+�:���.����E�+������� $����(JGFJ)�,.�N.������������1�!iE*S�.��������� �����������N.����� ��� ���������. ������JFLhP��

:� $�%+�%.��Y������� ������+�!����!+�N�������+�=�����N+�8 ��!+���� ����+�B�� ��!N+�=�"���NN+�\�����,+����,����>>��(JGGR)�% ��� ����1�����.��*�XLN.��B�*N.��������3����������� .Z� �1��� .��� ��� �����1�N.���" ���!N���' ����/�E�FPJLhR��

���.� ���N+��-%��$��E�+�% ������:+�����Y���E�+�����'+�����Y. ��%��(JGFG)������.�(�)*��� ��� ��� �����1��NEJ�" ���.�������� � �.������������ �� ��� .������1���� ���Y�����!��-�. ���������E!�FLRSVhXG��

�����������>+�!.���������+������ Y���>%�(JGGF)�N���� �����1����3��������" � .��������,����N.�� .����.� .�BNEX�(�LV������)�����Y������� .Z� ��)����������!�KLKhKL��

Page 194: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPL��

�����������>+�!.���������+�,�����,+�������O+�=����� ��%+������ Y���>%�(JGGS)�,.��������,�*"��������� ���N.�������� ���*6���" ���NO!E*>=E������������3����*���������-�JPhSF+�B�������

��� $��E+����"��Y��B+��.��� �=+�i��,>+����\��� ������(JGFL)�:�Y���*������� �N.��B��(:�N�)�����������N.��B������ �Y���������������1��� .������������ �����1��"����������*���. ���������-�JRVKhPS��

����7��+�'$������'+���������+�!����#��+������3�8+��������� ����(JGFS)�� ������ ��� ����+��:;71��)�(�51���+8����)�:<���=���������+������ ���� ���������4>� ������������������

��!���!N+�5�������+�E�����N>+�%�����Y����+����\�������%�(JGGK)��*��� ��������������"��Y� �� .�1� ���������*���& +��' �4��KKFhRR��

�����,B+����*!.��Y���+�E��������+�����Y�"�� �N+����!�� ��>�(JGGJ)�����.�FJ��������.�FL���� ��� ������ � .��.����1��� ������1���.�����-�. ���������CC�JSKPShXGG��

�����,B+������,�+���E���+����!�� ��>�(JGGF)�'� ��� �����1�����.��FJ��������.��FL�Z� .� .�� ����������������1���.���������������.������1���" ��*�� ����������/���"����#���' �0�'�#�%E�KFPhJS��

������+��������+����� ��+��������+�\����!�+�:�N���>+����N� ����N�(JGGP)������ �����1�N.���������3�.����1�� ���:1���� ��� �" ���� ���Y������*��� ��.���.�� �� �����*��������. ����%�KPXLhRL��

������+�����.����!�+��������+�E����+��������+�%���$��+���Y���!+�\��!+�:�����>+�����=+�'Y�����+����N� ����N�(JGFJ)���.���� ��������. ��� �� .������ �"�������� ���� ��Y� ������������ .����.� ���*��� �N.��B����.�"� �����*��������-!�XSJhKK+�B������'����

� ��,=+�5�� �>+�%�.Z������!+������Y�����(JGGL)�����.�FJ������ ���� .���������6��� ����� .����.�%��� ������Y�������#��-�/��� ��������/��� ����E!�!FJVFhPL��

� ��,=+�%�.Z������!+������Y�����(JGGJ)�b�������������*F���������11��������� ���1��������������������������.�(FJ)���� � �"���� �� .�%���.������ �L��������������� ������������������"��� ������ .�����������-�. ���������CC�JSVKKhV��

������=:�+�:�Z����!+�!.��D:+�:���%*,+����%�.���1�����(JGFJ)�N��1�(�FPGN.��B�)�Y���Y�� ���.�"� ��N.����� ��� +�1������.������ �"���.�� +���������� ��� ��Z�� �����1��� �������/&�'�2���C�LRVLG��

����������+����E�� ����B�(JGGX)�5 �� ��������*��� ��������.�� �.�� �� ��.��-�/���������-C�7$$'�%SXhKK��

Page 195: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPS��

���.�����+�E�� ���%+������� $����(JGGJ)�!� ��������������"� ����� �Y��������������Y�����*��Y���� ��WN.����������3�Z� .������ �"���"��������� ��� �������������SFhKS��

������+�=;��"����+���""���%+�\ ��.���Y�=+����O11�������%�(JGGV)�����.�FJW����.�FL�1����� �������������$��������� �����1����������� .�����������"���������"�������� �����*��������. ����E�FSVGhV��

���� $�!+�E����85+���� �E�+�%.��!%+�%�.��.��Y���+�����. ���+�E�$����,+����E.���>5�(JGGG)�N���� ����1������ �������������F�(N�%F)����Y� ���������������.���������������������1���� ��.�� ���-�9�������4-�FVJPhLV��

��������O�(FPPK)������������1�!�E������ �����"�����/C-�FLFhS��

=��� ��E*'+����'����Y����(JGGK)�! ��Y� ������1��� �����1�N.�������������� ��3�.����1�� ����� ��� ���� �1��� �����1���N.�������������� ��3�.����1�� ��������"��������� ���1���%� P"+��������������� ����2��������-�XKhRX��

=�Y������%+�E�� $��+�,���"�%+�%�$�Y��=+����E�$����,�(JGGS)�!�� ����������1�� ����JGS�����Z� �.�'��������1�����.�FL�1�������� �����1��FFKN.��B�������Y���*������� �N.��B���*���/��������44�FGJPhLS��

=��"�� ��+�!.����i+�!.����b+������Y��.����(JGGP)��������=���� ��B3�.������� ��*5F�N���� ��!�������� ��������:�����$��� ��� �����1�N.���� � .�:�����B����"�SGRGhSGVJ��

=��B>�(FPPK)�5 �� ������������ �����������$����1� ������"������������������E"�JSPhKR��

=��.������i+����i�������%�(JGGX)�!� ���������������� ��B!,J����N.����������� ����� � .���� ��������� 3�������� �Y�������-������' ���%�FGShFS��

=���>+����1�������>+�����5+�8���Y���� �N+����8� ��*i��� �Y� ��,�(JGGL)������ ���" ���������"��� ��� ����� ��FFSN.��B�+��������������� ��3�.����1�� ���1���N.������N��F������� �����1������.��������� ����3 �������������� ������ ��1���%/�VSVhKX��

=���>+�8���Y���� �N+�%�$�Y��=+�E�$����,+�!�����\+�������=+����8� ��*i��� �Y� ��,��(JGGF)�'� ��� �����1�. �� ��������FL���� ���Z� .�����*Y����*���.��������� ���FFG�(�E��FFG)���� ������*����� ��E���� ��� ���������. ������FXVXhPG��

O11�������%�(JGGF)�'�������1��� ������1�. �� ��������*��� ������ �����������.�*1���� ������2��������"�FXLKhSJ��

Page 196: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPK��

O11�������%+���������8+�N���>*�+����%������'�(FPPR)�8��������% � ���1� �����'������!���!.��Y�����������N��� ��1�����.��FL��1����� ��' ����567��8��C!�KLLhKLX��

O����>�8+�8�������+�%�� ��������+�E�����!+��������:+�>����:>+������+�!�3�>+�>����,%+�=����B��+������Y�%+�����������(JGFG)�M��� � � ����.���.���� ������������Z������1�����.���.�� �� ������ ��������� ��������� ������' �' �����/���L��

���Y��%+����\���.����B�(FPPF)�,.������.������� ���� ������������ ������������Q*��Y���� ���������4-�SSRhSKV+�B�������

�� .�Y�N+������*\��Y��8�+�5�Z����!+���������=+�\.� ����+���Y��.���+������������������!�(JGFJ)�,.������ �"��*������� �N.���� ��� ����1�� ����B�*5F��� ��� ��Z� .�3�� � ������3� ������� ������� ��11��������������/�LPRhSFF��

�� .�Y�N+������������������!�(JGFL)��B�*5F�����.� �� ���� .��� ���� �" Z��� ��Y� ������������ ��11��Y�����'�����)3/�����-�FRShP��

������N+���� ����%+�%������:+�%���.$*��$�'+�������N+����:�����>!�(FPPR)��� ��� �����1� .��������1�� ��*Y������" �N.�+�!�!SJ+����N��*F���� �����)������������SXLhSRK��

� ���E�+����N�����%:�(JGFL)�������.����N��*V��� ��� ��Z� .� .��QFJWFL���"��� +�!���� ���+��������� ��� �����1� .�������� ���� ������ .Z� ��*���. ���������-�LSXGhRF��

�����+�=��"���>+�B� �����+�������������(JGGF)�!� �����*��� �3� ��1�� �Y����������������������' �����%��FKKGhL��

�����E:+������ �N,+����:1Y�Z� $�N>�(JGGJ)�%��* ������"������� �����"���1���*��������. ���/�XLPhKG��

����>+�=�"���N+���������+�����:+�����$�����+����>��� �.�>��(JGGR)�'� ��� �������������1����������!���������.��������� ���:D8''���N������ �����1��� .�N����� �������=������ ����1������ ��*!�����N�� ���5 ����� ������/��������1���!%�KhFL��

�����>�(FPPK)�! ���������� ����*��� �Y������� .���������� ������#���������1���44�FVFhJFJ��

�������Y���B�+����1�������>+�8���Y���� �N+�N��. ���\+����8� ��*i��� �Y� ��,���(JGGJ)�K*5 ��3 � � �����S(�)���� ������������ �� .�����.����"��� ��1�. �� ��������FL���� ����-�. ���������CC�JGVFJhP��

N�.�Y��8+�����.����Y�����=�(JGGF)�,����1������������ �����2��������"�FXGRhFS��

Page 197: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPX��

N�.�Y��8+�O������+�5��>5+�����.����Y�����=�(JGGS)�����.�FL�� ����� ����������� ���� .����.���� �� ��*�� ��� ������� ���5�3*F��-�. ���������C%�SPSGXhFL��

N��.�%�E+�,��!N+��������B>+�8���.�����+����!�� ��>�(JGFL)������N=�*FVJ���������N=�*JGG����� �����*��� �����"��� �Q*FL�(�=�FL)�3������������������������� ����� ����� �������� � �������������-�. ���������EE�RPVXhPK��

N��������%��+��8���,+�b���i+�E�����!+�!.����Ei+�E�"��Y��,%+�,.�����%+�!.���%+�������B+�!�����Y���+��� .����>�+�%.�.�%,��+�: ����>��+�!�11� ��+��������%5+�% �� �>+�%Y���� ����+�\���\'+�%���.����NE+����E�"��Y���E�(JGFF)�!� � ���� ��� ����1� .�TJ������������ ��*������ ��������3��"�����-CC�KSPhKK+�=� �����"���.�����������

N��i�(FPPV)�!����������!.���� ��$� �����1��B�*5F+�������� �"��*������� ��������=���� ��B3�.������� ���1���N������N.���,������-�. ���������C/�LSPKShLSPXG��

N$����E+�\��:+��� ��8+�5Z����%*'+����5�����(JGGK)���� � �� ����.���� ��$� �����1��� ��.���������� ���1����.�����,���Y����������*��������/������ ��-�FXPhVF��

N�����+������5B+�%�.�.��*N��+�E����=+�%�.�� ��+����N��.�� �:��(JGGS)�!�� �����1��3�����"����.�������� �����1���� ����" �1������.�����Y������"���"���� �C�FGKPhXP��

N��"��=�+�������������N�(JGGK)�N�� ���������� ��. �� ������������ �����1� .��FJ�1���� ��31�"�'�/��������' ��4�FSXhFKS��

N� �.���>+�%����Y��\!+���� ���� �BN+����.��B%+�!.���,i+�O�����!�+���� ��:��+���������,B�(JGFL)�� ������ ��� � .�=*����!* �������1��QFJ�������1����� ��� �����1�N.�*��� ������������-�*���' �����E�L��

N� ��%:+����5����N���(JGGP)����* �������1���!N��� ��� �" ���� ��*�� ��� ������� �����"���1���*��������. ����"�VFPhLG+�=� �����"���.�����������

N��.����+�\� ���8+�:��������!+�=�Y� ��5+�E�$����,+�������� �>*:�(JGGJ)�N���� �����1��,�*"��������� ������.����(����.���)�����������" � .�$���*���3��*�����*"�������.���.���� ��*KG�(B��KG)��-�. ���������CC�SGRKFhP��

N���1� �5+�!�� �������+�N���$$����+������ Y���>%�(JGGX)�N�����.�"� �� .���"��*�����N.���� ��� �����������1�����Y*��� ��,��������� ��Y��-�*���' �������V��

N����B�+����\��Y��,��(JGGG)��,���*�� ��� ������� ����1���. �� ������������ ���������� �����1������ �������������(N�%)����N�%*��Y���� �����#���1���. �����4%�RPKhVJR��

Page 198: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPR��

N� �.�Z.�� �%+�������+�\������:+����N�����Y����(FPPP)������ ������.����"��� ���� ��� � �"������,������������ ������ �"������ ���$� ���� ��������-�. ���������C-�FLSVKhPG��

N ���D�+������ �>+�%������������+��������+�\���*i+�=������!+�������������(JGGK)�,.�N.�*����1����B��:1���� ��� ��Z� .�����"������������.����� ������� ���� ������������.���� ��"�����-C�VKhFGG��

%���.������+�������%+�������������(JGGG)����� �����������1�������1���������$� �����1��*��� ��*��������� �����3����������� ����*��������FXLhV��

%�������%=+�'�������'+���� ����+����Y���!�+����=���� ���(JGGR)�N.�WN.�*������� �Y����*''�������������� ��������"� ��1��� .������������6��� ������*���. ���������E�LSJPhLP��

%e��.$*���e�$��+�!�"$���%+�����#�*5�$�!+������e�!+������ ���+��� ����+����N�"���!�(JGFS)��Q�������������� .��Z���� .����������' ������4�VLLhSV��

%�.�1���+�� ����$Y���+��������+���� ��+����E��"���.�>��(JGGF)�5 �� ������������ ������� � Z�������1��� �� ������������������� .�������.������������ � ���������"C�FVLhPS��

%�.�� ��+����5������(JGGJ)������������� ��3�.����1�� ����1���N.���,������ ���������� .��Z� �.��)����������4�FKVRhXGP��

%�.�� $���+����Y�BB+��� ����+����8������ �:�(JGGG)�N.���,���������������+������ ���+�����������������������1����4��FhFJ��

%�.Z� $��>E+����Y�BB+��������5�8+�����-%��$�*%�.�� �!�(JGGK)�B��� ������������������� ��� �����������������1���� �Y�������-�. ���������E"�SFXJVhLK��

%� $�E+��;���.�8+�5������>+��� 6��8+��� $���+����%�.��"�� ���(JGFS)�T*���� ����� ��� ��Z� .� .�" �W��������"��� ���1� ��������*��� ���������.������� .�\� W!�(Jf)��� .Z� ����3��������� ���� �����/&�'�2���%�VRFLJ��

%.��!%+�%������6�.�%+�!.��5+�E�$����,+����E.���>5�(JGGG)��FL���.�*��� ��iEJ��� ��� ������iEJ��������� ����1��FL���.��*�������������������� *��� � �������� �����-�. ���������C!�JSSRGhX��

%.�� ��!�+������������N�(JGGJ)�,��� ��Z���"������ ������� .��������1����Z�������� +������ ��� ����� �Y�������/���"����#���' �0�'�#�%%�LXLLhV��

%�����Y����+����\�������%�(JGGK)�,.�����+��B��+������'���1�. �� ��������*��� ������.����"��� ���9���-�. ���' ���KFhXX��

Page 199: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPV��

%�.���%�(JGGP)�N���� �����1�N.��B����� ����" ��FJWFL*��������� �����.��-�/���������!E�SFhP��

%�����\�+��������N,+����% ��Z�����!�(FPPS)�����1��� �������!.���� ��$� �����1� .���%�"��� ��1��FL�9��-�. ���������4%�FPRPXhFPVGJ��

%����:\+�\���.�>5+����N�$���� �B�(FPPP)������.��FL�% ����� ��N.�*��� ��� ��� �����1� .�! ����3 ����*J������ ���-�. ���������C-�JRKXJhJRKXX��

%��Y�>+�:��"���. ���+�=���>�+�5����5B+����%��������(FPPS)��,������.�������1����� ����1���� .�F�R*���� � ���� ��� ����1� ������������.�*���*�'�*S��"�����/C��JRXhP��

%���.��E+�E��Y"������+�b�"���+�5��.�����N+�=;��"����+�%�������+����%�.�� $���(FPPS)��FJ�����FL��*��"��� ������������.������ � � �"�������� ���"������1��������������������������� �������. �����. ������1����������%E�PGXhPFS��

%������%N�(FPPR)����NO,B'=��B!5�='%�%�'����. ��1����% ��� ��������� �����#���1���. �����44�XLPhXRV+��������N��Z��SFLP�B��!������\� +���O����3�FGFLP+�������� �+�!��PSLGL*GFLP+��%���

% ����:=+������,�+����!�� ��>�(JGGX)�,.������ ����1������ ��������������������1��3������ ��� ��� ��� ��Z� .�����.�FJ�"� ��� �����.�FL��*���/��������C"�FSXFhV��

% ��Z����!+�!�� ����+�!.��b+�����.�%�+�5������i*�+����%�����\��(JGGR)�N���� �����1�N.�������������� ��3�.����1�� ����" ������ �����#���/���� �������C-�FVPhJJV��

% �Z�>:+��������>�+�=������=+�5�� $����B>+�B��������:+���������������(FPPF)���. �� ������������ ��+������.���*L+������������"���������� �� .���� �����1���.���������1� ���� ��� �������::!*�EF��� .�����������-������. �����-�FFFLhJS��

% �� .�������+����%������'�(FPPF)������.��FJ���������.��FL���"��� ��1�����1��� .��������1������ ������.����"��� ���/���"����#���' �0�'�#�EE�KKVJhX��

%��E*!+�,�Y�Y��,+����� ����$Y����(JGFF)�,��� �����1� .�N.��B��B� J� �� .���� ��������"������� ������������1����Z�1���� ����������� �Y�������������������FFGShFK��

%�$�Y��=+�5�6��Y�=+����E�$����,�(JGGP)�N���� ��������. �����������1��� ������1��FJWFL*��� ������������� .Z� ���"���� �������C�KKhRG��

%�$�Y��=+�=�Y������%+������5+����E�$����,�(JGGL)������.��FJ��� ��� ��N.���,���� .����.� �����*��.���.�� �� ���Y���*������� �N.��B���/"#'��""��

Page 200: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

FPP��

%�$�Y��=+�,���� ��E+�5�6��Y�=+�������E+�,�Y� ��N+��������%+�E�����,+�5���Y�"��,+����E�$����,�(JGGP)��� ��� �����1���Y���*������� �N.��B��" �����.�FL�Z� .������1���� ����1���� ��������������� ����� .��� �1����-�. ���������E-�KGGGhP��

,� �Z��E+�E� �.�5+����=���.����(JGGK)�%�����+��������"��������� ����1�����.�FJWFL+������ �� .�����.�FJ*�����N.����� ��� �����. �����. ������1���������//C�XFKhJG��

,� ���� ��,+�D��D+������ .���N+�OY��� ��'+������Y��,�(FPPP)�5�����B!,J�������3�.����1�� ���1���N.���,����+��.���.�� �� �����JW���.���+��������������� �Y�������-������. ����-C�PJFhV��

,�������N+�,����\>+�5����>N+��������������(FPPS)���� ��� ��� �����1�"���� ����������� �����1������������� � ��� �������-�. ���������4%�XGPLhFGG��

,����>>+���������+�����������+����%������%N�(FPPR)�% ��� ����1�N�%S�"���� �����S**�� ��� ��(�����.�F)��� �"���$� �����1� .� ����� ����� � �1����,��. ��� ����������E%�JKFhXF��

,����8�+�E�Z����,+�%.��Y������� ������+�E�$����,+����,����>>��(JGGK)�%����.� ��1��� ��� ������ ����� � .���"����� .�����.��*�NEJ*�" ������������3��' ����/�"�FXVXhPG��

,��Y��.���,+������+�:���$����8+�%�$�N+����!.�������(FPPR)�!����� ��� ����1���� �����1�='5L,L������" ������.�FJ����N��F��2��������!�RJRhLK��

8���Y���� �N+������.��8+���� .�� ��5+�E�$����,+���Y����+����8� ��*i��� �Y� ��,���(JGGG)�!��1���� �������� ��� �����1����3���" ��FL���� ������.����"��� ��-�. ���������C!�JXJGXhFJ��

8������ �:+�����-%��$�*%�.�� �!�(FPPR)�N.���,������������������� Z��Y���)������������JJPKhJLJJ��

8����$�N>+�5�Z����+�i�������+�\��Z�� .��+����!���������:�(FPPR)�=�������������� �� ������1������$����� ������� �"��� ��������� �"��� ����������������� ����*���. ��������E�PRLhVK��

8� ��+�=;��"����+�%���.��E+�5�� ��Y�!+��������Y���B+�%�.�� $��+����%�.�� �����(FPPS)�,.�Q*��"��� ���1��*��� �����FJ�����FL��������� � �� +�"� ��� ��������� �� ��� � �� ��(�.'�&����//%�FXGhFXS��

8������+�!.�1����>+�N�������E:+�������!>�(JGFG)�N�������1���� ��B����������������� ���� ��� �"�� ��� ��1��������� .��� ��"���1����������"�VSJhKR+�=� �����"���.���������+������������1�������������"���.���:��� ������N��. ��N�����

Page 201: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

JGG��

8������E+�8����!+����N� ����!%�(JGFJ)������� ����������� ��1������ ��*!�����N�� ���% ��� �����31�"�'�/��������' �//�FRhJR��

\�.���+����>����,:b�(JGGJ)�5��PG��� ��� ���������� �� ���� ��� � .������ �������.��FJ�"� ��� �����.��FL� ���������1 ���-�. ���������CC�LJSGPhFJ��

\��� ������(FPPV)�:�������1��� ����������"���� ��� �����1������.���. ���' ������1�����C�FJKhLK��

\��� �����+�\�������,+����������5N�(FPPK)�:�������1��� ������1� ������������ �����-�. ���������C"�KGLhX��

\ ��.���Y�=+����O11�������%�(JGGK)���������������� �������,.���!���, ��%���1������� ������FFKPhFJGS��

\.� .��'+�E��Y�5+�,������!+�,����*���$��$��+����E� �N�(FPPK)�B3�����������������1��1�+���������������Z� .�� ��� ������������� ��� �������������� ��3�.����1�� ������� �� .������ �� ��������1���� ���Y�����!��-�. ���������C"�FVLVVhPK��

\.� .��'�+�!���"���%+�N�������E:+�������!>�(FPPR)��"��1���� ���� �����. �� ��. ������#�����1����������//���Fh�JL��

\���+�������+���� ���N%+����\��M�(JGGX)�������������������� ��3�.����1�� ���� ��B�����������1���� �Y�����������������!�FJLShP��

\��>+�b.���>+�:���5+�=��b+���\+�����#�*���6��:+�����.��N>+�%�.���1��\\+����!�~ *%����N�(JGGL)�! ���������� � ������ ������FPGN.��B�����1���� �*���� � ����� ��� � �����B���* ������� ����.�� ��1���*���.�� ��1�����C�JRhLV��

D��>+�\�����+�8���E ������+�5�$���Y��+�% ����. ��+�E�� �E+�,�Y�Z��i+�%����� ��=+��� �.�����,+����������5N�(JGGL)������� �%����������! ��Y� �������"����N���� �%�1*O�����$���������� ����=� ���.������������-�JGFhJFS+�B�������

D��=+����� �:+���"�Y���'+������ Y���>%�(FPPL)����� �� ����.����"��� ��1��FJ��� � �� �� .������������ .Z� �������.��.� �������������='5�L,L�������/���"����#���' �0�'�#�%"�XRSFhK��

i������.��i+�E� �.�5+������E+����=���.����(JGGJ)�����.�(FJ)��������.�(FL)��� ��� �Z� .�%�W,.����� ����.���.� ��� ��K����� ����� �� ���.���.� ����� ��� ������. ������FLKLhV��

i���.��.��i+�%�� ��i+����� �*E��� ��=+����5� �Y ������(JGFF)������� *����� ����Y�������� � ������*1� ���F"�(��NF")��.���.�� �� �������������� ��3�.����1�� ���5F�(�B�*5F)� ������� �N.��*��� ��� ���� ��Y� ����������$� �����-�. ���������E4�SSKRXhVS��

Page 202: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N1�����

JGF��

i��5*�+�=���>*O+�������=:�+�,��6����'+�\���.�!+�%.��:+�E���:+�!.��D:+�,������+�:���%*,+����%�.���1�����(JGFF)��FPGN.��B��(N��1)������ ������������������ ���������������������� ��� ����Z� .�1������.�����Y������������1���C��LXGhRG��

i��>*b�(JGGJ)�N��*,���8������$� �����1����������� �����.������������� �����1� .��� ��� ������ ���1�������������"�����*���/��������4��LKJhLKP��

i��D+���Y����N+����������\�(JGGR)�N����1���������N�"��,��������� �Y����������-������. ���E4�JKhLK��

i;��O+���Y� ��+������� $����(JGGK)����B!,J*�� ����������������3������ �� .�������$� �������1��� �����1�N.����-������. ����C"�KRFhVJ��

b��������\+������� �B+�=������+�=���� �>+����%�� �.�,��(FPPR)�!���� ��Y�" Z������� ���������� ���Y�����!���� �" � .����������.��������.�F���"��� ��"�����/E!�SSJhX��

b�Y��,+�E�����+���������������!+�E����!!+���.����+������Y��.����(JGGS)��JF*�� ��� �Y�����F��.���.�� �� ���������� ��FS*L*L�"������ ���B�*5F+�������� �"��*������$�N.��3�.����1�� ����-�. ���������C%�FVLPJhSGG��

b.���>+�:���5+�%.������+�%�.���1��\\+����!�~ *%����N�(JGGF)�'� �1��� �����1���������� ��� �����1�FS*L*L�Z� .��FPGN.��B���-�. ���������C4�SFLFVhJS��

b.����%+�!����O�+�!�������N+��� Y���>%+����%������\��(FPPX)���!* ��������� �� ��1� .������ ���" ����"��� �1���� ���� .��� ��� �����1��.���.�������!*" ���-�. ���������C��JGJGVhFJ��

b.���i�(JGGF)��"��1���� ������������� ��3�.����1�� �����3������. �����' ��4�RJShLJ+�B�������

b.���+�E���Y�E%+������,B+�i���������8+������Y�����(JGGS)�����.�FJ���� � ��� ��� ��Z� .���J���������ON�����.�FJ*� ����� ���J���.���.� ����� ��� �����.���.�� �� �����1������ �"��*������� ���� ��+� ����-�. ���������C%�KSPVLhX��

� �

Page 203: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 204: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

Page 205: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 206: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

������� ���J

Page 207: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 208: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JGR��

������ �K

����� <���������� ����������� 1��#�������� <�������-���������

� ��� .���� ���� � ��� ���&����� �� � ��������� ��� �� ��� $���4� � �� ���

��� �������"�� ������� <����+������ ��"���������"����������7 ���+���"����

���� 1� ���� �� ����&�������� B��� ��� ���� ���"�� �� �� ��� <��� �� �4�� ����

��� <��� ��������� ��� � � ������� ������"����� ��� ���3�� ���� �����

����� � � � �������� �� ��������� � � ��� N���� �� ���� � ��� 1��#���� �/��

�����+� ��"��/�� � VGG���"��� �� �1��� �� ��� ������.��7��M���� ���� �� ���

3 ����&������ �-���3� ��� ��� ��� �������� ��� ������ ���1����������� ��� �������

�-�� �����4� � ��� ��� <��� �� . �� ���������+� ��� ������ � ��� ��������� �� ���

��"����� �����7 ���� �� ��� ��� ���� 5�� .�� �1�� �� 1��#���� � ��� <��� ��

��� ������ ���������������� ��� $���4���

:����� <�����. �� ����������� ��� 1��������� �����"��� � ����Q+�

�T����U�������������� ���.������ ��� ��� +��������3�������������1�������������

��� ��"��� � � �Q� ��� 1����� �� ��� ���� �� �����4� �� �������� � �� ���� ��� �,��� �� ���

������-�� �����4���������������������4�������"��� � ��Q���#����TU+�����3�����

�����;� ��� �����4��������1� �����B�� �������� ��� $���4����"��������� � ���

��"��� � ��Q�.����� $�����,������������ ������������������"���#����TU��:��

��"��� � ���Q� ��������� � ��� �#�����-.����� $������,�+�������� �������

���� �����/��� 7��� ��� $� ������� <��������������

:����"��� � ���Q�� ������ <�����������3������� �� 1��#������Q�+�

�Q�+��Q�����QFJ��:����"1��#�����FJ�� 7�1������������"����QFJ����QFL������ ��

��"1��#����� 7����������������������������1������������������3��������

���������� � �"�������+� �� ���3�� � ��&�����+� ��� �������4� ��&�����+� ��+�

��������+�-��������������-���� �����:����� <����QFJ����QFL������� ����������

�� ����� �� ��� �� ���� �� ��� ������ �� ���� � ��� <��� 1� ����� :�� ��� <���

�����������*����� ��� ��������� <����QFJWFL��������������1������� ���

������ ������� ��� <��� 1� ���+� ��� <��� ��� ����� �� ��� <��� ����������

��� ��� � ������ ��� 3���� � ��������+� �� �� � ��� ��� <��� 1� ���� ��

��"����� ��� N.��B��� �� ��� ��.����+� � �� 0�� ���� !��� �� ��� <���

��� ������� ��"��������3�������5��PG��������������,�+�������3�����'����

?� ����������� <���������������1��1� ������J�����K���3#����������� <���

:

Page 209: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JGV��

N�%�� �� � �������+� ���� �� /�� ���� ���� �� ��� ��� �� ����� � ��"� �� ���� ��

���� �� � ��� ���"���� � � ����� �������� 3����� ���� ��� 1����� �� ���

�� �1�����4���������� <�������0���3�����QFJWFL���

������������1� ������������ �����/�������� �����������"����

���1��#��������N.��,������:��1��#��������N.��,�����1�������� ������?���

1��#����N��+� � ���������� ����� ���� ������ � ��� ��+���������,�+������� � �

���� ��+� ����� �� ����� ���� �� N.��,����� � ��� ��������� �� ���� �����

����� � � � 1�������+� ���� ��� 3���+� �� ���������� +� ��� ������ � +� ���

�������4+������������� ��������+���������4���&���������-�.��4������ ��������

1��#����� 7���"�������������"1��#����N.�+�N�����!�SJ��B����������W�,��� 7�

��� ���� ������� <��������������������"���+�����������"�����-�� �����4�

�4�� ��� �������� ��� <��� "����������� � ����� ��� � �������+� ���

N.��B���� :�� N.������ �4�� ��� ��������� � �� ��� $��� ��� .�������� �� �,�� ��

���+� � ����� � ��� ��� <��� N.�� ��� ��� � � � �������� ���� ���� ,��"/� .�� .��� ���

N.���'� ��� ������ �-��������� � ��� ��.�"���4� � ��� ��� <��� N.�� 6�� ��+�

����3����������� �����4���

����������"1��#�����������/�����1��#�������������"�*N.��B����,� �����

��"��� -���� �� 1��#���� ������ �3�� ��� ������ -.��������� �� ��� ��� <���

�"�+� ������ � �5� �� ��� ������ -.��������� ��� ������ ���� ����+� ������ � �5��

%-.��� ���� � ��� �� ��"��� -���� �� 1��#���� ��� � ��� ����� �� ��� ���

��� <��� �FJ�� :�� �FFKN.��B�+� ��� ��b*N.��B�+� ��� :�N�� �� ��� �E��*:"��� B��� ���

������� 1�����������"1��#���������������N5*N.��B��+� 6�������� ���������

=* ������� ������ �3�� ���� ��;������ ��"� �� �� .��������� ��� ������ N�%�

��� ���� ��� ������ <��� H���������� ����� ��� $���4������� <����I+� �� /����

���/�� -��� ��� �� ��������� ��"� ��� ��� <����FJ�� :-�E��*:"�� �� �� � �� ����

�� �����"1��#�����N.��B������ ��"/��-������������FFS*N.��B�+�����FPGN.��B��

������B�*5F��%-.����� ��������FFS*N.��B�� ��"/��� ����� ����������#����TU+�

������ � ����� ������� �������.������ �� ��������FPGN.��B��/�����������

��� <���1� �������������� ��� $���4������QFL��:����� <����B�*5F+�����������

"���+����.������ �������������-� �������4��� ���/������ <�������

:�� �B�*5F� /�� ��� ���"���� ��� FPPV� ���� ���� ��� <��� ��������� ����

����� ?"����� :�� ���� ���4� ������� ?"���� ��"��� ��� ������ ��� ����� ��.�"� ����

��"�� �-�� ��� � � �� ��# ���� � ��� ��� <��+� �� �� ��� ��� �������� $���4� ���

Page 210: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JGP��

����� ?"�������������� #����3 ����&������������������������"���� ������B�*

5F��������� ?"���+��������;� �� +������� �����4��N.���%-.������ ������ �

���� �� ��� � � �� � ��� N.�� ���� ��� N���� �� ��� � � ��� �������4� ��� ���4� ��

����� ?"���� �-.�� ���� � ��� /� ���� �������4� "�� �� � �����3�� ��� 1��1�������4��

��1�� �� �������� ��� ���� 1��1������� �� ��� �� �3��� �����+� ���� �1�� �

��� 3 ���&����������3���+��-.����� ����������������� � �������������W������

�����3�!YFW��������������1��1�����������B�*5F����� ������������ ��������

�� ������� ���-��.�"��������� <����:����� �����1��1�������4������B�*5F����� �

��� �� ������� ��� ��� �7� �� ����� N.�+� 6�� ��� �� ��� �� -��� ����/����� � ��� ���� �

-���������� ����* �������� :�� �B�*5F� �-.�� ������� � �����"�� ����� �� ���

�� �����3�4�� ������ ����� �-�� �����������7������������� ?"�����,��"/�

� 7� ����������� �� ��� �������4� �� ����� ��&�����+� ��3#� ���� �� ��� �������4� � ���

������ � +��� ��� � ������1���������&��������

B���������&���������� ������������ ��1�����%+��+��GWF����J������� ����1���%�

/�����������������4����=�������1����������������������4����������&������������

���&�����1��������������:���� ������1���+�����GWF�������J+����� �� ����3 �����

������&����������/�3���:�� 1������ 7� 1��������� ����� ���� �� ����� ������+����/��

����� /����������������4�1#������ ��������&�����1��������� �������� ������� ��"/�

�� ���� �� ������ �1�� �� ���������� ������ � � � �-.�� -����"���� �-�����

��� �7� ��� -�� ���� (������� � ��� �� ���+� �������� �� �� ��� ��� <��)� ��� ������ �

�-���1��������� � ��� ��������4� ���� �� ��� ��1��� �-����� ��� �7� ��� �����7�� 1��2��

�� ���� ��� ��� � ������� ��� ���&����� 1������ ��� ���� ��� ���&����� �� ������� ��

������� �� 1����� �� ��� � �� ���&������ 1���� � ����������� � ��� ��� 1��� �

����� ?"���� �� ��� ��� ��� �� �� /� �� ���� �� ���� �� H�������� "� I�� B�� ����

�� ����� 7�1���� ��������� ?"�����������������7������ ���������������

�����3� ��� ���� ���������4�� ������� +� �� ���� �� ���� ��7� �-������� � �

����������������-�"������4��������;� �� +�����������4�1#������������&�������

�����4���

Page 211: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFG��

����������� ����K

�6�($2��3L,(�?��23:7'('(*+��#+

N��� � ���� �������������������� ������������� <����QFJ������� ����

�������������� ����� ���������4���&�������B������������������������6� ����

�� �������� ��� ��� ��� ��� <��� �QFJ� �� ���&����� -�� ���� ���� .�����+� ��� �����4�

���<����� ���"����� ����"����6����:������������������ ���������������

������ ��������QFJ����� ������ ������

������ � � � �� ��� ������� ����� �� �4� � ������ $���4� ��"��&������

��� ����������� <����QFJ��B�����&��������� �1������ ����4������QFJ������� ����

��� �� ��"���� �� ��"�<�� .���������� � ��� �� ��������� ���� � ������

�� ����� +� �� ��� ��"������ ����QFJ� �� ��������� ������ ���4���� � ��� �������

� �� ��� ���&����� ��� �0� ���� ����� +� ��� ���� �� ��� � �� ���&������ ��� ��

1���������� �� ����4�������"���������1�� �� �#������&������� �� ��"/���"� ���

��� <��������������QFJ*�����M������������������ ����4������QFJ��� ���/������

�1�� �� ���������� ������������ $�� �������&�������"������$������������

��� ��� ��� <��� �QFJ� ������ ��� �� �4� ��� �������� ��� �������� ?"���� ���� �

�-���1��� �� ��� ��1��+� �� ��� ���/�� �� ����� ����� ��� ���� �� ����� ��� ��� �

����� �� $������������ ��� ������"��&�������� ��"��������QFJ���������������1��

����6��� � �������� $���4� ��"� �1�� �� ��� <��� ��������� �� ��� �� ���� ��

�� �������� ���� � ��� ������� � ����� �� � ��� �� 1����� �� ��� ���� 1������ � ���

�� ����/�� �0����� ��� �7� ���0�� ��������� ������������������ ��� 1��2���� �������

����2������������ 1#������ � ������&����� 1������ ����+����������� 1�� �0��������

�������� $���4���"����1��&��<���+��������������0���3�������*�� ���+�������������

�������� $���4�� ��� �� +� �� ������� ��� ��� �������� ����QFJ� 1��������"���

�-����� ��� �7� ��� -�� ����� �� ��� ������4� �� ��� �������� ��� �������� $���4� ��"� ��� Q*

�"������� ,�� � �� ��� � �� ���&������ ���� �� ���� �� ���� � ��� 1���� �� ���

����� ?"���+����������� ��������� ������� /��� ������ <���������������

�����3� ��� ����� ��6������ B�� ��� ��"��� ��� ��� �QFJ� � ���� ��������� ����

����� ?"���+����� ��0���1�������� ��1����B�������+����� ������ �����������QFJ���

����� ����� �� �� ���� �� ����� �����&����� +� �� ��� ���� ��� ��� �QFJ�

�������� $���� ��"/���"��������� ����+����������� ������ ����������� �� +�

Page 212: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFF��

��� ��� ��� ���� � �� �������� ��� ��� �QFJ� � ���� ������ $��� ��� 1����� � ��� �� ���

����1������������ �������������� � ����� ��������������� $��������������� ����

������ �������� ������������ $���4���"��������� ?"�������� ��������������QFJ�

������ ���� ��� ����� �������� �� ��� ���� ������ $���4� ��� ���� �0.�� ��� � ��"�

�� ����� � �� B�� ��� ������� ��� ��� ��� <��� �QFJWFL� ��� ����7���� ��� �� ���

������ $���4� �� �,O!+� �� �� ������ $���� � ����� ?"���+� ���� � ��� �������4�

��&�������

%�� ��� �QFJ� /� ��� ����� ����� �� � ���� � ����� ���+� ��� ���� 1�� �� ��������7�

1� �� �� ��� �����4� ��&������� ��� ��� � ���������� ���� �� .��� ��� �� ����

� ��� $����������&�����1���� �����QFJWFL+� ��� �#����!��!����QFJWFL�������� ��

���&����� 1�"��"�7� ������"����7������� ��#���� 6��2�� ����������������1����� ��

��"��1�� ��������������"����������7 ����������"������������������

��"� ��� �#���� ����� �+� ��� ���&����� !��!��� � �QFJWFL� � ��� ����� �/�� ���&�����

��������������� �������1���������� ���"�������������������� �������

��7����� �� ����� ��&������ �� 6��2�� � �� �� ���� � 1��3�� �-���� �� �����+� �� ���

��������� ������&�����!��!��+�1� ����� +�.��.������������� �����&�����

����������������������"�����#��������� �����

���������� +������� ��� $��������#��������&�����5:���� ��������������

��������� �-3�����4� � ��� ��� <��� �QFJ� �� 6��2�� � ��� ��1���4� ��"� �� ��������

%������ �� +� ����� �� ���� ����� $��� ��� ��������� -���� �� ���&����� �� ���

����������� �������"������������*�+��"����� *���1�� �� 1�� �����

������� ���&�������� ��������&����� ��&�����+� /�� ����+� � ����2�����������*��

��"� ������� � � ���� � ������ ��� ��"����� ��&������ ����2���� �� ���� ���

�1�� ����� �"�7���������� �"��� � �������"�������&������1�������������&�����

���"���� 1� � ���� ����� ���� �� ��� ���&����+� ��� 1�����4� ��6��� 7���� �� � ��+�

���� ���� �� �������� 1������ ��� ��� ���"���� � �����-��� ��� 3���+�

������� ���&�������� ����� �������� � � ��� ������� ��� �����4� ��"� ��� ���������

-������ ��� ���&����������� � +��������������� ������������������������� �

1����� ����� ��� ���&����� �� � �������*��������� �� �� ���� ����� ������

��� ��� ���&������������� ������&��������"������ ���������������1 ������

��� �� � ��� ������*�� ���� ��� ����+� �� ������� �� 1��������� ��� �� +� ���� ��

���� � �� ��"��� ������� ��� ��� 1�� �� � ��� ��� <����QFJ� �������� 1� �� �� ���

�� �������� ��� �� ��� "���+� �� ��� ����� $��� �� ����� ��&������ -���� �� ���&�����

Page 213: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFJ��

!��!��=��������� <����QFJ�������������.��.������������� ��������"����4�

� ���&����� ���� ��� �� �GW�F�� ,� � �� ���+� ��� �� ���&����� �.�QFJ� ���� ����

����������4�������� � ���" ���� ����"����� �� ���1��3�������������������"�

����"���� ���������� ���"� ������&�����!��!����QFJWFL����3���� ������ ���

���3�������������������"���+�����3�������4�3����� ��� 6������ ������&�����

�.�QFJ� .��� ���� � ��1� ��� �� ���������� ��"� ����������� �� ��� � -���� ��

���&����� �� ������ .���� ��� � ���� � �� ����/��� :-�� ��� 3�������4� ����� �� ����

�� ������ ��� �#������B��!��!����QFJWFL�/������ �#����� �"�� �����"�+����.��

� � ���� ���������� ��� �+��� ���������&�����.����������� ������������

�� ��� ������ ����������������������������� <����QFJWFL��B�������+��� ���

���&����� �.�QFJ� �-3����� � /� ����� ����� ��� ����/��-��1� ��� �� ��� ��3��

������&������� �������� �������GW�F���

:������� ��� ���� � �� �" ���� �� ������� ��� ��� ��� <��� �QFJ� ������ ����

1����4�������������4������� ���������

�6 �83,�+9+ ( +M83 '($2��3L,(������ �*7,,�7393 ��2$32( '($2��3L,(

�?��

B������ ���� ������������ ��"�����������"���1� ����������� <����QFJ�

���� ������ ��������:���� �������/���������/������� ���������� <���N.�+���������

� 7����������������� <���N.��B����:���B�*5F�/������N.��B����������������

�� ������� � ��� ����� ��� �� /� ����� ��1������4� ��"�� ��� ���� �� �����4�� B�� ���

����2����� ���� ����� ��������"�� �� �����4�� ����"������ <����� 6��2�� �

����6������*������������ ���4��B����� ��"������������ <����QFJ��������2��

��*������������ �����"������� <����B�*5F����� ���0�"�����������������������

���4������������������4����QFJ+�������1��������7������ ��� � ��������;������

�����"���������"1��#���������B�*5F�������N5*N.��B�����������������

��� ��� ���� �� ��� ���� ��� � !* ������� ���� ���4� �?��� .���3� ��"� �� ��

.������������������N5�����N5*N.��B����:������+�����������.��� �����������

1�������� ��� ��� ��� ��� ��� <��� �B�*5F+� ��3#� ���� ��� �� �����"��� � ��� ����

1��#���+� �� ����������� ��"� ��� ��� <��� �QFJ� �� ���/�� -���� � �� ���� B�� ����

���������1����� ������������B�*5F+�����1�����=* ������������� �������

��������5*�5�������!* ���������"����� ����?���.���3��%������ �� +����/��

Page 214: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFL��

��� ��� � =* ������� ��� ����2� � ��*������������ ��� �QFJ�� ��� �� +� ��� ��� ���

.��� ��� ��� �������� ��� ��� -��� ��� ��� ���4� -�� �����4� �� ��� ������ ��� �� ���

1����� �������������/����� ���������������5*�5����� ��� +����� ��1�����

������������������������� � �-�� ������������"�����QFJ��,� �����3#+�������� � ��

�" ���� ������4�� ���������� ���� ����������������"�������1��#��������

��� <���N5*N.��B�+�����FFKN.��B���� ���:�N�+� ��"/������� ������������"�

������ <����QFJWFL��� ���/�����������5��,� � ������������ ����� ������4����

�0���3� ����������� � �� ��� ��� <��� �QFJWFL� /�� �� ������ N5� �� �� �����;������

0���� � ������ ��� �� +� ��� N.��B��� � �"��3�� �� ����� ��� � 0���4� ��"� ���

��� <��� �QFJWFL� �� ���/�� �� ������ �5�� B�� 1 � � ���� ��� �B�*5F� �0���3�� �� ���

��� <��� �QFJ� �� ���/�� �� ������� �5*�5� �� �� � 3������� �� � �� ���� � �� ���

��"��� � ��� ��"1��#���� � ��� �B�*5F+� ��� �B�*5F� /�� ��� ��� /� �� ������ �?���

.���3��/������� �� �� � �������"������ �����������B�*5F�.������������� �

0���� ������ ����� � ��� �� ��� ��"��� � ��� ��"1��#���� 6�� ��� ���

�FPGN.��B���#�����0���3��� ���/�����������?���.���3��������� <����QFL��

���������� +������� ����������1� ������� �����-�� �����4������QFJ�

�� ��� ���� ���4� �� ��� ��� <��� �B�*5F�� B�� ��� �"������ ��� ����� ��� ��� <��� �QFJ�

� ������ �����.��.������/�����4��������� <����B�*5F+������� �����0�� �����4��

����QFJ��������� �� ������ ������������"�����B�*5F���

:�� �B�*5F� � 7� ������� ��� ��� ���� ���4� �� ����� ?"����� :������� �� ���

�������� ����� 1� � ����� ���� ��� �QFJ� ��"�� ��� ������ $���4� � ��� �B�*5F� ����

����� ?"���+� 6�����/�����������;��������� �������������� �����4���� 6��2�� �

������7��������*���� ���4��������� ?"��������������������������������

�QFJ� ����<�� ��� ����� � �� �0����"���� � � ��� �B�*5F� ��� ����� ?"���� ��

�����;� �� +��������� ������������ �����4���

���������� ��������QFJ�������� ������������"������� <����B�*5F+�6��������

��� �� �� ����� ��� +� �� ��� ����� ���� ����� ��� ��� ��� <��� �QFJ� ��� ����2�

-� ��������-�� ��� � ��� ��# ���������B�*5F���"��N.���B�����1������������������

�������=��-����� �� �������� <���N.���������� ����������� ��������� ��

���� �1��� � ���� � �� ����� ������ <���N.��B��� �� ���� (N.���FR�)���� 6��2�� �

���� �������������������������������������� <����QFJ�������� � � ���B�*

5F����������� �� �� ������ <���N.���FR������� ���+� ������ ������� �����4�

������ �� ������ <����QFJ�������� �������3�����4����������������� ��� 1��

Page 215: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFS��

������ �-������� � �0�� ��� � � �� ��� ���� �� � ��� ����1����� ��� ��� 0��������

�0�� ��� � ��N.����B������ ��� $��������#������&���������<"��������03�����4�����

��� <����QFJ+��� ��������������03�����4���� ��������� <����QFJ���������

���� ���+� �� ���� �0������� � ����1����� /�� ��� ������� ��� � ����"��� B�� ��� �� ��

��� ��� ,*NBDr� ��� ������ �3� �� ��� ��* ����1���4� � ��� ���������� ��� 0����

��� /� ��� ��� <��� -�� ���+� �� �� �� ��� ���� 0��� ����� ��� ��� � 7� ������ � ���

�0����4�0�������������� ���� ��������������������=��/������� �0���� ��+���

���� �������� ���������+�/������ �������������� <���-�� �����03������7��

:������� �� ��� ������ ��� ��"��� ���� �� ����� �� �� �������� ��"� ��;������ � ���

��� <����QFJMJLF:� �� �� �� ����1� ��� ��"����������� �� ���������� ���&�����

5BEJPL��:03�����4������QFJ������������������ ��������3��� ��S�.��������

������������1�� �0���������0�� ��� � ���������� ������ ����1������B������ �

���� ��"/�������"��������������� ����-�� ��� � ��� ��# ���������B�*5F���������

�QFJ�������� ����� �� +������� � ���" ���� ��1���������� �������3��������

��� <����B�*5F��� �����������/���� �������������� <����QFJ��

:�� �������4�� ����B�*5F�� 7� ��� ��������� ��� ���4� ������� ?"���� �� ���

1��1�������4��:����� <���FS*L*L��4��������� <���������3������������ ����

���� <����� ���/�+������������ +����������������� �������1��1����� ����

������ <���������3���:�� 1��1�������4�� ���������VVK�����1�� ����������

�����3� �� ��� ���� ���4� �� FS*L*L� �� �� ����3� ��� ���� � �����3� �� ��"����

������ $� � ���� ����� ?"����� ,� � �� ���+� ������ ��� �� ����3� ��� �� ��� �������� ���

����������4� � ��� �B�*5F� ��������� ?"���� /�� ��� 1��1�������4� �� ��� ���4� � FS*L*L��

:���������� ���0� ����� �-1� �� ����QFJ� ��"������ �����4������� 1�� ������

�����������*������������ ���4�� '�������� ������.��� � $��������� ����QFJ�

���� ��� ����� �� �-�� �����4� � ��� ��� <��� �B�*5F+� �� ��� FS*L*L� �-���������� �� ���

����� ��.�"� ���+� ����������� +� ��� ��������� � �QFJ� .������ � ��������� ���

�� �����4�� ���B�*5F���FS*L*L�����+��������+�������"�������������� �����

�� �����4� � �� ��� FS*L*L� �� ��� �B�*5F� �� ��������� � �QFJ�� :�� ��*

������������ ���4� �� ��������� �� �"������� 0��.�"����� � 1��1� ���� ���

��� ������� ��� 1�� ��0��.�"���������������������������4��� ������4�� �� ���

FS*L*L��������� <����B�*5F����� �� +� � �������������� � ��������������� �����

3����� �� ���� ��� �� � �� ������ ����� �� ��"� �1�� �� ���� ��������� � ���

�B�*5F+��������� � ������������� �3��B������� � ���" ���� ��������3�������

Page 216: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFK��

��1�� ����������������"���+�.��.��� ����1������������ <���FS*L*L���

���#1����:�����1������ ��� $���/���0��������FS*L*L�U+��� �������� �"�����

�� ������ �� ���� 1�� ��"� ��� ��"��� � �� FS*L*L� _+� |� �� {�� =�� ����� � ��� � ���

�1�� �� ���1����� ��������� 1�� 1�������� �1�� ��� ��� �� ��� "���+� �� ����3�

��� �������"��������������������4������B�*5F��,� �������.��.���������

�"����� ���������� ��� ��� �� �����4�� �� ���FS*L*L� �� ����B�*5F+�.��.��������

��������������� ���������.�"���4���� ��������FS*L*L��%�"����/������ ����

�� ������1��1�������4���"�����������VVK+����/������������3�������4��FS*L*L+�

��� �B�*5F� �� ���������� ���� ����� ?"���� �� �����;� �� +� �0��.�"�3�� ��� ����

�� ��� � ��� ��# ����������N.������ �� +���"����������������0�� �����4�� ���

�QFJ������ ��������� �������4����� <������������1�����������������

��� �� �� �������� � �������4� � ��� ��� <��� N.��B��� /�� �� ���/��

0������� �� ������������ ��� ����3�� �0�� �����4� � N.��� ,��"/� ���

�0.�"��� � � 0�� ���������� ��"� ��� �� �3�� �� ��"� �� ��� N.��B��+� /�� �� ��+� 1� �

.���#���� �� . ��#����� B�� ��� � ����� ��� ��� ��� <��� �B�*5F� ���� ���� ��

.�"��� � ����� ��� +������ ��"��������������� $����B���������������������� � �

0���4� � ��� 1����� ����� �� � ��� �B�*5F� ��"� ��� ��� 1����� ������+� ��� =*

������� �� ��� !* �������� :�� N5*N.��B��� ���� 1������ .���#���� ��

. ��#������ ���/��0��������������.���3������� $� �������������4�!* ��������

B������� � ��������� �����������B�*5F��������2��1������.���#���� �� ���"�

��� ��� � =* ������� ���� ��"� ��� ��� � !* ������+� � � �� ���+� ��"��� ��� ��� ��� � !*

��������������2����*������������ ����/������ � � ���B�*5F���� ������ �

=* �������� ��3�� �� �� � 3������� ��� 1 � � ���� ��� �B�*5F� /� �� ��� ���� ���4� !*

���������������������.���3�� ��� ������ �����������������������.���3�����

N5*N.��B����M��������4�=* ������� ������������ � �0�� ������������ ���������

��� � � �������� ���������������0���4��� ��"����!* ������+��� �.���*.����������

��������� �� ���� ���1��� � ���

/6�� ('+�D( +M#7) 3'N'7'(283'($2��3L,(������

B������ ���� ���������������� �� $������������ $���4���&�����������B�*

5F�� ��� ���� ��� <��� ��������� ���� ����� ?"����� B�� ���� ��� 0������� ������

� �"��� $�� �0� ��� ���� ��� ����� ?"���� 6�� ��� ��� �������� $���4� ���

Page 217: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFX��

����� ?"���� �� 6��2�� � �����+� /�� �/�� �1#���� ����� ��� �B�*5F� � 7�

��"�3���������M��������������������� <����������������1�� �� ����

� ��� �� ���� �� ���&����� 5:�� ��� �B�*5F� ���� ���� ��� �� �4� �/�� �� ��� �� ���

����1������������ ��0���1�����"�����������������1����� � ��������� ���� ��1���

��������� ���� �� ������� ��3#� ���� ������ $��� �� ��� $���� � �������4� � �� ���

���&������ ,��"/� �� ��� �"�����+� ��� ���� �0.����� ���� +� ��� ��� �B�*5F� ��

������ $������������� �������� ������ ���������

��� �� ��� "���+� �� ��� ����� $��� ��� ������ $���4� ��&������ � ��� �B�*5F� ��

���&������B�������������������� ���������� �4�� ����4��1�� ������������ �

�"���� �� B�� ���� �� �#���� ��&������ �� ��� ���� ��� ��� �B�*5F� � ���� ������ $���

����������� ����������4������������M���������� 1������6������������ $���4�

��� ���0�"������������������� ��� ���"��&������� ���+�����"���������� <���

����� � ��� ��������+� �� ��� ��"��� ��� ��� �B�*5F� �������� $���� ��"� �0������� �

�����+� N�"FF� �� ���������� ,� � �� ���� ���� � �� �4� ������ �� ��� �� ��� ��"��� ��

�� ����#������&������� � �����3�������� ���������4���"���������1���������

��� ��� <��� �B�*5F�� ��� ��� ����� � ���� ���� �� ��� ��"������ ��� ��� �B�*5F�

�������� �� �����3� 3��# ��� �� ���# ��� �� ���/�� � ��� �� �����4� ��� �� ��"����

���������� ���������3�3��# ��+���"�%�K��B�� ������� ����#�����1���������

��"����� �����7 ���� ����� �� �0����4� � N.�+� �� ��� �B�*5F� /�� �0���������

0�� ����*��������� ���"���+������ ������������� 7������� ������� ����#�����

��� ��������� �������� ������+����N�"FF�/������������� <��������������

���� �����/����3#�������#�������������0������������������ �� +� � �������

��������/��3����� ������"������������/���������� 7�����0���� ������ � �+�

��"������ ��� ���� � �� �4� � ��� �B�*5F� � ����� �������� � ��"� �� ������� � �

��#����� �� ��������� ��"�� ��� ��� �QFJ� ������ � ��� ��������� �� ���� � ����/��

������ ��0�� ��� � �������� <����B�*5F���

-6 �*$'+ ( +M 83 '( $2��3L,( ������ 3, $2� 3##�# 83 #3,;('+�D( +M 23:7'(�#

$32'($2��3L,(�?��

���������� ���� ����B�*5F��� ����� ���������� ����QFJ� ����� � �����

��� <���� ��������� $������������ ���+�����;� �������������� $���������

�������� $���4����� ������ ��������!� ��� +������ ��"�������������� $���4�� �����

Page 218: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFR��

��� <����QFJ�������B�*5F����1�� �� �������&����������� ������ ������+������� �

���������"���� �����4����������� <���������� 3 ��� � �����

:�� �B�*5F� �� 1��1������ �� ��� ������ VVK� ��� ��� ���������� � ���� ������� ��

���� � ��� �� ���� ��� ��� 0��.�"��� ��� ���� �� ��� � � �� ��# ����� >�� � �"���� � ���

�� �����������B�*5F����1��1��������/���������������6���� ��� �������N.�������� ���

"���+����� ���1��1���� ����������� ������������� <����QFJ�� ����1��1�������

���� ������ �����������������������XR�������������3�������/�������������

��������� �� ����� 1� � ������ ����� ��� ��"�� ��� ���� �������4�� :������� �� ���

���������������QFJ�������� ���1��1����������������������6����+���������B�*5F�

� ���� ������� ��� �0����4� � ��� ������� �� �� ��� ��� ��� <��� �� ��������� ��

����� �� �������6�� ������� ��������:���B�*5F���1��1���������� ����� �1��+�

���� ����QFJ���������������� �������������� $���4���"��������������������/��

�������������������������������"���!����0.��� +� ������������3������1� �

������ �������1��1�������4���"������������4������QFJ+�/������+������ ��� ��0����

1��1�������4������ ������"/������.�"�3� ��������� ��� � ����� �� �/����� ������

�����"� �����������0.��0� �������"��/�����1��� � ���

��� ��� 0����1����� �� �� ��� ���� � �� ��� $���4� ��� ��� �B�*5F� ������

��� �������6�� ��� ���"�����QFJ�������� ��������������������������QFJ���

:�������������� ����1������4�����&��������<����������"�3�����4������QFJ�

�� ���&�����='5L,L��:���QFJ� ����3� ��� 1������4�0����� �� ��&������+� ������ ��

1���+� ����� /�� 3������� �� ��� ���� 1����� ���� � � ����� � �� ����� �� ���&�����

='5L,L��:�������� ��� $�� ����&�������� ��������������03�����4�������� <���

�B�*5F���������������1�� �0�������� ����1������4�� �!� ��� +�������"������

�������� ����QFJ����3������� ��� 1������4�0����� ����&������������ �����

�������������"���B�������+���������&�����1���� ���������� <����B�*5F���

��<�� ��� 1������4� ��� ����� �� �� �������� � �-3�����4� � ��� �QFJ� �� ����� ��

�/�� ���/�+� �� ����3� ��� /�� �� ���/�� � ��� ��� <��� N��+� ��� N.�+� ��� /� ����� ���

1������4� ��� � 1����� !������� +� ��� �B�*5F� ��"/� /�� ����2� 0�� �����N���� ���� �

���� � ��������3���������B�*5F��� ����������� <�������� �� ������� ������

��� ��� $���4��

��� �� ��� "���+� �� ��� � ����� ��� ��1�������� � ��� �B�*5F� �� ����������4�

��&�������:����� <����QFJWFL�� ������������������������4���&�������� ���/���

�0�� �����4��N.�+�����7���������������������������3������ �� ����� �

Page 219: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFV��

���� � ��� �� ��� � � ��&������� �� � ������ ��� �� �3�� � �� ����� ��� �"���+� �� ���

� ���������������4���&���������������&�������� ��������������03�����4��

��� ��� <��� �B�*5F�� B�� ��� 1�� ��� ������� � ������ � � 1���� ��"�� ���&�����

��� ���������&�����������3�������������� <����B�*5F��B������ � ������������

������&�������� ������������� �03�����4�� ������ <����B�*5F��� ������ �

� ��� 1����� ����� ��� ����� ��� ������&�������� ���+� ������ ������������4�

�/���� ���,� �������������������/��������� ����� � �6��� ������"���� +�/����

��+���� ����B�*5F�� 7� ����������� ����������4���&�����+� �� ����������������

�QFJ� �� ��� �B�*5F� ���� � ��� �� ��������� � ��� ��� � �������� ��� �������4�

��&���������

���� �����������3����������4��3����� ������0� ����� ��� ���

�����"��� �����+���� �� +���� ������� ��������� ������ ��������� � ���

��� ���0�"��������� ������������������ 7�����0���� ��������� �����4�� ���

����B�*5F�������QFJ���

� �

Page 220: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

N�������� ��7�

JFP��

�� �������F��:����� <����QFJ��������� $�����1����� � ������� ����?� ���� ���������� �����

����������� �������� ������ ��������

J��:���QFJ��������� $����"��������� ��������� ���������4���

L�� :�� ������ � ��� 1����4� � ��� ��� <��� �QFJ� �������� 1� �� �� ��� �� ���+�

����� ��� ����� ������ ��������

S��B����������� �������� <����QFJ���"���� ���������.N=������������������ �

������"����4����������������1����GW�F��

K��:����� <����QFJ���*������������ ����"������� <����B�*5F��� ���/�������

�������5*�5��

X��:0�� �����4�������� <����QFJ������ ������������4��������� <����B�*5F��

R��:����� <����QFJ���������0�� �����4�������� <����B�*5F+��1�� ����� ���/���

��� ������4� � ��� ���4� � ��� �B�*5F� �� ��� 1����� ������ � ����� ��� � N.��

(N.��FR�)��

V���B�*5F���� ���������0�� �����4��N.������<������QFJ������&�����5BEJPL���

P��:����� <����QFJ���������0����"���� ������B�*5F��������� ?"�����

FG��:���B�*5F� /���������� � ������ $��+����"�"��� ��� ���/�������������

�?���.���3������� $� ���������4�!* ��������

FF��:���QFJ��1�����3������ �����4�� �������� <���FS*L*L�������B�*5F��

FJ��:���B�*5F��������� $�������������������&������B����

FL��:���B�*5F��������� $����"�N�"FF��������������������&������B������

FS��:���B�*5F�������QFJ��������� $����������� �������� ������ ���������

FK��:���B�*5F������3��� ��� � �� ����1������4���������&�����='5L,L��

FX��:���B�*5F��1� ��������������4���&��������

� �

Page 221: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 222: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 223: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 224: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

����O

Page 225: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��

� �

Page 226: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

'�3�

JJK��

���NB8'�,'O=%� JL�

� �

'=,NO��!,'O=� JP�

� �

O�>B!,'8B%� XR�

� �

��,BN'�:%��=���B,5O�%� RL�

� �

NB%�:,%� FGF�

� �

�'%!�%%'O=� FKL�

� �

!O=!:�%'O=%� FRK�

� �

NB�BNB=!B%� FVF�

� �

NB%���B=�!�,�:]� JGK�

� �

'=�BD� JJL�

� �

���B=�'D�'� JJP�

Page 227: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

� �

Page 228: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

� �

Page 229: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

� �

Page 230: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�������O

� �

Page 231: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

� �

Page 232: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

�����3�'�

JLF��

���B=�'D�'����"����1� .�.������"��N.��B��1���� �

�,,3< �P �3*)32# �9 ��3 �7*(, �)' ������ 9(*+';6 ����Y� ����Z.��� ����� � �� �� �1��� ��� ����� ���� Y��Z�� �� �� ��� � N.��B�� 1��� ���+� Z.���� "���Y � ����Z.�������� �"���������� ������ �� ����� ��� ���1����� ���1����B���=��"���Z� .���"������3 � �����"����� �������� � .����� �N.���,��������1��� ��1� .��5��������(!��Y�������+�JGFL)�

Page 233: Involvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/59726/1/GGA_THESIS.pdfInvolvement of the Microtubule-Regulated RhoGEF GEF-H1 in the

��