İnsan Primer Bronş Epitel ve İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In In

VitroVitro Ortamda Elde Edilmesi* Ortamda Elde Edilmesi*

Hasan Bayram1,2, Bülent Göğebakan2, Öner Dikensoy1, Erhan Ekinci1.

Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi, Göğüs Hastalıkları AD1,

Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi, Hücre Kültürü Laboratuarı2.

*Gaziantep Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Yönetim Birimi tarafından desteklenmiştir.

Giriş-1Giriş-1• Hücre dizileri ve primer hücre kültürleri

hücrenin morfolojik, fizyolojik ve biyokimyasal özelliklerinin anlaşılmasında

• Hastalıkların patogenezlerinin araştırılması, terapötik girişimlerin etkilerinin değerlendirilmesinde yararlı bir model oluşturmaktadırlar

Giriş-2Giriş-2

• Hücre dizileri ve primer hücre kültürleri deneysel çalışmalarda dünyada yaygın olarak kullanılmaktadır

• Türkiye’de hücre kültürlerinin üretimi ve araştırmalarda kullanımı sınırlıdır

Giriş-3Giriş-3

• Akciğer hücre dizilerinin (A549) kültürü sadece birkaç merkezde yapılabilmektedir

• Akciğerin primer hücre kültürleri ülkemizde henüz yapılmamaktadır.

AmaçAmaç• Çeşitli nedenler ile pnömonektomi veya

lobektomi yapılan hastaların akciğer eksplantlarından veya bronş biyopsilerinden primer bronş epitel hücre kültürü elde etmek.

• Alveoler epitel hücre dizi (A549) kültürleri elde etmek.

MetMetodod• İnsan primer bronş epitel hücre kültürlerinin

kütür kaplarında üretilmesinde Devalia ve ark.’nın metodu ve bu yöntemin biyopsiler için uyarlanmış şekli kullanıldı.(Devalia JL et al, Respir Med 1990)(Bayram H et al, J Allergy Clin Immunol 1998)

• A549 hücre dizilerinin ‘flask’ ve 12 kuyucuklu kültür ‘plate’ lerinde üretiminde daha önce uyguladığımız metod kullanıldı(Bayram H et al, Eur Respir J 2006)

Primer Bronş EpitelPrimer Bronş EpitelHücre KültürleriHücre Kültürleri

Kültür Kap ve ‘Plate’ leriKültür Kap ve ‘Plate’ leri

Hücre Kültür Kapları(BD Primaria™)

24-kuyucuklu ‘plate’(BD Primaria™)

Kültür VasatıKültür Vasatı• ‘Medium 199’

– Foetal bovine serum/Nu Serum4 (2.5ml)

– (2.5ml)/1ml bovine pancreatic insulin (2.5 g/ml)

– 1ml human transferrin (2.5 g/ml)

– 1ml epidermal growth factor (20g/ml)

– 1ml hydrocortisone (0.36 g/ml)– 1ml L-glutamine (0.02mg/ml)– 1ml antibiyotik/antimikotik

solüsyon• 100ml tamamlanır ve 0.2m por

çap filtreden geçirilir

Doku Diseksiyon Materyalinin YıkanmasıDoku Diseksiyon Materyalinin Yıkanması

Bronş Biyopsi/Eksplantlarının Bronş Biyopsi/Eksplantlarının DiseksiyonuDiseksiyonu

Eksplantların kültür kaplarına transferi

Eksplantlar kültür kaplarında

Kültür ortamında 3. gün(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x100)

Kültür ortamında 8. gün(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x200)

Kültür ortamında 22. gün (eksplant alınmış)(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x200)

24-kuyucuklu Plate’e Transfer24-kuyucuklu Plate’e Transfer

Alveol Epitel Hücre Dizileri Alveol Epitel Hücre Dizileri (A549)(A549)

Kültür Flask ve ‘Plate’ leriKültür Flask ve ‘Plate’ leri

Hücre Kültür Flask ve 12-Kuyucuklu ‘plate’ (Sigma, Corning™)

Kültür VasatıKültür Vasatı

• DMEM – %10 Foetal bovine

serum– L-Glutamine

A549- Flask içindeA549- Flask içinde

A549-1.günA549-1.gün

A549 Kültür ortamında 1. gün(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x300)

A549 Kültür ortamında 5. gün(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x300)

12-Kuyucuklu ‘Plate’e Transfer12-Kuyucuklu ‘Plate’e Transfer

ÖzetÖzet• Primer bronş epitel hücre kültürleri Türkiye’de

ilk kez biyopsi eksplantı ve akciğer rezeksiyon materyalinden üretildiler

• Bu kültür modelinde primer hücreler ilk kez 24-kuyucuklu ‘plate’e transfer edilip üretildiler

• Alveol epitel hücre dizi (A549) kültürleri ülkemizde bir göğüs hastalıkları laboratuarında ilk kez yapıldı

Sabrınız İçin Teşekkür EderimSabrınız İçin Teşekkür Ederim