Inmunutrición a partir de sepas lácticas

Nutr Hosp Vol. 28. Suplemento 1. 2013

lactobaciili and E. co//log,„ number of copies respect to controlswas determined in the crop contents of birds fed on both PTS-Osupplemented diets, vi/hiie oniy those fed on PTS-O-90 hadlower (P<0.05) enterobacteria number of copies, in the iieaicontents, PTS-0-45 feeding resuited in iower (P<0.05) Clostri-dium coccoides / Eubacterium rectale and Clostridium leptumlog,„ number of copies. PTS-O-90 gave piace to lower (P<0.05)enterobacteria and higher bacteroides and totai bacteria. Lower(P<0.05) E. CO//and bacteroides iog,„ number of copies weredetermined in the caecal contents of birds fed on PTS-O-90,while C. coccoides /E. rectale number of copies of chickens fedon PTS-0-45 was aiso lower (P<0.05) than controls. Energy,fat, ADF and NDF faecal digestibiiities were greater (P<0.05)than controis in chickens fed on diets containing PTS-O. N andNSP faecai digestibiiities were greater (P<0.05) than controis inchickens fed diets containing PTS-O-90. These resuits confir-med previous data, and showed that PTS-O modulated intesti-nal microbiota composition and improved performance andnutrient digestibiiity in broilers.

References:Cross DE, McDevitt RM, Acamovic T. Herbs, thyme essential oii

and condensed tannin extracts as dietary suppiements forbroiiers, and their effects on performance, digestibiiity,voiatiie fatty acids and organoieptic properties. Br Poult Sei2011; 52; 227-237.

Peinado MJ, Ruiz R, Echávarri A, Rubio LA. Gariic derivativePTS-O is effective against broiier pathogens in vivo. PoultSc/2012;91:2148-2157.

Ruiz R, Garcia iVIP, Lara A, Rubio LA. Gariic derivatives (PTSand PTS-O) differentiy affect the ecoiogy of swine faecalmicrobiota in vitro. Vet Microb 20^0; 144:110-117.

Propiedades, producción y evaluación decepas potencialmente probióticas en piensos paralechones

Pérez Guerra N', Torrado Agrasar A', Méndez Batán J^, Pastrana Castro U.'Departamento de Química Analítica y Alimentaria, Facuitad de Cienciasde Ourense, Universidad de Vigo. As Lagoas s/n, 32004, Ourense.España.^Cooperativas Orensanas Sociedad Cooperativa Ltda (COREN), Poií-gono San Ciprián de Viñas, 32901 Ourense, España.

En el presente trabajo se ha realizado una evaiuación deipotenciai probiótico de 3 cepas de bacterias lácticas (Pedio-coccus acidllactici NRRL B-5627, Lactococcus lactis CECT539 y Enterococcus faecium CECT 410) para ser utiiizadascomo sustitutos de ios antibióticos en piensos para iecho-nes. La producción de cultivos aitamente concentrados encélulas viabies y metaboiitos de ia fermentación (ácidosorgánicos, etanol y bacteriocinas) se iievó a cabo en cuitivosreaiimentados y realcalinizados en suero de ieche. Tras laobtención y caracterización de los cuitivos, se estudió suefectividad sobre ios índices productivos (ganancia de pesocorporai, consumo de alimento y eficiencia) y ios recuentosde coiiformes fecales en lechones destetados, de 21 días deedad. En este estudio se utiiizaron dos controies: un piensosin supiementar y otro supiementado con sulfato de coiis-tina.Los cuitivos de las tres bacterias iácticas sobrevivieron acepta-biemente ias condiciones simuiadas dei tracto gastrointestinal yademás durante su almacenamiento con ieche descremada a -

20^C (durante 3 meses) y en el pienso (durante 7 días). Adicio-naimente, las tres cepas produjeron eievados niveies de bio-masa y productos de fermentación en un efiuente de ia industriaalimentaria como ei suero de leche.En ios experimentos con animaies, ei uso del antibiótico pro-dujo los mejores resultados, sin embargo, los animaies aumen-tados con los piensos probióticos exhibieron un incremento sig-nificativo (P = 0,05) en ia ganancia de peso corporai, en ei pesocorporai finai y en ia reducción de coiiformes totales (P <0,05)en comparación con ios cerdos no tratados.

l íJ í l Effect of Salmosan®, Duraió gum andCassia gum on the presence of M cells in theintestinal epithelium of chickens infected withSalmonella enteritidis

BrufauMV, Martin-Venegas R', ViláB^, BrufauJ^, FerrerR''Departamentde Fisioiogia, Facultatde Farmacia, Universität de Barce-lona. ^Institut de Recerca i Tecnologia Agroalimentàreis (iRTA- CentreMas de Bover)

Salmosan®, Duraió gum and Cassia gum, proceeding fromCeratonia silliqua L. and Cassia obtusifolia L. seeds, are pro-ducts highiy rich in ß-galactomannans (ß-gm) with prebiotic pro-perties, in a previous study, we have observed that Saimosan®(patent WO2009/144070A2, ITPSA) reduced the prevalence ofSalmonella entérica ser. Enteritidis (Salmonella) in the chickenintestine through a mechanism which has been associated toan increase in the production of mucus (Brufau etal., 2011; iilWorkshop Probióticos, Prebióticos y Saiud. Evidencia Cientí-fica, Casteildefeis). The capacity of Saimonella to cross theintestinal epitheiium and, thus, to initiate systemic infection, ismediated by epitheiiai microfoid (M) celis. The aim of this studywas to investigate the effect of ß-gm on the popuiation of epithe-iiai M ceiis in chickens infected with Salmonella. Sampiesof theiieum and caecal tonsii of 21 -day-oid male chickens oraily infec-ted at 7 days with 10= cfu of Salmonella and fed from day onewith a diet containing Salmosan* (1 g/kg), Duraió gum (1 g/kg)or Cassia gum (0.5 g/kg) were observed by scanning and trans-mission eiectron microscopy. The resuits showed the capacityof ß-gm to reduce the number of M celis which were increasedafter Salmonella infection, in conclusion, the results obtainedgive another evidence of the positive effects of ß-gm on the pre-vention of chicken intestinal infection with Salmonella and thus,contamination of chicken products for human consumption.

INMUNONUTRICIÓN

l Ü Í l Lactobaciiius piantarum C4 inhibe larespuesta de citoquinas proinflamatorias inducidapor bacterias patógenas en macrófagos murinospor un mecanismo independiente de lainterleuquinaiO.

Jiménez-Valera M', Moreno E', Ruiz-López M'iy, Bergillo-Meca V,Moreno-Montoro IVf, Lasserrot A', Ruiz-BravoA'.' Departamento de Microbiología y ̂ Departamento de Nutrición y Broma-toiogía. Facultad de Farmacia, Universidad de Granada. 18071 Gra-nada; 'Empresa Biotmicrogen S.L., Parque Tecnológico de Ciencias dela Salud, 18100Armilla, Granada.

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En estudios previos, la cepa C4 de Lactobacillus plantarum hamostrado capacidad para inhibir la producción de citoquinasproinflamatorias en ratones infectados experimentaimente conListeria monocytogenes. Ei objetivo de este trabajo fue investi-gar ia influencia de C4 en la respuesta de los macrófagos muri-nos RAW 264.7 a bacterias Gram-positivas y Gram-negativaspotencialmente enteropatógenas. Monocapas de células RAWse incubaron durante 4 h con suspensiones de Yerslnia entero-colitica, Escherichia coli. Salmonella entérica serovar Typhimu-riumy Listeria monocytogenes, a una concentración finai de 10^bacterias viables por mi. La concentración de citoquinas en lossobrenadantes de ios cultivos se determinó mediante inmuno-enzimoensayos comerciales. La cepa C4 no indujo producciónde ias citoquinas proinfiamatorias IL-1a e IL-12. L. monocytoge-nesy S. íyp/i/mt/r/um indujeron IL-1a, mientras que Y. enteroco-litica, E. coli y S. typhimurium indujeron IL-12. Cuando C4 seincubó conjuntamente con ias otras cepas, inhibió la producciónde IL-1a por L. monocytogenes y S. typhimurium, y de IL-12 porY. enterocolitica y E. coli. Curiosamente, cuando se determina-ron los niveles de la citoquina antiinflamatoria iL-10, se observóque C4 no soio no indujo esta citoquina, sino que inhibió su pro-ducción inducida por E. coli, L. monocytogenes, Y. enterocoliticay S. typhimurium. El paralelismo en las determinaciones de IL-1y de IL-10 no es sorprendente, ya que la expresión de ios genesde ambas citoquinas está promovida por factores de transcrip-ción de ia misma familia NF-KB. En conclusión, ia acción antiin-flamatoria de C4 no parece mediada por ia inducción de IL-10.

m La ingesta regular del probiótico Lactobaciiiuspiantarum 3547 mejora los marcadores deinflamación medidos en la fase acuosa de las hecesen población con sobrepeso y obesidad

López-Plaza B, Bermejo LM, Sarrion-Pelous MD, Ariza-Astoifi MJ, Tha-bata KW, Palma-Milla S, Usbona-Catalan A, Gómez-Candela C.Instituto de Investigación Sanitaria del Hospital Universitario La Paz (Idi-PAZ). Grupo de Investigación en Nutrición y Alimentos Funcionales(NUTRINVEST). Paseo de ia Catellana 261,28046, Madrid.

El objetivo de este estudio ha sido valuar el efecto de la ingestaregular del probiótico Lactobacillus piantarum 3547 (Lp3547)sobre los marcadores de infiamación medidos en la fase acuosade heces (FAH) de personas con sobrepeso y obesidad.

Se llevó a cabo una intervención nutricional con mantenimientodei patrón de actividad fisica y dei dietético habituai, paraieio,dobie ciego y controiado con placebo, de 10 semanas de dura-ción en voiuntarios de ambos sexos con sobrepeso y obesidad(IMCa27-<35), de 45-60 años, sin enfermedades crónicas nitratamiento farmacológico. Tras 2 semanas de estabilizaciónde ia dieta y supresión de alimentos fermentados ios participan-tes fueron aleatorizados en 2 grupos: Grupo Probiótico (GLp;n=9) que consumió una cápsuia diaria de Lp3547 (5x10= ufe) yGrupo Placebo (GP; n=11) cuya cápsula contenía maltodex-trina. Ai inicio y ai final de la intervención se recolectaron mues-tras de heces que fueron centrifugadas para determinar el perfilinflamatorio en ia FAH mediante ELiSA. Parámetros bioquími-cos, antropométricos y dietéticos fueron evaluados.

Al inicio de la intervención ambos grupos presentaban valoressimilares de citoquinas en FAH. Ai finalizar ia intervención ios par-ticipantes que pertenecieron ai G/.p presentaron una disminuciónsignificativa de ILIß comparada con los pertenecientes al GP

(-70,8±124,0 vs 10,1±23,3 pg/ml)(p<0.05). La IL-1a presentó unaumento significativo en ios participantes dei GP entre el inicio y elfin de ia intervención (628,5±643,8^932,2±576,4pg/mi)(p<0,05)mientras que los pertenecientes al GLp permanecieron estables(765,6±739,1-*627,6±413,1 pg/ml). El resto de las citoquinas nosufrieron cambios significativos.

En conclusión, se puede indicar que el consumo regulardurante 8 semanas del probiótico /-p3547mejora ei perfii infla-matorio intestinal disminuyendo los niveies de iL-1ß y estabiii-zando los de IL-1a en personas con un sobrepeso y obesidad.

El presente estudio ha sido apoyado por gnjpo CARiNSA a tra-vés dei proyecto HUENUFOOD (CEN-20101016) del programaCÉNIT del Ministerio de Economía y Competitividad de España.

^ ^ Propiedades antiinflamatorias (IL-10) einducción de respuestas adaptativas de tipo Th1 delas cepas bacterianas Bifidobacterium animalissubsp. iactis BS 01 (LMG P-21384) y Lactobacillusrhamnosus LR 05 (DSM 19739)

Palomares O', Nicola S''Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Cien-cias Ouímicas, Universidad Complutense de Madrid, '^Departamento deInmunología y Citofluorimetria, Biolab research srl. Novara, Italia.

La aiergia es una enfermedad mediada por iinfocitos Th2 caracte-rizada por ia producción de igE frente a sustancias inocuas deno-minadas alérgenos. Diversos estudios demuestran la utilizaciónbeneficiosa de probióticos en prevención y tratamiento de la aler-gia pero los mecanismos inmunológicos impiicados no están total-mente diiucidados. Ei objetivo de este trabajo es estudiar ias res-puestas inmunitarias in vitro que las cepas bacterianas probióticasBifidobacterium animalis subsp. lactisBSO^ y Lactobacillus rham-nosus LR 05 inducen en céiuias sanguíneas periféricas mononu-cieares (PBMC). Las cepas probióticas BS 01 y LR 05 inducenproiiferación de PBMC modificando significativamente el porcen-taje de células del sistema inmune innato y adaptative BS 01y LR05 inducen un descenso significativo dei porcentaje de monocitosCD14* y un aumento significativo del porcentaje de célulasCD16VCD56* y células dendríticas Lin/HLA-DR* en PBMC. BS01 aumenta significativamente ei porcentaje de céiuias TCD4VCD25* sin aiterar el porcentaje de céiuias T CD3VCD4+,CD3VCD8*o células B CD19VCD20*. LR 05 incrementa ei por-centaje de células T CD3VCD4*, CD4VCD25* y células B. Ambascepas inducen la producción de IL-12p70 e IL-10 con clara predo-minancia de ia citoquina inmunoreguiadora IL-10. Además, seobserva un incremento en citoquinas Th1 (iFN-y) y Th2 (iL-4) conclaro predominio de respuestas Th1. En resumen, este trabajodemuestra que las cepas probióticas Bifidobacterium animalissubsp. lactis BS 01 y Lactobacillus rhamnosus LR 05 presentanpropiedades antiinfiamatorias e inmunoreguiadoras que favore-cen ia generación de respuestas de tipoThi, io que sugiere su uti-lización terapéutica para el tratamiento de la alergia.

Nueva sintesis enzimática y caracterizaciónestructural de dos oligosacáridos potencialmentebioactivos

Diez-Municio M', Herrero M', Jimeno ML', Montilla A', Corzo N', OlanoA', Moreno FJ''

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'Dpto. Bioactividad y Análisis de Alimentos. Instituto de Investigación enCiencias de ia Alimentación, CIAL (CSIC-UAM), c/Nicolás Cabrera 9,28049 Madrid, Spain. ̂ Centro Química Orgánica "Lora-Tamayo" (CSIC),c/Juan de la Cierva 3,28006 Madrid, Spain.

La producción de nuevos oligosacáridos bioactivos con activi-dad prebiótica suscita en la actualidad un gran interés debido asu posibie uso como ingredientes funcionales. En el presentetrabajo, se describe la producción de dos oligosacáridos conpotencial bioactividad, denominados glucosil-lactosa (ß-D-Gal-(1 ->4)-a-D-Glu-(2->1)-a-D-Glu) y lactulosacarosa (ß-D-Gal-(1-»4)-ß-D-Fru-(2-»1)-a-D-Glu), mediante síntesis enzimáticaempleando una dextransacarasa (EC 2.4.1.5) de Leuconostocmesenteroides B512-F. Estos trisacáridos se sintetizaron comoconsecuencia de la transferencia de ia unidad de glucosa de lasacarosa (donante) a la lactosa y lactulosa (aceptores), dandolugar a rendimientos en peso respecto a los aceptores de par-tida de hasta un 50% y un 35%, respectivamente, bajo las con-diciones óptimas de reacción.

Atendiendo a las estructuras elucidadas por RMN (fig. 1),ambos oligosacáridos podrían presentar actividad prebióticadebido a que se ha descrito que el enlace a-(2-»1) presentauna alta resistencia a la digestión gastrointestinal en animales yhumanos. Además, el trisacárido glucosil-lactosa, es un deri-vado galactosiiado de ia kojibiosa (2-O-a-D-giucopiranosil-D-glucosa), disacárido que presenta un gran potencial prebióticosegún diversos estudios descritos en la bibliografía. Igual-mente, la lactulosacarosa, al tener lactulosa como estructurabase, debe poseer las propiedades beneficiosas atribuidas aeste disacárido, tales como la estimulación selectiva de las bac-terias beneficiosas en el intestino grueso y la regulación deltiempo de tránsito intestinal. Asimismo, dado su mayor pesomolecular con respecto a la lactulosa, podría presentar la capa-cidad de ser fermentada en las zonas más distales del colon,que es la región del intestino grueso que presenta una mayorincidencia de patologías digestivas y oncológicas. En el futurose realizarán estudios que permitan determinar la potencialbioactividad de estos trisacáridos.

Fig. 1.—Estructuras elucidadas por RMN de los trisacáridos glu-cosil-lactosa (izquierda) y lactulosacarosa (derecha).

•cHl Probiotic Escherichia coii Nissie 1917 (EcN)protects intestinal barrier against damageproduced by the secreted autotransporter serinprotease SAT

Toloza L, Giménez R, Aguilera L, Aguilar J, Badia J, Baldomá LDepartament de Bioquímica i Biologia Molecular, Facultat de Farmacia,Universität de Barcelona i Institut de Biomedicina la Universität de Barce-lona. Av. Diagonal, 643.08028-Barcelona

Escherichia co/; Nissie 1917 (EcN) is a harmless probiotic usedin the treatment of intestinal disorders due to its beneficialeffects on intestinal epithelial barrier and Immune function. EcNis able to establish itself in the human intestine and out-competepathogens by expressing numerous fitness factors such asadhesins, proteases and microcins, most of them encoded byspecific genes mainly clustered in four islands. One of thesefactors is the serin protease autotransporter Sat, which hasbeen proposed to act as a virulence factor in some enteropatho-genic Eco//strains by promoting lesions in the tight junctions ofpolarized Caco-2 cells. Proteomic studies performed by ourgroup identified Sat in EcN culture supernatants. Here we pre-sent Sat functional studies. The saf gene from EcN was clonedand the encoded protein shown to display serin protease acti-vity in vitro. The function of Sat on the intestinal barrier integritywas assessed using monolayers of polarized Caco-2 cells incu-bated with wild type EcN, the knockout mutant EcN sat.icm andthe non-adherent E. coli strain HB101, as well as with the samestrains transformed with the recombinant plasmid expressingSat. After three-hours incubation TER and paracellular permea-bility to '"C-mannitol were measured. A significant increase inparacellular permeability was only observed with the recombi-nant HB101 strain expressing Sat. Expression of this proteasein the genomic background of the probiotic strain EcN did notalter the barrier permeability. The same results were obtainedwhen Caco-2 monolayers were incubated with concentratedculture supernatants collected from these strains.

Effect of cocoa fibre on the intraepitheliallymphocyte composition in rat colon

Massot-Cladera M, Rigo MM, Abril-Gil M, Franch A, Castellote C, Pérez-Cano F J, Caste» MDepartment of Physiology, Faculty of Pharmacy, University of Barcelona,Spain. Institut de Recerca en Nutricio i Seguretat Alimentaria (INSA),Barcelona, Spain

We have previously demonstrated that a 10% cocoa diet inducessignificant changes in the rat lymphocytes from Peyer's patchesand mesenteric lymph nodes'. Moreover, it also affects themicrobiota composition in rats^. The aim of the present study wasto establish whether the cocoa diet was also influencing theintestinal effector cells, by means of the analysis of the colonintraepithelial lymphocyte (lEL) population. Moreover, as thesemodulatory effects could be attributed to flavonoids or othercompounds present in cocoa such as fibre, a cocoa-fibre-enri-ched diet was also studied. For three weeks Wistar rats were fedeither standard diet, diet containing 10% cocoa (with 0.2% poly-phenols, 5.5% soluble fibre and 16.5% insoluble fibre), or twoother diets with same proportion of insoluble fibre, one based oncocoa fibre and other containing inulin. Faecal and caecal pHlevels were determined along and at the end of the study, res-pectively. After the nutritional intervention, colon I EL were phe-notyped by immunofluorescence staining and flow cytometryanalysis. Cocoa fibre, cocoa and inulin diets decreased both fae-cal and caecal pH. The cocoa group, but not the cocoa fibre-diet,reduced the proportion of TCRaß-i-CD3+CD8aß+ andTCRaß+CD3+CD4+ lEL. In addition, it increased NK-IEL pro-portion and the percentage of CD103+ lEL. These resultsdemonstrate that faecal pH might be a good indicator of changesin microbiota. On the other hand, the cocoa fibre seems not to bethe responsible of the changes observed on the intestinalimmune system after cocoa nutritional intervention.

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Referencias:1. Ramiro-Puig E, et al. Intestinal immune system of young

rats influenced by cocoa-enriched diet. J Nutr Biochem2008; 19: 555-565.

2. Massot-Cladera M, et al. Cocoa modulatory effect on ratfaecal microbiota and colonie crosstalk. Arch Biocheme/op/7ys2012; 15:105-112.

Influence of different sources of cocoapolyphenols on intestinal microbiota and IgA ofWistar rats

Massot-Cladera M, Torres S, Abril-GII M, Pérez-Berezo T, Franch A, Cas-tellM, Pérez-Cano FJ.Department of Pfiysiology, Faculty of Pharmacy, University of Barcelona,Spain. Institut de Recerca en Nutricio i Seguretat Alimentaria (INSA),Barcelona, Spain

Previous studies performed in our laboratory showed that a 10%cocoa diet containing 0.2% (w/w) of polyphenols was able toaffect the growth of certain species of gut microbiota' and dimi-nish the synthesis of intestinal immunoglobulins^. The aim of thepresent study was to ascertain whether this modulatory effectcould be attributed to flavonoids or to other compounds present incocoa, such as fibre. For this purpose we used different sourcesof cocoa with distinct flavonoid and fibre composition. Briefly, Wis-tar rats were fed standard diet, diet containing 0.2% cocoa-poly-phenols from defatted cocoa (Nutrexpa SL) or diet containing0.4% or 0.8% cocoa-polyphenols from non-fermented cocoa(Natraceutical Group), for four weeks. Intestinal IgA was quanti-fied by ELISA and faecal microbiota composition was characteri-zed by FISH coupled to flow cytometry analysis using specificprobes directed to 16S rRNAof main bacteria groups. All polyphe-nol-enriched cocoa diets attenuated intestinal IgA production andIgA coating bacteria. Moreover, they modified gut microbiotacomposition, by means of reducing the proportion of Lactobaci-llus, Bifidobacterium and £co//groups and preventing the age-associated increase in the percentage of Bacteroides, Strepto-coccus and Staphylococcus. All these effects were independentof the flavonoid dose because the intake of diets with 0.2% poly-phenols (high fibre) from defatted cocoa and 0.8% polyphenolsfrom non-fermented cocoa (low fibre) were the most effective.Therefore, although these effects are mainly attributed to thepolyphenols present in cocoa, other cocoa ingredients such asfibre or methylxanthines may be somehow playing a role.

References:1. Massot-Cladera M, et al. Cocoa modulatory effect on rat

faecal microbiota and colonie crosstalk. Arch Biocheme/op/7ys2012; 15:105-112.

2. Pérez-Berezo T, et al. Cocoa-enriched diets modulate intes-tinal and systemic humoral immune response in young adultrats. f\/lol Nutr Food Res2Q-\'\; 55S: 56-66.

^ ^ Alteración de la respuesta inmune frente abacterias comensales y gliadinas en ratonesenvejecidos prematuramente

De Palma G', Vida C?, SantacruzA', De Castro NM', De la Fuente, M',Sanz Y'.'Ecología Microbiana y Nutrición. Instituto de Agroquímioa y Tecnologíade Alimentos (lATA), Consejo Superior de Investigaciones Científicas(CSIC). Valencia. ^Departamento de Fisiología. Facultad de Biología.Universidad Complutense de Madrid.

La enfermedad celíaca (EC) es una enteropatía provocadapor una reacción inmunológica anómala a las proteínas delgluten en individuos predispuestos. Los casos típicos se pre-sentan en los primeros años de vida tras la exposición a lagliadina del gluten, pero los casos diagnosticados en la edadadulta están aumentando. Esto indica que otros factoresestán implicados en el desencadenamiento de esta patología,como puede ser el estrés. Dado que el estrés causa alteracio-nes en la comunicación entre los sistemas nervioso e inmuno-lógico, contribuyendo al desarrollo de diversas patologías, elobjetivo de este estudio ha sido determinar si la respuesta deesplenocitos y leucocitos derivados de nodulos linfáticosmesentéricos frente a gliadinas y bacterias intestinales, estáalterada en ratones adultos prematuramente envejecidos(PAM) (animales caracterizados por presentar una respuestaalterada al estrés) en comparación con controles no prematu-ramente envejecidos (NPAM). Los esplenocitos de ratonesPAM expuestos a gliadinas y al péptido 33-mer produjeronmayor síntesis de TNF-a (P=0.005) y menor de IL-10 y unaumento del porcentaje de células T CD4+ y CD8+ en compa-ración con las células de ratones NPAM. Los leucocitos deratones PAM incubados con péptido 33-mer, S. bifidum CECT7365 y Shigella CBD8 secretaron menos IFN-y que los deratones NPAM (P=0.010-0.044), aunque la producción basalde esta citoquina fue mayor. Los resultados indican que losesplenocitos de PAM muestran una elevada respuesta infla-matoria frente a las gliadinas, lo que podría favorecer el des-arrollo de la EC, siendo los PAM un buen modelo para estapatología.

Financiación: Ministerio Economía y Competitividad (AGL2011 -25169 y Consolider Fun-C-Food CSD2007-00063); MICINN(BFU2011-30336); UCM (910379ENEROINN); RETICEF(RD06/0013/0003; RDI2/0043/0018).

Q j Potencial antiinflamatorio de a-glucanosproducidos por bacterias ácido lácticas (BAL)aisladas de productos cárnicos

Nácher-VázquezM"', López P^, PrietoA', Gil ML', Gozaltx)D',yAznarR'''Departamento de Biotecnología, Instituto de Agroquímica y Tecnolo-gía de Alimentos (CSIC), Burjassot, Valencia. "^Departamento de Micro-biología Molecular y de Biología de las Infecciones, Centro de Investi-gaciones Biológicas, CSIC, Madrid. 'Departamento de BiologíaMedioambiental, Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC, Madrid."Departamento de Microbiología y Ecología, Universidad de Valencia,Burjassot, Valencia.

Entre los exopolisacáridos producidos por bacterias del ácidoláctico (BAL), se encuentran los dextranos, homopolisacáridosde glucosa con enlaces a-(1,6) y con ramificaciones a-(1,3), a-(1,4) o a-(1,2) cuyo tamaño y grado de ramificación es depen-diente de cepa. En el presente trabajo se estudió el potencialantiinflamatorio de tres a-glucanos, producidos por dos Lacto-bacilos y un Leuconostoc aislados de productos cárnicos. Losa-glucanos producidos en medio definido con sacarosa, fueronpurificados para su posterior utilización en estudios con macró-fagos intraperitoneales de ratón. Su caracterización mediantemétodos físico-químicos reveló que, al igual que los dextranoscomerciales producidos por una cepa de Leuconostoc mesen-teroides, son (1,6)-a-glucanos con ramificaciones a-(1,3). Lostres a-glucanos (>2x 10^ Da), y dos dextranos comerciales, TI O(1x10'' Da) y T2000 (2x10= Da), fueron utilizados en primer

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lugar en ensayos de estimulación frente a macrófagos; se deto-xificaron con polimixina B y se utilizaron en concentración de 50|jg/ml determinándose los niveles de la citocina proinflamatoriaTNF-a por ELISA. En ninguno de los casos se observó res-puesta, lo que apoya su utiiización en aplicaciones sanitarias oagroalimentarias. En segundo lugar, se ensayó su potencialantiinflamatorio mediante ensayos de co-incubación con com-puestos que desencadenan respuestas proinflamatorias comoel lipopolisacárido (LPS) de Escherichia coli (0,25 ng/mL);Zymosan, partículas de paredes celulares de Saccharomycescerevisiae (100 |jg/mL); levaduras de Candida albicans(10VmL), y curdlano, (1,3)-ß-glucano lineal de Alcaligenes fae-calis (20 Mg/mL). Los niveles de TNF-ct registrados se mante-nían en presencia de Zymosan, levaduras ó curdlano, mientrasque se reducían de forma significativa en respuesta al LPS.

Q i J Respuesta en tiempo real de la líneaintestinal HT29 como medida de bioactividad deleche materna y de fórmula: ¿potencial area paraaplicación de pro- y prebióticos?

Fernández-García M\ Solís &, Gueimonde M', Ruas-Madíedo P''Departamento de Microbiología y Bioquímica de Productos Lácteos,Instituto de Productos Lácteos de Asturias-Consejo Superior de Investi-gaciones Científicas (IPLA-CSIC). Villaviciosa, Asturias, [email protected], [email protected]"̂ Servicio de Pediatría, Hospital Universitario Central de Asturias - Servi-cio de Salud del Principado de Asturias (HUCA-SESPA), Oviedo, Asturias

La alimentación con leche materna en los primeros estadios devida es crucial para el correcto desarrollo intestinal y la madura-ción del sistema inmune del neonato, sin embargo las fórmulasinfantiles no logran emular a la leche materna en cuanto a subioactividad. En nuestro grupo hemos implementado una nuevatécnica para analizar en tiempo real el comportamiento de líneascelulares en presencia de diversos bioactivos. Para ello emplea-mos el equipo RTCA-DP que registra cambios de impedanciarelacionados con el estado de crecimiento (en proliferación oconfluencia) y morfoiogía de células eucariotas adhérentes. Eneste trabajo se utilizó la línea celular de epitelio intestinal humanoHT29 en estado proliferativo (en división) y confluente diferen-ciado (monocapa) para evaluar su repuesta en presencia deleche humana y de fórmula. En el escrutinio inicial se analizaron40 muestras de leche donadas por 11 madres en distintos perio-dos de lactancia (1,10,30 y 90 días) y 7 muestras comerciales deleche maternizada de inicio. Se observó que la mayoría de lasleches maternas inhibieron la proliferación celular y afectaron a laintegridad de la monocapa de HT29, mientras que de las célulasepiteliales en contacto con leches de formula se comportaroncomo el control en ausencia de bioactivos (medio de cultivo). Sepretende emplear esta técnica para analizar el potencial decepas probióticas de la colección del IPLA, procedentes de diver-sos orígenes, que añadidas a una leche comercial de fórmulamimeticen el efecto bioactivo obtenido con la leche materna.

£ 2 3 Impact of the commensal bacteriumFaecalibacterium prausnitzii in a non activeinflammation murine model

Martin R'", Chain P, Lu J', Jury J', Gratadoux JJ', Verdu B, Bercik R,SokolH'-', Langella P'', Bermudez-Humaran LG''Commensal and Probiotics-Host Interactions Laboratory, INRA,UMR1319 Micalis, F-78350 Jouy-en-Josas, France. ^Farncombe Family

Digestive Health Research Institute. McMaster University. 1200 Main StWest, H.Sc. 3N6. Hamilton, Ontario, Canada. ^Department of Gastroen-terology and Nutrition, AP-HP, Hôpital Saint-Antoine F-75012 and UPMCUniv Paris 06 F-75005, Paris, France.

Irritable bowel syndrome (IBS) is a disorder characterized bychronic abdominal pain, discomfort, bloating, and a low-gradeinflammation status in the gut'. Although its etiology is diverse, thedevelopment of more realistic animal models and reproduciblereadouts is still required in order to better mimic and study thisdisorder. The fact that a decrease in the abundance and biodiver-sity of the commensal bacterium Faecalibacterium prausnitzii Uasbeen observed in IBS-patients^ combined to its protective role inacute chemical-induced colitis model^ have led us to develop anew low-grade inflammation model to evaluate its properties.In this study, we reproduced the recovery-recurrence periodsobserved in IBS-patients in a new chronic model characterizedby two episodes of DiNitro-BenzeneSulfonic-acid (DNBS)-cha-llenge. We tested the effects of our model strain F. prausnitzii A2-165 and its supernatant and we compared its effect with that of arecombinant strain of Lactococcus lactis secreting biologicallyactive anti-inflammatory interleukin-10. No significant differen-ces were observed either in the macroscopic and microscopicscores or mieloperoxydase activity between DNBS-treated anduntreated mice thus validating our model as a low-grade inflam-mation one. Finally, in vivo and ex vivo gut permeability, colonieserotonin levels and cytokine profiles were measured as rea-douts of a non-overt and active inflammation. Interestingly, signi-ficant protective effects in terms of permeability, immune activa-tion and gut-function parameters were observed in mice treatedwith both F. prausnitzii and its supernatant.These resuits confirm the high potential of F. prausntzii as anovel probiotic to prevent and to treat IBS-patients.

References:1. Ford AC, Talley NJ. J Gastroenterol20^ 1 ; 46(4): 421 -312. Rajilic-Stojanovic M, Biagi E, Heilig HG et al. Gastroentero-

/ogy2011; 141(5): 1792-1801.3. Sokol H, Pigneur B, Watterlot L et al. PNAS USA 2008;

105(43): 16731-16736.

Activación de macrófagos por ß-glucanosbacterianos

Notararigo S', Fernández de Patencia P, Mohedano ML, López PCentro de Investigaciones Biológicas (CSIC). Departamento de Micro-biología Molecular y Biología de las Infecciones, Ramiro de Maeztu 9,28040 Madrid.

Los exopolisacáridos (EPS) sintetizados por bacterias poseendiversas funciones como el reconocimiento e interacción celu-lar, la adherencia a superficies y la formación de biofilms. Estu-dios previos han mostrado que estirpes de Pedioccocus parvu-lus productoras de (1 -•3)-ß-glucano con ramificaciones 1 -^2son capaces de inmunomodular macrófagos humanos'•== y quela presencia de sus EPS potencia la adhesión de las bacterias acélulas epiteliales del intestino humano'^ Además, el biopolí-mero producido por P. parvulus 2.6 y purificado ha mostrado unefecto prebiótico sobre Lactobacillus plantarum VJCf SI poten-ciando su crecimiento y viabilidad^

En este trabajo hemos utilizado dicho ß-giucano producido porlas estirpes P. parvulus2.6 y Lactococcus lactis NZ9000[pNGTF]y purificado". Se ha analizado su influencia en la línea celular

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THP-1 diferenciada a macrófagos, para los cuaies el EPS no pre-sentó efectos tóxicos.Ei anáiisis de ia infiuencia del ß-glucano en ia producción decitoquinas por THP-1 diferenciadas a macrófagos mostró unaumento de ias citoquinas TNF-a, IL-12 p40 e IL-10 indicandoun efecto inmumomoduiador.Para comprobar si dicho efecto puede estar moduiado por ceiu-ias epiteiiaies dei intestino, se ha utiiizado ia técnica de iostransweil de dobie capa, ia iínea ceiuiar de enterocitos, Caco-2en el inserto, y THP-1 72H PMA en ia zona inferior. Ei anáiisisde ios niveles de interieuquinas ha mostrado una moduiacionde las THP-1 72H PMA, por ia interacion de ias céiuias Caco-2con ei ß-glucano.

Referencias:1. Fernández de Palencia P et al. Appl Environ Microbiol 2009;

75:4887-4891.2. Garai-ibabe G et ai. Bioresour Technoi 2010; 101: 9254-

9263.3. Russo Petal, int J Mol Sci 2012; 13:6026-6039.4. Notararigo S et ai. Carbohydrate Poiymers http://dx.doi.org/

10.1016/j.carbpol.2012.05.016.

m m Fitasas de bifidobacterias y su aplicación enalimentación

García-Mantrana I, Sanz-Penella JM, Yebra MJ, Haros M, Monedero VInstituto de Agroquímica y Tecnología de Alimentos (iATA-CSiC). Av.Agustín Escardino 7,46980 Patema, Vaiencia. [email protected]

Algunas especies de bifidobacterias, como Bifidobacteriumlongum o Bifidobacterium pseudocatenulatum, muestran acti-vidad fitasa capaz de degradar ei mio-inositoi hexakisfosfato(InsPj o fitato) presente en aigunos productos de origen vege-tai. El InsPj es considerado un antinutriente por su elevadacapacidad de queiar mineraies como el Ca, Zn, Mg o Fe, redu-ciendo su biodisponibilidad a nivei intestinai. Por esta razón,ia actividad fitasa podría ser considerada como una cuaiidadprobiótica. Las fitasas de ias dos especies anteriores han sidoaisiadas y caracterizadas. Tanto ias propias bidifobacteriascomo ios enzimas purificados se han utilizado en la elabora-ción de aumentos de alto contenido en fitato, consiguiéndosesu reducción y una acumuiación de derivados de menor gradode fosforiiación, algunos de ios cuales poseen cualidades fun-cionaies. Las especies de iactobaciios no presentan actividadfitasa, por io que los genes de las fitasas de bifidobacteriashan sido expresadas en Lactobacillus casei, confiriendo estanueva actividad a ia cepa. L. case! expresando las fitasas deS. longum o S. pseudocatenulatum es capaz de degradar efi-cazmente ei insPj y dar iugar a acumuiación de InsPj. Estosresultados abren las puertas a la elaboración de nuevos pro-ductos fermentados probióticos con un reducido contenido enfl tatos.

'Department of Pharmacology, CIBER-EHD, CIBM, University of Gra-nada.^Institute for Research in Biomedicine Barcelona, Barcelona.'Department of Microbioiogy, University of Granada."Biosearch, Granada

Probiotics have shown to exert bénéficiai effects due to theirimmunomodulatory properties. The aim of the present studywas to compare the in vitro effects of two probiotics Lactobaci-llus fermentum CECT5716 and Enterococcus faecalisUGRA10 (iive or death) in two different ceii types invoived inthe immune response: Caco-2 ceiis (intestine epitheiiai ceiis)and RAW 264.7 cells (macrophages), in addition, we investi-gated the effects of these probiotics on the signaiiing path-ways associated to mitogen-activated protein (MAP) kinasesin Caco-2 cells.

Celis were incubated for 3 hours with each probiotic (live ordeath) (10» CFU/ml), and stimulated with LPS (100 ng/mi) or iL-1 ß (1 ng/ml) for 30 minutes (western blot) or 24 h (iL-8 or nitritedetermination). Western blots were performed with proteinextracts to anaiyze phosphorylated or total forms of p38 MAPkinase, p42/44 ERK or SAPK/JNK.

Both Lactobacillus fermentum CECT57t 6 anä Enterococcusfaecalis UGRA10, iive or death, inhibited the stimuiated produc-tion of either iL-8 (Caco-2 ceils) and nitric oxide (RAW 264.7) ina simiiar way. in the epitheiiai cells, this inhibitory effect wasassociated with a reduced phosphoryiation of p42/44 ERK andSAPK/JNK when it compared with stimulated cells without pro-biotic.

In conclusion, the viabiiity of either E. faecalis UGRA10 or Í.. fer-mentum CECT5716\o downregulate the stimulated immuneresponse is not essentiai, and, at least in Caco-2 ceiis, this isobtained through inhibition of MAP kinase pathways for bothprobiotics.

Comparative study of the in vitroimtminomodulatory effects of the probioticsLactobacillus fermentum CECT5716 andEnterococcus faecalis UGRA10

Rodríguez-Nogales A', Algieri F', Vezza V, Garrido-Mesa N', Rodri-guez-Cabezas M'E', Comalada ti/P, Utrilla MP', Martin-Bueno W, Valdi-via B, Maqueda /W, Olivares M', ZarzueloA', GálvezJ'.

Intestinal anti-inflammatory effects ofBifidobacterium breve CECT7263 in the TNBSmodel of rat colitis

Algieri F', Rodriguez-Nogales A', Garrido-Mesa N', Zorrilla P', Rodrí-guez-Cabezas M'E', UtrillaM'P', OlivaresM^, ZarzueloA', GálvezJ'.'CIBER-EHD, Department of Pharmacology, Center for BiomedicaiResearcti, University of Granada, Spain. ^Department of Immunologyand Animal Sciences, Biosearch S.A., Granada, Spain

Different strains of Bifidobacterium breve have been reported toexert intestinai antiinfiammatory properties in experimental coii-tis. The present study evaiuates the effects of Bifidobacteriumbreve CECT7263, a probiotic isolated from human milk, in theTNBS model of rat colitis.

Bifidobacterium breve CECT7263 (Biosearch, S.A.) was givenorally (5x10" CFU/rat/day) to Wistar rats, for two weeks beforeTNBS coiitis induction, and thereafter until coionic evaiuationone week iater; both macroscopicaily and biochemicaiiy: mye-loperoxidase activity (MPO), TNFa and iL-1ß ieveis. Also,microbiological studies were performed in the iuminai contentsby determining iactobaciili and bifidobacteria (beneficial bacte-ria) as weii as aerobic bacteria and enterobacteria (potentiaipathogen).

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This probiotic showed intestine anti-infiammatory effect, as evi-denced by an amelioration of the damaged colon and decrea-sed MPO. These effects were associated with a significantreduction in coionic TNFa and iL-1 ß levels, increased GSH con-tent and reduced iNOS expression. The microbiologicai studiesreveaied that the probiotic increased the bénéficiai / potentialpathogen bacteria ratio in comparison with untreated controlrats.

We conclude that Bifidobacterium breve CECT7263 showsintestinai anti-inflammatory activity in TNBS-induced rat coiitis,by ameiiorating the altered immune response and restoring thealtered microbioiogicai composition in the coionic iumen.

£ 2 1 Modulación de factores proinflamatoriosasociados a la obesidad mediante suministraciónde Lactobaciius piantarum 3547 en ratas Wistar

Tabernero M', Gómez-Candela O, López-Plaza EP, Bermejo LM', CazJV, Largo C.Instituto de Investigación Sanitaria del Hospital Universitario La Paz (idi-PAZ). 'Cirugía Experimental, ¡^investigación en Nutrición y AlimentosFuncionales (NUTRINVEST). Paseo de la Castellana 261, 28046,Madrid.

Entre las alteraciones fisioiógicas asociadas ai desarroiio dela obesidad se han descrito cambios en la microbiota intesti-nal que pueden mediar en alteraciones en el sistema inmune yei desarroiio de un estado proinfiamatorio. Ei objetivo de estetrabajo fue evaluar el efecto modulador en marcadores deinfiamación de Lactobacillus plantarum 3547 (Lp3547) enratas obesas.

Ratas Wistar macho fueron supiementadas con dieta hiper-calórica (grupos obeso) o una dieta estándar (grupos control)durante 22 semanas. Trascurrido este tiempo cada grupo sedistribuyó en subgrupos de controles (control obeso OC ycontrol normopeso NC) y tratados con Lp3547 (probióticoobeso OP y probiótico normopeso NP). La supiementaciónse reaiizó durante 14 días a una dosis diaria de 2x10^ ufe/kg/animal.

Los animales obesos tuvieron valores significativamentesuperiores de peso, depósitos grasos (retroperitoneai y epidi-dimal) y leptina con respecto a ios normopeso mientras queno observaron diferencias en ei peso de hígado, perfil lipídicoy glucosa plasmática o los niveies de insulina y resistina. Losanimaies suplementados Lp3547 presentaron valores deIL10 significativamente superiores que sus respectivos con-troles (p<0.01).Además, los animaies OP mantuvieron niveles de TNFa equipa-rabies a ios controies normopeso, tanto a nivei plasmático comoen tejido adiposo (p<0.01 ).

Conclusión: Ei Lp3547 tiene un efecto sobre la inmunidad,moduiando los niveies de iL10 en piasma, tanto en animalesobesos como normopeso. Además tuvo capacidad de revertirel aumento de citoquinas proinfiamatorias asociadas a ia obesi-dad, tanto en plasma como en tejido adiposo.

El presente estudio ha sido apoyado por Grupo CARiNSA a tra-vés del proyecto HUENUFOOD (CEN-20101016) del programaCÉNIT del Ministerio de Economía y Competitividad de España.

USOS CLÍNICOS

m Ü Efecto de los probióticos orales en lamicrobiota periodontal y periimplantaria

Flichy-FernándezAJ, Candel-Marti E, Peñarrocha-Diago MUnidad de Cirugía e Implantología Oral. Universidad de Valencia

Los probióticos constituyen un método para la prevención de iasenfermedades periodontaies y peri-impiantarias, ya que puedenofrecer beneficios debido en ia reiación causa-efecto de la placacon las alteraciones periodontaies y periimpiantarias.

Comprobar si tras ei tratamiento con el probiótico Lactobacillusreuterise producen cambios en la concentración de las bacteriasperiodontopatógenas Tannerela forsythia (Tf), Porphyromonasgingivalis (Pg), Treponema denticola (Td), Aggregatibacter acti-nomycetemcomitans (Aa) y la carga bacteriana total (TBL) endientes e implantes dentales de la misma arcada.

Se reaiizó un estudio cruzado, aleatorizado, a doble ciego con-trolado por placebo. Se estudiaron los pacientes parciaimenteedéntuios con un extremo distal libre rehabiiitado con uno o dosimplantes en la mandíbula. Se pautó el Lactobaciiius reuteriPro-dentis (PerioBaiance™; Sunstar/BioGaia, Switzerland/Sweden)o placebo, una tableta cada 24h disuelta en la cavidad oraldurante 28 días. Para la determinación de las bacterias perio-dontopatógenas, se utiiizó ei iAI-PadoTest 4.5 (lAIIAI InstituteInc., Zuchwil, Switzeriand), sistema que detecta Tf, Pg, Td, Aa yTBL usando pruebas de ARN. Ei nivel de significatividad fue de <0,05 y la potencia estadística de 0,83.

Se inciuyeron 30 pacientes, se analizaron 60 dientes y 60 implan-tes. Tras la administración dei probiótico, en los dientes se produjoun descenso significativo de la Tf, Td y de la TBL. En los implantesse redujo significativamente la Pg, la Td y la TBL.

A la vista de estos resuitados se conciuye que tras la adminis-tración de probióticos orales se mejora ia salud periodontai yperiimplantaria reduciendo la carga bacteriana patógena.

B l Flatulencia: caracteristicas clínicas,fisiológicas y microbiológicas

Chaysavanh M'-', Estrella, S'-' Hernandez O', Cuenca S', Accarino, A'',GuyonnetD', Santos J", GuarnerF'-', MalageladaJR'-', Azpiroz F"'Digestive System Research Unit, Institut de Recerca Hospital Universi-tari Vali Hebron, Barcelona. Departament de Medicina, Universität Autó-noma de Barcelona, 08193 Bellaterra (Cerdanyola dei Valles). Centrode Investigación Biomédica en Enfermedades Hepáticas y DigestivasCIBERehd, Barcelona. ̂ Danone Research, Paris.

Determinar ia influencia de la dieta sobre los síntomas clínicos yia microbiota intestinal en pacientes con fiatulencia.

Se estudiaron pacientes (n = 30) y sujetos sanos (n = 20)durante 3 días con su dieta habitual (basal), y durante otros 3días con una dieta alta en residuos (flatulogénica).

En el periodo basal los pacientes registraron más síntomas abdo-minaies que los sujetos sanos (5,8 ± 0,3 vs 0,4 ± 0,2 demolestia/dolor, respectivamente; p = 0,0001 ) y más evacuaciones

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Inmunutrición a partir de sepas lácticas

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