OBJETIVO Estudiar la curva de crecimiento de Saccahromyces cerevisiae

1.73h y 1.37h respectivamente En el presente informe se estudio la curva de crecimiento del Saccahromyces cerevisiae, para este objetivo se utilizo un espectrofotó-metro a 620nm con el cual se registro la ab-sorbancia cada cierto tiempo, también se utili-zo el método gravimetrico, pesando la mate-ria celular húmeda cada cierto tiempo, se ob-tuvieron los siguientes resultados: para la ve-locidad especifica tato para gravimetría como para absorbancia fue de 0.4h-1 y 0.5h-1 , en lo que se refiere al tiempo de generación fue de

RESUMEN

La célula microbiana son esencialmente una maquinaria de síntesis capaz de duplicarse a sí misma. El proceso de síntesis para el creci-miento bacteriano involucra unas 2000 reac-ciones químicas de una amplia variedad. Una vez sintetizados los polímeros, el crecimiento continúa con el ensamblaje y formación de nuevas estructuras celulares que finalizan con la división en dos células hijas. En un medio apropiado física y nutricionalmente, un cultivo se reproduce continuamente como células ve-getativas, los nutrientes absorbidos y metabo-lizados permiten crecer al microorganismo .

UNAMBA

Fecha del boletín

Volumen 1, nº 1

CURVAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

INTRODUCCION

Contenido:

Resumen, introduc-ción, objetivo

1

Marco Teórico 2

Materiales y Procedi-miento

9

Resultados 11

Discusiones, Conclu-siones, y Bibliografía

14

Anexo 15

“UNIVERSIDAD NACIONAL MICAE-LA BASTIDAS DE

APURIMAC”

CARRERA PROFE-SIONAL DE INGE-NIERIA AGROIN-

DUSTRIAL

BIOTECNOLOGIA AGROINDUSTRIAL-

LABORATORIO

• DOCENTE: Bio. Yanett Campos

• ALUMNO: Christian Andrew Aguilar M.

ABANCAY-APURIMAC

mentando progresivamente. Esta figura se obtuvo de un crecimiento de una única célula que tiene un tiempo de generación de 30 minutos, tabla 1. En la figura 2 se presenta el número de células en escala logarítmica ver-sus tiempo en escala aritmética (Gráfico se-milog) lo que da una línea recta, este es un inmediato indicador de que las células están creciendo exponencialmente. Este tipo de gráficos semilog es util para la estimación de tiempos de generación a partir de datos expe-rimentales, el tiempo de generación puede leerse directamente a partir del gráfico figura 3.

Crecimiento Microbiano Es un incremento en el número de células o aumento de la masa microbiana. El cre-cimiento es un componente esencial de la función microbiana, ya que una célula indi-vidual tiene un período de vida determina-do en la naturaleza y la especie se mantie-ne solamente como resultado del creci-miento continuo de la población celular. En muchas situaciones prácticas es nece-sario el control de la población celular, el conocimiento de cómo se expande es útil para el diseño de métodos de control para el crecimiento microbiano. Una bacteria es una máquina capaz de duplicarse así mis-ma. Los procesos sintéticos de crecimien-to celular bacteriano implican no menos de 2000 reacciones bioquímicas de una gran variedad de tipos. Las reacciones principales de la síntesis celular son de polimerización, luego se ensamblan las macromoléculas, se forman las estructu-ras celulares: pared celular, membrana citoplasmática, flagelos etc. El crecimiento microbiana ocurre por fisión binaria, bajo las mejores condiciones de E. coli puede completar su ciclo en 20 minu-tos. El control de la división celular está íntimamente ligado a los acontecimientos de replicación cromosómica. Crecimiento de poblaciones La velocidad de crecimiento es el cambio en el número de células por unidad de tiempo. El tiempo requerido para que a partir de una célula se formen dos células o el tiempo requerido para duplicar una población de células se llama tiempo de generación o tiempo de duplicación. En una sola generación se duplica el número de células o masa celular, en minutos en ocasiones en horas o días. Crecimiento exponencial Modelo de incremento de la población en el que el número de células se dobla cada cierto período de tiempo. Una de las carac-terísticas del crecimiento exponencial es que la velocidad de incremento en el nú-mero de células es lenta inicialmente pero después incrementa constantemente. Co-mo muestra la siguiente figura 1 , típica curva de crecimiento exponencial expresa-da aritméticamente, la pendiente va incre-

MARCO TEORICO

Página 2 Curvas de crecimiento microbiano

En algunos casos es necesario emplear una ecuación diferencial para expresar relacio-nes cuantitativas de crecimiento:

Duplicación de la población Donde K es la constante de crecimiento pa-ra un cultivo cerrado, μ y K están relaciona-das y reflejan el proceso de crecimiento de una población que incrementa exponencial-mente. Las densidades poblacionales bacte-rianas se expresan en notación científica mediante potencias de 10, por tanto en la ecuación: se pueden convertir los logaritmos neperia-nos a los logaritmos base 10 y sustituir la constante instantánea μ por K:: Cálculo del tiempo de generación Para muchos propósitos en microbiología es útil conocer el tiempo de generación de una población microbiana durante el crecimiento exponencial, de la figura 2 se deduce que el crecimiento bacteriano exponencial es una progresión geométrica, existe una relación directa entre el número de células presente en el momento inicial y el habido en un mo-mento determinado del crecimiento expo-nencial así:

Página 3 Volumen 1, nº 1

N= número final de células, No= número ini-cial de células y n= número de generaciones que ha ocurrido durante el período de fase exponencial, el tiempo de generación de la fase exponencial se calcula t/n, donde t= ho-ras o minutos de crecimiento exponencial y conociendo N y No, es posible calcular el nú-mero de generaciones y a su vez el tiempo de generación. Para expresar la ecuación N =N02n en térmi-nos de n, es necesario la siguiente transfor-mación:

Ciclo de crecimiento de poblaciones Se ha visto el ciclo de crecimiento parcial-mente en la parte de crecimiento exponen-cial. Un cultivo bacteriano simple y homogé-neo tiene un ciclo de crecimiento como el que se representa a continuación. puede dividirse en varias fases: Fase de latencia, exponencial, estacionaria y de muerte, ver figura 4.

Fase de latencia: Cuando una población microbiana se inocula en un medio fresco, el crecimiento ocurre después de cierto tiempo. Si un cultivo en crecimiento expo-nencial se inocula exactamente el mismo medio, no se observa esta fase sino que sigue creciendo exponencial, se requiere cuando las células se toman de un cultivo viejo, también cuando las células han sido dañadas por tratamientos: radiaciones, tóxicos, calor, también cuando se pasan de un medio rico a un medio pobre. Fase exponencial: Es la consecuencia de que una célula se divida en dos, estas en otras dos y así sucesivamente, la mayoría crecen exponencialmente pero las veloci-dades de crecimiento exponencial pueden variar esencialmente. Es influenciada por las condiciones ambientales (temperatura, composición del medio de cultivo) y por las características genéticas del microorganis-mo las procariotas crecen más rapidamen-te que las eucariotas. Fase estacionaria: En un cultivo donde no se renueva el medio un cultivo el creci-miento exponencial no puede ocurrir indefi-nidamente. Una bacteria pesa alrededor de una billonesima de gramo (10-12g), cada 20 minutos en 18 horas producirá una po-blación bacteriana cerca de 4000 veces el peso de la tierra, obviamente es imposible mantener ese ritmo de crecimiento. Habi-tualmente un nutriente esencial del medio de cultivo se acaba, o algún producto de desecho se acumula en el medio hasta que alcanza una concentración inhibitoria de crecimiento exponencial. La población al-canza la fase estacionaria. No hay incre-mento neto o decremento del número de células. Sin embargo, aunque no hay creci-miento, ocurren funciones celulares, inclu-yendo el metabolismo bioenergético y algu-nos procesos biosintéticos. Algunos micro-organismos pueden tener un crecimiento lento, algunas células crecen y otras mue-ren, siendo el balance total de ausencia de incremento en el número de células, esto se conoce como crecimiento críptico. En E. coli se han identificado genes que son ne-cesarios para la supervivencia durante es-ta fase genes sur, si existen mutaciones conducen rápidamente a la muerte celular a medida que entran en la fase estaciona-ria.

Página 4 Curvas de crecimiento microbiano

♦ Determinación de peso húmedo ♦ Determinación de peso seco ♦ Determinación de nitrógeno total ♦ Determinación química de un ácido nuclei-

co Un último grupo entiende al crecimiento sobre la base de la influencia que ejercen los micro-organismos en los cambios químicos de su entorno como consecuencia del incremento de la biomasa.

Recuentos Directos Recuento microscopico: Es una técnica co-mún, rápida y barata que utiliza un equipa-miento fácilmente disponible en un laborato-rio de microbiología. Para estos recuentos se utilizan generalmente cámaras de recuentos, aunque también pueden realizarse a partir de muestras filtradas en membranas y transpa-rentizadas o teñidas con colorantes fluores-centes (Naranja de acridina).

La mayor dificultad del recuento en cámara es obtener reproductibilidad en el llenado de la cámara con líquido. Otra dificultad es la adsorción de las células en las superficies del vidrio, incluyendo pipetas. Esta adsorción es crítica en el proceso de dilución de la muestra y se minimiza al realizar las diluciones en me-dios de alta fuerza iónica (solución fisiológica o medios mínimos sin fuente de carbono).

Las cámaras más utilizadas son las de Hawksley y la de Petroff-Hausser. La primera tiene la ventaja que puede ser utilizada con objetivos de inmersión, aunque la mayoría de los recuentos se realizan con objetivos secos. Una de las mayores ventajas del recuento mi-croscópico es brindar información adicional sobre el tamaño y la morfología de los objetos contados.

Fase de muerte: Si la incubación continua después que la población alcanzó la fase estacionaria las células entran en fase de muerte, en algunos casos acompañada de lisis celular, es también de acuerdo a la figura 4 una función exponencial. Sin em-bargo, en muchos casos la velocidad de muerte es mucho más lenta que la veloci-dad de crecimiento exponencial. Medición del crecimiento: El crecimiento de una población bacteria-na puede ser entendido desde diferentes perspectivas y de acuerdo a éstas se pue-de llegar a determinar la medida del creci-miento mediante diversas metodologías.

Para algunos, el crecimiento es la capaci-dad para multiplicarse que tienen las célu-las individuales, ésto es iniciar y completar una división celular. De esta forma, se con-sidera a los microorganismos como partí-culas discretas y el crecimiento es entendi-do como un aumento en el número total de partículas bacterianas. Existen dos for-mas para determinar el número total de microorganismos en una muestra:

♦ Recuento microscópico de partículas ♦ Recuento electrónico de partículas Para otros, el crecimiento implica el au-mento de los microorganismos capaces de formar colonias debido a que sólo se tiene en cuenta el número de microorganismos viables, esto es capaces de crecer indefini-damente. Las determinaciones que se uti-lizan son:

♦ Recuento de colonias ♦ Método del número más probable Para los fisiólogos bacterianos, bioquími-cos y biólogos moleculares una medida del crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos, la síntesis macromolecular y un incremento en la capacidad para la sínte-sis de los componentes celulares es una medida del crecimiento. Para este grupo la división celular es un proceso esencial pe-ro menor que rara vez limita el crecimien-to, ya que lo que limita el crecimiento es la capacidad del sistema enzimático para utilizar los recursos del medio y formar biomasa.

Página 5 Volumen 1, nº 1

Tipo de cuadro Area Volumen Factor

Cuadrado total 1.00 x 10-2 2.00 x 10-5 5.00 x 104

Cuadrado grande 4.00 x 10-4 8.00 x 10-7 1.25 x 106

Cuadrado peque-ño 2.50 x 10-5 5.00 x 10-8 2.00 x 107

♦ 1/Dilución: Inversa de la dilución utilizada para llenar la cámara de recuento.

♦ Número de cuadrados contados: Cantidad de cuadrados de la cámara que se utiliza-ron para contar un el número de bacte-rias.

♦ Volumen del cuadrado: Volumen de cada cuadrado de la cámara. Depende del tipo de cuadrado en donde se realizó el re-cuento. Por ejemplo, cada cuadrado pe-queño tiene un volumen de 5 x 10-8 ml (50 µm x 50 µm x 20 µm = 5 x 104 µm3 = 5 x 10-8 ml).

Recuento electronico: Los contadores elec-trónicos permiten realizar recuentos de bac-terias, levaduras no filamentosas y protozoa-rios, pero no de hongos y microorganismos filamentosos o miceliares. Estos instrumen-tos constan básicamente de dos comparti-mientos comunicados a través de un peque-ño conducto. En ambos compartimientos hay electrodos que miden la resistencia eléctrica del sistema, y como el orificio del conducto es muy pequeño y su resistencia es muy alta, la resistencia eléctrica de cada compartimiento es independiente. El princi-pio de funcionamiento de estos instrumen-tos es el que se explica a continuación. Un volumen fijo de una suspensión bacteriana es forzada a pasar desde un compartimiento al otro a través del pequeño conducto, en un muy breve intervalo de tiempo. Cuando un microorganismo pasa al nuevo comparti-miento, la resistencia de éste se incrementa debido a que la conductividad de la célula es menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y contados. Este tipo de recuento presenta algunos inconvenientes. Ciertas bacterias muy pequeñas producen cambios

en la resistencia que son comparables al "ruido" generado por la turbulencia que se desarrolla al pasar el fluido por el orificio. No pueden medirse células que formen filamentos o agregados o soluciones muy concentradas de microorganismos, debido a que el pasaje de más de una célula en un breve período de tiempo va a ser toma-do como una célula más grande. Es común la obstrucción del orificio por microorganis-mos muy grandes.

Medida de la Biomasa

La medida de la masa de los constituyen-tes de la célula bacteriana es utilizada fre-cuentemente como base para la medida de una actividad metabólica, o de un cons-tituyente metabólico o químico. Algunos de los métodos para cuantificar la biomasa son obvios y confiables, pero pueden vol-verse complicados si se busca la exactitud.

Peso húmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada lue-go de la separación de las células por filtra-ción o centrifugación. Es una técnica útil para grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La can-tidad de líquido retenida puede ser impor-tante, por ejemplo, un pellet de células bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que apor-ta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular. Para corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda retenida en el espa-cio intercelular luego de una centrifuga-ción, para ello se utilizan soluciones de

Página 6 Curvas de crecimiento microbiano

polímeros no iónicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.

Peso seco: El peso seco (contenido de sólidos) de las células bacterianas que se encuentran en una suspensión se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105°C hasta peso constante. Esta técnica es útil para grandes volúmenes de muestra, debido a que diferen-cias del orden de los miligramos representan el peso de un gran número de bacterias.

La desventaja de este método es que compo-nentes volátiles de la célula pueden perderse por el secado y puede existir alguna degrada-ción. También la muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta.

Determinación de acidos nucleicos: Es una técnica que permite determinar indirectamen-te la masa de una población bacteriana. Se determina la cantidad existente de un determi-nado ácido nucleico (generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la población.

Determinacion de nitrógeno: Es una técnica que permite determinar indirectamente la ma-sa de una población bacteriana. Existen distin-tas técnicas para determinar la cantidad de nitrógeno que contiene una muestra en rela-ción al compuesto que se quiera determinar. Puede analizarse el nitrógeno no proteico me-diante el NO2-, NO3-, NH4+, el nitrógeno proteico mediante absorción en UV, Reacción de Biuret, Reacción de Lowry, o el nitrógeno total me-diante la Digestión de Kjeldahl.

Incorporación de precursores radiactivos: Es una técnica que permite determinar indirecta-mente la masa de una población bacteriana. En esta técnica se adiciona al medio un com-puesto marcado radiactivamente que puede ser incorporado a la célula, y luego se determi-na la cantidad de marca incorporada por toda la población.

Dispersión de la Luz

Cuando un haz de luz paralelo (colimado) gol-pea una partícula en suspensión, parte de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. La nefelome-tría mide la luz dispersada por una solución de

partículas. La turbidimetría mide la luz dispersada como un decrecimiento de la luz transmitida a través de la solución. En relación a la longitud de onda y al ta-maño de la partícula pueden existir tres tipos de dispersión.

Los métodos de dispersión de la luz son las técnicas más utilizadas para monito-rear el crecimiento de los cultivos bacte-rianos. Son muy útiles y poderosos pero pueden llevar a resultados erróneos. Principalmente, dan información sobre el peso seco (contenido macromolecular).

Turbidimetría: La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debi-do a partículas de una suspensión y cuantifica la luz residual transmitida.

Estudios teóricos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de di-ferentes tipos de bacterias, independien-temente del tamaño celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de con-centración de peso seco. Esto quiere de-cir que, en soluciones diluidas, la absor-bancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del ta-maño celular del microorganismo. Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas son diferentes. Por esta razón, para esti-mar el número de microorganismos tota-les o el número de microorganismos via-bles de una suspensión bacteriana debe realizarse una "curva de calibración" con cada tipo de microorganismo, sólo de esta forma es posible relacionar Absor-bancia (Densidad Optica) con el número de microorganismos totales o con UFC.

Página 7 Volumen 1, nº 1

por la escasez de otro factor.

Ley de la Tolerancia de Shelford La presencia y/o ausencia, abundancia de organismos en un ambiente están determinados no solo por los nu-trientes sino también por factores físico químicos

♦ Esta ley describe la forma en que

las variables abióticas controlan la abundancia de los organismos en un sistema

♦ Shelford, 1913, establece que

cada organismo necesita una serie de condiciones para sobrevivir y desarrollarse

♦ Los márgenes de tolerancia y la

fluctuación de los factores físico químicos en un sistema determi-nan que m.o. pueden encontrarse o desarrollarse sobre una base sustenta-ble

♦ Los márgenes de tolerancia para

una variables dada interaccionan con otras variables.

Absorbancia = K x Peso Seco

K: constante que varía con la longitud de on-da utilizada y representa la inversa del peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de la absor-bancia (1/W0).

Peso seco: Concentración celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (µg/ml-mg/ml).

La relación directa entre la absorbancia y el peso seco sólo se aplica para suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley de Beer. Sin embargo, el inconve-niente de utilizar suspensiones diluidas pue-de involucrar un mayor error de pipeteo y me-nor sensibilidad por el bajo nivel de absor-ción.

En estos gráficos se puede apreciar que sus-pensiones diluidas de dos microorganismos diferentes con igual peso seco tienen la mis-ma absorbancia, mientras que para el mismo número de microorganismos totales la absor-bancia de cada suspensión es distinta.

Factores que afectan al crecimiento bacte-riano:

♦ La distribución y funcionamiento de la poblaciones microbianas están fuertemen-te influidas por factores abióticos

♦ La limitación de nutrientes y la toleran-

cia ambiental regulan o excluyen la exis-tencia de microorganismos en diferentes ambientes

♦ Los microorganismos poseen limites

inferiores y superiores de tolerancia, así como óptimos para los diferentes factores abióticos

Ley del Mínimo de Liebig: La producción de biomasa total de cualquier organismo esta determinado por el nutriente cuya concentración sea mínima, en relación con lo que requiere el organismo. Un incremento en la concentra-ción de determinado nutriente limitante per-mite el crecimiento o reproducción de la po-blación afectada, hasta que queda limitada

Página 8 Curvas de crecimiento microbiano

Inoculo (para 100ml):

Medio de fermentación (para 250ml):

Glucosa 2 gr.

Extracto de levadura 0.1 gr.

KH2PO4 0.5 gr.

MgSO47H2O 0.04 gr.

Glucosa 5 gr.

Extracto de levadura 0.25 gr.

KH2PO4 0.5 gr.

MgSO47H2O 1 gr.

Sulfato de amonio 0.1 gr.

METODOLOGÍA

Esterilizar el inoculo a 121 ºC *20 minutos a 15 psi

Enfriar a 28 ºC

Inocular asépticamente 5 gr. De levadura

Incubar a 28 ºC por 12 horas

Esterilizar el medio de fermentación a 121 ºC *20 minutos a 15 psi

Enfriar a 28 ºC

Inocular asépticamente 5% del inoculo

Incubar a 28 ºC por 24 horas

Pipetas

Estufa

Vasos de precipitados

Autoclave

Incubadora

Levadura Sacharomyces cereviceae

Centrifuga

Tubos de ensayo

Espectrofotómetro

MATERIALES

Página 9 Volumen 1, nº 1

Para inocular se debe hacer los siguientes pasos:

-Extraer 5% del inoculo, centrifu-garlo a 3000 rpm por 10 minu-tos. -Eliminar el sobre nadante. -Llenar agua y llevarlo de nuevo a la centrifuga a 300rpm por 10 minutos. -Eliminar el sobre nadante -Inocular el decantado al medio de fermentación.

Página 10 Curvas de crecimiento microbiano

Extracción del 5% del inoculo después de las 12 horas

Para la medición con el espectrofotómetro (densidad óptica):

Extraer 4 ml del caldo de fermentación

Llevar la muestra espectrofotómetro a 620nm

Calibrar el espectrofotómetro a 620nm

Para la medición por gravimetría:

Extraer 4 ml del caldo de fermentación

Pesar el decantado

Centrifugar a 3000rpm por 10 minutos

Den

sida

d óp

tica

Tiempo

Peso

Tiempo

Realizar los siguientes gráficos

Centrifugación a 3000rpm por 10 minu-tos

Después del centrifugado separación en dos fases

Vaciado del inoculo al medio de fermen-tación

Observación en espectrofotómetro

RESULTADOS

Página 11 Curvas de crecimiento microbiano

Tiempo Absorbancia Gravimetría 0 0,217 0,008 1 0,749 0,01 3 0,842 0,03 5 1,32 0,01

24 1,259 0,185

PARA LOS GRAFICOS

Página 12 Volumen 1, nº 1

CALCULO DEL LA TASA DE CRECIMIENTO PARA ABSORBANCIA

( ) ( )

0

0

-1

1.32 0.217 (5)

0.4h

tf

f

N N eLnN LnN t

Ln Ln

µ

µ

µ

µ

∗= ∗

= +

= + ∗

=CALCULO DEL TIEMPO DE GENERACION PARA ABSORBANCIA

0t

fN N eµ= ∗ 0 2gfN N= ∗

1

22

20.4 5

22.89

g tegLn tLne

tgLn

h hgLn

g

µ

µµ

−

==

=

∗=

=

CÁLCULOS MATEMÁTICOS

Se analizar la parte de la curva hasta donde haya habido crecimiento y tomaremos como el dato final N (absorbancia) al dato de mayor magnitud tal como se muestra en al siguiente tabla

Tiempo Absorbancia 0 0,217 1 0,749 3 0,842 5 1,32

52 .891 .73

tg

τ

τ

τ

=

=

=

Conclusión: El tiempo de generación que nos arroja n los resultados nos muestran que cada 1.73 horas se duplica la levadura

Página 13 Volumen 1, nº 1

CALCULO DEL LA TASA DE CRECIMIENTO PARA EL PESO

( ) ( )

0

0

-1

0.1 0.008 (5)

0.5h

tf

f

N N eLnN LnN t

Ln Ln

µ

µ

µ

µ

∗= ∗

= +

= + ∗

=CALCULO DEL TIEMPO DE GENERACION PARA EL PESO

0t

fN N eµ= ∗ 0 2gfN N= ∗

1

22

20.5 5

23.64

g tegLn tLne

tgLn

h hgLn

g

µ

µµ

−

==

=

∗=

=

CÁLCULOS MATEMÁTICOS

Se analizar la parte de la curva hasta donde haya habido crecimiento y tomaremos como el dato final N (peso) al dato de mayor magnitud tal como se muestra en al siguiente tabla

Tiempo Gravimetría 0 0,008 1 0,01 3 0,03 5 0,1

244 .531 .37

tg

τ

τ

τ

=

=

=

Conclusión: El tiempo de generación que nos arroja n los resultados nos muestran que cada 1.37 horas se duplica la levadura

Con respecto a la velocidad especifica:

Fabio Rafael Tarántola 2003, menciona que la veloci-dad especifica del Sacharomyces es de 0.124h-1 , en los resultados obtenidos se tuvo para la absorbancia un resultado de 0.4h-1 y para la medición del peso de 0.5h-1 , es probable que se haya cometido erroes en la toma de datos al momento de medir la absorbancia y quiza no estuvo calibrado el espectrofotómetro.

Fabio Rafael Tarántola 2003, menciona que el tiempo de duplicación del Saccharomyces cereviceae es 2 horas a 25 ºC, e los resultados obtenidos par absor-bancia se tiene que el tiempo de duplicación es de 1.73h, y para la gravimetría se tiene que el tiempo de duplicación es de 1.37h, los resultados están cerca-nos al teorico.

DISCUSIONES

Página 14 Volumen 1, nº 1

CONCLUSIONES

La velocidad especifica de crecimiento de Saccahromyces cerevisiae es de 0.124h-1 El tiempo de duplicación de Saccahromyces cerevisiae es de 2horas Las levaduras como Saccahromyces cerevisiae se desarrolla normalmente a 25ºC

BIBLIOGRAFIA

Fabio Rafael Tarántola 2003, “DISEÑO Y PUESTA EN MARCHA DE UN SISTEMA SEMICONTINUO DE FERMENTA-CION PARA LA PRODUCCION DE ETANOL A PARTIR DE MATERIAS PRIMAS RENOVABLES MEDIANTE Saccharomy-ces cerevisiae”. Universidad Nacional del Cuyo Mendoza-Argentina. Erika Fajardo Trujillo2007, “EVALUACIÓN DE MELAZA DE CAÑA COMO SUSTRATO PARA LA PRODUCCIÓN DE Saccharomyces cerevisiae” PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA-FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS- MICROBIO-LOGÍA INDUISTRIAL BOGOTÁ D.C. www.microbiologia.com.ar Buscador www.google.com: “Microbiología clínica crecimiento y muerte de bacterias”

Página 15 Volumen 1, nº 1

Organismo Temp. (°C)

Tiempo de

duplicación (hs)

BACTERIAS

Escherichia coli 37 0,28

Bacillus subtilis 40 0,43

Pseudomonas putida 30 0,75

Mycobacterium tubercu-losis 37 6

Treponema pallidum 37 34

LEVADURAS

Saccahromyces cerevi-siae 25 2

EXPERIMENTO SUSTRATO INICIAL Azúcar Reductor Inicial

VELOCIDAD ESPECÍFICA µ (h-1)

CONSTANTE DE CONVERSIÓN (Y) Nº lev x108/g azúcar

1 1.84 0.090 3.68 2 3.25 0.124 295.4 3 5.24 0.115 142.8

ANEXOS

Tablas de Fabio Rafael Tarántola